專(zhuān)利名稱(chēng)：黃楊寧片中環(huán)維黃楊星d含量及含量均勻度高效液相色譜測(cè)定法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D含量及含量均勻度測(cè)定法，特別是涉及黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D含量及含量均勻度的高效液相色譜測(cè)定法。
背景技術(shù)：
以黃楊生物堿總堿(有效部位)為原料生產(chǎn)的制劑黃楊寧片，其《中國(guó)藥典》2000年版一部所載的方法是酸性染料比色法，該方法雖然簡(jiǎn)便、靈敏度高，但專(zhuān)屬性差，所以測(cè)得的是生物堿總堿，不能測(cè)定其中環(huán)維黃楊星D的含量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種靈敏度高、專(zhuān)屬性強(qiáng)的黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D含量及含量均勻度的高效液相色譜測(cè)定法。
本發(fā)明的目的可以通過(guò)下列措施來(lái)實(shí)現(xiàn)一種黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D含量及含量均勻度的高效液相色譜測(cè)定法，其色譜條件中固定相用氨丙基硅烷鍵合硅膠為色譜柱的填充劑；流動(dòng)相采用磷酸氫二鉀—乙腈體系。
本發(fā)明的目的還可以通過(guò)下列措施來(lái)實(shí)現(xiàn)所述的黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D含量及含量均勻度高效液相色譜測(cè)定法，進(jìn)樣前待測(cè)樣品先調(diào)節(jié)pH至2～6，再調(diào)節(jié)pH至10～13，然后以萃取用有機(jī)溶劑萃取3～8次進(jìn)行提取分離。
所述的黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D含量及含量均勻度高效液相色譜測(cè)定法中萃取用有機(jī)溶劑為氯仿、二氯甲烷、叔丁基甲醚、苯、環(huán)己烷、醋酸乙酯。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明采用高效液相色譜技術(shù)，測(cè)定黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D的含量，不但靈敏度高，對(duì)毫克數(shù)量級(jí)所測(cè)誤差不大于5％，而且專(zhuān)屬性強(qiáng)，能很好地將“黃楊寧”中與主成分“環(huán)維黃楊星D”結(jié)構(gòu)相似的幾種生物堿有效地分開(kāi)，從而能測(cè)定它們各自的含量，利用該方法還可以測(cè)定黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D的含量均勻度，很好地滿(mǎn)足藥典含量及含量均勻度測(cè)定的要求。該方法利用氨基柱、特定的流動(dòng)相和檢測(cè)波長(zhǎng)是其關(guān)鍵。本方法中提取分離方法能將零點(diǎn)幾毫克的檢測(cè)成分提取分離出來(lái)，這就保證了方法的準(zhǔn)確度。


圖1為黃楊寧高效液相色譜法210nm波長(zhǎng)測(cè)定的色譜圖；圖2為黃楊寧高效液相色譜法200nm波長(zhǎng)測(cè)定的色譜圖；圖3為黃楊寧高效液相色譜法220nm波長(zhǎng)測(cè)定的色譜圖。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D含量及含量均勻度高效液相色譜測(cè)定法，以黃楊寧規(guī)格為0.5mg/片測(cè)定舉例，色譜柱采用江蘇漢邦科技有限公司產(chǎn)品(Lichrospher NH2，4.6×250mm，5μm)。
實(shí)施例1含量測(cè)定照高效液相色譜法(中華人民共和國(guó)藥典2000年版一部附錄VI D)檢查。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性 固定相用氨丙基硅烷鍵合硅膠為填沖劑；磷酸氫二鉀溶液(取磷酸氫二鉀4.0g，加水溶解并稀釋成1000ml)—乙腈(體積比為30∶70)為流動(dòng)相；流速為1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；柱溫為40℃；供試品溶液色譜圖中，環(huán)維黃楊星D峰與其他生物堿峰均應(yīng)達(dá)基線分離；理論塔板數(shù)按環(huán)維黃楊星D峰計(jì)算，應(yīng)不低于1000。
對(duì)照品溶液的制備取經(jīng)用五氧化二磷為干燥劑，60℃恒溫減壓干燥至恒重的環(huán)維黃楊星D對(duì)照品(對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品中環(huán)維黃楊星D在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，其峰面積應(yīng)大于總峰面積的98％，下同)7mg，精密稱(chēng)定，置100ml容量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備取黃楊寧片20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量(約相當(dāng)于環(huán)維黃楊星D 4mg)，置50ml量瓶中，加冰醋酸2ml， 超聲處理10分鐘，加水10ml，超聲處理5分鐘，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超聲處理20分鐘，并不時(shí)適當(dāng)振搖，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥潔凈的4#垂熔漏斗濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氫氧化鈉溶液8ml，搖勻，靜置10分鐘，用20、10、10、10ml氯仿萃取四次，合并氯仿層，置50ml量瓶中，加氯仿至刻度，搖勻，精密量取10ml，置10ml具塞離心管中，40℃水浴，用溫和氮?dú)饬鞔蹈?，精密加入流?dòng)相5ml，超聲，渦旋處理各5分鐘，得供試品溶液。
