專(zhuān)利名稱(chēng)：一種輸血前血液配合試驗(yàn)的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于一種用于輸血前進(jìn)行血液配合試驗(yàn)的方法。本發(fā)明尤其是關(guān)于一種不需使用離心機(jī)即可于輸血前進(jìn)行血液配合試驗(yàn)的方法。
背景技術(shù)：
血型(blood groups)是表現(xiàn)人類(lèi)個(gè)體的特征，是一種遺傳的表現(xiàn)。臨床上所說(shuō)的血型是指紅血球表面抗原構(gòu)造的差異。從廣義來(lái)說(shuō)，血型包括紅血球、白血球、血小板、血漿等血液成分不同的抗原系統(tǒng)。而一般常說(shuō)的ABO血型，就是指血液中紅血球所帶的抗原種類(lèi)不同而言。例如，紅血球上含有A抗原的，稱(chēng)為A型；含有B抗原的，稱(chēng)為B型；同時(shí)含有A和B兩種抗原的，稱(chēng)為AB型；既不含A抗原又不含B抗原的稱(chēng)為O型。
目前人類(lèi)的血型系統(tǒng)是根據(jù)紅血球所帶抗原種類(lèi)的不同約可分成二十多種血型系統(tǒng)，其包括ABO血型系統(tǒng)、MNS血型系統(tǒng)、P血型系統(tǒng)、Rh血型系統(tǒng)、Kell血型系統(tǒng)、Lewis血型系統(tǒng)、Dutty血型系統(tǒng)、Kidd血型系統(tǒng)、Diego血型系統(tǒng)、I血型系統(tǒng)…等(表一)。而在這些血型系統(tǒng)中，與輸血關(guān)系最大的為ABO血型系統(tǒng)，其次為其它血型系統(tǒng)。
若將兩個(gè)體中血型不兼容的血液滴放在玻片上混合，其中的紅血球即聚集成簇，這種情形稱(chēng)為凝集(agglutination)。當(dāng)紅血球的凝集發(fā)生時(shí)，有時(shí)還伴隨有溶血現(xiàn)象。當(dāng)血型不兼容的血液輸入循環(huán)血液中時(shí)，在血管內(nèi)亦會(huì)發(fā)生同樣的情況，此凝集成簇的紅血球會(huì)堵塞微血管及溶血，且將會(huì)損害腎小管，同時(shí)亦會(huì)伴發(fā)過(guò)敏反應(yīng)，其結(jié)果可危及生命。
輸血是對(duì)各種原因引起的失血、貧血、低血壓、低血紅素等患者的一種重要醫(yī)療措施，和確保一些手術(shù)得以順利進(jìn)行的重要手段。及時(shí)且正確的輸血，?？墒股刮５幕颊哌_(dá)到起死回生的作用。但是，錯(cuò)誤的輸血，也可以?shī)Z取患者的生命。輸入不兼容血型的血液，如不及時(shí)發(fā)現(xiàn)，會(huì)產(chǎn)生過(guò)敏性休克或嚴(yán)重的溶血反應(yīng)并發(fā)急性腎功能衰竭而死亡。
1901年德斯坦納(Landsteiner)發(fā)現(xiàn)了第一個(gè)血型系統(tǒng)，即ABO血型系統(tǒng)，從此為人類(lèi)揭開(kāi)了血型的奧秘，并使輸血成為安全性較高的臨床治療手段。在準(zhǔn)備輸血時(shí)，首先必須保證供血者與受血者的ABO血型相合，因?yàn)檫@一系統(tǒng)的不兼容輸血常引起嚴(yán)重的反應(yīng)。對(duì)于白種人來(lái)說(shuō)，生育年齡的婦女以及需要反復(fù)輸血的病人，還必須使供血者與受血者的Rh血型相合，以避免受血者在被敏感后產(chǎn)生抗Rh的抗體。
