專利名稱：白術(shù)藥材tlc指紋圖譜的構(gòu)建方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及白術(shù)藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，本發(fā)明還涉及由此方法所得到的白術(shù)藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
背景技術(shù)：
我國(guó)中藥材品種繁多，來(lái)源復(fù)雜，由于地方差異，藥材中同名異物、同物異名的現(xiàn)象十分常見。市場(chǎng)上以假亂真、以次充優(yōu)的情況時(shí)有發(fā)生，即使對(duì)同一種藥材，由于各地的生長(zhǎng)環(huán)境、種植技術(shù)等的不同，質(zhì)量也會(huì)有很大的差異。因此，采用什么方法對(duì)藥材進(jìn)行合理、有效的評(píng)價(jià)，是一項(xiàng)重要的任務(wù)。
傳統(tǒng)的藥材評(píng)價(jià)方法是用單一的化學(xué)成分作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，具有很大的局限性。中藥指紋圖譜為解決這一問(wèn)題提供了鑰匙。由于中藥具有成分復(fù)雜、有效成分不完全明確的特點(diǎn)，指紋圖譜的整體性和模糊性可以有效地反映同一物種個(gè)體的相似性。通過(guò)指紋圖譜的特征性，能有效地鑒別中藥的真?zhèn)?，通過(guò)指紋圖譜主要特征峰面積或比例的制定，能有效地控制中藥的質(zhì)量，確保其質(zhì)量的相對(duì)穩(wěn)定性，對(duì)有效地控制中藥質(zhì)量具有重要意義。國(guó)外對(duì)植物藥指紋圖譜也有相似的應(yīng)用，德國(guó)銀杏提取物制劑就是其中十分突出的一個(gè)例子。
白術(shù)為菊科(Compositae)植物白術(shù)Atractylodes macrocephala Koedz.的干燥根莖，產(chǎn)于浙江、安徽等地，具有健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎的功效，在中藥領(lǐng)域多有應(yīng)用。本發(fā)明用薄層色譜法構(gòu)建了白術(shù)藥材的指紋圖譜，為白術(shù)藥材質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別提供了一種全新的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種白術(shù)藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法，以及由此方法所得到的白術(shù)藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
本發(fā)明的白術(shù)藥材指紋圖譜的構(gòu)建方法包括下列步驟
(1).供試品溶液的制備精密稱取白術(shù)藥材粉末，加水超聲提取，濾過(guò)，濾液加95％乙醇靜置過(guò)夜，濾過(guò)，回收乙醇，轉(zhuǎn)移至分液漏斗用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯蒸干，轉(zhuǎn)移至刻度試管，定容，作為供試品溶液；(2).薄層層析精密吸取供試品溶液，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以體積比為20∶5∶8的環(huán)己烷-氯仿-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；(3).薄層掃描測(cè)定對(duì)薄層斑點(diǎn)進(jìn)行掃描測(cè)定，計(jì)算各峰的比移值Rf，并以面積歸一化法計(jì)算各峰的相對(duì)峰面積，得到白術(shù)藥材的指紋圖譜；掃描測(cè)定條件為掃描波長(zhǎng)330nm；掃描燈氘燈；測(cè)定模式熒光。
按照上述本發(fā)明的方法，在制備供試品溶液時(shí)，加水超聲提取時(shí)的加水量一般不少于5倍生藥重量；提取時(shí)間一般不少于10min；濾液中加入95％乙醇的量以與水混合后乙醇濃度以體積計(jì)一般不小于50％。
按照上述本發(fā)明的方法，可得到白術(shù)藥材的TLC指紋圖譜。通過(guò)對(duì)多批(10批以上)白術(shù)藥材的TLC色譜圖進(jìn)行比較，確定其共有特征峰，可得到由其共有特征峰構(gòu)成的白術(shù)藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
本發(fā)明通過(guò)對(duì)11批白術(shù)藥材的TLC色譜圖進(jìn)行比較，確定其共有特征峰，得到了由其共有特征峰構(gòu)成的白術(shù)藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。該標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜有10個(gè)特征峰，各峰Rf值和相對(duì)峰面積范圍分別為峰10.10，9.58～26.66％；峰20.13、1.00～9.10％；峰30.19、4.38～14.90％；峰40.33、4.30～12.55％；峰50.41、12.13～24.32％；峰60.50、3.66～9.44％；峰70.56、3.13～9.20％；峰80.70、15.18～31.24％；峰90.84、2.78～8.45％；峰100.93、1.28～3.37％。