測(cè)定法取供試品溶液1ml，用流動(dòng)相稀釋至10ml，搖勻，作為預(yù)試液，取20μl預(yù)試液注入高效液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分峰高約為記錄滿(mǎn)量程的20％。再取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1，測(cè)量環(huán)維黃楊星D峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果示含量為標(biāo)示量的73.5480％。
含量均勻度取黃楊寧片10片，分別置25ml量瓶中，加1ml冰醋酸，加水1ml，超聲處理5分鐘，加9ml水，超聲處理5分鐘，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超聲處理10分鐘，并不時(shí)振搖，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥潔凈的4#垂熔漏斗濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氫氧化鈉溶液8ml，搖勻，靜置10分鐘，用10、5、5、5ml氯仿萃取四次，合并氯仿層，置25ml量瓶中，加氯仿至刻度，搖勻，精密量取10ml，置10ml具塞離心管中，40℃水浴，用溫和氮?dú)饬鞔蹈桑芗尤牒繙y(cè)定的流動(dòng)相2ml，超聲、渦旋處理各5分鐘，得供試品溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，得每片的含量，比較即得含量均勻度。
實(shí)施例2含量測(cè)定照高效液相色譜法(中華人民共和國(guó)藥典2000年版一部附錄VI D)檢查。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性 固定相用氨丙基硅烷鍵合硅膠為填沖劑；磷酸氫二鉀溶液(取磷酸氫二鉀4.0g，加水溶解并稀釋成1000ml)—乙腈(體積比為25∶75)為流動(dòng)相；流速為1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm；柱溫為40℃；供試品溶液色譜圖中，環(huán)維黃楊星D峰與其他生物堿峰均應(yīng)達(dá)基線分離；理論塔板數(shù)按環(huán)維黃楊星D峰計(jì)算，應(yīng)不低于1000。
對(duì)照品溶液的制備取經(jīng)用五氧化二磷為干燥劑，60℃恒溫減壓干燥至恒重的環(huán)維黃楊星D對(duì)照品7mg，精密稱(chēng)定，置100ml容量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量(約相當(dāng)于環(huán)維黃楊星D 4mg)，置50ml量瓶中，加冰醋酸2ml，超聲處理10分鐘，加水10ml，超聲處理5分鐘，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超聲處理20分鐘，并不時(shí)適當(dāng)振搖，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥潔凈的4#垂熔漏斗濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氫氧化鈉溶液8ml，搖勻，靜置10分鐘，用20、20、10ml二氯甲烷萃取三次，合并二氯甲烷層，置50ml量瓶中，加二氯甲烷至刻度，搖勻，精密量取10ml，置10ml具塞離心管中，40℃水浴，用溫和氮?dú)饬鞔蹈?，精密加入流?dòng)相5ml，超聲，渦旋處理各5分鐘，得供試品溶液。
測(cè)定法取供試品溶液1ml，用流動(dòng)相稀釋至10ml，搖勻，作為預(yù)試液，取20μl預(yù)試液注入高效液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分峰高約為記錄量程的20％。再取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見(jiàn)圖2，測(cè)量環(huán)維黃楊星D峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果示含量為標(biāo)示量的62.4219％。
含量均勻度取本品10片，分別置25ml量瓶中，加1ml冰醋酸，加水1ml，超聲處理5分鐘，加9ml水，超聲處理5分鐘，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超聲處理10分鐘，并不時(shí)振搖，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥潔凈的4#垂熔漏斗濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氫氧化鈉溶液8ml，搖勻，靜置10分鐘，用10、10、5ml醋酸乙酯萃取三次，合并醋酸乙酯層，置25ml量瓶中，加醋酸乙酯至刻度，搖勻，精密量取10ml，置10ml具塞離心管中，40℃水浴，用溫和氮?dú)饬鞔蹈桑芗尤牒繙y(cè)定的流動(dòng)相2ml，超聲、渦旋處理各5分鐘，得供試品溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，得每片的含量，比較即得含量均勻度。
實(shí)施例3含量測(cè)定照高效液相色譜法(中華人民共和國(guó)藥典2000年版一部附錄VI D)檢查。