在臨床上即使在ABO系統(tǒng)血型相同的人的間進(jìn)行輸血，在輸血前必須進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)(cross-match test)。這樣，不但可檢驗(yàn)血型測(cè)定是否有誤，亦可發(fā)現(xiàn)他們的紅血球或血清中，是否還存在一些其它足以引起紅血球凝集反應(yīng)的抗原或抗體。
交叉配血中最重要的是ABO血型配合，必需ABO血型相同，且交叉配血無(wú)凝集才能輸血。已知的交叉配血法是采用室溫鹽水配血法，這種方法的主要缺點(diǎn)是只能檢查出不相配合的完全抗體，而不能檢查出不相配合不完全抗體，所以?xún)H可以滿(mǎn)足大部分輸血者ABO血型配血要求。而除ABO系統(tǒng)以外的其它血型系統(tǒng)的抗體或多次接受輸血患者及多次妊娠的婦女產(chǎn)生的抗體絕大多數(shù)為不完全抗體，在鹽水介質(zhì)中紅血球不易產(chǎn)生凝集。為檢查出不完全抗體常用方法有抗人類(lèi)球蛋白法、蛋白酶法及膠體介質(zhì)法等，這些方法亦存在一些缺點(diǎn)。為了輸血安全及操作方便，必須改良配血方法。
近年提出的用凝聚胺(Polybrene)配制的試劑可以檢查出完全抗體與不完全抗體兩種性質(zhì)的抗體，且能發(fā)現(xiàn)可引起溶血性輸血反應(yīng)的絕大多數(shù)抗體，此種檢測(cè)方法被稱(chēng)為手工凝聚胺法(Manual Polybrene)。凝聚胺是一種多價(jià)陽(yáng)離子氨基聚合物，它可以引起正常紅血球的可逆性凝集，如果被抗體致敏的紅血球與凝聚胺連在一起，就會(huì)發(fā)生不可逆凝集。
大部份發(fā)達(dá)國(guó)家已導(dǎo)入需使用特殊的試劑及設(shè)備(例如，抗球蛋白血清、離心機(jī)等)的標(biāo)準(zhǔn)化輸血前檢測(cè)的方法。然而，這些設(shè)備對(duì)落后國(guó)家來(lái)說(shuō)，卻是不易取得的，或因價(jià)格過(guò)高而無(wú)法購(gòu)得。因此，對(duì)于這些發(fā)展中國(guó)家或落后國(guó)家來(lái)說(shuō)，開(kāi)發(fā)不需使用離心機(jī)或昂貴試劑的配合試驗(yàn)的操作程序是非常重要的。
本發(fā)明在此即致力于提供一種比手工凝聚胺法操作更簡(jiǎn)單，且不需使用昂貴試劑及離心機(jī)的方法，以有效檢測(cè)出血液中具有臨床上重要性的抗體。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的，是提供一種不需使用昂貴試劑及離心機(jī)即可于輸血前進(jìn)行血液配合試驗(yàn)的方法。
本發(fā)明的另一目的，是提供一種操作人員僅需接受最少的訓(xùn)練即可進(jìn)行血液配合試驗(yàn)的方法。
本發(fā)明的又一目的，是提供一種簡(jiǎn)單且快速的輸血前血液配合試驗(yàn)的方法。
本發(fā)明所提出的在輸血前進(jìn)行血液配合試驗(yàn)的方法，是改良自手工凝聚胺法(Manual Polybrene，MP)，將原先需要試管及離心機(jī)的檢測(cè)方式，改以一載體(例如，載玻片)所取代，以獲得一種快速且簡(jiǎn)便的血液配合試驗(yàn)方法，在此稱(chēng)之為玻片凝聚胺法(Slide Polybrene，SP)。
其方法是通過(guò)使用一載體(例如，載玻片)，于該載體上依序加入低離子力溶液、待測(cè)病人血清(或血漿)及供血者血球(或抗體篩檢血球)后混合，再加入凝聚胺溶液混合后靜置。此時(shí)會(huì)很快的出現(xiàn)紅血球凝集現(xiàn)象。之后，再加入再懸浮溶液，經(jīng)搖晃后由凝聚胺引起的凝集會(huì)再度分散；而由抗體所引起的凝集則不會(huì)被分開(kāi)，而此一凝集所產(chǎn)生的產(chǎn)物，可立即且輕易的由肉眼或放大鏡(如果必要時(shí))所觀察到。
