專利名稱：在臨床,食物和環(huán)境樣品中同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的裝置和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的方法。所述方法基于使用能將免疫酶反應(yīng)的固相直接導(dǎo)入要被檢測(cè)的樣品中的裝置，由此倒置了免疫酶法和ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)實(shí)施中第一步的過程，所述免疫酶法和ELISA通常要預(yù)先將樣品分布于微板的微孔中，所述微板微孔的表面上吸附了單類型(固相)，試劑、抗原或抗體。
在所提及的方法中，所述固相帶有用于多種同時(shí)分析的不同被吸附的試劑(抗原和抗體)并以從棒上突起的小型柱的表面表示，所述棒被直接導(dǎo)入樣品中然后，在孵育后，放置于微板或微帶的格網(wǎng)(screen)上，然后將其從包含結(jié)合物的第一塊微板的微孔轉(zhuǎn)移到其中分布了顯色次層(chromogenous sublayer)的微板(或微帶)中。其持續(xù)一端時(shí)間，一經(jīng)從支撐小型柱的格網(wǎng)上移去，然后通過分光光度計(jì)進(jìn)行讀數(shù)因此，這就允許使用已在銷售的設(shè)備并可在實(shí)驗(yàn)室中正常用于分析且不會(huì)構(gòu)成廣泛應(yīng)用本創(chuàng)新的經(jīng)濟(jì)上的障礙。
所述小型柱可以是單個(gè)的并裝配在探針(probe)上(根據(jù)分析的需要，或研究的需要)或根據(jù)負(fù)責(zé)重要急診的特殊小組的需要，它們可被設(shè)置為每棒4或8或12個(gè)(

圖1)。
本發(fā)明的通用性使得多種類型過程(實(shí)驗(yàn)性和常規(guī)性)的方法非常靈活并具有非常強(qiáng)的適應(yīng)性，而且能對(duì)在預(yù)見要使用免疫酶試驗(yàn)和ELISA的醫(yī)學(xué)，獸醫(yī)，食品和工業(yè)領(lǐng)域中的實(shí)驗(yàn)實(shí)踐進(jìn)行減負(fù)和優(yōu)化。
現(xiàn)有技術(shù)直至目前所使用的檢測(cè)抗體和抗原的方法和裝置(預(yù)見要使用免疫酶試驗(yàn)和ELISA)表現(xiàn)出某些決定分析結(jié)果的非常精細(xì)的且需要特別關(guān)注的步驟。這些步驟是-清洗由小尺寸微孔構(gòu)成的固相；-干燥同一固相；-與手動(dòng)分布于微孔中的試劑接觸的不同次數(shù)，其具有系統(tǒng)誤差的必然概率。
此外，這些試驗(yàn)由下述因素決定-受到不同樣品分布于微板中所需時(shí)間和識(shí)別碼轉(zhuǎn)錄所需時(shí)間影響的樣品的處理時(shí)間；-進(jìn)行分析的樣品的體積，其限定了檢測(cè)的靈敏度，且其不能改變，因?yàn)槠湟蕾囉谖宓奈⒖讛?shù)目；-在不同的微板中對(duì)單個(gè)樣品實(shí)施多種不同的分析的必要性。
為克服這些困難，已有報(bào)道提出了某些解決方法，下述專利文件DE4120139，EP-A1-0301141，EP-A-0087899中描述了其中的某些解決方法。
在DE 4120139中，在微板上制作微孔，所述微孔以多種平行的行和列排列。微板的第二覆蓋形成結(jié)合抗原或抗體的結(jié)構(gòu)支持物，其也沿與微孔幾何學(xué)相應(yīng)的行和列排列，以便通過用支持覆蓋物覆蓋微板使其完全插入微孔中。
通過移液管將要被分析的樣品放置在單個(gè)微板的每個(gè)凹窩中。用載有抗原支持結(jié)構(gòu)的覆蓋物再次覆蓋微板，將其孵育足夠長的時(shí)間以便形成免疫復(fù)合物。一經(jīng)成形，免疫復(fù)合物保持附著于支持物的遠(yuǎn)側(cè)部(珠子)。對(duì)支持物的第一次清洗發(fā)生在微孔內(nèi)。將整個(gè)覆蓋物和抗原的支持結(jié)構(gòu)一起，轉(zhuǎn)移至另一微板上，在所述另一微板上已經(jīng)分布了結(jié)合物antispecies，然后將其再孵育一次。如果存在免疫復(fù)合物，其將與之結(jié)合。實(shí)施第二次清洗。將覆蓋物再次轉(zhuǎn)移至其中已經(jīng)分布了顯色次層的第三個(gè)微板上。最后，將其置于一旁孵育以便使其發(fā)生顯色作用。
