專利名稱：精液液化劑及其制備方法以及液化精液的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種體外診斷試劑，具體適用于液化異常精液的液化。
背景技術(shù)：
液化異常精液樣本過于粘稠，進(jìn)行免疫生化等項(xiàng)目檢測時，由于精液內(nèi)各待測物質(zhì)分布不均而難以混勻及準(zhǔn)確加樣，往往難以得到準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，因此，添加液化劑消化精液檢測標(biāo)本，是液化異常精液進(jìn)一步檢測分析必不可少的前處理程序。
常用的處理不液化樣本的方法有酶消化法和機(jī)械混合法。酶消化法主要是利用蛋白酶干粉試劑或靡蛋白酶針劑水解精液中的纖維蛋白液化精液。酶消化法存在的缺陷在于干粉試劑不便于使用，并難以廣泛應(yīng)用于臨床；靡蛋白針劑為粉狀，需要使用前溶解，但是溶解后極不穩(wěn)定。機(jī)械混合法是通過機(jī)械振蕩，破壞網(wǎng)狀纖維絲，達(dá)到促進(jìn)液化的效果，但此方法極易破壞精液內(nèi)精子或其他細(xì)胞，同時導(dǎo)致精子或細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)向精漿釋放，造成難以預(yù)計(jì)的影響。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提出一種能快速液化異常精液，且不影響精液生化免疫分析，易于臨床廣泛應(yīng)用的精液液化劑及其制備方法以及用該液化劑液化精液的方法。
實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案一種精液液化劑，所述精液液化劑為含有蛋白質(zhì)水解酶的酶保存液。
一種精液液化劑的制備方法，包括如下步驟1)將稱量的蛋白質(zhì)水解酶、碳化二亞胺加入酶保存液中，置4℃攪拌4～12小時；2)在步驟1)所述混合液中加入2-氨基乙醇，置室溫反應(yīng)1～4小時；3)在步驟2)所述混合液中加入牛血清白蛋白，置室溫反應(yīng)0.5～1小時；4)在步驟3)所述混合液中加入步驟1)中所述的酶保存液，調(diào)整蛋白質(zhì)水解酶濃度至2～10g/L。
一種精液液化劑液化精液的方法，每1ml精液中加入精液液化劑10～50ul。
采用上述技術(shù)方案，結(jié)合下面將要詳述的實(shí)施例，本發(fā)明突出的技術(shù)效果在于1、液化時，用蛋白質(zhì)水解酶水解液化異常精液中的纖維蛋白，能將不液化的新鮮精液樣本在30分鐘內(nèi)快速液化，便于進(jìn)一步檢測；2、本發(fā)明消除了機(jī)械混合法對精液內(nèi)精子或其他細(xì)胞的破壞，經(jīng)過液化處理后的精液樣本，其生化免疫分析的結(jié)果不受影響；3、進(jìn)一步的，在酶保存液中采用牛血清白蛋白，對蛋白質(zhì)水解酶的穩(wěn)定性有幫助，液化劑穩(wěn)定性更好，貯存期長，4℃保存可穩(wěn)定1年以上，完全適合于作為試劑盒使用；4、本發(fā)明的液化劑為液體，性能穩(wěn)定，液化時操作簡便，易于臨床的廣泛應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式
下面通過具體的實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。
實(shí)施例一，一種精液液化劑，為含有菠蘿蛋白酶2～10mg/ml的酶保存液，酶保存液為含有10g/L的蔗糖、1.755g/L的NaCl、22g/L的氨基乙酸、2g/L的牛血清白蛋白(BSA)的pH7.4的0.2M/L的磷酸鹽(PB)緩沖液。
