專利名稱：在個(gè)體中檢測酸相關(guān)性疾病危險(xiǎn)性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明針對在個(gè)體內(nèi)檢測胃酸相關(guān)性疾病危險(xiǎn)性的方法，特別的，針對檢測具有腺癌相關(guān)危險(xiǎn)性的胃食道反流性疾病和巴雷特氏食道的危險(xiǎn)性的方法。本方法也可被使用以測定個(gè)體發(fā)生潰瘍的危險(xiǎn)性，該潰瘍是NSAID(非類固醇抗炎藥物)使用的結(jié)果，以及在幽門螺旋菌根除治療后發(fā)生食道疾病的危險(xiǎn)性。根據(jù)本發(fā)明的方法基于測定來自該個(gè)體的樣本，特別是血清樣本的被分析物胃蛋白酶原I、幽門螺旋菌標(biāo)志物和空腹胃泌素-17。
背景技術(shù)：
反流性疾病是可由胃內(nèi)容物上升、反流入食道而導(dǎo)致的一種病癥。特別的，當(dāng)所述反流現(xiàn)象在食道粘液中引起損害或炎癥，例如食道炎時(shí)，使用術(shù)語“反流性疾病”。反流性疾病的典型癥狀是燒心。
大范圍反流性疾病的并發(fā)癥是一種稱為巴雷特氏食道的疾病(Barrett′sesophagus)，是一種涉及食道中各種程度的上皮改變的疾病。一般認(rèn)為反流破壞食道上皮，所引起的病癥繼而參與食道腺癌的危險(xiǎn)性增高。
具有健康，即非萎縮性，粘膜的一個(gè)個(gè)體的胃是酸性的，通常在pH大約1-2。然而胃中的酸分泌依賴于胃泌素-17的釋放，因?yàn)槲该谒?17刺激酸釋放，并且胃酸度增加在反饋機(jī)制和控制中導(dǎo)致從腔G細(xì)胞(胃泌素細(xì)胞)中胃泌素-17的釋放減少。該胃泌素17特別指獲自基礎(chǔ)或空腹?fàn)顟B(tài)下的胃泌素-17，因?yàn)橛捎谑澄飳ξ杆岫鹊闹泻托?yīng)，刺激后，例如攝入富含蛋白餐后，測量的胃泌素-17上升。
出版物WO96/15456，該出版物在此引入作為參考，披露了通過測定來自個(gè)體的血清樣本的分析物胃蛋白酶原I和胃泌素-17的濃度篩選癌癥危險(xiǎn)性的方法。根據(jù)該出版物，將所測定的濃度值與針對每一分析物的選定的截止點(diǎn)值和參考值進(jìn)行比較，所獲得的結(jié)果可被用于評價(jià)胃萎縮的存在和位置以及癌癥的相關(guān)危險(xiǎn)性。
根據(jù)所披露的一個(gè)實(shí)施方式，所述測試可與對幽門螺旋菌抗體的測試以及所謂的蛋白刺激測試結(jié)合，根據(jù)該蛋白刺激測試在空腹后于早晨取血樣本，然后病人吃富含蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)餐，并且在2小時(shí)內(nèi)以15分鐘的間隔取血樣本。在大約20分鐘后清楚見到胃泌素-17的最大升高。
幽門螺旋菌是一種螺旋形的、革蘭氏陰性細(xì)菌，在緊鄰的胃粘膜上皮細(xì)胞表面的粘液中和在細(xì)胞間隙中旺盛生長。細(xì)菌很明顯是經(jīng)口從一個(gè)人到另一個(gè)人傳播的。細(xì)菌對胃粘膜的影響是炎癥反應(yīng)，是通過釋放強(qiáng)的炎癥介質(zhì)物質(zhì)而由補(bǔ)體所介導(dǎo)的。急性期后，炎癥轉(zhuǎn)化成慢性胃炎。在患慢性胃炎的病人中，70-90％證實(shí)有幽門螺旋菌感染(Calam，J(1994)Helicobacter pylori(Review)Eur.J.Clin Invest 24501-510)。
WO出版物WO00/67035，該出版物在此引入作為參考，披露了通過定量測定血清胃蛋白酶原I和血清胃泌素-17的濃度，并且將所獲得的值與選定的截止點(diǎn)和參考值進(jìn)行比較來評估消化性潰瘍危險(xiǎn)性的方法。這樣所得到的結(jié)果使得評價(jià)可能增高了的消化性潰瘍的危險(xiǎn)性成為可能。
