專利名稱：火棉膠包埋法及在斷層解剖學研究中的應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是涉及外科采用火棉膠包埋的一種方法及其在斷層解剖學研究中的應用。
背景技術(shù)：
火棉膠(Colloidion，Nitrocellulose or Soluble gun cotton)包埋法技術(shù)是一種對單一組織或器官(如神經(jīng)組織或心臟)標本進行固定、脫水、浸透、包埋、硬化、制塊和切片的方法；只限于組織學，光鏡下3×3mm或5×5mm視野的觀察。組織包埋塊體積一般在2×3×3mm或3×5×5mm厚，不能反映臨床意義重大的局部斷層解剖學關(guān)系；如神經(jīng)與血管的配布關(guān)系，神經(jīng)、血管和臟器的配布的斷層解剖學關(guān)系。
斷層解剖學(Sectional anatomy)是用斷層方法研究和表達人體正常形態(tài)結(jié)構(gòu)及其基本功能的科學。目前國內(nèi)的斷層解剖學的研究方法有1、冷凍切片技術(shù)(Cryotomy)，是人體斷層標本制備的常規(guī)方法，其基本步驟有①取材，尸體的整體或局部；②固定，用10％甲醛固定6個月以上；③標線；④冷凍；⑤切片，用木工鋸或帶鋸機制成斷層標本，亦可用大型冷凍切片機或銑床進行銑削，或用刨子等其他工具制作。
2、生物塑化技術(shù)(Plastination)，是選用某些滲透性能好的液態(tài)高分子多聚化合物為單體作為塑化劑，置換組織細胞內(nèi)的水分進行聚會固化，整個塑化過程基本包括①固定，用甲醛動脈灌注固定；②脫水，通常以丙酮為脫水劑；③真空浸漬，在負壓或真空條件下，以塑化劑置換組織的丙酮；④硬化處理；⑤塑化切片，用線鋸制成斷層標本。
斷層解剖學的研究以上方法存在的問題如下
①冷凍鋸切，切片厚度一般在1-2cm，隨著臨床磁共振圖像的發(fā)展，掃描層越來越薄，與之匹配的斷層切片趨向薄型化。對于1-2cm厚度的斷層結(jié)構(gòu)以不能滿足影像學和外科學的發(fā)展需要，不能提供翔實的，特別是匹配磁共振圖像的斷層切片資料和疑難手術(shù)入路資料；磁共振圖像掃描層一般為1.0-3.0mm。
②冷凍銑刨，不能保留銑刨掉的標本，只能對底物進行拍照或經(jīng)計算機處理獲取模擬資料。
③生物塑化線鋸，斷層切片厚度為1.2mm，鋸路損耗在0.3mm以上；不能真實反映切片的連續(xù)性。塑化技術(shù)設(shè)備條件要求高、費用貴，目前國內(nèi)尚未普及。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于彌補現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，而提供一種可采取以下技術(shù)方案實現(xiàn)目的。
火棉膠包埋法，包埋法步驟①取材標本經(jīng)甲醛固定后尸體的任何部位；②標本脫鈣將設(shè)計好的取材標本用10％鹽酸浸泡15-30天，直至骨組織可用針刺人為止；③將火棉膠包埋法與德國產(chǎn)L型切片機結(jié)合制備連續(xù)斷層切片。
相對現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點和效果實現(xiàn)火棉膠包埋法技術(shù)在斷層解剖學研究中的應用其關(guān)鍵在于科學的思維方法和技術(shù)創(chuàng)新把火棉膠包埋法、斷層解剖組織塊脫鈣和德國產(chǎn)浸酒L型切片機(JUNG AG.)整合制備斷層解剖切片。
1、有別于一般的組織切片，特別是不同于目前國內(nèi)的斷層解剖切片。
2、本技術(shù)研制的斷層解剖切片具有連續(xù)性，無鋸耗，可任意選擇切片的薄厚匹配磁共振圖像(MRI)；切片薄厚選擇范圍在25μm-3.0mm，一般磁共振圖像掃描層在1.0-3.0mm。
