專利名稱：肌酸激酶生物傳感器及其試劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物傳感器技術(shù)領(lǐng)域，是一種電流型生物傳感器快速檢測(cè)總肌酸激酶試條和所用試劑的制造方法，這種試條可以快速檢測(cè)總肌酸激酶的濃度。
背景技術(shù)：
肌酸激酶(Creatine Kinase)存在于全身的肌肉組織和大腦組織的細(xì)胞漿和線粒體中，使一個(gè)與細(xì)胞內(nèi)能量代謝、肌肉收縮、ATP的再生有直接關(guān)系的重要激酶?？赡娴卮呋韵路磻?yīng)
注CK肌酸激酶，Creatinephosphate磷酸肌酸，ADP腺苷二磷酸，Creatine肌酸，ATP三磷酸腺苷，Mg肌酸激酶反應(yīng)活性必需的鎂離子。
肌酸激酶活性的測(cè)定是臨床診斷肌肉疾病、神經(jīng)疾病、腦病和心臟疾病的常規(guī)檢查的基本項(xiàng)目之一。心血管疾病，尤其是心肌梗塞是心臟血管疾病中主要死亡原因。病人發(fā)病急、死亡危險(xiǎn)性高，肌酸激酶在心肌梗塞后幾個(gè)小時(shí)內(nèi)增高，因此快速診斷病人的肌酸激酶是十分必要的。此外，前列腺癌、肺癌、神經(jīng)真性瘤患者的肌酸激酶水平高于正常人。而糖尿病人的高血糖抑制肌肉組織中激酶活性的表達(dá)，肌酸激酶活性降低是糖尿病發(fā)展的結(jié)果或糖尿病病情進(jìn)一步發(fā)展的原因。并且激酸肌酶檢測(cè)是運(yùn)動(dòng)員體育訓(xùn)練強(qiáng)度的重要指標(biāo)之一。正常情況下，肌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整、功能正常，肌酸激酶(CK)極少透出細(xì)胞膜。訓(xùn)練及訓(xùn)練造成的微損傷會(huì)使血清中肌酸激酶活性增加。血清肌酸激酶是評(píng)定肌肉承受刺激和骨骼肌微細(xì)損傷及其適應(yīng)與恢復(fù)的重要敏感指標(biāo)。
目前，常用的測(cè)定血清肌酸激酶的方法是酶耦聯(lián)試劑盒法、干式生化分析法和免疫分析法，這幾種方法都需要昂貴的配套檢測(cè)儀器。儀器本身無(wú)隨時(shí)待命供急診需要的設(shè)計(jì)功能。檢測(cè)儀器由于采用光學(xué)比色法原理等，容易受到血清中其他物質(zhì)的干擾，檢測(cè)有誤差，且不能檢測(cè)全血。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)心肌梗塞急診病人和運(yùn)動(dòng)員外出訓(xùn)練檢測(cè)等應(yīng)用，提供一種快速、準(zhǔn)確、方便，并可以與便攜式小型儀表配套的可用于全血檢測(cè)的便攜式生物傳感器肌酸激酶試條。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)解決方案是提供一種肌酸激酶生物傳感器，包括如下結(jié)構(gòu)在絕緣性基板上表面有一對(duì)平行電極及電極引線；兩電極分別為工作電極和對(duì)電極，兩電極上方覆有絕緣層；絕緣層橫向有一槽溝；槽溝上方覆蓋有封裝層；絕緣性基板、槽溝與封裝層圍成的空間組成毛細(xì)作用溝道，毛細(xì)作用溝道兩端為毛細(xì)進(jìn)樣口，該毛細(xì)作用溝道為電極反應(yīng)區(qū)，其在毛細(xì)作用溝道的兩電極表面有一納米材料層，納米材料層上表面固定有反應(yīng)試劑層；納米材料層，為鉑黑粒子或高分子納米材料中的一種；以獲取高活性的電極表面和高比表面積的納米材料層。
所述的肌酸激酶生物傳感器，其所述反應(yīng)試劑包括電子接受體、耦聯(lián)反應(yīng)組合試劑、緩沖液、酶激活劑、酶還原劑、抗凝劑和表面活性劑。
所述的肌酸激酶生物傳感器，其所述高分子納米材料為高分子羧甲基纖維素鈉，其中高分子羧甲基纖維素含量為0.1~1％。