測量各種分析物的濃度的方法在本領(lǐng)域是已知的，并且為此目的也有商業(yè)上可得到的試劑盒。實(shí)現(xiàn)該測定的有些示范性方法也在WO出版物WO96/15456中加以描述。
發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有可能在個(gè)體中通過測定分析物胃蛋白酶原I、幽門螺旋菌感染標(biāo)志物和胃泌素-17，來檢測胃酸相關(guān)性疾病，其中胃泌素-17特別的是獲自空腹?fàn)顟B(tài)下的胃泌素-17。如果是基于胃蛋白酶原I和幽門螺旋菌標(biāo)志物，可以確定所述個(gè)體的胃粘膜是非萎縮性和非胃炎性的(無幽門螺旋菌感染)，即胃蛋白酶原I值高于截止點(diǎn)值顯示健康的體粘膜，并且個(gè)體沒有幽門螺旋菌感染，例如確立低幽門螺旋菌抗體效價(jià)后，低空腹胃泌素-17值提示胃過酸，并且個(gè)體發(fā)生例如上面所提到的酸相關(guān)疾病的危險(xiǎn)性增高。
在導(dǎo)致本發(fā)明的工作中，可以證實(shí)血清中低空腹胃泌素-17(G-17空腹)水平(＜1pmol/l)顯示胃高酸度(酸輸出持續(xù)較高)，胃內(nèi)H+濃度抑制了胃泌素-17從胃內(nèi)體胃泌素細(xì)胞中的釋放。胃泌素-17的血清水平在胃粘膜正常和健康的個(gè)體中是胃酸性的間接標(biāo)志物，即無幽門螺旋菌抗體，并且血清胃蛋白酶原I正常。
已經(jīng)用實(shí)驗(yàn)證實(shí)，血清中低空腹胃泌素-17顯示酸相關(guān)疾病的危險(xiǎn)性增高至少2倍，在酸相關(guān)疾病中可以提到例如胃食道反流性疾病(包括那些帶有賁門潰瘍和息肉的胃食道反流性疾病)、巴雷特氏食道、與幽門螺旋菌感染無關(guān)的十二指腸潰瘍病，和幽門螺旋菌感染根除后發(fā)生的胃食道反流性疾病。
特別的，本發(fā)明針對在個(gè)體內(nèi)檢測胃酸相關(guān)性疾病的危險(xiǎn)性的方法，該方法以測定分析物胃蛋白酶原I、空腹胃泌素-17和幽門螺旋菌感染標(biāo)志物(Hp-標(biāo)志物)為基礎(chǔ)，該方法包含-測定來自該個(gè)體的樣本中胃蛋白酶原I、空腹胃泌素-17的濃度以及Hp標(biāo)志物的濃度或存在，并且-將所測定的值與每一分析物的選定截止點(diǎn)值進(jìn)行比較，其中胃蛋白酶原I值等于或高于其相應(yīng)的截止點(diǎn)值，加之Hp標(biāo)志物值低于其相應(yīng)截止點(diǎn)值，再加上空腹胃泌素-17值等于或低于其相應(yīng)截止點(diǎn)，顯示所述個(gè)體中胃酸相關(guān)性疾病的危險(xiǎn)性增高。
因此本發(fā)明提供一種方法，使得鑒定一種個(gè)體成為可能，該個(gè)體具有發(fā)生酸相關(guān)疾病的增高的危險(xiǎn)性，例如上面所示例的那些酸相關(guān)疾病，以及相關(guān)腺癌危險(xiǎn)性。
所詳細(xì)說明的方法可因而被用來作為對個(gè)體中來自樣本，例如血液、血清或血漿樣本的胃酸度的間接測試。
發(fā)明詳述根據(jù)本發(fā)明，將一分析物的所測量值與截止點(diǎn)值進(jìn)行比較的過程，其目的是為了證實(shí)分析物的所測量值是否大于、等于、還是小于相應(yīng)的截止點(diǎn)值。
在本發(fā)明的上下文中，個(gè)體或受檢者指哺乳動(dòng)物，如人，或動(dòng)物，如寵物，例如狗。
本發(fā)明因而在第一步包括一種方法，用來至少測定來自將要被測試的個(gè)體的樣本中幽門螺旋菌標(biāo)志物、胃蛋白酶原I(PGI)和空腹胃泌素-17。