要被分析的樣品必須被快速而獨(dú)特地放置在第一塊微板上。
在EP-A1-0301141中，可在單個(gè)臨床樣品中同時(shí)測(cè)定針對(duì)不同抗原的多種特異性抗體。
本發(fā)明包括·具有一組橢圓形開口的支持結(jié)構(gòu)，優(yōu)選是塑料的；·所述支持物上的固定化硝酸纖維素的多孔膜，其上噴射了不同的抗原；·將所述膜固定在支持件上的粘合劑(雙粘附層)；·第一個(gè)容器，其包含稀釋的要被分析的血清/乳清的樣品·包含結(jié)合的antispecies的第二個(gè)容器；
·包含顯色次層的第三個(gè)容器。
將位于吸附了不同抗原的膜上的支撐部件插入第一個(gè)保存有要被分析的樣品的容器中。
使其孵育5分鐘，期間形成保持附著于膜的免疫復(fù)合物。隨后用蒸餾水清洗支持部件，以便清除非結(jié)合殘余物，然后將支持物插入其中已經(jīng)分布了結(jié)合物堿性磷酸酶antispecies的第二個(gè)容器中。然后進(jìn)一步孵育，期間結(jié)合物結(jié)合于免疫復(fù)合物(所述聚集體，結(jié)合物-免疫復(fù)合物，將始終保持附著于支持物上)。然后進(jìn)行第三次清洗。最后將支持結(jié)構(gòu)插入包含顯色底物的第三個(gè)容器中。堿性磷酸酶(結(jié)合物的酶)將可溶性顯色次層轉(zhuǎn)變?yōu)槌练e于多孔膜上的不溶性有色產(chǎn)物。如此結(jié)合的該產(chǎn)物以多孔膜上有色標(biāo)記的形式而可被觀測(cè)。膜上不存在顯色標(biāo)記提示在臨床樣品中不存在特異性抗體。
在EP-A-008799中，將微孔以許多平行列和行排列于微板上。微板上的第二覆蓋物呈現(xiàn)支持結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)構(gòu)成用于錨定可移動(dòng)的免疫復(fù)合物的固相，雖然連接于可斷裂附加物其也沿與微孔幾何學(xué)相應(yīng)的行和列排列，以這樣的方式當(dāng)用覆蓋物覆蓋微板時(shí)則支持結(jié)構(gòu)可被完全插入微孔中。將欲分析的樣品分布于每個(gè)凹窩中。用支撐抗原的支持結(jié)構(gòu)的覆蓋物再次覆蓋微板然后將其孵育足夠的時(shí)間以形成免疫復(fù)合物。然后進(jìn)行ELISA方法學(xué)過程。
某些分析方法不能解決樣品分布于微板中和轉(zhuǎn)錄識(shí)別碼的問題，這些方法具有顯著的時(shí)間損耗和誤差的可能性，而其它的方法不能用于實(shí)施檢測(cè)樣品中的抗原的分析。
另一個(gè)缺點(diǎn)表現(xiàn)為如下事實(shí)即孵育時(shí)間僅從微板中的微孔被填滿時(shí)開始。
為克服這些困難和缺點(diǎn)，以及優(yōu)化分析過程，本發(fā)明提出了用于同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的本裝置和方法，其用于，例如但不限于A)-在如下樣品中同時(shí)檢測(cè)不同抗體·大量乳液樣品；·含有抗凝血藥的個(gè)體血液樣品(動(dòng)物或人類)；·唾液樣品
·蛋樣品；B)-在如下樣品中同時(shí)檢測(cè)不同的抗原(醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)領(lǐng)域中的興趣微生物或其毒素，非生物物質(zhì)等)·病理學(xué)樣品；·食物樣品；·環(huán)境樣品；C)-在如下樣品中同時(shí)檢測(cè)不同抗體和不同的抗原·大量乳液樣品；·含有抗凝血藥的個(gè)體血液樣品(動(dòng)物或人類)；·唾液樣品·蛋樣品；·病理學(xué)樣品。