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)如下由于中藥具有成分復(fù)雜、有效成分不明確的特點(diǎn)，白術(shù)藥材其成分的研究方面較少，沒(méi)有一種能夠較好地控制其質(zhì)量的方法。而本指紋圖譜的構(gòu)建，將白術(shù)作為一個(gè)整體來(lái)對(duì)待，通過(guò)指紋圖譜中主要特征峰面積或比例的制定，能有效地用來(lái)檢測(cè)和控制白術(shù)的質(zhì)量，為白術(shù)藥材質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別提供了一種全新的方法。且本發(fā)明具有方法簡(jiǎn)便可行、直觀、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好、易于操作等特點(diǎn)。
下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。


圖1是11批白術(shù)藥材樣品的TLC圖；圖2是11批白術(shù)藥材樣品薄層掃描三維圖譜；圖3是白術(shù)藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的實(shí)施例如下。
1儀器與試藥1.1儀器CAMAG AUTOMATIC TLC SAMPLER薄層自動(dòng)點(diǎn)樣儀；CAMAG TLCSCANNER 3薄層色譜掃描儀；CAMAG REPROSTAR 3薄層成像系統(tǒng)；CAMAG TLCPLATE HEATER III薄層板加熱器；CAMAG雙槽展開缸(瑞士CAMAG公司)；KQ3200超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。
1.2試藥白術(shù)藥材(共11批)由廣州中一藥業(yè)有限公司提供，分別來(lái)自于浙江、安徽、江蘇等地。經(jīng)鑒定均系《中國(guó)藥典》所指定的品種。實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。
2白術(shù)藥材指紋圖譜的構(gòu)建2.1供試品溶液的制備分別精密稱取每批白術(shù)藥材粉末(過(guò)40目篩)2g，加水20ml，超聲提取30min，加95％乙醇34ml，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液回收乙醇，至余液約為5ml，移至分液漏斗，用10ml蒸餾水洗滌，洗滌液并入分液漏斗，以乙酸乙酯20ml提取，乙酸乙酯提取液50℃蒸干，乙酸乙酯溶解轉(zhuǎn)移入5ml刻度試管，定容至3ml，作為供試品溶液。
2.2薄層層析分別精密吸取每批白術(shù)藥材供試品溶液3μl點(diǎn)于Merck預(yù)制板(20cm×20cm)上，以環(huán)己烷-氯仿-乙酸乙酯(20∶5∶8)為展開劑，預(yù)飽和20min，展開，取出，晾干，噴以以10％硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。
2.3薄層掃描掃描波長(zhǎng)λ＝330nm；掃描燈氘燈；光束狹縫5.00mm×0.1mm；掃描速度25mm/s；測(cè)定模式熒光。得到的11批白術(shù)藥材樣品的TLC圖和三維掃描圖分別如圖1和圖2所示。
2.4指紋特征的確定通過(guò)對(duì)比11批藥材的薄層掃描圖，選取1～10號(hào)峰作為白術(shù)藥材的指紋特征峰，構(gòu)成白術(shù)藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜(見圖3)。
各樣品Rf值、相對(duì)峰面積見表1～表3。
表1白術(shù)樣品Rf值樣品 峰1 峰2 峰3 峰4 峰5 峰6 峰7 峰8 峰9 峰1010.10 0.13 0.19 0.32 0.39 0.47 0.55 0.69 0.84 0.9420.10 0.13 0.19 0.32 0.39 0.48 0.54 0.66 0.81 0.9330.10 0.13 0.19 0.32 0.40 0.47 0.55 0.67 0.82 0.9340.10 0.13 0.19 0.32 0.41 0.49 0.55 0.68 0.83 0.9350.09 0.13 0.19 0.32 0.41 0.51 0.56 0.69 0.84 0.9360.09 0.13 0.19 0.33 0.41 0.51 0.56 0.69 0.83 0.9370.10 0.13 0.20 0.32 0.41 0.50 0.57 0.70 0.84 0.9380.10 0.13 0.20 0.33 0.43 0.51 0.58 0.71 0.84 0.9390.10 0.13 0.19 0.33 0.41 0.51 0.58 0.71 0.85 0.9310 0.10 0.13 0.20 0.33 0.42 0.50 0.58 0.72 0.86 0.9311 0.10 0.14 0.20 0.34 0.44 0.51 0.59 0.74 0.87 0.94表2白術(shù)樣品相對(duì)峰面積值(％)樣品 峰1 峰2 峰3峰4峰5峰6 峰7 峰8峰9 峰10114.87 9.10 4.38 12.55 24.32 4.06 4.18 21.08 4.18 1.28226.66 1.00 8.27 4.30 15.20 3.66 3.13 31.24 4.69 1.85323.71 3.89 8.19 8.66 12.13 8.15 6.74 19.74 5.50 3.28413.42 4.89 6.69 6.47 17.44 