根據(jù)本發(fā)明的幽門螺旋菌感染的標(biāo)志物或指示物可以，例如是幽門螺旋菌抗體，其數(shù)值可以從體液樣本中加以測定。這樣的樣本有利地是血清樣本，但也可以是唾液、尿、淚液樣本，例如能得到的用來測量抗體值的商用試劑盒。幽門螺旋菌抗體的截止點(diǎn)值可由本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易地加以測定。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，我們使用了30EIU的值，作為指示幽門螺旋菌感染存在或不存在的截止點(diǎn)(cut-off)。針對幽門螺旋菌的特異性抗體也可用蛋白質(zhì)印跡進(jìn)行測量。
另一可選擇途徑是通過測定抗原自身的存在評價(jià)幽門螺旋菌感染的存在。這樣的測量法可例如在來自患者的大便樣本上完成，并且，針對這一目的的測定法，例如酶免疫測定，是商業(yè)上可得到的(參照例如Lancet 1999；354，30-33)。也有可能使用已熟知的測量二氧化碳含量的方法，測定來自患者呼吸中抗原的存在，來自被標(biāo)記的尿素的二氧化碳的形成受幽門螺旋菌細(xì)菌催化，并且為這一測定所提供的系統(tǒng)也是商業(yè)上可得到的(例如NosterAB，瑞典所生產(chǎn)的HeliprobeTM)。另一可選擇途徑是從在患者胃進(jìn)行內(nèi)窺鏡過程中取下的活組織檢查樣本中測定抗原存在或不存在。在這一可選擇途徑中，試驗(yàn)對抗原來說或者陽性或者陰性，并且抗原的存在被理解為指示幽門螺旋菌感染。在本發(fā)明的上下文中，當(dāng)Hp-標(biāo)志物是抗原本身時(shí)，試驗(yàn)是陽性或陰性，并且感染的截止點(diǎn)—感染的截止點(diǎn)是陽性和陰性之間的交界值—可因此被認(rèn)為是零，陽性試驗(yàn)指示抗原存在，并且因而指示異常狀態(tài)，而陰性試驗(yàn)是低于這一標(biāo)志物的截止點(diǎn)的值。
胃蛋白酶原和胃泌素優(yōu)選從體液樣本加以測定，特別是從血清、血漿或全血樣本，或從尿、唾液、或淚液樣本。
所述方法包括測量胃蛋白酶原I分析物，但根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，也有可能另外還測量胃蛋白酶原II分析物(PGII)的濃度，并且使用PGI與PGII的比值而不是PGI，或者另外作為將要與預(yù)先測定的截止點(diǎn)值比較的值。胃蛋白酶原I以及胃蛋白酶原I與II的比值傾向于隨著體粘膜萎縮的加劇而線性降低。
在根據(jù)本發(fā)明的方法中，使用胃蛋白酶原I的截止點(diǎn)值，該值是區(qū)分正常和萎縮行體粘膜的正常截止點(diǎn)值。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，該實(shí)施方式已給出可靠結(jié)果，所使用的血清或血漿胃蛋白酶原I的截止點(diǎn)值為≥50μg/l。這一數(shù)值比經(jīng)常使用的25μg/l的截止點(diǎn)稍微高一些，可以使用它以保證所檢驗(yàn)的個(gè)體確實(shí)具有非萎縮性的粘膜。血清或血漿胃蛋白酶原I的上參考限在大約130μg/l，由此在上限附近或超過上限的值可被用來證實(shí)疾病的危險(xiǎn)性增高。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員可輕易地選擇將要被用于特定狀態(tài)和所要測試的特定人群的截止點(diǎn)值。
同樣地，對于胃泌素而言，可以確定一截止點(diǎn)值，并且根據(jù)本發(fā)明測定空腹胃泌素-17。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式，發(fā)現(xiàn)空腹胃泌素-17以≤1pmol/l為截止點(diǎn)值適于大多數(shù)用途。這樣一個(gè)數(shù)值也被證明可有效區(qū)分具有發(fā)生酸相關(guān)疾病的危險(xiǎn)性的個(gè)體和不具有危險(xiǎn)性的個(gè)體，酸相關(guān)疾病如上面所定義。