經(jīng)過如下過程實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的方法固相的敏化固相由適用于免疫酶法的塑料(聚苯乙烯，尼龍，acrilonitricstyrene等)小型柱的表面構(gòu)成，末端用將欲敏化的表面與蛋白質(zhì)試劑(抗體或抗原)在PH＝9∶5的碳酸鹽/碳酸氫鹽的棉塞中接觸的現(xiàn)有方法進(jìn)行敏化，然后在冰箱溫度下孵育過夜。
該敏化步驟與標(biāo)準(zhǔn)方法間的實(shí)質(zhì)性差異包括如下事實(shí)，用于敏化小型柱的容器被不同的試劑注滿(而在標(biāo)準(zhǔn)方法中所有微板的微孔用相同試劑進(jìn)行敏化)以這樣的方式來自相同探針的每個(gè)小型柱的表面均帶有不同的吸附的試劑。例如，如果使用具有96個(gè)小型微孔的微板來敏化由12個(gè)棒攜帶的小型柱，每棒帶有8個(gè)小型柱，則該微板將以下述方式進(jìn)行充注A行試劑A在所有12個(gè)微孔中B行試劑B在所有12個(gè)微孔中C行試劑C在所有12個(gè)微孔中D行試劑D在所有12個(gè)微孔中E行試劑E在所有12個(gè)微孔中F行試劑F在所有12個(gè)微孔中G行試劑G在所有12個(gè)微孔中
H行無試劑＝陰性對(duì)照以這種方式，在敏化固相的步驟結(jié)束時(shí)，具有8個(gè)小型柱的12個(gè)棒的每一個(gè)棒均可用于實(shí)施7個(gè)不同的檢測(cè)同時(shí)加陰性對(duì)照，且每個(gè)棒將具有相同的順序。
在用于分析之前將以這種方式制備的固相保存于冰箱中。
樣品分析將樣品(例如含有抗凝血藥的血液，或乳液)收集于瓶或試驗(yàn)管(其中放置了等量稀釋液)，所述瓶或試驗(yàn)管中浸入棒-以在封口或蓋的內(nèi)側(cè)上特定預(yù)先確定的位置放置然后封閉樣品容器-將吸附了抗原的小型柱與欲檢測(cè)抗體的樣品接觸(和/或確定針對(duì)抗原的抗體的存在)每個(gè)小型柱均帶有不同的抗原(或不同的單克隆抗體)并可通過特殊顯色進(jìn)行區(qū)分(圖2)；一個(gè)小型柱不用任何抗原進(jìn)行敏化以作為陰性對(duì)照(可用這樣一種方式排列探針以便包含-抗原加陰性對(duì)照；-直至7個(gè)抗原加陰性對(duì)照，如圖解所示；-直至11個(gè)抗原加陰性對(duì)照，倒轉(zhuǎn)微板的方向然后使用載有12小型柱的棒)。
還可在樣品容器的封口或蓋上，在外側(cè)面，設(shè)置用于放置記載樣品識(shí)別碼的卡片的特殊固定器所述卡片在取樣時(shí)即置于封口上而，在處理樣品時(shí)，從封口上取下然后置于棒上。
在實(shí)驗(yàn)室中轉(zhuǎn)移樣品所使用的時(shí)間用作孵育時(shí)間以形成免疫復(fù)合物，如果樣品中存在特異性抗體當(dāng)其遭遇小型柱中吸附的抗原(和/或小型柱吸附的單克隆抗體的特異性抗原)時(shí)其即會(huì)呈現(xiàn)出來。
免疫復(fù)合物經(jīng)由特異性抗原(或抗體)而附著于各小型柱的表面，則樣品應(yīng)具有存在于被插入的棒上的一個(gè)或多個(gè)抗原(或抗體)的陽性事實(shí)上，該反應(yīng)利用了抗原(或抗體)在固相(表示為小型柱)上的吸附。
保留免疫復(fù)合物的該固相經(jīng)過進(jìn)一步的步驟。
到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，打開保存樣品的容器，取出載有小型柱的棒并裝上帶有樣品識(shí)別碼的其自己的卡片，然后和來自不同樣品的其它棒一起放置在微板支架形式的特殊支持器上(圖3)；在單個(gè)樣品的情況下，可將其置于微帶的支持物上。
實(shí)施徹底清洗，用特殊溶液清洗小型柱然后將小型柱的遠(yuǎn)側(cè)端放置于吸水紙上(足以將其放置于紙上)控干清洗液。
用這一方式可除去附著于小型柱表面的物質(zhì)的任何痕跡(由于小型柱表面并非特別結(jié)合這些物質(zhì))，而參與形成免疫復(fù)合物的抗體(或抗原)則保持與被小型柱表面吸附的特異性抗原(或抗體)的附著。
