專利名稱：中華絨螯蟹顫抖病快速診斷方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種水產養(yǎng)殖病害的快速檢測方法，尤其是一種針對河蟹重大流行病——顫抖病的活體快速診斷方法。
背景技術：
中華絨螯蟹顫抖病是近年來暴發(fā)流行的重大水產病害之一，嚴重威脅著河蟹養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，其病蟹患病后期的主要病征是步足顫動，故稱為顫抖病，病蟹一旦發(fā)現此癥狀即瀕臨死亡，此外，近幾年還發(fā)現有些顫抖病蟹在還沒有表現出顫抖癥狀時即死亡，所以在生產實際中急需一種快速、準確、便捷的診斷技術。
目前的包涵體染色技術可以顯示病蟹血液中大量寄生的病原體，但此方法只有在病原體達到一定量是才能顯色，此外該技術還需要一個涂片、干燥、染色、沖洗的過程，時間約為半小時，步驟復雜，耗時較長。

發(fā)明內容
為了克服現有技術繁鎖、耗時的不足，本發(fā)明提供一種中華絨螯蟹顫抖病快速診斷方法，利用已確定的顫抖病病原體可侵染蟹血細胞形成包涵體及具游動性的特點，可在不染色的情況下直接觀察血液滴片，能很直觀地看到病蟹機體被感染程度，只要有一個病原體在血細胞空泡中運動就能作出病原體已侵染機體的判斷，有效地解決了問題。
本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案采用下述步驟a.采血及保存蟹按常規(guī)方法活體采血后將血樣放入體積百分比為1％-20％甲醛溶液中混勻；b.制片及觀察用上述混合液制滴片，在光學顯微鏡下觀察，見血細胞中的空泡內有活動的小微生物體即可確定為顫抖病。
本發(fā)明中甲醛溶液的體積百分比優(yōu)選10％。
為了使視野中的血細胞數目適于觀察，本發(fā)明推薦血樣與甲醛溶液的體積比為1∶0.2至1∶5，優(yōu)選1∶1。
本發(fā)明方法中用光鏡觀察時，推薦用相差效果會更佳。
對于由相同病原體引起的其他水生動物的疾病的快速診斷可以參照本發(fā)明方法進行。
本發(fā)明的有益效果是，方法便捷、快速，準確，能在5分鐘之內對還為表現出典型顫抖病癥狀的早期感染病蟹作出明確診斷。本發(fā)明利用已確定的顫抖病病原體可侵染蟹血細胞形成包涵體及具游動性的特點，可在不染色的情況下直接觀察血液滴片，能很直觀地看到病蟹機體被感染程度，只要有一個病原體在空泡中運動就能作出病原體已侵染機體的判斷，整個檢測過程極其簡單，時間只需5分鐘，避免了染色制片過程中各種人為的干擾因素。
具體實施例方式
實施例1蟹活體采血及樣品保存將蟹體外洗凈，用75％酒精消毒第四對步足與蟹體交界處，用微量注射器從此處刺入蟹體內取血0.02mL放入同體積的10％甲醛溶液中混勻，該血液樣品可長期保存。
制片和觀察取混合液0.01mL滴在載玻片上，加蓋片后放置光鏡40倍數下觀察，見血細胞中的空泡內有活動的小微生物體，即可確定該蟹感染顫抖病。
實施例2蟹活體采血及樣品保存將蟹體外洗凈，用75％酒精消毒第四對步足與蟹體交界處，用微量注射器從此處刺入蟹體內取血0.02mL放入0.2倍體積的1％甲醛溶液中混勻，該血液樣品可長期保存。
制片和觀察取混合液0.01mL滴在載玻片上，加蓋片后放置光鏡100倍數下觀察，見血細胞中的空泡內有活動的小微生物體，即可確定該蟹感染顫抖病。
實施例3蟹活體采血及樣品保存將蟹體外洗凈，用75％酒精消毒第四對步足與蟹體交界處，用微量注射器從此處刺入蟹體內取血0.02mL放入5倍體積的20％甲醛溶液中混勻，該血液樣品可長期保存。
制片和觀察取混合液0.01mL滴在載玻片上，加蓋片后放置光鏡40倍數下相差觀察，見血細胞中的空泡內有活動的小微生物體，即可確定該蟹感染顫抖病。
實施例4蟹活體采血及樣品保存將蟹體外洗凈，用75％酒精消毒第四對步足與蟹體交界處，用微量注射器從此處刺入蟹體內取血0.02mL放入0.1倍體積的5％甲醛溶液中混勻。
制片和觀察取混合液0.01mL滴在載玻片上，加蓋片后放置光鏡40倍數下相差觀察，見血細胞中的空泡內有活動的小微生物體，即可確定該蟹感染顫抖病。
實施例5蟹活體采血及樣品保存將蟹體外洗凈，用75％酒精消毒第四對步足與蟹體交界處，用微量注射器從此處刺入蟹體內取血0.02mL放入6倍體積的15％甲醛溶液中混勻。
制片和觀察取混合液0.01mL滴在載玻片上，加蓋片后放置光鏡40倍數下相差觀察，見血細胞中的空泡內有活動的小微生物體，即可確定該蟹感染顫抖病。
權利要求
1.中華絨螯蟹顫抖病快速診斷方法是采用下述步驟a.采血及保存蟹按常規(guī)方法活體采血后將血樣放入體積百分比為1％-20％甲醛溶液中混勻；b.制片及觀察用上述混合液制滴片，在光學顯微鏡下觀察，見血細胞中的空泡內有活動的小微生物體即可確定為顫抖病。
2.根據權利要求1所述的中華絨螯蟹顫抖病快速診斷方法，其特征在于所述甲醛溶液的體積百分比為10％。
3.根據權利要求1所述的中華絨螯蟹顫抖病快速診斷方法，其特征在于步驟a中血樣與甲醛溶液的體積比為1∶0.2-5。
4.根據權利要求3所述的中華絨螯蟹顫抖病快速診斷方法，其特征在于所述的血樣與甲醛溶液的體積比為1∶1。
5.根據權利要求1所述的中華絨螯蟹顫抖病快速診斷方法，其特征在于在光學顯微鏡下觀察時用相差。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種水產養(yǎng)殖病害的快速檢測方法，尤其是一種針對河蟹重大流行病——顫抖病的活體快速診斷方法。本發(fā)明所采用的技術方案是蟹按常規(guī)方法活體采血后將血樣放入體積百分比為1％－20％甲醛溶液中混勻；用上述混合液制滴片，在光學顯微鏡下觀察，見血細胞中的空泡內有活動的小微生物體即可確定為顫抖病。運用本發(fā)明的方法進行診斷，便捷、快速，準確，能在5分鐘之內對還未表現出典型顫抖病癥狀的早期感染病蟹作出明確診斷。此外，該發(fā)明還可以用于相同病原體的感染的其它動物病害的快速診斷。
文檔編號G01N1/28GK1624458SQ200410066028
公開日2005年6月8日 申請日期2004年12月14日 優(yōu)先權日2004年12月14日
發(fā)明者王文 申請人:南京師范大學