專利名稱：一種免疫層析質(zhì)控標準試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型為保證用戶能夠盡可能得到可靠的測定結(jié)果，發(fā)明一種免疫層析質(zhì)控標準試紙。
背景技術(shù)：
各種免疫層析檢測試紙，如金標檢測試紙在臨床檢驗中具有廣泛的應用。該類試紙利用免疫層析一步法原理和標記抗體或抗原進行制備，通過抗原--抗體的特異性反應，用于臨床檢測，成為臨床檢驗中正在興起的第三代產(chǎn)品。目前國際市場上用于臨床檢驗的已有上百余種，國內(nèi)也有十幾種。由于免疫層析檢測試紙具有直觀、快速、操作簡便、經(jīng)濟等特點，使之易于推廣和使用。但由于免疫層析試紙主要采用生物原料和生物方法制備，較易受到外界因素的影響，由此影響到測定結(jié)果的準確性和有效性。目前世界上許多免疫層析試紙均是采用設(shè)立控制線(Control Line)的方法來進行試紙的質(zhì)控。其原理是在樣品檢測試紙上同時噴一條可以識別與膠體金等標記物相偶連的抗體或者抗原并能與之結(jié)合的檢測抗體作為控制線，測定中當該線不顯色時則認為試紙失效或檢測失敗，但由于控制線上所采用的抗體是只識別與膠體金等標記物相偶連的抗體或抗原并能之結(jié)合的抗體，因此該控制線只能檢測膠體金等標記物的顯色是否失效，而對檢測抗原的抗體或檢測抗體的抗原是否失效，以及檢測中最為關(guān)鍵的抗原與抗體的結(jié)合情況則無法檢測。

發(fā)明內(nèi)容
本實用新型通過新的思想和新設(shè)計方式，發(fā)明一種既能夠檢測金標等標記顆粒、偶聯(lián)抗體或抗原的質(zhì)量，抗體或抗原與標記顆粒的偶聯(lián)情況，又能測定檢測抗原或抗體的好壞，以及抗原-抗體的結(jié)合情況，同時還可將質(zhì)控標準試紙條的質(zhì)控顯色色帶的顏色深淺作為定量的標準，即可通過將樣品測試的色帶顏色與之相互比較，就可以對測定樣品中的抗原或者抗體量進行定量測定或進行定量判斷一種免疫層析質(zhì)控檢測試紙條。使用這種試紙條作為檢測試紙，使可能影響試紙質(zhì)量和測定過程的多個因素同時得到控制，達到一舉兩得的一種免疫層析質(zhì)控標準試紙及其應用方法。
本實用新型免疫層析質(zhì)控標準試紙結(jié)構(gòu)組成和設(shè)計原理是包括有底板、吸樣品墊、硝酸纖維素膜層、膠體金膜、吸水墊和抗原或抗體樣品膜層，在底版上固定有一段吸水膜，構(gòu)成吸水墊的一種新型免疫層析質(zhì)控標準試紙，其特征是在硝酸纖維素膜層中部噴涂有一段抗體2或抗原2，構(gòu)成檢測相應抗原或抗體的檢測線，在吸樣品墊與硝酸纖維素膜層之間夾有膠體金膜層，膠體金膜層中含有抗體1或抗原1與標記物制成的標記探針，在吸樣品墊上覆蓋一層抗原膜或抗體樣品膜層；試紙中部有一條檢測線。當標記物-抗體1或標記物-抗原1出現(xiàn)偶聯(lián)解開或者抗體1或抗原1失效或者檢測線區(qū)域的抗體2或抗原2失效時，檢測線不能顯色；當抗原或抗體樣品膜上所給予的抗原量或抗體量確定，檢測時間確定時，如測定的結(jié)果有效，則其顯色的顏色深淺可以作為定量的標準使用，在相同測定條件下，可將樣品試紙測試的結(jié)果與質(zhì)控標準試紙的顯色色帶進行顏色深淺的比較，就可以對測定樣品中的抗原量或抗體量進行測定，臨床檢測中可通過控制抗原膜或抗體樣品膜上所給予的抗原或抗體量及檢測時間，將該檢測線