手工凝聚胺法中紅血球是通過(guò)離心力的作用而使其緊靠在一起，由此增強(qiáng)其血球凝集效果。然而，在玻片凝聚胺法中紅血球則是通過(guò)凝聚胺試劑的正電荷作用而聚集在一起，以造成非特異性紅血球凝集。
本發(fā)明將通過(guò)參考下列的實(shí)施例做進(jìn)一步的說(shuō)明，這些實(shí)施例并不限制本發(fā)明前面所揭示的內(nèi)容。熟悉本發(fā)明的技藝者，可做一些改良與修飾，但仍不脫離本發(fā)明的范疇。
具體實(shí)施例方式
根據(jù)本發(fā)明所提出的一種玻片凝聚胺法，其檢測(cè)步驟大致上可區(qū)分成三個(gè)階段，包含致敏階段(sensitization phase)、凝聚胺聚集階段(Polybreneaggregation phase)及再懸浮階段(resuspension phase)。
其中致敏階段，是包含將低離子力溶液加入一預(yù)先備妥的載體(例如，載玻片)上，緊接著于此載體上已滴有低離子溶液處加入待測(cè)血清(或血漿)及紅血球[抗體篩檢血球(antibody screening cells)或供血者的血球]鹽水溶液[或10μl紅血球濃厚液(packed RBCs)]。這些試劑可由攪拌棒將其混合均勻，接著于室溫下靜置0.5～5分鐘，較佳為1～2分鐘。
凝聚胺聚集階段，是包含將凝聚胺反應(yīng)溶液(working solution)加入前述玻片上的混合液中，并以涂抹棒將其混合均勻，接著于室溫(約22℃)下靜置0.5～5分鐘，較佳為1～3分鐘。紅血球聚集現(xiàn)象通常于加入凝聚胺溶液30秒后開(kāi)始出現(xiàn)，且于1分鐘的內(nèi)完成；再懸浮階段，包含將一滴的再懸浮溶液加入上述玻片的試劑中，再以手輕輕搖晃此玻片約8～120秒，較佳為10～60秒，直到任何由凝聚胺引起的非特異性聚集被分散。而真正由抗體所引起的聚集則不會(huì)被分開(kāi)，且可立即為肉眼所觀察到。對(duì)于較微弱的反應(yīng)來(lái)說(shuō)，此一聚集產(chǎn)物可通過(guò)放大器來(lái)觀察到。由此可快速的獲得檢測(cè)的結(jié)果，且于加入再懸浮液后通常不需超過(guò)3分鐘即可獲得檢測(cè)結(jié)果。
就日常品質(zhì)控制來(lái)說(shuō)應(yīng)包含一微弱反應(yīng)抗-E或抗-D做為正控制組，且插入AB型血清做為負(fù)控制組。
前述的低離子力溶液、待測(cè)血清、紅血球鹽水溶液及再懸浮溶液的使用量的體積比，以再懸浮溶液的使用量為1體積份時(shí)，低離子力溶液的使用量為1.5～8體積份，較佳為2～4體積份；而待測(cè)血清的使用量為1～5體積份，較佳為1.5～2.5體積份；紅血球鹽水溶液的使用量為0.5～3體積份，較佳為0.75～1.5體積份。
前述的低離子力溶液可通過(guò)將葡萄糖與乙二胺四乙酸二鈉鹽(disodiumEDTA)溶于水中所制備。例如，將25克葡萄糖及1克乙二胺四乙酸二鈉鹽溶于500毫升蒸餾水中。
前述的紅血球鹽水溶液是以0.9％生理食鹽水所調(diào)配而成，其濃度為15～25％，較佳為18～22％。
前述的凝聚胺反應(yīng)溶液，是以生理食鹽水所配制而成，其濃度較佳為0.1～0.15％。其配置與保存方法，可由1克凝聚胺與10毫升0.9％生理食鹽水，配制成10％儲(chǔ)存溶液(stock solution)冷凍儲(chǔ)存。待使用時(shí)，再以0.9％生理食鹽水配制成所需濃度的反應(yīng)溶液。