將結(jié)合物anti-species分布在沒有吸附任何類型的試劑的微板或微帶的微孔中，然后立即用載有棒的支架覆蓋，以小型柱浸入試劑中的方式而小型柱的顏色與微板或微帶支架(圖4，圖5)邊所產(chǎn)生的色帶相對(duì)應(yīng)，技術(shù)人員將會(huì)想到使用用顏色標(biāo)記的支架(在檢測(cè)樣品中抗原的情況下，結(jié)合物將由酶構(gòu)成，所述酶與針對(duì)與結(jié)合于吸附在小型柱表面上的單克隆抗體的抗原不同的抗原表位的單克隆或多克隆抗體結(jié)合)。
將其孵育(通常在+37℃孵育30′)。
在結(jié)合物的孵育期間，與能夠在存在特異性次層的情況下催化顯色反應(yīng)的酶蛋白質(zhì)結(jié)合的抗體將與免疫復(fù)合物特異性結(jié)合無論其在與插入欲檢測(cè)樣品中的棒的在前孵育過程期間何時(shí)形成。若樣品為陽性則結(jié)合物也將保持附著于小型柱表面然后將和其一起被轉(zhuǎn)移最終的微板中。
孵育后，移開支承棒的支架然后實(shí)施進(jìn)一步的清洗和干燥，以便清除未特異性附著于小型柱的表面的試劑，而抗原/抗體/結(jié)合物復(fù)合物(或抗體/抗原/結(jié)合物復(fù)合物)保持牢固的粘附。
將支承棒的支架放置于另一個(gè)，已分布了顯色次層的最后的微板或微帶上。
對(duì)其實(shí)施孵育(通常在室溫下10～15分鐘)，以便產(chǎn)生能夠生成有色物質(zhì)(顯色反應(yīng))的與結(jié)合物結(jié)合的酶的催化反應(yīng)，有色物質(zhì)的量與附著于小型柱的免疫復(fù)合物的量成比例且其光密度可通過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)。只需提起支持物，即，通過提出吸附了酶的結(jié)合物的小型柱即可阻滯顯色反應(yīng)(圖6)。
獲取微板或微帶的分光光度計(jì)讀數(shù)。
具有4或6或12小型柱的探針遵循相同的步驟(圖7)。
若想要僅在實(shí)驗(yàn)室中實(shí)施所述方法，省略將載有小型柱的棒直接插入欲分析的樣品和收集容器中，可通過使用微量加液器將樣品分布于未被任何試劑敏化的微板的微孔(其中可最終放置適宜量的稀釋液)中。在該情況下，必須被分布的樣品的重復(fù)次數(shù)與將連續(xù)被插入包含樣品的微孔中的棒的小型柱的數(shù)目一樣多，且必須觀測(cè)到將棒放置在支架中的相同方向(例如，在8個(gè)小型柱棒的情況下，12個(gè)樣品被分布在微板中，每一個(gè)重復(fù)8次，即形成列的8個(gè)微孔中)。樣品一經(jīng)被分布于微板中，將含有載有小型柱的棒的支架以將其進(jìn)入欲分析的樣品的方式進(jìn)行放置并將其在適宜的溫度下孵育需要的時(shí)間。在孵育期結(jié)束時(shí)實(shí)施對(duì)小型柱的清洗，并將其浸入包含特異性結(jié)合物的微板的微孔中并將其在適宜的溫度下孵育需要的時(shí)間。然后進(jìn)一步實(shí)施對(duì)小型柱的清洗已經(jīng)將其浸入包含顯色次層的微板的微孔中；將其在適宜的溫度下孵育需要的時(shí)間，提起包含載有小型柱的探針的支架，然后實(shí)施分光光度計(jì)讀數(shù)。
本發(fā)明方法的優(yōu)勢(shì)和價(jià)值這類試驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)室中的實(shí)施時(shí)間總共約為50分鐘，由于需要轉(zhuǎn)移成比例量的樣品至微板上，轉(zhuǎn)錄樣品的識(shí)別碼以便其分布在微板上，使樣品與在微板微孔的壁構(gòu)成的固相上吸附的抗原一起孵育，每件事情都要乘以與對(duì)相同樣品實(shí)施試驗(yàn)的數(shù)目相同的很多倍，故標(biāo)準(zhǔn)方法肯定要長得多。
按標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行兩次清洗。