的顯色控制在有意義的顯色數(shù)值上，以判斷陰性或陽性結(jié)果；通過在吸樣品膜上增加一層抗原樣品膜可制成用于通過抗體檢測樣品中抗原量的免疫層析試紙條的質(zhì)控和測定，通過增加一層抗體樣品膜可制成用于通過抗原檢測樣品中抗體量的免疫層析試紙條的質(zhì)控和測定；所設(shè)計制造的免疫層析質(zhì)控試紙不受標記物種類的限制，能在使用不同標記物標記制造的免疫層析檢測試紙中應用；檢測時所實用新型的質(zhì)控試紙可采用干凈水(蒸餾水或純凈水)，或者配制的與檢測樣品所使用緩沖液相一致的液體來進行檢測。
本實用新型試紙結(jié)構(gòu)組成和設(shè)計原理在常規(guī)免疫層析檢測試紙的吸水墊中增加一層預先含有一定量的相應抗原或抗體物質(zhì)的樣品膜層(抗原膜或抗體膜)，這樣當該試紙吸水段浸入液體中時，抗原或抗體樣品膜中的抗原或抗體便會隨著水液上升，當上升到試紙膜上的檢測線抗體或抗原區(qū)域時，便發(fā)生抗原-抗體的特異性結(jié)合，同時顯色。其設(shè)計原理普通金標等標記免疫層析檢測試紙在試紙上同時設(shè)定控制線(Control Line)用于試紙的質(zhì)控，測定中當該線不顯色時則認為試紙失效或檢測失敗。但由于控制線采用的抗體或抗原是只識別與膠體金等標記物相互偶連的抗體或抗原并與之結(jié)合，因此該控制線只能檢測膠體金探針等標記物是否失效。經(jīng)過改進后，質(zhì)控標準紙條上采用的是識別檢測抗原或抗體并與之特異性結(jié)合的抗體或抗原，當該新型免疫層析質(zhì)控標準試紙插入液體樣品時，由于毛細管作用，水液將沿試紙條向上移動，通過吸水墊中預先放置的抗原或抗體膜層時，水液將帶著抗原或抗體一起先向前移動，先與金標等標記顆粒偶聯(lián)的抗體或抗原結(jié)合，繼續(xù)向前移動到檢測區(qū)域時，抗原或抗體被檢測區(qū)域的抗體或抗原識別，于是停留下來，形成三明治夾心結(jié)合，同時與之相互連接的金標等標記顆粒顯色。
本實用新型采用標記抗體測定抗原免疫層析檢測試紙質(zhì)控試紙測定原理。其中▲檢測抗原；●標記物顆粒。
●—抗體1標記物顆粒與抗體1相互偶聯(lián)，其中抗體1可識別抗原“▲”并與之結(jié)合抗體2該抗體噴在檢測線區(qū)域，它可識別檢測抗原“▲”的另一位點，并與之結(jié)合●—抗體1-▲-抗體2標記物顆粒-抗體1、抗體2與抗原“▲”形成三明治結(jié)合，同時標記物顆粒聚集起來并顯色抗體3該抗體噴在檢測試紙控制線區(qū)域，可識別抗體1，并與之結(jié)合●—抗體1-抗體3抗體3可識別抗體1并與之結(jié)合，同時偶聯(lián)在抗體1上的標記物顆粒聚集起來并顯色●—抗體1-▲-抗體3抗體3識別抗體1并與之結(jié)合，同時偶聯(lián)在抗體1上的標記物顆粒聚集起來并顯色A、常規(guī)免疫檢測試紙控制線的測定原理常規(guī)免疫檢測試紙控制線處所采用的抗體3可識別抗體1，并與之結(jié)合而顯色，但由于抗體3是針對抗體1來進行設(shè)計的，因此只能檢測抗體1和標記物的質(zhì)量，而不能檢測到抗體2的質(zhì)量。顯色深淺(標記物顆粒聚集的多少)與樣品中抗原“▲”的含量多少無關(guān)，因此其顏色深淺不能用于作為判斷檢測抗原量的標準。