所述的肌酸激酶生物傳感器，其所述耦聯(lián)反應(yīng)組合試劑，與被分析物起反應(yīng)，能產(chǎn)生與被分析物總肌酸激酶的濃度相對(duì)應(yīng)的電流；電子接受體為鐵氰酸鹽、亞甲基藍(lán)、二茂鐵及其衍生物、對(duì)笨醌、吩嗪硫酸甲酯、靛酚及其衍生物和β-萘醌-4-磺酸鉀組成的組中的任一種；緩沖液為磷酸緩沖液、TRIS緩沖液、MES緩沖液組成的組中的任一種；
酶激活劑為醋酸鎂或氯化鎂；酶還原劑為N-乙酰半胱氨酸、還原型谷胱甘肽或含巰基物質(zhì)的一種；抗凝劑為肝素、草酸鹽、檸檬酸鹽和EDTA中的任一種；表面活性劑為TritonX-100、二乙醇酰胺、烷基醇酰胺磷酯鹽、醇醚羧酸鹽、單烷基磷酸酯、十二烷基磺酸鈉或烷基酚聚氧乙烯醚中的任一種。
所述的肌酸激酶生物傳感器，其所述耦聯(lián)反應(yīng)組合試劑包括磷酸肌酸、葡萄糖、單磷酸腺苷(AMP)、二磷酸腺苷(ADP)、輔酶II(NADP)或輔酶II(NAD)、己糖激酶或葡糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、心肌黃酶這幾種試劑的全部或部分。
所述的肌酸激酶生物傳感器，其電子接受體的濃度范圍10mM~100mM、緩沖液濃度范圍10~100mM、酶激活劑濃度范圍0.1~10mM、酶還原劑濃度范圍5~20mM、抗凝劑濃度范圍0.5~5mM、表面活性劑濃度范圍0.1～0.5％。
一種肌酸激酶生物傳感器所用試劑的制備方法，包括下列步驟a)首先將磷酸肌酸、葡萄糖混合制備成溶液R1；b)將單磷酸腺苷(AMP)、二磷酸腺苷(ADP)、輔酶II(NADP)或輔酶II(NAD)、己糖激酶或葡糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶和心肌黃酶這幾種試劑的全部或部分、緩沖液、酶激活劑、酶還原劑、抗凝劑和表面活性劑混合制備成溶液R2；c)對(duì)電極表面活化處理后，將溶液R1、R2和電子接受體溶液混合均勻，然后均勻的滴加在電極納米材料層上；d)對(duì)c)步所得半成品進(jìn)行干燥后，用絕緣材料覆蓋成封裝層；e)用切條機(jī)將試條陣列切成單個(gè)試條，然后真空封裝，備用。
所述的試劑制備方法，其所述c)步中對(duì)電極表面活化處理，是用等離子體法快速活化電極表面。
所述的試劑制備方法，其所述d)步，是把c)步所得半成品放在溫度為35～37℃的干燥箱中干燥20～25分鐘后，用絕緣材料覆蓋封裝層。
所述的肌酸激酶生物傳感器，其檢測(cè)系統(tǒng)采用電流法檢測(cè)。
本發(fā)明產(chǎn)品與目前國(guó)內(nèi)外產(chǎn)品比較具有許多優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明的試條和介紹的方法與已經(jīng)商業(yè)化的系列的便攜式電流型儀表是兼容的，因此可以隨身攜帶、檢測(cè)簡(jiǎn)單快捷；由于一次性試條的生產(chǎn)工藝采用先進(jìn)的微機(jī)電系統(tǒng)(MEMS)工藝，既保證了檢測(cè)的可靠性和一致性，又降低了試條的生產(chǎn)成本；采用簡(jiǎn)單有效的酶的固定方法，采用了電化學(xué)電流檢測(cè)的原理，較之比色法原理精確，使得試條的生產(chǎn)更為簡(jiǎn)便；試條采用毛細(xì)設(shè)計(jì)，使進(jìn)樣更快，需血量更少(3μl)，而且系統(tǒng)的響應(yīng)快，靈敏度高。


圖1是本發(fā)明設(shè)計(jì)的兩電極系統(tǒng)的分層示意圖；圖2本發(fā)明的電極平面圖。
圖3本發(fā)明實(shí)施例的不同濃度高分子羧甲基纖維素(CMC)的循環(huán)伏安比較圖。
圖4本發(fā)明實(shí)施例的肌酸激酶實(shí)時(shí)響應(yīng)圖。
圖5本發(fā)明實(shí)施例的肌酸激酶線性關(guān)系圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的傳感器試條電極的制備方法參照已申請(qǐng)專利00410030214.X和200410031948.X。