前述的再懸浮溶液是以0.3～0.5M的檸檬酸三鈉水溶液與5％葡萄糖水溶液混合所制備。前述的檸檬酸三鈉水溶液與葡萄糖水溶液的混合體積比，較佳為1～2∶1。
實(shí)施例一以玻片凝聚胺法進(jìn)行檢測(cè)的靈敏度為檢測(cè)玻片凝聚胺法對(duì)于檢測(cè)不同種的異體抗體(alloantibodies)的靈敏度。在此所使用的異體抗體包含抗-E、抗-“Mia”、抗-D、抗-K、抗-Jka、抗-Jkb、抗-Dia、抗-Fya及抗Fyb，及取自于“血清、細(xì)胞及罕見(jiàn)血液國(guó)際免疫血液交換組織(Serum，Cells and Rare Fluids International ImmunohematologyExchange Group，SCARF)”所贈(zèng)在臺(tái)灣少見(jiàn)的抗體。
首先，先于載玻片上以蠟筆畫(huà)出一尺寸約為3×1.5公分大小的橢圓形溢流環(huán)，用以避免檢測(cè)過(guò)程中試劑溢流出此一范圍，而造成檢測(cè)結(jié)果的偏差。
之后，將三滴(每滴約50μl)低離子力溶液加入載玻片中，緊接著加入兩滴待測(cè)血清及一滴的20％抗體篩檢血球鹽水溶液，以涂抹棒將其混合均勻后，于室溫下靜置約1分鐘。
于前述載玻片上的試劑中加入一滴0.1％凝聚胺反應(yīng)溶液，并以涂抹棒將其混合均勻，接著于室溫下靜置1分鐘。
將一滴的再懸浮溶液加入上述載玻片上的試劑中，再以手輕輕搖晃此玻片10秒鐘，使由凝聚胺引起的非特異性聚集分散開(kāi)。最后，再以肉眼觀察紅血球的凝集結(jié)果。
血清抗體力價(jià)的測(cè)定方式，是利用半定量的方式來(lái)測(cè)定，其是以二倍稀釋法所得的稀釋血清再和一定量的血球作用，最后以能與紅血球發(fā)生凝集反應(yīng)的最高稀釋倍數(shù)來(lái)表示抗體的力價(jià)。
用做為抗體力價(jià)測(cè)定的稀釋劑為3％白蛋白食鹽水溶液(牛血清白蛋白購(gòu)自美國(guó)Sigma化學(xué)公司)。
比較實(shí)施例一以手工凝聚胺法進(jìn)行檢測(cè)的靈敏度使用與實(shí)施例一中相同的抗體篩檢血球，以0.9％生理食鹽水調(diào)配成3％的濃度。
將2滴待測(cè)血清及1滴3％抗體篩檢血球加入試管中，之后搖動(dòng)混合。
加0.6毫升低離子力溶液(LIM)到每一支試管中，混合后，靜置1分鐘。再于上述試管中加入2滴(約0.1毫升)0.05％凝聚胺溶液，混合，靜置15秒。
將上述混合液以3,400rpm的轉(zhuǎn)速離心10秒。去除上清液。
加入2滴(0.1毫升)的再懸浮液，緩和的混合10秒鐘。倒在玻片上于3分鐘內(nèi)用肉眼和顯微鏡觀察有無(wú)凝集現(xiàn)象(10秒內(nèi)，若為凝聚胺引起的聚合應(yīng)該會(huì)分散開(kāi)，若為抗原抗體引起的凝集，則不會(huì)分開(kāi))。
待測(cè)血清亦以二倍稀釋法稀釋并與一定量的紅血球作用以上述的方法進(jìn)行測(cè)定，以測(cè)定出能與紅血球發(fā)生凝集反應(yīng)的最高稀釋倍數(shù)。
比較實(shí)施例二以間接抗球蛋白法進(jìn)行檢測(cè)的靈敏度于試管中加入待測(cè)血清二滴，之后加入1滴與比較實(shí)施例一中相同的3％抗體篩檢血球，以3,400rpm轉(zhuǎn)速離心15秒，搖開(kāi)，加入牛白蛋白(BovineAlbumin)溶液2滴，于37℃下靜置15～30分鐘。以生理食鹽水清洗3～4次后，去除上清液。
加入2滴多價(jià)抗人體球蛋白試劑，經(jīng)混合后再以3,400rpm離心15秒，以肉眼或顯微鏡觀察有無(wú)凝集現(xiàn)象。若有凝集，則為陽(yáng)性。