●—抗體1+抗體3→●—抗體1-抗體3B、新實用新型的新型質(zhì)控標準試紙的測定原理▲+●—抗體1→●—抗體1-▲……(1)●—抗體1-▲+抗體2→●—抗體1-▲-抗體2……(2)設(shè)計中不需要抗體3，而能夠直接檢測到抗體1、標記物、抗體2的質(zhì)量，同時能夠檢測到它們的結(jié)合。顯色深淺(膠體金顆粒聚集的多少)與所結(jié)合抗原“▲”的量有直接的線性關(guān)系，因此其顏色深淺可直接反應抗原的多少。
本實用新型采用標記抗原測定抗體免疫層析檢測試紙質(zhì)控試紙測定原理。其中◆檢測抗體；●標記物顆?！瘛乖?標記物顆粒與抗原1相互偶聯(lián)，抗原1可識別抗體“◆”并與之結(jié)合抗原2該抗原噴在檢測區(qū)域，它可識別抗體“◆”的另一位點并與之結(jié)合●—抗原1-◆-抗原2標記物顆粒-抗原1、抗原2與抗體“◆”形成三明治結(jié)合，同時標記物顆粒聚集起來并顯色抗體3該抗體噴在控制線區(qū)域，它可識別抗原1，并與之結(jié)合●—抗原1-抗體3抗原3可識別抗原1并與之結(jié)合，同時偶聯(lián)在抗原1上的標記物顆粒聚集起來并顯色●—抗原1-◆-抗體3抗體3識別與抗體“◆”結(jié)合的抗原1，并形成三明治結(jié)合，同時偶聯(lián)在抗原1上的標記物顆粒聚集起來并顯色A、常規(guī)免疫檢測試紙控制線的測定原理常規(guī)免疫檢測試紙控制線處所采用的抗體3可識別抗原1，并與之結(jié)合而顯色，但由于抗體3是針對抗原1來進行設(shè)計的，因此只能檢測抗原1和標記物的質(zhì)量，而不能檢測到抗原2的質(zhì)量。顯色深淺(標記物顆粒聚集的多少)與樣品中抗體“▲”的含量多少無關(guān)，因此其顏色深淺不能用于作為判斷檢測抗原量的標準。
●—抗原1+抗體3→●—抗原1-抗體3B、新實用新型的新型質(zhì)控標準試紙的測定原理◆+●—抗原1→●—抗原1-◆……(1)●—抗原1-◆+抗原2→●—抗原1-◆-抗原2……(2)設(shè)計中不需要抗體3，而直接能夠檢測到抗原1、標記物、抗原2的質(zhì)量，同時能夠檢測到它們的結(jié)合。顯色深淺(膠體金等標記顆粒聚集的多少)與所結(jié)合抗體“◆”的量有直接的線性關(guān)系，因此其顏色深淺可直接反應檢測抗體量的多少。


圖1為本實用新型免疫層析質(zhì)控標準試紙的縱向剖視圖。
圖2為使用本實用新型免疫層析質(zhì)控標準試紙，測定結(jié)果無效時的示意圖。
圖3為使用本實用新型免疫層析質(zhì)控標準試紙，測定結(jié)果有效時的示意圖。
具體實施方式
1、采用標記抗體測定樣品中抗原的質(zhì)控試紙條的制備方法是采用與制備同種常規(guī)層析檢測試紙相同的制備方法和原料制備試紙條，不同的是，在制備質(zhì)控檢測試紙條時需要在樣品墊覆蓋一層預先經(jīng)過處理，并含有一定量的與檢測抗原相同的抗原，再行包裝。
2、采用標記抗原測定樣品中抗體的質(zhì)控試紙條的制備方法是采用與制備同種常規(guī)層析檢測試紙相同的制備方法和原料制備試紙條，不同的是，在制備質(zhì)控檢測試紙條時需要在樣品墊覆蓋一層預先經(jīng)過處理，并含有一定量的與檢測抗體相同的抗體，再行包裝。