孵育期，加入結(jié)合物后以及加入顯色次層之后，與標(biāo)準(zhǔn)方法中的相同。
對(duì)于不用任何類型試劑敏化的經(jīng)典方法需要額外的微板，因此成本非常低。
載有其上吸附了抗原(或抗體)的小型柱的棒的成本與用抗原或抗體敏化的微板的成本相當(dāng)。
用于載有小型柱的棒的支架的成本應(yīng)僅看作時(shí)初建成本，如實(shí)驗(yàn)室材料的成本(正如試管架的成本)。
本方法的優(yōu)勢(shì)本發(fā)明提供的優(yōu)勢(shì)在一般優(yōu)勢(shì)-即，改善經(jīng)典免疫酶方法的質(zhì)量-和特殊類型的優(yōu)勢(shì)；即，相對(duì)健康領(lǐng)域的特殊應(yīng)用間有區(qū)別。
一般優(yōu)勢(shì)·固相期間清洗操作的優(yōu)化來自用清洗溶液流包圍小型柱在除去能夠改變反應(yīng)的非-特異性試劑上更有效率的可能性；·固相期間干燥操作的優(yōu)化以及由此小型柱的一致性，使得其在先浸入的液體易于控干；·減少來自將微板的每個(gè)樣品與試劑同時(shí)接觸的系統(tǒng)誤差；·通過使用轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)室的時(shí)間作為孵育期的第一步能夠降低對(duì)樣品的處理次數(shù)；·此外，降低對(duì)樣品的處理次數(shù)依賴于所述過程中一個(gè)步驟的廢除，假定結(jié)合物最終錨定的固相從最終微板中提出，使得阻滯顯色酶反應(yīng)的溶液的注入變得不必要；·改善試驗(yàn)靈敏度，這來自根據(jù)需要增加欲分析的樣品的量而不用增加實(shí)施試驗(yàn)所需試劑的量的可能性因此，試驗(yàn)中樣品的量可與反應(yīng)的量分離，而這可引起試驗(yàn)靈敏度的增加，尤其是在大量乳液樣品中，在食物樣品和環(huán)境樣品中(在食物和環(huán)境樣品的情況下，應(yīng)當(dāng)研究素因性單克隆抗體能夠與未變性細(xì)菌抗原反應(yīng)的可能性這經(jīng)使得在與標(biāo)準(zhǔn)免疫酶法中所使用的相比更多量的樣品中使用本方法成為可能，由此避免了退到富集過程的需要-在標(biāo)準(zhǔn)方法前24小時(shí)即可提供分析報(bào)告-或消除預(yù)富集和富集過程，在標(biāo)準(zhǔn)方法前48小時(shí)即可提供分析報(bào)告；其仍需要謹(jǐn)慎評(píng)價(jià)，然而，該顯著意義要?dú)w功于不處于細(xì)菌生長期之后的陽性反應(yīng))。
特殊優(yōu)勢(shì)處理成組樣品的可能性，即同時(shí)實(shí)施全部范圍的試驗(yàn)(呼吸組，腸道組，斷奶期間動(dòng)物健康組，病原體和糧食中的毒素等)以適合的方式響應(yīng)極少對(duì)每個(gè)樣品僅進(jìn)行一種類型試驗(yàn)的血清診斷學(xué)和食物和環(huán)境控制的需要，這使得在單個(gè)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)即可給出完整的分析報(bào)告。
由小型柱構(gòu)成的固相，根據(jù)在各種場(chǎng)合下產(chǎn)生的診斷需要，可被規(guī)劃以便允許任何時(shí)候的獨(dú)立小型柱的組合。
預(yù)防措施在實(shí)施檢測(cè)相同樣品中不同抗原和檢測(cè)不同抗體或否的混合試驗(yàn)的情況下，應(yīng)當(dāng)注意到雖然相同的結(jié)合物anti-species可用于檢測(cè)任何類型的抗體，在對(duì)抗原的檢測(cè)中特異性結(jié)合物用于檢測(cè)各種抗原在用于實(shí)驗(yàn)室中樣品達(dá)到的第一個(gè)微板，將特異性結(jié)合物放置在每個(gè)行或列上以便顯示特異性抗原；為使該分布簡化，可在微板的微孔底部著色，假定該微板不通過分光光度計(jì)讀數(shù)。