在涉及測定分析物濃度的檢驗(yàn)中，截止點(diǎn)值(cut-off value)的概念對本領(lǐng)域技術(shù)人員是熟知的。截止點(diǎn)值通常意味著一個(gè)數(shù)值或一組數(shù)值，其被選擇以作為對所研究的測試來說在參考值(正常值)和異常值之間的界限。這樣的截止點(diǎn)值是方法特異性的，依賴于為用來測定分析物濃度的測試方法所選擇的特異性和敏感性，參見例如William J.Marshall，Clinical Chemistry，第3版，1995，Mosby。
如先前所提到的，測量胃蛋白酶原I，任選胃蛋白酶原II和胃泌素-17的方法在本領(lǐng)域是熟知的。測量通常為免疫方法，使用針對該被分析物的單或多克隆抗體。
所用的檢測方法包括，例如，測量吸收度、熒光或發(fā)光。也可能同時(shí)完成所有三種被分析物的測量，例如在同一微孔板上的不同孔中或在其上的同一孔中，這提供了一種特別方便的方法。
如先前所提到的，也有商用試劑盒，可用來測量各種分析物濃度，例如GastroPanel(Biohit Oyj，赫爾辛基，芬蘭)，用來從血液樣本中測量胃蛋白酶原I、胃泌素-17和幽門螺旋菌抗體。所測量的數(shù)據(jù)可隨后例如用軟件加以評估，例如GastroSoft軟件，其基于獲自分析物濃度的結(jié)果草擬出診斷，并給出進(jìn)一步治療的建議。


圖1顯示具有正常胃部的巴雷特氏陰性和巴雷特氏陽性患者的空腹胃泌素-17水平。從結(jié)果可以看出，在巴雷特氏陽性患者中，55％的空腹胃泌素-17值等于或低于1pmol/l，而只有23％的巴雷特氏陰性患者具有如此低的胃泌素-17值。其區(qū)別在統(tǒng)計(jì)上是顯著的。因而空腹胃泌素-17是一個(gè)標(biāo)志物，在有正常胃的個(gè)體組中，將具有發(fā)生酸相關(guān)疾病的危險(xiǎn)性的個(gè)體與不具有危險(xiǎn)性的個(gè)體區(qū)別開。
圖2顯示具有正常胃的巴雷特氏陰性和巴雷特氏陽性患者的空腹胃泌素-17水平。
圖3餐后胃泌素-17(受刺激的胃泌素-17)的相應(yīng)水平。很明顯，空腹胃泌素-17在巴雷特氏陰性和巴雷特氏陽性患者之間導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著區(qū)別，然而餐后胃泌素-17卻不是這樣。
實(shí)驗(yàn)測試圖1-3所顯示的結(jié)果基于下列測試。
測試材料由300名患胃消化不良、進(jìn)行過內(nèi)窺鏡檢查的病人組成。他們被有目的地加以搜集，患者被分成兩組。病例組由15名患者組成，他們在組織學(xué)上和用內(nèi)窺鏡證實(shí)具有典型的長段巴雷特氏。在這些當(dāng)中，11人具有正常和健康的胃粘膜，正常和健康的胃粘膜的定義是沒有幽門螺旋菌胃炎(幽門螺旋菌IgG抗體效價(jià)＜30EIU)，并且胃蛋白酶原I血清水平正常(≥50μg/l)。他們還在胃腔和胃體的內(nèi)窺鏡活組織檢查中具有正常胃組織學(xué)。對照(126名患者)由不具有巴雷特氏食道和幽門螺旋菌抗體的患者組成，并具有正常血清胃蛋白酶原I。將這兩組(病例和對照)進(jìn)行比較。
酰胺化胃泌素-17的空腹水平的平均值(G-17空腹)在患者中比在對照中顯著(P＝0.045，Mann-Whitney U檢驗(yàn))降低(4.0±6.1pmol/l與2.0±3.0pmol/l)。另一方面，餐后G-17水平(G-17餐后)在病例和對照中沒有區(qū)別。相反，G-17餐后在巴雷特氏患者中比在對照中稍高(15.7±18.2pmol/l與13.4±18.2)。