待測(cè)血清亦以二倍稀釋法稀釋并與一定量的紅血球作用以上述的方法進(jìn)行測(cè)定，以測(cè)定出能與紅血球發(fā)生凝集反應(yīng)的最高稀釋倍數(shù)。
實(shí)施例一、比較實(shí)施例一與比較實(shí)施例二中不同血清樣品，分別經(jīng)二倍稀釋法以不同的檢測(cè)法，測(cè)定能與紅血球發(fā)生凝集反應(yīng)的最高稀釋倍數(shù)，其測(cè)定結(jié)果示于表二。
綜合實(shí)施例一、比較實(shí)施例一及比較實(shí)施例二，由表二中可以看出于檢測(cè)抗-E時(shí)，玻片凝聚胺法(SP)及手工凝聚胺法(MP)較間接抗球蛋白法(IAT)有較高的靈敏性。而間接抗球蛋白法則較玻片凝聚胺法與手工凝聚胺法于檢測(cè)抗-“Mia”、-K、-Jka及-Jkb時(shí)有較高的靈敏度。
實(shí)施例二玻片凝聚胺法對(duì)不同的異體抗體的檢出率為測(cè)試不同的異體抗體(alloantibodies)的檢出率，在此所使用的異體抗體包含抗-“Mia”(23例)、抗-E(8例)、抗-D(5例)、抗-C(1例)、抗-Jka，-Jkb及-Jk3(共8例)、抗-Kpb(2例)、抗-Dia及-Dib(共6例)、抗-S(1例)、抗-M(4例)、抗-P1(2例)、抗-Lea及-Leb(共2例)、抗-A(10例)、抗-B(10例)、抗-H(13例)及抗-I(2例)，共85例，部分抗體是取自于“血清、細(xì)胞及罕見(jiàn)血液國(guó)際免免疫血液交換組織(SCARF)”。
將含有前述異體抗體抗體的抗體篩檢血球以實(shí)施例一中所述的檢測(cè)方法進(jìn)行測(cè)試，但不經(jīng)二倍稀釋法稀釋?zhuān)匀庋蹤z測(cè)受測(cè)樣品凝集情形，其結(jié)果示于表三。
比較實(shí)施例三手工凝聚胺法對(duì)不同的異體抗體抗體的檢出率將實(shí)施例二中所使用的85例異體抗體抗體，以比較實(shí)施例一中的方法進(jìn)行測(cè)試，但不經(jīng)二倍稀釋法稀釋?zhuān)匀庋蹤z測(cè)受測(cè)樣品凝集情形，其結(jié)果示于表三。
比較實(shí)施例四間接抗球蛋白法對(duì)不同的異體抗體抗體的檢出率將實(shí)施例二中所測(cè)試的85例異體抗體抗體，以比較實(shí)施例二中的方法進(jìn)行測(cè)試，但不經(jīng)二倍稀釋法稀釋?zhuān)匀庋蹤z測(cè)受測(cè)樣品凝集情形，其結(jié)果示于表三。
綜合實(shí)施例二、比較實(shí)施例三及比較實(shí)施例四，由表三中可得知玻片凝聚胺法可自23個(gè)抗-“Mia”樣本中檢測(cè)出21個(gè)，自8個(gè)抗-E樣本中檢測(cè)出7個(gè)。此外，玻片凝聚胺法亦可迅速且完全的檢測(cè)出ABO血型系統(tǒng)中不兼容的血型。此外，玻片凝聚胺法對(duì)于其它臨床上重要的異體抗體也可快速的檢測(cè)出，這些臨床上重要的異體抗體，也包含對(duì)抗Kidd及Diego血型系統(tǒng)抗原的抗體。
另一方面，于85個(gè)取自病患的異體抗體中，經(jīng)檢測(cè)后有74個(gè)抗體可為玻片凝聚胺法所測(cè)得，包含10個(gè)抗-A及10個(gè)抗-B。而抗-Kpa僅可通過(guò)間接抗球蛋白法所測(cè)得。
雖然，兩種凝聚胺法皆具有較難測(cè)得Kell血型系統(tǒng)的抗體的缺點(diǎn)。然而，在東方人的族群中K抗原出現(xiàn)的頻率非常低(接近0％)，因此于臨床醫(yī)學(xué)上的重要性不大。