本發(fā)明的其它特征和優(yōu)勢(shì)將從下述對(duì)構(gòu)建本發(fā)明的若干方法，僅以圖1，2，3，4，5，6，7和8中非限制性實(shí)例給出的描述中顯而易見地得出。
附圖簡介圖1顯示了金屬或塑料棒(1)，等間距的固體吸附材料，例如聚苯乙烯或尼龍的小型柱(2)從其上突起。小型柱(2)還可以是單獨(dú)且以通過接頭(3)連接至棒(1)制成的槽口(4)的方式進(jìn)行固定。
將接頭(3)固定至槽口(4)的系統(tǒng)能夠使組裝符合小型柱(2)到棒(1)的需要。
圖1中，棒上設(shè)置了8個(gè)小型柱(2)，但其還可以是4個(gè)或12個(gè)。
圖2顯示了棒(1)，其中小型柱(2)已全部用不同的蛋白質(zhì)試劑(抗體或抗原)進(jìn)行敏化，其被浸入用于欲檢測(cè)抗原和抗體的樣品的容器(5a)中。
棒具有標(biāo)簽(6)，該標(biāo)簽可被分離并可被插入樣品容器(5b)的蓋子中。
包含載有小型柱(2)的棒(1)的樣品容器(5)的轉(zhuǎn)移時(shí)間用作在每個(gè)個(gè)體小型柱(2)上形成免疫復(fù)合物的孵育時(shí)間。
圖3顯示，在孵育期末，如何將每個(gè)具有標(biāo)簽(6)的載有小型柱(2)的棒(1)放置在由至少3個(gè)平行水平邊(11，12，和13)和至少兩個(gè)平行垂直邊(14和15)和用于提取和/或轉(zhuǎn)移的手柄(16)所構(gòu)成的支架(10)上。
為放置棒，在水平邊(11，12和13)上等間距設(shè)置12個(gè)槽口并在垂直邊(14和15)等間距設(shè)置8個(gè)槽口。
為指示在支架(10)裝載棒的方向，在支架上標(biāo)示有色鈕(16)。
在支架(10)上，棒(1)按照有色鈕(16)排布。在圖4中，將棒(1)放置于平行水平邊(11，12和13)上的槽口內(nèi)，并顯示了具有以1～12進(jìn)行編號(hào)的12列和表示為A～H的8行進(jìn)行排布的96個(gè)微孔(21)的微板(20)。這些行還可通過不同有色的小方形區(qū)(22)進(jìn)行區(qū)分。
支架(10)具有足以能夠以使得小型柱(2)的位置與在微板(20)上排列的相同微孔(21)的位置相一致的方式裝載棒(1)的形狀和大小，如圖5中所示。
圖6顯示了從微板(20)上提起以便進(jìn)行清洗的支架(10)。
圖7中，顯示了具有4個(gè)小型柱(2)并具有標(biāo)簽(6)的棒(1a)。同一圖中的棒(1a)被從一側(cè)至另一側(cè)放置在微板(20)的12列上，將微板的能力加倍以便實(shí)施對(duì)雙倍數(shù)量樣品的分析。因而，在微板上修改將對(duì)稱性重復(fù)的小的有色方形區(qū)(22)。
如圖8中所示，由于分布樣品步驟，固相清洗的簡單化以及由于同時(shí)實(shí)施檢測(cè)多個(gè)抗體和/或抗原的可能性，故所述方法使其自身能用于制備在技術(shù)領(lǐng)域或在實(shí)驗(yàn)室(醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)學(xué))檢測(cè)樣品的試劑盒。在該情況下，分光光度計(jì)讀數(shù)可被試驗(yàn)結(jié)果的可視讀數(shù)取代。
圖8顯示了實(shí)施具有4個(gè)小型柱(2)的單個(gè)棒(1A)的分析的步驟。
步驟1.取樣并將棒導(dǎo)入容器(5)(最終標(biāo)上刻度且已含有稀釋溶液)。
步驟2.在室溫下孵育。
步驟3.經(jīng)過含有清洗液的測(cè)試-管(7)三次。
步驟4.導(dǎo)入已含有特定結(jié)合物的微帶(25a)。
步驟5.在室溫下孵育。
步驟6.通過含有清洗液的測(cè)試-管(7)三次。
步驟7.導(dǎo)入已含有顯色次層的微帶(25b)。
步驟8.在室溫下孵育。
步驟9.結(jié)果的可視讀數(shù)。
在每個(gè)由微孔的單個(gè)柱所制備的微板(25a)或(25b)上，即微帶，要檢測(cè)的抗體或抗原顯示為特定小的有色方形區(qū)(22)-例如，抗原A，抗原B，多克隆抗體，無試劑(陰性對(duì)照)-所述顏色與小型柱(2)的顏色相對(duì)應(yīng)。