3、本技術(shù)研制的斷層解剖切片能清晰展示斷層解剖的任何毗鄰結(jié)構(gòu)如人體顱腦、眼眶或視器、脊柱區(qū)、四肢關(guān)節(jié)、盆部等與臨床關(guān)系密切的復雜結(jié)構(gòu)及其毗鄰關(guān)系，能能反映臨床意義重大的局部斷層解剖學關(guān)系；如神經(jīng)與血管的配布關(guān)系，神經(jīng)、血管和臟器的配布的斷層解剖學關(guān)系。
4、技術(shù)研制的斷層解剖切片觀察范圍比一般組織片大5-10倍，比一般斷層解剖切片厚度小10-20倍。
5、優(yōu)化了火棉膠切片的保存方法(參見前述火棉膠斷層解剖切片的保存方法)。
具體實施例方式
實施例1、火棉膠包埋法，包埋法步驟①取材標本經(jīng)甲醛固定后尸體的任何部位，如頭顱、脊柱區(qū)、盆部、四肢關(guān)節(jié)等；②標本脫鈣將設(shè)計好的取材標本用10％鹽酸浸泡15-30天，直至骨組織可用針刺人為止；③將火棉膠包埋法與德國產(chǎn)L型切片機結(jié)合制備連續(xù)斷層切片。
實施例2、火棉膠包埋法，在實施例1基礎(chǔ)上，取材體積范圍在(50×50×50mm)至(180×180×150mm)，切片厚度設(shè)置在(0.5-1.0mm)，或設(shè)置在(25-100μm)。
實施例3、火棉膠包埋法在斷層解剖學研究中的應用，在實施例1或2基礎(chǔ)上，斷層解剖組織塊制備和包埋步驟①斷層解剖組織塊脫鈣；②沖洗將脫鈣組織塊取出后，用循環(huán)水沖洗24小時；③常規(guī)脫水；④浸膠將脫水后的組織塊先浸入5％火棉膠中，在真空箱內(nèi)以66kPa的壓力抽真空30分鐘，靜置1天后，再抽真空，再靜置1天后浸入8％火棉膠中；以同樣條件抽真空2次。
⑤包埋與制塊用15％火棉膠作為包埋劑，包埋塊的形成約15-30天(這個時間主要取決于火棉膠溶劑的蒸發(fā)速度)。將包埋塊置人70％酒精中硬化保存。
實施例4、火棉膠包埋法在斷層解剖學研究中的應用，在實施例3基礎(chǔ)上，斷層解剖切片的制備方法將上述火棉膠包埋塊焊接到德國產(chǎn)浸酒L型切片機的焊托盤上，焊托盤最大直徑為(200mm)，焊托盤平面至切片刀距離為(180mm)；取材體積范圍設(shè)定在(50×50×50mm)至(180×180×150mm)，切片展示范圍亦在(50×50×50mm)至(180×180×150mm)內(nèi)。
應用實例實例1、1998年至2000年對20例顱底鞍區(qū)(海綿竇及其腦神經(jīng)、頸內(nèi)動脈和蝶竇)，3例脊柱區(qū)(腰部椎間盤、椎間盤關(guān)節(jié)、椎管內(nèi)脊神經(jīng)根)進行了實驗研究。2000年首次在國內(nèi)公開發(fā)表了該技術(shù)方法論文《火棉膠包埋法在制備斷層解剖學標本上的應用》(參見中國臨床解剖學雜志，2000年第18卷第1期第91頁)。
實例2、2000年至2003年完成9例尸腦火棉膠斷層解剖連續(xù)切片，并將斷層解剖與磁共振圖像(MRI)結(jié)合，發(fā)表學術(shù)論文2篇。
①《顳葉內(nèi)側(cè)結(jié)構(gòu)的斷層解剖學研究》(參見中國斷層影像解剖學雜志，2000年第4卷第1期第9-12頁)；②《顳葉內(nèi)側(cè)結(jié)構(gòu)的斷層解剖與MRI的對照研究》(參見中國臨床解剖學雜志，2003年第21卷第1期30-32頁。
實例3、2002年至今完成成人頭頸靜脈孔區(qū)7例、眼眶(視器)50例、膝關(guān)節(jié)8例火棉膠斷層解剖連續(xù)切片研究。發(fā)表學術(shù)論文如下①《膝后外側(cè)部結(jié)構(gòu)的斷層解剖及臨床意義》，解剖學雜志，2003年第26卷第5期第480-483頁。
②《肌錐間隙的斷層解剖》，解剖學雜志，2003年第26卷第4期第381-385頁。
③《頸靜脈孔區(qū)的薄層斷層解剖研究》中國臨床解剖學雜志，2003年第21卷第5期第451-453頁。