綜合實(shí)施例一及實(shí)施例二的結(jié)果顯示，玻片凝聚胺法可檢測(cè)出大部分臨床上重要的異體抗體，特別是抗-E及抗-“Mia”。此二種抗體是為在臺(tái)灣臨床醫(yī)學(xué)上重要且最常見(jiàn)的異體抗體，且在其它的東南亞地區(qū)亦具有相似的臨床重要性。白種人的MNS血型系統(tǒng)中，MiIII血型是屬于稀有血型，然而在臺(tái)灣出現(xiàn)旳頻率為7.3％，其中以臺(tái)灣原住民出現(xiàn)的比例最高為世界之冠。在臺(tái)灣約每二百人中有一人帶有能與MiIII表現(xiàn)型的紅血球反應(yīng)的抗-”Mia”抗體，因此臺(tái)灣血庫(kù)作業(yè)所使用的抗體篩檢血球必須含有MiIII表現(xiàn)型的紅血球，當(dāng)輸錯(cuò)血液時(shí)其排斥反應(yīng)與ABO血型的反應(yīng)類(lèi)似。
其它異體抗體，例如抗-D、-K、-Jka、-Jkb、-Fya及-Fyb亦可為玻片凝聚胺法所測(cè)得，且其靈敏度與手工凝聚胺法相近。雖然，玻片凝聚胺法(及手工凝聚胺法)于檢測(cè)抗-K時(shí)，比間接抗球蛋白法的靈敏度為低。但由于絕大多數(shù)東南亞地區(qū)的病患及捐血者皆為K抗原陰性，因此可預(yù)期抗-K的發(fā)生率應(yīng)相當(dāng)?shù)?。?shí)際上的例子，臺(tái)灣過(guò)去20年來(lái)僅發(fā)現(xiàn)一例可與Kell血型系統(tǒng)的抗原反應(yīng)的抗體。因此，對(duì)東南亞地區(qū)而言，使用靈敏檢測(cè)Kell血型系統(tǒng)的抗體程序，于常規(guī)的血液配合試驗(yàn)程序中似乎是不需要的。
綜上所述，玻片凝聚胺法是為一種極快的(約五分鐘)、便宜的(檢測(cè)用的試劑很容易制備，且可于實(shí)驗(yàn)室中自己制備)，且易于操作的檢測(cè)方法。操作人員僅需要一天左右的訓(xùn)練即可勝任此一檢測(cè)工作。因此，于資源較少的國(guó)家中，尤其是輸血前的配合試驗(yàn)主要做ABO血型系統(tǒng)的配合，使用玻片凝聚胺法，將可顯著的改善輸血安全。在這些國(guó)家中，許多臨床上仍未被檢測(cè)出的重要抗體，由此亦可被檢測(cè)出。
在發(fā)展中國(guó)家的輸血工作，不僅缺乏離心機(jī)，同時(shí)亦缺少足夠的資金購(gòu)買(mǎi)試劑以及訓(xùn)練新的人員。在這些國(guó)家中，可選擇使用玻片凝聚胺法，用于常規(guī)的輸血前檢測(cè)中以改善輸血病患的安全。
表一部份已知血型系統(tǒng)及其特異抗體

表二以玻片凝聚胺法(SP)、手工凝聚胺法(MP)及間接抗球蛋白法(IAT)檢測(cè)異體抗體的力價(jià)的比較抗-方法E E E E EEE*“Mia” “Mia” “Mia” “Mia” “Mia”玻片凝聚胺法1 4 8 16128 512 2001 2 2 4 8手工凝聚胺法1 8 128 641024 2048 1600 2 2 4 16 8間接抗球蛋白法 1 8 2 1 512 256 2001 4 16 64 32抗-方法D*K#K#Jka#Jkb#Jkb#Dia#Fya#Fyb#Fyb玻片凝聚胺法1600 2162 416 2 4 4 1手工凝聚胺法6400 1161 416 16 64 1616間接抗球蛋白法 3200 64 512 4 832 4 1288 4備注*為美國(guó)食品藥物管理局(FDA)核準(zhǔn)的商業(yè)單株抗體(monoclonal antibodie)#為美國(guó)食品藥物管理局(FDA)核準(zhǔn)的商業(yè)抗血清。