用等離子體法快速活化電極表面的技術(shù)參照已申請(qǐng)專利02154524.3。
本發(fā)明提供了一種在電極表面反應(yīng)區(qū)內(nèi)組裝一層高分子納米顆粒的方法。通過(guò)在電極表面均勻滴加不同濃度的親水性大分子羧甲基纖維素鈉，于37℃溫度條件下干燥后，獲得具有不同孔徑的電極納米層。該方法進(jìn)一步加強(qiáng)了電極表面的親水性，增大了電極的有效表面積。不僅有利于酶試劑的固定化，而且增加了電極的電化學(xué)活性。
本發(fā)明提供了在納米顆粒上固定反應(yīng)試劑的方法。
本發(fā)明將反應(yīng)試劑固定在電極上形成試劑層，固定在高分子納米層上的反應(yīng)試劑包括電子接受體，與被分析物起反應(yīng)且能產(chǎn)生與被分析物濃度相對(duì)應(yīng)的電流的耦聯(lián)反應(yīng)的組合試劑，同時(shí)還包括緩沖液、酶激活劑、還原劑、抗凝劑和表面活性劑。
本發(fā)明試劑組合所依據(jù)的反應(yīng)原理如下
其中Creatine phosphate磷酸肌酸；Creatine肌酸；CK肌酸激酶；Glucose葡萄糖；Glucose-6-phosphate 6-磷酸-葡萄糖；Gluconolactone-6-phosphate 6-磷酸葡糖內(nèi)酯；HK己糖激酶；GPD磷酸葡萄糖脫氫酶；NADPH NADP+(輔酶II)還原型/氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸；DIA心肌黃酶；Fe(CN)64-/Fe(CN)64-還原型/氧化型鐵氰化鉀首先將適當(dāng)濃度的磷酸肌酸、葡萄糖混合制備成溶液R1，將適當(dāng)濃度的單磷酸腺苷(AMP)、二磷酸腺苷(ADP)、輔酶II(NADP)、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、心肌黃酶、醋酸鎂、還原型谷胱甘肽、EDTA、TritonX-100混合制備成溶液R2，在電極表面活化處理好后，再將溶液R1、R2和鐵氰酸鉀溶液混合均勻，然后用點(diǎn)樣儀均勻滴加在電極高分子納米層上。在35～37℃干燥箱中干燥20～25分鐘后，用絕緣材料覆蓋封裝，用切條機(jī)將試條陣列切成單個(gè)試條。然后真空封裝。備用。
試劑中磷酸肌酸的適用濃度范圍10~1000mM，其優(yōu)化反應(yīng)范圍50mM~100mM。葡萄糖的適用濃度范圍10~1000mM，其優(yōu)化反應(yīng)范圍50mM~100mM。單磷酸腺苷的適用濃度范圍1~100mM，其優(yōu)化反應(yīng)范圍5mM~20mM。二磷酸腺苷的適用濃度范圍0.5~100mM，其優(yōu)化反應(yīng)范圍1mM~20mM。輔酶II的適用濃度范圍0.5~100mM，其優(yōu)化反應(yīng)范圍1mM~20mM。己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、心肌黃酶適用濃度范圍1~2000U/ml，其優(yōu)化反應(yīng)范圍1~40U/ml。
起氧化還原作用的電子接受體由從鐵氰酸鹽、亞甲基藍(lán)、二茂鐵及其衍生物、對(duì)笨醌、吩嗪硫酸甲酯、靛酚及其衍生物和β-萘醌-4-磺酸鉀組成的組中選擇出的一種；通過(guò)電子介體將酶反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的電子從酶反應(yīng)中心轉(zhuǎn)移到電極表面，使得電流型酶?jìng)鞲衅鞯捻憫?yīng)速度和檢測(cè)靈敏度得到了提高，同時(shí)降低了反應(yīng)的電壓。所述電子接受體為鐵氰酸鉀，使工作電位降至0.2V，減少血液中其它活性物質(zhì)的干擾。鐵氰酸鉀的適用濃度范圍0.1mM~300mM，其優(yōu)化反應(yīng)范圍10mM~100mM。