上述精液液化劑的制備方法，包括如下步驟1)稱量蔗糖1.0克，NaCl 0.1755克，氨基乙酸2.2克，BSA0.2克，置于100ml容量瓶中；2)加95ml pH7.4 20mM的PB緩沖液于100ml容量瓶中充分溶解步驟1)中所述的物質(zhì)。以pH計(jì)測定溶液酸堿度，并以NaOH或HCl校正pH至7.4。最后用pH7.420mM的PB緩沖液補(bǔ)充至總體積100ml，制得酶保存液，并于4℃保存；3)稱取碳化二亞胺10～50mg溶解于10ml 0.02M PB緩沖液中，加入菠蘿蛋白酶液20mg，在4℃下磁力攪拌4～12小時，其中碳化二亞胺起交聯(lián)作用，使菠蘿蛋白酶形成多聚酶；4)加入2mol/L 2-氨基乙醇60ul，置室溫反應(yīng)1～4小時，2-氨基乙醇終止碳化二亞胺的交聯(lián)作用；5)加入BSA10mg，置室溫反應(yīng)0.5～1小時，BSA用于穩(wěn)定菠蘿蛋白酶；6)以步驟2)制成的酶保存液調(diào)整菠蘿蛋白酶濃度至4g/l，得到精液液化劑，并于4℃保存。
使用上述精液液化劑液化精液的方法，具體步驟如下1)在液化障礙精液標(biāo)本中，按每1ml精液中加入25ul精液液化劑的比例，加入液化劑，充分混合；2)將添加有精液液化劑的精液標(biāo)本置37℃孵育5～10min或至精液液化，其間振蕩1～2次。
實(shí)施例二，一種精液液化劑，為含有菠蘿蛋白酶2～10g/l的酶保存液，酶保存液為含有5～15g/L的葡萄糖，1～5g/L的NaCl，0.5～1.5g/L的明膠，1～5g/L的BSA，pH7.4 0.2M/L的PB緩沖液。
上述精液液化劑的制備方法，包括如下步驟1)稱量葡萄糖0.5～1.5克，NaCl 0.1～0.5克，明膠0.05～0.15克，BSA 0.1～0.5克，置于100ml容量瓶中；2)加95ml pH7.4 15～50mM的PB緩沖液于100ml容量瓶中充分溶解步驟1)中的物質(zhì)。以pH計(jì)測定溶液酸堿度，并以NaOH或HCl校正pH至7.4。最后用pH7.415～25mM的PB緩沖液補(bǔ)充至總體積100ml，制得酶保存液，并于4℃保存；3)稱取碳化二亞胺10～50mg溶解于10ml 0.02M PB緩沖液中，加入菠蘿蛋白酶液15～25mg，在4℃下磁力攪拌4～12小時，其中碳化二亞胺起交聯(lián)作用，使菠蘿蛋白酶形成多聚酶；4)加入2mol/L 2-氨基乙醇60ul，置室溫反應(yīng)1～4小時，2-氨基乙醇終止碳化二亞胺的交聯(lián)作用；5)加入BSA10mg，置室溫反應(yīng)0.5～1小時，BSA用于穩(wěn)定菠蘿蛋白酶；6)以步驟2)制成的酶保存液調(diào)整菠蘿蛋白酶濃度至2～10mg/ml，得到精液液化劑，并于4℃保存。
用上述精液液化劑液化精液的方法，具體步驟如下1)在液化障礙精液標(biāo)本中，按每1ml精液中加入10～50ul精液液化劑的比例，加入液化劑，充分混合；2)將添加有精液液化劑的精液標(biāo)本置37℃孵育5～10min或至精液液化，其間振蕩1～2次。
菠蘿蛋白酶的濃度低于2g/l時會使用液化速度減慢，不利于對精液樣本的快速分離與進(jìn)一步檢測，菠蘿蛋白酶的濃度高于10g/l沒有實(shí)驗(yàn)應(yīng)用價值而且還增加了試劑成本；酶保存液中的葡萄糖的濃度低于5g/L、NaCl的濃度低于1g/L、明膠的濃度低于0.5g/L、BSA的濃度低于1g/L時會降低其對菠蘿蛋白酶的穩(wěn)定作用，葡萄糖的濃度高于15g/L、NaCl的濃度高于5g/L、明膠的濃度高于1.5g/L、BSA的濃度高于5g/L時會干擾菠蘿蛋白酶對精液的液化作用。
上述實(shí)施例中，采用菠蘿蛋白酶水解不液化精液中的纖維蛋白的，菠蘿蛋白酶還可以用木瓜蛋白酶、靡蛋白酶、胃蛋白酶等其它能水解纖維蛋白的酶替換；采用BSA對蛋白質(zhì)水解酶起穩(wěn)定作用；蔗糖或者葡萄糖還可以用其他的單糖替換；NaCl還可以用其余可溶性含氯的無機(jī)鹽替換，氨基乙酸還可以用低分子量氨酸酶替換。