當(dāng)將1pmol/l設(shè)作截止點(diǎn)界限時(shí)，11個(gè)巴雷特氏患者中有6個(gè)(55％)的G-17空腹水平低于這一截止點(diǎn)，而這一流行率在對照中是126個(gè)中有29個(gè)(23％)(P＜0.05，X2檢驗(yàn))。
此外，還有5個(gè)具健康、正常胃粘膜、但發(fā)生十二指腸潰瘍(DU)的患者(這些患者中潰瘍的病因?qū)W是使用NSAID或阿司匹林，此外還有正常或高酸輸出)。這5個(gè)DU病人中G-17空腹的血清水平極低(0.458±0.431pmol/l)；即，顯著低于適當(dāng)?shù)姆荄U、非巴雷特氏對照的值。
權(quán)利要求
1.檢測個(gè)體中胃酸相關(guān)性疾病的危險(xiǎn)性的方法，該方法以測定分析物胃蛋白酶原I、空腹胃泌素-17和幽門螺旋菌感染標(biāo)志物(Hp-標(biāo)志物)為基礎(chǔ)，該方法包含-測定來自該個(gè)體的樣本中胃蛋白酶原I、空腹胃泌素-17的濃度以及Hp標(biāo)志物的濃度或存在，并且-將所測定的值與每一分析物的選定截止點(diǎn)值進(jìn)行比較，其中胃蛋白酶原I值等于或高于其相應(yīng)的截止點(diǎn)值，加之Hp標(biāo)志物值低于其相應(yīng)截止點(diǎn)值，再加上空腹胃泌素-17值等于或低于其相應(yīng)截止點(diǎn)，顯示所述個(gè)體中胃酸相關(guān)性疾病的危險(xiǎn)性增高。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中幽門螺旋菌標(biāo)志物是幽門螺旋菌抗體，其濃度從該樣本中加以測量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中幽門螺旋菌標(biāo)志物是幽門螺旋菌抗原，其存在從該樣本中加以測定。
4.根據(jù)前述任一權(quán)利要求的方法，還包括測量受刺激的胃泌素-17值(G-17刺激)。
5.根據(jù)前述任一權(quán)利要求的方法，還包括測量分析物胃蛋白酶原II(PGII)的濃度，并得到PGI/PGII比值用于比較。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中測量來自體液，例如血清、血漿、全血、尿、唾液或淚液樣本，特別是血清樣本的分析物。
7.根據(jù)前述任一權(quán)利要求的方法，其中胃酸相關(guān)性疾病是反流性疾病或巴雷特氏食道。
全文摘要
本發(fā)明針對在個(gè)體內(nèi)檢測胃酸相關(guān)性疾病的危險(xiǎn)性的方法，該方法以測定分析物胃蛋白酶原I、空腹胃泌素－17和幽門螺旋菌感染標(biāo)志物(Hp－標(biāo)志物)為基礎(chǔ)，該方法包含選定胃蛋白酶原I、空腹胃泌素－17和Hp－標(biāo)志物的截止點(diǎn)值，測定來自該個(gè)體的樣本中胃蛋白酶原I、空腹胃泌素－17的濃度以及Hp標(biāo)志物的濃度或存在，并且將所測定的濃度與選定的截止點(diǎn)值進(jìn)行比較，其中胃蛋白酶原I值等于或高于其相應(yīng)的截止點(diǎn)值，加之Hp標(biāo)志物值低于其相應(yīng)截止點(diǎn)值，再加上空腹胃泌素－17值等于或低于其截止點(diǎn)，顯示所述個(gè)體中胃酸相關(guān)性疾病的危險(xiǎn)性增高。
文檔編號G01N33/53GK1682115SQ03821224
公開日2005年10月12日 申請日期2003年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月6日
發(fā)明者奧斯莫·斯沃瓦尼米, 馬蒂·哈科南, 彭蒂·賽波南 申請人:拜奧希特公司