陽性對(duì)照的準(zhǔn)備對(duì)每個(gè)微板或微板組或微帶組，通過預(yù)先將棒置于孵育中(該棒的小型柱被浸入含有特異性試劑的微孔用作檢測(cè)(抗原和抗體)的陽性對(duì)照)需要的時(shí)間和在適宜溫度下而制備陽性對(duì)照(將未被任何試劑敏化的小型柱插入不包含任何特異性試劑的凹窩中而作為進(jìn)一步的陰性對(duì)照)；其上形成免疫復(fù)合物的棒最終可保存，備用。
然后將陽性對(duì)照棒插入裝載了取自樣品的棒的支架中，然后與這些棒同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，并和這些棒遵循上述試驗(yàn)操作。
必須認(rèn)識(shí)到，本發(fā)明并不限于用于示例中給出的例子，而可被任何本領(lǐng)域技術(shù)人員在不違背本發(fā)明的情況下進(jìn)行修改和使之完善。
權(quán)利要求
1.通過免疫酶試驗(yàn)和ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的方法，其特征在于如下事實(shí)，其上形成免疫復(fù)合物的固相由排列在棒上的小型柱構(gòu)成；將置于棒上的小型柱浸入微板的微孔中，用不同的試劑敏化置于棒上的小型柱；每個(gè)棒的小型柱一經(jīng)敏化，即將所述棒插入含有要被分析的樣品的容器中；針對(duì)容器中樣品的孵育期一經(jīng)終止，即將每個(gè)棒放置于支持物上；清洗支持物上每個(gè)棒的小型柱；將支持物上每個(gè)棒的小型柱插入包含特異性結(jié)合物的微板的微孔中，在適宜溫度下孵育一段時(shí)間；孵育一經(jīng)終止，即將支持物上的小型柱從微板中提出并清洗；將來自支持物上每個(gè)棒的小型柱插入包含顯色次層的微板的微孔中，在適宜溫度下孵育一段時(shí)間；提取支持物上每個(gè)棒的小型柱并讀取結(jié)果。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的通過免疫酶試驗(yàn)和ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的方法，其特征在于如下事實(shí)，用于要被分析的樣品的容器由未被敏化的微板構(gòu)成以及所述微板置于載有包含小型柱的棒的支架上在需要的溫度下孵育一段適宜的時(shí)間。
3.通過免疫酶試驗(yàn)和ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的裝置，所述裝置由其上形成免疫復(fù)合物的小型柱構(gòu)成，其特征在于如下事實(shí)，所述小型吸附柱在棒上以模塊間距分隔；所述棒帶有用于在檢測(cè)中鑒別樣品的標(biāo)簽；將支承小型柱的所述棒放置于支持物上；將帶有小型柱的所述棒和所述支持物放置在微板上，所述微板上排布著以模塊間距放置的微孔；將從支持物承載的棒上突出的所述小型柱以與微孔放置相同的模塊間距進(jìn)行放置；將所述小型柱，當(dāng)支持物置于微板上時(shí)，插入用特異性結(jié)合物以及隨后用顯色化合物充滿的微孔中。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的通過免疫酶試驗(yàn)和ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的裝置，其特征在于如下事實(shí)，所述支持物是由至少2個(gè)平行水平邊和至少2個(gè)垂直平行邊形成的支架；所述支架具有一個(gè)用于轉(zhuǎn)移和提起的手柄；在所述水平和垂直邊上存在用于放置棒的槽口；以及在所述支架上存在用于支持轉(zhuǎn)載方向的有色鈕。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的通過免疫酶試驗(yàn)和ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的裝置，其特征在于如下事實(shí)，所述支架載有12個(gè)棒，每個(gè)棒帶有8個(gè)小型柱；將所述支架放置在微板上，所述微板具有以由支架支承的小型柱的模塊間距按12列和8行排列的96個(gè)微孔；將所述小型柱插入所述微板上呈現(xiàn)的所述微孔中。