緩沖液為磷酸緩沖液、TRIS緩沖液、MES緩沖液組成的組中選擇出的一種；所述緩沖液為磷酸緩沖液。緩沖液用于提供一個(gè)酸堿度pH值穩(wěn)定的反應(yīng)環(huán)境，反應(yīng)的最佳酸堿度pH為6～8，濃度范圍10~100mM。
肌酸激酶反應(yīng)中，鎂離子是必須的，酶激活劑為醋酸鎂或氯化鎂。選用醋酸鎂，其適用濃度范圍1~100mM，最佳濃度范圍5~20mM。
由于血清中大多數(shù)肌酸激酶是以非活性形式存在的，為了精確定量測(cè)定其活性，必須將其激活，常用的酶還原劑為N-乙酰半胱氨酸、還原型谷胱甘肽等含巰基物質(zhì)的一種；所述酶還原劑為還原性谷胱甘肽。由于巰基化合物在溶液中穩(wěn)定性差，因此，還原性谷胱甘肽需用新鮮配制的溶液。其適用濃度范圍0.1~10mM，最佳濃度范圍0.1~5mM。
由于全血檢測(cè)過(guò)程中，血液很容易凝固，一般血液在2~5分鐘開(kāi)始凝固，因此，為了反應(yīng)順利進(jìn)行，需在試劑中添加抗凝劑?？鼓齽閺母嗡?、草酸鹽、檸檬酸鹽和EDTA中選擇出的一種；所述抗凝劑為EDTA。其適用濃度范圍0.1~10mM，最佳濃度范圍0.5~5mM。
所述表面活性劑為TritonX-100。添加0.05～1％非離子型的表面活性劑。優(yōu)選0.1～0.5％濃度表面活性劑。
本發(fā)明的上述各種目的、方法、特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)，通過(guò)下面結(jié)合附圖和實(shí)施例可以得到更加詳細(xì)的說(shuō)明。
實(shí)施例1圖1、圖2是本發(fā)明設(shè)計(jì)的兩電極圖。首先，采用微機(jī)電系統(tǒng)(MEMS)工藝在絕緣性基材1上制備好薄膜金電極2、3，在薄膜金電極2、3上粘加第二絕緣層4，第二絕緣層4中設(shè)有毛細(xì)作用溝道7，毛細(xì)作用溝道7形成反應(yīng)區(qū)。(5是封裝層，6是電極引線、10是毛細(xì)進(jìn)樣口)。然后，電極2、3經(jīng)離子清洗機(jī)活化后，在電極2、3反應(yīng)區(qū)即毛細(xì)作用溝道7中組裝一層高分子羧甲基纖維素(CMC)納米顆粒層8，在37℃電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)干燥20分鐘，取出備用。
然后添加試劑，試劑為磷酸肌酸100mM；葡萄糖50mM；醋酸鎂20mM；單磷酸腺苷(AMP)20mM；腺苷二磷酸(ADP)5mM；煙堿腺苷二核酸磷酸(NADP)5mM；葡萄糖6-磷酸脫氫酶4U/ml；己糖激酶4U/ml；心肌黃酶2U/ml；谷胱甘肽3mM；EDTA1mM；TritonX-1000.2％；鐵氰酸鉀25mM；磷酸緩沖液0.01M。
將5μl上述試劑溶液滴加在毛細(xì)作用溝道7中，覆有一層高分子羧甲基纖維素(CMC)的納米顆粒層8上，在37℃的干燥箱中干燥20分鐘，形成試劑層9。從干燥箱中取出試條，加蓋透明絕緣封裝層5，形成毛細(xì)作用溝道7，及兩端的毛細(xì)進(jìn)樣口10。用切條機(jī)將試條陣列切成單個(gè)試條。然后真空封裝。
實(shí)施例2在制備好的電極2、3上，用離子水清洗后，滴加0.5％和1％的高分子羧甲基纖維素(CMC)，在37℃電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)干燥20分鐘。取出后，檢測(cè)其伏安特性曲線。圖3中，為電極2、3上，組裝不同濃度的高分子羧甲基纖維素(CMC)(1)0％；(2)0.5％；(3)1％的循環(huán)伏安圖。掃描速率100mV/s，溶液基相0.01M磷酸緩沖液(pH7.4)，0.03MK3Fe(CN)6。由圖3可見(jiàn)，隨著高分子羧甲基纖維素(CMC)濃度增加，其電流增大，但隨高分子羧甲基纖維素(CMC)濃度增大，高分子納米膜增厚，電子傳遞速率降低，影響反應(yīng)速度；背景反應(yīng)電流增大。因此需要選擇合適的濃度。一般選擇0.1~1％，根據(jù)具體情況來(lái)確定。在組裝高分子納米膜的電極2、3表面，表面積明顯增大，加入液狀反應(yīng)試劑后，納米材料層8與試劑形成溶膠層，因此產(chǎn)生更大的反應(yīng)電流，增大反應(yīng)靈敏度。