表三不同檢測(cè)方法對(duì)不同的異體抗體所能檢測(cè)出的病患個(gè)數(shù)抗- 病患數(shù)玻片凝聚胺法手工凝聚胺法 間接抗球蛋白法“Mia” 2321 2323E 8 7 8 7D 5 5 5 5C 1 1 1 1Jka.Jka.Jk3 8 5 8 8Kpb2 0 0 2Dia.Dib6 3 6 6S 1 1 1 1M 4 4 4 2P1 2 2 2 0Lea.Leb2 2 2 1A 10 10 1010B 10 10 1010H*1 1 1 1I 2 2 2 0總數(shù)85 74 8377備注*為孟買(mǎi)表現(xiàn)型(Bombay phenotype)
權(quán)利要求
1.一種血液配合試驗(yàn)的檢測(cè)方法，其步驟包含(A)取用一載體；(B)于該載體上加入低離子力溶液、待測(cè)血清或血漿，以紅血球食鹽水溶液，經(jīng)混合后靜置1～2分鐘；(C)于該載體上再加入凝聚胺食鹽水溶液，經(jīng)混合后靜置1～3分鐘；(D)于該載體中再加入再懸浮溶液，輕搖10～60秒；(E)觀察紅血球凝集的情形，其中該紅血球食鹽水溶液的濃度為18～22％，且該凝聚胺食鹽水溶液的濃度為0.1～0.15％。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其中該低離子力溶液、該待測(cè)血清或血漿、該紅血球食鹽水溶液，以及該凝聚胺食鹽水溶液的使用量，以該再懸浮溶液的使用量為1體積份時(shí)，該低離子力溶液的使用量為2～4體積份；該待測(cè)血清或血漿的使用量為1.5～2.5體積份；該紅血球鹽水溶液的使用量為0.75～1.5體積份。
3.如權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其中該一體積份是為20～200微升。
4.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其中該步驟(B)中的該低離子力溶液是以葡萄糖及乙二胺四乙酸二鈉鹽溶于蒸餾水中所制備。
5.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其中該步驟(D)中的該再懸浮液是以0.3～0.5M的檸檬酸三鈉水溶液與5％葡萄糖水溶液混合所制備，其中該檸檬酸三鈉水溶液與該葡萄糖水溶液的體積混合比為1～2∶1。
6.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其中該步驟(A)中的該載體為載玻片。
7.如權(quán)利要求1或6所述的檢測(cè)方法，其中該載體上進(jìn)一步設(shè)置一溢流環(huán)。
全文摘要
本發(fā)明是有關(guān)一種簡(jiǎn)易且快速的血液配合試驗(yàn)的檢測(cè)方法，可于輸血前有效檢測(cè)出供血者與受血者的血液是否配合(或相容)，以提高輸血安全。本方法是改良自手工凝聚胺法(MP)，在不需使用試管或離心機(jī)的情況下，僅需通過(guò)使用一玻片，即可有效的檢測(cè)出病患血清(或血漿)中的紅血球異體抗體(alloantibodies)。本發(fā)明所提出的方法，極適用于資源缺乏的地區(qū)或發(fā)展中國(guó)家，特別是血球上K抗原頻率極低的族群。
文檔編號(hào)G01N33/543GK1614424SQ20031010429
公開(kāi)日2005年5月11日 申請(qǐng)日期2003年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月6日
發(fā)明者林媽利 申請(qǐng)人:財(cái)團(tuán)法人臺(tái)灣基督長(zhǎng)老教會(huì)馬偕紀(jì)念社會(huì)事業(yè)基金會(huì)馬偕紀(jì)念醫(yī)院