④《視神經(jīng)的斷層解剖學研究及其臨床意義》，中國臨床解剖學雜志，2003年第21卷第5期第454-456頁。
⑤《膝關(guān)節(jié)橫斷面解剖及臨床意義》，第三屆全國解剖與臨床學時研討會，黃山，解剖與臨床雜志論文匯編第34-36頁。
⑥《內(nèi)耳道底的斷層解剖研究》，第三屆全國解剖與臨床學時研討會，黃山，解剖與臨床雜志論文匯編第36-37頁。
⑦《火棉膠切片標本盒裝的保存方法，》第三屆全國解剖與臨床學時研討會，黃山，解剖與臨床雜志論文匯編第265-266頁。
實例4、中國著名解剖學家、山東大學醫(yī)學院副院長劉樹偉教授，在2004年7月18日李云生博士生導師推薦書中有這樣的評價“李云生教授在臨床解剖學領(lǐng)域著述頗豐，已形成自己的研究特色，尤其在利用火棉膠切片技術(shù)開展斷層影像解剖學研究方面獨樹一幟，……”(參見復印資料)。
權(quán)利要求
1.一種火棉膠包埋法，其特征在于包埋法步驟①取材標本經(jīng)甲醛固定后尸體的任何部位；②標本脫鈣將設(shè)計好的取材標本用10％鹽酸浸泡(15-30)天，直至骨組織可用針刺入為止；③將火棉膠包埋法與德國產(chǎn)L型切片機結(jié)合制備連續(xù)斷層切片。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的火棉膠包埋法，其特征在于取材體積范圍在(50×50×50mm至180×180×150mm)，切片厚度設(shè)置在(0.5-1.0mm)，或設(shè)置在(25-100μm)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的火棉膠包埋法在斷層解剖學研究中的應用，其特征在于斷層解剖組織塊制備和包埋步驟①斷層解剖組織塊脫鈣；②沖洗將脫鈣組織塊取出后，用循環(huán)水沖洗24小時；③常規(guī)脫水；④浸膠將脫水后的組織塊先浸入(5％)火棉膠中，在真空箱內(nèi)以(66kPa)的壓力抽真空30分鐘，靜置1天后，再抽真空，再靜置1天后浸入(8％)火棉膠中；以同樣條件抽真空2次；⑤包埋與制塊用15％火棉膠作為包埋劑，將包埋塊置入(70％)酒精中硬化保存。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的火棉膠包埋法在斷層解剖學研究中的應用，其特征在于斷層解剖切片的制備方法將上述火棉膠包埋塊焊接到德國產(chǎn)浸酒L型切片機的焊托盤上，焊托盤最大直徑為(200mm)，焊托盤平面至切刀距離為(180mm)；取材體積范圍設(shè)定在(50×50×50mm)至(180×180×150mm)，切片展示范圍亦在(50×50×50mm)至(180×180×150mm)內(nèi)。
全文摘要
本發(fā)明是涉及外科采用火棉膠包埋的一種方法及其在斷層解剖學研究中的應用。火棉膠包埋法，步驟①取材標本經(jīng)甲醛固定后尸體的任何部位；②標本脫鈣將設(shè)計好的取材標本用10％鹽酸浸泡15－30天；③將火棉膠包埋法與L型切片機結(jié)合制備連續(xù)斷層切片。效果有別于一般的組織切片；所研制的斷層解剖切片具有連續(xù)性，無鋸耗，可任意選擇切片的薄厚匹配磁共振圖像；切片薄厚選擇范圍在25μm－3.0mm；研制的斷層解剖切片能清晰展示斷層解剖的任何毗鄰結(jié)構(gòu)，能反映臨床意義重大的局部斷層解剖學關(guān)系；斷層解剖切片觀察范圍比一般組織片大5－10倍，比一般斷層解剖切片厚度小10－20倍，優(yōu)化了火棉膠切片的保存方法。
文檔編號G01N1/04GK1587961SQ20041007223
公開日2005年3月2日 申請日期2004年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月29日
發(fā)明者李云生 申請人:李云生