實(shí)施例3在試條的工作電極和參比電極之間施加+0.2V的電壓。在修飾了高分子材料羧甲基纖維素鈉(CMC)納米層8的電極2、3上，滴加混合試劑，待反應(yīng)電流(背景電流)平穩(wěn)后，加入不同活性的肌酸激酶緩沖液，與試劑和高分子納米層8發(fā)生作用，產(chǎn)生電流，經(jīng)電極引線6流出，在電化學(xué)生物傳感器檢測(cè)系統(tǒng)上可以快速檢測(cè)出與總肌酸激酶的活性相對(duì)應(yīng)的電流。產(chǎn)生的電流與激酸肌酶活性成正比。并且在很寬的范圍內(nèi)呈現(xiàn)很好的線性相關(guān)性。因此，該傳感器試條具有良好的應(yīng)用價(jià)值。見(jiàn)圖4a，為生物傳感器對(duì)不同濃度肌酸激酶實(shí)時(shí)響應(yīng)曲線。肌酸激酶活性(1)800U/ml；(2)400U/ml；(3)80U/ml；(4)8U/ml；(5)800U/L；(6)400U/L；(7)80U/L；(8)40U/L；(9)8U/L。圖4b是圖4a虛線部分放大圖。圖5為肌酸激酶線性關(guān)系圖。圖5a為肌酸激酶高活性范圍，反應(yīng)時(shí)間140秒；圖5b為肌酸激酶底活性范圍，反應(yīng)時(shí)間280秒。
本發(fā)明用了優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說(shuō)明，優(yōu)選實(shí)施例只是為了說(shuō)明的目的，而不是對(duì)本發(fā)明的限制。在上述說(shuō)明的基礎(chǔ)上可以對(duì)本發(fā)明作許多改進(jìn)和改變。因此，在所附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)，本發(fā)明可以有不是上述的其它實(shí)現(xiàn)方式。例如其它組合的試劑配方、在試劑層上覆蓋過(guò)濾膜從而消除紅細(xì)胞的干擾而用于全血肌酸激酶的檢測(cè)、可采用光學(xué)檢測(cè)法、可采用其它納米顆粒和非納米材料修飾的電極反應(yīng)區(qū)、三電極形式、厚膜電極的制備形式等。
權(quán)利要求
1.一種肌酸激酶生物傳感器，包括如下結(jié)構(gòu)在絕緣性基板上表面有一對(duì)平行電極及電極引線；兩電極分別為工作電極和對(duì)電極，兩電極上方覆有絕緣層；絕緣層橫向有一槽溝；槽溝上方覆蓋有封裝層；絕緣性基板、槽溝與封裝層圍成的空間組成毛細(xì)作用溝道，毛細(xì)作用溝道兩端為毛細(xì)進(jìn)樣口，該毛細(xì)作用溝道為電極反應(yīng)區(qū)，其特征在于在毛細(xì)作用溝道的兩電極表面有一納米材料層，納米材料層上表面固定有反應(yīng)試劑層；納米材料層，為鉑黑粒子或高分子納米材料中的一種；以獲取高活性的電極表面和高比表面積的納米材料層。
2.如權(quán)利要求1所述的肌酸激酶生物傳感器，其特征在于所述反應(yīng)試劑包括電子接受體、耦聯(lián)反應(yīng)組合試劑、緩沖液、酶激活劑、酶還原劑、抗凝劑和表面活性劑。
3.如權(quán)利要求1所述的肌酸激酶生物傳感器，其特征在于所述高分子納米材料為高分子羧甲基纖維素鈉，其中高分子羧甲基纖維素含量為0.1~1％。
4.如權(quán)利要求2所述的肌酸激酶生物傳感器，其特征在于所述耦聯(lián)反應(yīng)組合試劑，與被分析物起反應(yīng)，能產(chǎn)生與被分析物總肌酸激酶的濃度相對(duì)應(yīng)的電流；電子接受體為鐵氰酸鹽、亞甲基藍(lán)、二茂鐵及其衍生物、對(duì)笨醌、吩嗪硫酸甲酯、靛酚及其衍生物和β-萘醌-4-磺酸鉀組成的組中的任一種；緩沖液為磷酸緩沖液、TRIS緩沖液、MES緩沖液組成的組中的任一種；酶激活劑為醋酸鎂或氯化鎂；酶還原劑為N-乙酰半胱氨酸、還原型谷胱甘肽或含巰基物質(zhì)的一種；抗凝劑為肝素、草酸鹽、檸檬酸鹽和EDTA中的任一種；表面活性劑為TritonX-100、二乙醇酰胺、烷基醇酰胺磷酯鹽、醇醚羧酸鹽、單烷基磷酸酯、十二烷基磺酸鈉或烷基酚聚氧乙烯醚中的任一種。