6.根據(jù)權(quán)利要求4的通過免疫酶試驗(yàn)和ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的裝置，其特征在于如下事實(shí)，所述支架載有8個(gè)棒，每個(gè)棒帶有12個(gè)小型柱；將所述支架放置在微板上，所述微板具有以由支架支承的小型柱的模塊間距按8列和12行排列的96個(gè)微孔；將所述小型柱插入所述微板上呈現(xiàn)的所述微孔中。
7.根據(jù)權(quán)利要求4的通過免疫酶試驗(yàn)和ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的裝置，其特征在于如下事實(shí)，所述支架載有24個(gè)棒，每個(gè)棒帶有4個(gè)小型柱；將所述棒對(duì)稱地排列于所述支架上；將所述支架放置在微板上，所述微板具有以由支架支撐的小型柱的模塊間距按12列和8行排列的96個(gè)微孔；將所述小型柱插入所述微板上呈現(xiàn)的所述微孔中。
8.根據(jù)權(quán)利要求4的通過免疫酶試驗(yàn)和ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的裝置，其特征在于如下事實(shí)，所述支架載有16個(gè)棒，每個(gè)棒帶有6個(gè)小型柱；將所述棒對(duì)稱地排列于所述支架上；將所述支架放置在微板上，所述微板具有以由支架支承的小型柱的模塊間距按12列和8行排列的96個(gè)微孔；將所述小型柱插入所述微板上呈現(xiàn)的所述微孔中。
9.根據(jù)權(quán)利要求3的通過免疫酶試驗(yàn)和ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的裝置，其特征在于如下事實(shí)，所述棒載有小型柱；所述微板是呈現(xiàn)微孔的微帶；將所述小型柱插入微帶中呈現(xiàn)的所述微孔中；所述微孔可通過有色方形區(qū)進(jìn)行區(qū)分，其顏色與棒的小型柱的顏色相對(duì)應(yīng)。
10.根據(jù)權(quán)利要求3的通過免疫酶試驗(yàn)和ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的裝置，其特征在于如下事實(shí)，載有小型柱的所述棒具有放置帶有樣品識(shí)別碼的卡片的位置，以及從其上取下的卡片可被插入樣品容器的封口或蓋上的特定固定器中以及所述封口或蓋還具有用于放置識(shí)別樣品的卡片的外部位置。
11.根據(jù)權(quán)利要求3和9的通過免疫酶試驗(yàn)和ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的裝置，其特征在于如下事實(shí)，完整構(gòu)建棒，小型柱，樣品容器和微帶以便在本領(lǐng)域或在非專業(yè)外科學(xué)或?qū)嶒?yàn)室中實(shí)施試驗(yàn)。
全文摘要
通過免疫酶試驗(yàn)和ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)同時(shí)檢測(cè)不同抗體和抗原的由小型吸附柱構(gòu)成的方法和裝置，在所述小型吸附柱上形成免疫復(fù)合物，所述小型吸附柱在探針上以模塊間距分隔；所述探針帶有用于在檢測(cè)中識(shí)別樣品的標(biāo)簽。
文檔編號(hào)G01N33/543GK1650167SQ03810029
公開日2005年8月3日 申請(qǐng)日期2003年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2002年4月11日
發(fā)明者阿里桑德拉·馬治奧, 吉多·帕特拉卡 申請(qǐng)人:莫利塞諾瓦昂尼公司