實施例1、早早孕(HCG)金標檢測質(zhì)控試紙(1)、制造方法選用與制造早早孕(HCG)金標檢測試紙相同的兩種抗HCG(絨毛摸促性腺激素)抗體1和抗體2；將抗體1與標記物顆粒——膠體金相互偶聯(lián)，制備抗體1-膠體金標記探針，并預先將一定量的抗體2噴在硝酸纖維素膜的一定區(qū)域，形成一條檢測線；選取長100毫米、寬80毫米、厚1毫米的PVC塑料為底版，通過雙面膠先在中間貼長為100毫米、寬30毫米的已噴有一條檢測線的硝酸纖維素膜，再在硝酸纖維素膜的上部貼長為100毫米、寬為30毫米的吸水物(如濾紙等)，構(gòu)成吸水層；在硝酸纖維素膜的另一端粘貼膠體金的膜層，其中含有制備的抗體1-膠體金標記偶聯(lián)探針；在膠體金膜層上粘貼吸樣品膜，然后再在吸樣品膜上粘貼含有一定量HCG的抗原膜；粘貼完畢后，將其切成80毫米長，2.5毫米寬的試紙條，包裝即可。
(2)、應用實施例a、在試管或燒杯中放入少量蒸餾水或純凈水，或者少量0.01M、PH7.4的PBS緩沖液。將用上述方法制造的早早孕(HCG)金標檢測試制質(zhì)控試紙條的吸樣品端插入上述蒸餾水或純凈水中，保持15秒后取出平放，10分鐘后觀察結(jié)果，檢測線處有正常色帶顯現(xiàn)，說明檢測試紙質(zhì)量可靠，試紙檢測結(jié)果有效。將用同樣方法檢測樣品液后的檢測試紙的檢測線與上述試紙的檢測先作對比(1)、檢測試紙的檢測線色帶深于質(zhì)控試紙條的色帶，檢測結(jié)果為陽性；(2)、檢測試紙的檢測線色帶淺于質(zhì)控試紙條的色帶，檢測結(jié)果為陰性；b、試管或燒杯中放入少量蒸餾水或純凈水，或者少量0.01M、PH7.4的PBS緩沖液。將用上述方法制造的早早孕(HCG)金標檢測試制質(zhì)控試紙條的吸樣品端插入上述蒸餾水或純凈水中，保持15秒后取出平放，10分鐘后觀察結(jié)果，檢測線處無正常色帶顯現(xiàn)，說明試紙質(zhì)量有問題，樣品檢測試紙檢測的結(jié)果無效。
c、取少量蒸餾水或純凈水，或者少量0.01M、PH7.4的PBS緩沖液，將以上液體直接滴在用上述方法制造的早早孕(HCG)金標檢測試制質(zhì)控試紙條的吸樣品端后平放，15分鐘后觀察結(jié)果，檢測線處有正常色帶顯現(xiàn)，說明檢測試紙質(zhì)量可靠，試紙檢測結(jié)果有效。將用同樣方法檢測樣品液后的檢測試紙的檢測線與上述試紙的檢測先作對比(1)、檢測試紙的檢測線色帶深于質(zhì)控試紙條的色帶，檢測結(jié)果為陽性；(2)、檢測試紙的檢測線色帶淺于質(zhì)控試紙條的色帶，檢測結(jié)果為陰性。
d、取量蒸餾水或純凈水，或者少量0.01M、PH7.4的PBS緩沖液，將以上液體直接滴在用上述方法制造的早早孕(HCG)金標檢測試制質(zhì)控試紙條的吸樣品端后平放，15分鐘后觀察結(jié)果，檢測線處無正常色帶顯現(xiàn)，說明試紙質(zhì)量有問題，樣品檢測試紙檢測的結(jié)果無效。
實施例2、排卵(LH)金標檢測質(zhì)控試紙(1)、制造方法選用與制造排卵(LH)金標檢測試紙相同的兩種抗LH(促黃體生成素)抗體1和抗體2；將抗體1與標記物顆?！z體金相互偶聯(lián)，制備抗體1-膠體金標記探針，并預先將一定量的抗體2噴在硝酸纖維素膜的一定區(qū)域，形成一條檢測線；選取長100毫米、寬80毫米、厚1毫米的PVC塑料為底版，通過雙面膠先在中間貼長為100毫米、寬30毫米的已噴有一條檢測線的硝酸纖維素膜，再在硝酸纖維素膜的上部貼長為100毫米、寬為30毫米的吸水膜(如濾紙等)，構(gòu)成吸水墊；在硝酸纖維素膜的另一端粘貼膠體金的膜層，其中含有制備的抗體1-膠體金標記偶聯(lián)探針；在膠體金膜層上粘貼吸樣品墊，然后再在吸樣品墊上粘貼含有一定量LH抗原的樣品膜；粘貼完畢后，將其切成80毫米長，2.5毫米寬的試紙條，包裝即可。