5.如權(quán)利要求4所述的肌酸激酶生物傳感器，其特征在于所述耦聯(lián)反應(yīng)組合試劑包括磷酸肌酸、葡萄糖、單磷酸腺苷(AMP)、二磷酸腺苷(ADP)、輔酶II(NADP)或輔酶II(NAD)、己糖激酶或葡糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、心肌黃酶這幾種試劑的全部或部分。
6.如權(quán)利要求4所述的肌酸激酶生物傳感器，其特征在于所述電子接受體的濃度范圍10mM~100mM、緩沖液濃度范圍10~100mM、酶激活劑濃度范圍0.1~10mM、酶還原劑濃度范圍5~20mM、抗凝劑濃度范圍0.5~5mM、表面活性劑濃度范圍0.1～0.5％。
7.如權(quán)利要求5所述的肌酸激酶生物傳感器，其特征在于所述耦聯(lián)反應(yīng)組合試劑中，磷酸肌酸的濃度范圍為10~1000mM；葡萄糖的濃度范圍為10~1000mM；單磷酸腺苷的濃度范圍為1~100mM；二磷酸腺苷的濃度范圍為0.5~100mM；輔酶II的濃度范圍為0.5~100mM；己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、心肌黃酶的濃度范圍為1~2000U/ml。
8.一種肌酸激酶生物傳感器所用試劑的制備方法，其特征在于包括下列步驟a)首先將磷酸肌酸、葡萄糖混合制備成溶液R1；b)將單磷酸腺苷(AMP)、二磷酸腺苷(ADP)、輔酶II(NADP)或輔酶II(NAD)、己糖激酶或葡糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶和心肌黃酶這幾種試劑的全部或部分、緩沖液、酶激活劑、酶還原劑、抗凝劑和表面活性劑混合制備成溶液R2；c)對(duì)電極表面活化處理后，將溶液R1、R2和電子接受體溶液混合均勻，然后均勻的滴加在電極納米材料層上；d)對(duì)c)步所得半成品進(jìn)行干燥后，用絕緣材料覆蓋成封裝層；e)用切條機(jī)將試條陣列切成單個(gè)試條，然后真空封裝，備用。
9.如權(quán)利要求7所述的試劑制備方法，其特征在于所述c)步中對(duì)電極表面活化處理，是用等離子體法快速活化電極表面。
10.如權(quán)利要求7所述的試劑制備方法，其特征在于所述d)步，是把c)步所得半成品放在溫度為35～37℃的干燥箱中干燥20～25分鐘后，用絕緣材料覆蓋封裝層。
11.如權(quán)利要求1所述的肌酸激酶生物傳感器，其特征在于檢測(cè)系統(tǒng)采用電流法檢測(cè)。
全文摘要
本發(fā)明肌酸激酶生物傳感器及其試劑的制備方法，涉及生物傳感器技術(shù)領(lǐng)域，可以快速檢測(cè)總肌酸激酶的濃度。本發(fā)明肌酸激酶生物傳感器，在毛細(xì)作用溝道的兩電極表面有一納米材料層，納米材料層上表面固定有反應(yīng)試劑；納米材料層，為鉑黑粒子或高分子納米材料中的一種；以獲取高活性的電極表面和高比表面積的納米材料層。其試劑的制備方法，是先配置兩種溶液，再與電子接受體溶液混合而成。當(dāng)被分析物——含有肌酸激酶的樣品——通過(guò)毛細(xì)作用滴加到試條反應(yīng)區(qū)上后，用電化學(xué)生物傳感器檢測(cè)系統(tǒng)可以快速檢測(cè)出總肌酸激酶的濃度。
文檔編號(hào)G01N33/50GK1737158SQ20041005851
公開(kāi)日2006年2月22日 申請(qǐng)日期2004年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月16日
發(fā)明者劉春秀, 蔡新霞, 姜利英, 羅賢波, 李華清 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院電子學(xué)研究所