權(quán)利要求
1.一種精液液化劑，其特征是所述精液液化劑為含有蛋白質(zhì)水解酶的酶保存液。
2.如權(quán)利要求1所述的精液液化劑，其特征在于所述蛋白質(zhì)水解酶在酶保存液中的含量為2～10g/L。
3.如權(quán)利要求1或2所述的精液液化劑，其特征在于所述蛋白質(zhì)水解酶優(yōu)選菠蘿蛋白酶。
4.如權(quán)利要求3所述的精液液化劑，其特征在于所述酶保存液是包括單糖、無機(jī)鹽、明膠、氨基乙酸與牛血清白蛋白的pH值在7.0～8.0 15～50mM的磷酸鹽緩沖液。
5.如權(quán)利要求4所述的精液液化劑，其特征在于所述單糖的含量為5～15g/L，所述無機(jī)鹽的含量為1～5g/L，所述明膠的含量為0.5～1.5g/L，所述氨基乙酸的含量為10～30g/L，所述牛血清白蛋白的含量為1～5g/L。
6.一種精液液化劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟1)將稱量的蛋白質(zhì)水解酶、碳化二亞胺加入酶保存液中，置4℃攪拌反應(yīng)4～12小時；2)在步驟1)所述混合液中加入2-氨基乙醇，置室溫反應(yīng)1～4小時；3)在步驟2)所述混合液中加入牛血清白蛋白，置室溫反應(yīng)0.5～1小時；4)在步驟3)所述混合液中加入步驟1)中所述的酶保存液，調(diào)整蛋白質(zhì)水解酶濃度至2～10g/L。
7.如權(quán)利要求6所述的精液液化劑的制備方法，其特征在于所述步驟1)中所述蛋白質(zhì)水解酶優(yōu)選菠蘿蛋白酶。
8.如權(quán)利要求6或7所述的精液液化劑的制備方法，其特征在于所述步驟1)中所述酶保存液是包括單糖、無機(jī)鹽、明膠、氨基乙酸、牛血清白蛋白的pH值在7.0～8.015～50mM的磷酸鹽緩沖液，所述單糖的含量為5～15g/L，所述無機(jī)鹽的含量為1～5g/L，所述明膠的含量為0.5～1.5g/L，所述氨基乙酸的含量為10～30g/L，所述牛血清白蛋白的含量為1～5g/L。
9.如權(quán)利要求6所述精液液化劑的制備方法，其特征在于所述步驟4)混合液中碳化二亞胺的含量為1～5g/L，2-氨基乙醇的含量為12mmol/L。
10.一種權(quán)利要求1所述精液液化劑液化精液的方法，其特征在于每1ml精液中加入精液液化劑10～50ul，優(yōu)選25ul。
全文摘要
本發(fā)明公開一種精液液化劑，所述精液液化劑為含有蛋白質(zhì)水解酶的酶保存液。一種精液液化劑的制備方法，包括如下步驟將稱量的蛋白質(zhì)水解酶、碳化二亞胺加入酶保存液中置4℃攪拌反應(yīng)4～12小時；加入2－氨基乙醇，置室溫反應(yīng)1～4小時；加入牛血清白蛋白，置室溫反應(yīng)0.5～1小時；以酶保存液調(diào)整蛋白質(zhì)水解酶濃度至2～10g/l。一種精液液化劑液化精液的方法，每1ml精液中加入精液液化劑10～50ul。由于采用了以上的方案，用蛋白質(zhì)水解酶水解液化異常精液中的纖維蛋白，便于進(jìn)一步檢測，經(jīng)過液化處理后的精液樣本，其生化免疫分析的結(jié)果不受影響；且本發(fā)明的液化劑為液體，性能穩(wěn)定，液化時操作簡便，易于臨床的廣泛應(yīng)用。
文檔編號G01N33/531GK1584594SQ20041004003
公開日2005年2月23日 申請日期2004年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月16日
發(fā)明者傅劍華, 劉瑜, 胡家純, 何林, 何小紅 申請人:深圳華康生物醫(yī)學(xué)工程有限公司