(2)、應用實施例a、在試管或燒杯中放入少量蒸餾水或純凈水，或者少量0.01M、PH7.4的PBS緩沖液。將用上述方法制造的排卵(LH)金標檢測試紙質(zhì)控試紙條的吸樣品端插入上述蒸餾水或純凈水中，保持15秒后取出平放，10分鐘后觀察結(jié)果，檢測線處有正常色帶顯現(xiàn)，說明檢測試紙質(zhì)量可靠，試紙檢測結(jié)果有效。將用同樣方法檢測樣品液后的檢測試紙的檢測線與上述試紙的檢測先作對比(1)、檢測試紙的檢測線色帶深于質(zhì)控試紙條的色帶，檢測結(jié)果為陽性；(2)、檢測試紙的檢測線色帶淺于質(zhì)控試紙條的色帶，檢測結(jié)果為陰性。
b、在試管或燒杯中放入少量蒸餾水或純凈水，或者少量0.01M、PH7.4的PBS緩沖液。將用上述方法制造的排卵(LH)金標檢測試紙質(zhì)控試紙條的吸樣品端插入上述蒸餾水或純凈水中，保持15秒后取出平放，10分鐘后觀察結(jié)果，檢測線處無正常色帶顯現(xiàn)，說明試紙質(zhì)量有問題，樣品檢測試紙檢測的結(jié)果無效。
c、取少量蒸餾水或純凈水，或者少量0.01M、PH7.4的PBS緩沖液，將以上液體直接滴在用上述方法制造的排卵(LH)金標檢測試紙質(zhì)控試紙條的吸樣品端后平放，15分鐘后觀察結(jié)果，檢測線處有正常色帶顯現(xiàn)，說明檢測試紙質(zhì)量可靠，試紙檢測結(jié)果有效。將用同樣方法檢測樣品液后的檢測試紙的檢測線與上述試紙的檢測先做對比(1)、檢測試紙的檢測線色帶深于質(zhì)控試紙條的色帶，檢測結(jié)果為陽性；(2)、檢測試紙的檢測線色帶淺于質(zhì)控試紙條的色帶，檢測結(jié)果為陰性。
d、取量蒸餾水或純凈水，或者少量0.01M、PH7.4的PBS緩沖液，將以上液體直接滴在用上述方法制造的排卵(LH)金標檢測試紙質(zhì)控試紙條的吸樣品端后平放，15分鐘后觀察結(jié)果，檢測線處無正常色帶顯現(xiàn)，說明試紙質(zhì)量有問題，樣品檢測試紙檢測的結(jié)果無效。
實施例3、乙肝表面抗體金標檢測質(zhì)控試紙(1)、制造方法選用與制造乙肝表面抗體金標檢測試紙相同的兩種抗乙肝表面抗體抗原1和抗原2；將抗原1與標記物顆?！z體金相互偶聯(lián)，制備抗原1-膠體金標記探針，并預先將一定量的抗原2噴在硝酸纖維素膜的一定區(qū)域，形成一條檢測線；選取長100毫米、寬80毫米、厚1毫米的PVC塑料為底版，通過雙面膠先在中間貼長為100毫米、寬30毫米的已噴有一條檢測線的硝酸纖維素膜，再在硝酸纖維素膜的上部貼長為100毫米、寬為30毫米的吸水物(如濾紙等)，構(gòu)成吸水層；在硝酸纖維素膜的另一端粘貼膠體金的膜層，其中含有制備的抗原1-膠體金標記偶聯(lián)探針；在膠體金膜層上粘貼吸樣品膜，然后再在吸樣品膜上粘貼含有一定量乙肝表面抗體的抗體膜；粘貼完畢后，將其切成80毫米長，2.5毫米寬的試紙條，包裝即可。