9.40 7.84 22.03 8.45 3.3759.89 6.48 6.80 11.73 19.67 6.70 4.62 27.46 5.29 1.3769.58 5.75 5.22 8.33 22.99 8.55 6.53 23.60 6.76 2.70715.75 4.64 9.15 7.03 18.00 6.71 6.33 23.47 7.01 1.90815.07 5.05 10.91 9.40 15.20 8.87 5.72 22.35 5.68 1.75919.18 4.41 12.59 7.91 15.39 7.68 9.20 15.64 5.73 2.2710 14.40 5.04 14.26 8.27 13.93 9.44 6.95 18.27 6.33 3.1111 22.82 6.37 14.90 9.61 12.75 7.51 6.50 15.18 2.78 1.57表3特征峰Rf值及相對(duì)峰面積范圍特征峰 Rf值 相對(duì)峰面積(％)峰1 0.109.58～26.66峰2 0.131.00～9.10峰3 0.194.38～14.90峰4 0.334.30～12.55峰5 0.4112.13～24.32峰6 0.503.66～9.44峰7 0.563.13～9.20峰8 0.7015.18～31.24峰9 0.842.78～8.45峰10 0.931.28～3.3權(quán)利要求
1.一種白術(shù)藥材TLC指紋圖譜的構(gòu)建方法，依次包括以下步驟(1).供試品溶液的制備精密稱取白術(shù)藥材粉末，加水超聲提取，濾過(guò)，濾液加95％乙醇靜置過(guò)夜，濾過(guò)，回收乙醇，轉(zhuǎn)移至分液漏斗用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯蒸干，轉(zhuǎn)移至刻度試管，定容，作為供試品溶液；(2).薄層層析精密吸取供試品溶液，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以體積比為20∶5∶8的環(huán)己烷-氯仿-乙酸乙酯為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；(3).薄層掃描測(cè)定對(duì)薄層斑點(diǎn)進(jìn)行掃描測(cè)定，計(jì)算各峰的比移值Rf，并以面積歸一化法計(jì)算各峰的相對(duì)峰面積，得到白術(shù)藥材的指紋圖譜；掃描測(cè)定條件為掃描波長(zhǎng)330nm；掃描燈氘燈；測(cè)定模式熒光。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是在制備供試品溶液時(shí)，加水超聲提取時(shí)的加水量不少于5倍生藥重量；提取時(shí)間不少于10min；濾液中加入95％乙醇的量以與水混合后乙醇濃度以體積計(jì)不小于50％。
3.一種按照權(quán)利要求1或2所述方法得到的白術(shù)藥材TLC指紋圖譜。
4.按照權(quán)利要求3所述的白術(shù)藥材TLC指紋圖譜，其特征是該指紋圖譜是通過(guò)比較11批白術(shù)藥材的TLC色譜圖，由其共有特征峰構(gòu)成的白術(shù)藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
5.按照權(quán)利要求4所述的白術(shù)藥材TLC指紋圖譜，其特征是該指紋圖譜有10個(gè)特征峰，各峰Rf值和相對(duì)峰面積范圍分別為峰10.10，9.58～26.66％；峰20.13、1.00～9.10％；峰30.19、4.38～14.90％；峰40.33、4.30～12.55％；峰50.41、12.13～24.32％；峰60.50、3.66～9.44％；峰70.56、3.13～9.20％；峰80.70、15.18～31.24％；峰90.84、2.78～8.45％；峰100.93、1.28～3.37％。
全文摘要
本發(fā)明涉及白術(shù)藥材TLC指紋圖譜的構(gòu)建方法及其標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。首先，取白術(shù)藥材粉末，加水超聲提取，濾過(guò)，濾液加95％乙醇，靜置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液回收乙醇，水提醇沉液以乙酸乙酯提取，乙酸乙酯蒸干，定容，作為供試品溶液；吸取供試品溶液，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－氯仿－乙酸乙酯(20∶5∶8)為展開劑，預(yù)飽和20min，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；再進(jìn)行熒光掃描，測(cè)定波長(zhǎng)λ＝330nm；獲得白術(shù)藥材指紋圖譜。并通過(guò)對(duì)11批白術(shù)藥材的TLC指紋圖譜進(jìn)行比較，確定了其共有指紋特征，得到白術(shù)藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。本發(fā)明為白術(shù)藥材質(zhì)量控制和真?zhèn)舞b別提供了一種全新的方法。
文檔編號(hào)G01N30/95GK1529162SQ200310111788
公開日2004年9月15日 申請(qǐng)日期2003年10月16日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月16日
發(fā)明者蘇薇薇, 勞業(yè)興, 吳忠, 王永剛, 彭維, 招嘉文 申請(qǐng)人:中山大學(xué)