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性 固定相用氨丙基硅烷鍵合硅膠為填沖劑；磷酸氫二鉀溶液(取磷酸氫二鉀4.0g，加水溶解并稀釋成1000ml)—乙腈(體積比為20∶80)為流動(dòng)相；流速為1ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm；柱溫為40℃；供試品溶液色譜圖中，環(huán)維黃楊星D峰與其他生物堿峰均應(yīng)達(dá)基線分離；理論塔板數(shù)按環(huán)維黃楊星D峰計(jì)算，應(yīng)不低于1000。
對(duì)照品溶液的制備取經(jīng)用五氧化二磷為干燥劑，60℃恒溫減壓干燥至恒重的環(huán)維黃楊星D對(duì)照品7mg，精密稱(chēng)定，置100ml容量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲處理使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量(約相當(dāng)于環(huán)維黃楊星D 4mg)，置50ml量瓶中，加冰醋酸2ml， 超聲處理10分鐘，加水10ml，超聲處理5分鐘，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超聲處理20分鐘，并不時(shí)適當(dāng)振搖，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥潔凈的4#垂熔漏斗濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氫氧化鈉溶液8ml，搖勻，靜置10分鐘，用10、10、5、5、5、5、5、5ml叔丁基甲醚萃取八次，合并叔丁基甲醚層，置50ml量瓶中，加叔丁基甲醚至刻度，搖勻，精密量取10ml，置10ml具塞離心管中，40℃水浴，用溫和氮?dú)饬鞔蹈?，精密加入流?dòng)相5ml，超聲，渦旋處理各5分鐘，得供試品溶液。
測(cè)定法取供試品溶液1ml，用流動(dòng)相稀釋至10ml，搖勻，作為預(yù)試液，取20μl預(yù)試液注入高效液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分峰高約為記錄滿(mǎn)量程的20％。再取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見(jiàn)圖3，測(cè)量環(huán)維黃楊星D峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果示含量為標(biāo)示量的80.7239％。
含量均勻度取本品10片，分別置25ml量瓶中，加1ml冰醋酸，加水1ml，超聲處理5分鐘，加9ml水，超聲處理5分鐘，加冰醋酸溶液(1→10)近刻度，超聲處理10分鐘，并不時(shí)振搖，加冰醋酸溶液(1→10)至刻度，用干燥潔凈的4#垂熔漏斗濾過(guò)，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液20ml，置分液漏斗中，加6mol/L的氫氧化鈉溶液8ml，搖勻，靜置10分鐘，用5、5、3、3、3、2、2、2ml環(huán)己烷萃取八次，合并環(huán)己烷層，置25ml量瓶中，加環(huán)己烷至刻度，搖勻，精密量取10ml，置10ml具塞離心管中，40℃水浴，用溫和氮?dú)饬鞔蹈?，精密加入含量測(cè)定的流動(dòng)相2ml，超聲、渦旋處理各5分鐘，得供試品溶液。照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，得每片的含量，比較即得含量均勻度。
權(quán)利要求
1.一種黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D含量及含量均勻度的高效液相色譜測(cè)定法，其特征在于色譜條件中固定相用氨丙基硅烷鍵合硅膠為色譜柱的填充劑；流動(dòng)相采用磷酸氫二鉀—乙腈體系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D含量及含量均勻度的高效液相色譜測(cè)定法，其特征在于進(jìn)樣前待測(cè)樣品先調(diào)節(jié)pH至2～6，再調(diào)節(jié)pH至10～13，然后以萃取用有機(jī)溶劑萃取3～8次進(jìn)行提取分離。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D含量及含量均勻度的高效液相色譜測(cè)定法，其特征在于萃取用有機(jī)溶劑為氯仿、二氯甲烷、叔丁基甲醚、苯、環(huán)己烷、醋酸乙酯。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D含量及含量均勻度的高效液相色譜測(cè)定法。該方法色譜條件中固定相用氨丙基硅烷鍵合硅膠為填沖劑，流動(dòng)相采用磷酸氫二鉀－乙腈體系；進(jìn)樣前待測(cè)樣品先調(diào)節(jié)pH至2～6，再調(diào)節(jié)pH至10～13，然后以萃取用有機(jī)溶劑萃取3～8次進(jìn)行提取分離。該方法靈敏度高、專(zhuān)屬性強(qiáng)，能很好地將“黃楊寧”中與主成分“環(huán)維黃楊星D”結(jié)構(gòu)相似的幾種生物堿有效地分開(kāi)，從而能測(cè)定它們各自的含量，并能保證較高的準(zhǔn)確度，利用該方法還可以測(cè)定黃楊寧片中環(huán)維黃楊星D的含量均勻度。
文檔編號(hào)G01N30/02GK1540338SQ20031010614
公開(kāi)日2004年10月27日 申請(qǐng)日期2003年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月27日
發(fā)明者袁厚亮, 李泓 申請(qǐng)人:南京小營(yíng)制藥廠