(2)、應用實施例a、在試管或燒杯中放入少量蒸餾水或純凈水，或者少量0.01M、PH7.4的PBS緩沖液。將用上述方法制造的乙肝表面抗體金標檢測試紙質(zhì)控試紙條的吸樣品端插入上述蒸餾水或純凈水中，保持15秒后取出平放，10分鐘后觀察結(jié)果，檢測線處有正常色帶顯現(xiàn)，說明檢測試紙質(zhì)量可靠，試紙檢測結(jié)果有效。將用同樣方法檢測樣品液后的檢測試紙的檢測線與上述試紙的檢測先做對比(1)、檢測試紙的檢測線色帶深于質(zhì)控試紙條的色帶，檢測結(jié)果為陽性；(2)、檢測試紙的檢測線色帶淺于質(zhì)控試紙條的色帶，檢測結(jié)果為陰性；b、在試管或燒杯中放入少量蒸餾水或純凈水，或者少量0.01M、PH7.4的PBS緩沖液。將用上述方法制造的乙肝表面抗體金標檢測試紙質(zhì)控試紙條的吸樣品端插入上述蒸餾水或純凈水中，保持15秒后取出平放，10分鐘后觀察結(jié)果，檢測線處無正常色帶顯現(xiàn)，說明試紙質(zhì)量有問題，樣品檢測試紙檢測的結(jié)果無效。
c、取少量蒸餾水或純凈水，或者少量0.01M、PH7.4的PBS緩沖液，將以上液體直接滴在用上述方法制造的乙肝表面抗體金標檢測試紙質(zhì)控試紙條的吸樣品端后平放，15分鐘后觀察結(jié)果，檢測線處有正常色帶顯現(xiàn)，說明檢測試紙質(zhì)量可靠，試紙檢測結(jié)果有效。將用同樣方法檢測樣品液后的檢測試紙的檢測線與上述試紙的檢測先做對比(1)、檢測試紙的檢測線色帶深于質(zhì)控試紙條的色帶，檢測結(jié)果為陽性；(2)、檢測試紙的檢測線色帶淺于質(zhì)控試紙條的色帶，檢測結(jié)果為陰性。
d、取少量蒸餾水或純水，或者少量0.01M、PH7.4的PBS緩沖液，將上述緩沖液直接滴在用上述方法制造的乙肝表面抗體金標檢測質(zhì)控試紙條的吸樣品窗后平放，15分鐘后觀察結(jié)果，檢測線處無正常色帶顯現(xiàn)，說明試紙質(zhì)量有問題，樣品檢測試紙檢測的結(jié)果無效。
1-吸樣品墊；2-膠體金膜層；3-檢測線；4-吸水層；5-底板；6-硝酸纖維素膜層；7-樣品膜層。
權(quán)利要求1.一種免疫層析質(zhì)控標準試紙，包括有底板(5)、吸樣品墊(1)、硝酸纖維素膜層(6)、膠體金膜層(2)、吸水墊(4)和抗原或抗體樣品膜層(7)，在底板(5)上固定有一段吸水膜，構(gòu)成吸水墊(4)，其特征是硝酸纖維素膜層(6)中部噴有抗體2或抗原2，構(gòu)成檢測相應抗原或抗體的檢測線(3)，在吸樣品墊(1)與硝酸纖維素膜層(6)之間夾有膠體金膜層(2)，膠體金膜層(2)中含有抗體1或抗原1與標記物制成的標記探針，在吸樣品墊(1)上覆蓋一層抗原膜或抗體樣品膜層(7)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種免疫層析質(zhì)控標準試紙，其特征在于檢測線(3)位于試紙中部。
專利摘要本實用新型為保證用戶能夠盡可能得到可靠的測定結(jié)果，設(shè)計一種免疫層析質(zhì)控標準試紙。本實用新型在常規(guī)免疫層析檢測試紙的吸水墊中增加一層預先含有一定量的相應抗原或抗體物質(zhì)的樣品膜層(抗原膜或抗體膜)，這樣當該試紙吸水段浸入液體中時，抗原或抗體樣品膜中的抗原或抗體便會隨著水液上升，當上升到試紙膜上的檢測線抗體或抗原區(qū)域時，便發(fā)生抗原－抗體的特異性結(jié)合，同時顯色。使用這種試紙條作為檢測試紙，使可能影響試紙質(zhì)量和測定過程的多個因素同時得到控制，達到一舉兩得。
文檔編號G01N33/543GK2718581SQ03233158
公開日2005年8月17日 申請日期2003年2月11日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月11日
發(fā)明者馬嵐 申請人:云南大學, 昆明云大生物技術(shù)有限公司, 馬嵐