專利名稱：十八味人參補氣膏質量標準檢測方法
技術領域：
本發(fā)明屬于中藥技術領域。具體涉及十八味人參補氣膏質量標準檢測方法。
十八味人參補氣膏為傳統(tǒng)的煎膏劑，由人參、枸杞子、地黃、阿膠、五味子(制)、熟地黃、黨參、女貞子(制)、麥芽(炒)、太子參、黃精(制)、谷芽(炒)、黃芪、玉竹、茯苓、當歸、制何首烏、陳皮等十八味中藥組成，具有補益氣血，滋補肝腎的功效。用于身體虛弱，氣短乏力，頭暈耳鳴，腰膝酸軟。方中以制何首烏為臣藥，具有補肝腎，益精血，烏須發(fā)，強筋骨的功效。
原質量標準中只對其中黃芪、陳皮、當歸三味藥進行了定性鑒別，但沒有反映藥物內在質量的指標成分的含量測定項，無法在生產(chǎn)中有效的保證產(chǎn)品的內在質量，進而藥品療效得不到保證。
本發(fā)明所要解決的技術問題在于克服上述不足之處，改進十八味人參補氣膏原有質量標準，增加了其中制何首烏、五味子、枸杞子、女貞子和人參等五味藥的定性鑒別，建立了制何首烏中2、3、5、4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定。
本發(fā)明提供了十八味人參補氣膏質量標準測方法，該方法包括對其中制何首烏、五味子、枸杞子、女貞子和人參的定性鑒別，建立了制何首烏中2、3、5、4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定。
本發(fā)明提供的制何首烏、五味子、枸杞子、女貞子和人參的定性鑒別包括下列步驟1、制何首烏的薄層鑒別制何首烏含有大黃素，因此采用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取，經(jīng)試驗，能得到清晰的薄層色譜圖。取本品100g，置錐形瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，放冷后，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗滌，溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為供試品溶液。另取大黃素對照品，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。取缺制何首烏的“十八味人參補氣膏”100g，同法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(30～5∶9～2∶2～0.3)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；置氨蒸氣中熏后，斑點變?yōu)榧t色，陰性無干擾。
2、五味子的薄層鑒別取本品100g，置錐形瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，放冷后，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗滌，溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為供試品溶液。另取五味子醇甲對照品，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。取缺五味子的“十八味人參補氣膏”100g，同法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各10μl，對照品溶液3μl，分別點于同一高效硅膠GF254薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(40～10∶8～2∶1.5～0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，陰性樣品無干擾。
3、枸杞子的薄層鑒別取本品100g，置錐形瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，放冷后，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗滌，溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為供試品溶液。另取枸杞子對照藥材1g，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)30ml，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)20ml溶解后，用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次20ml，合并溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為對照藥材溶液。取缺枸杞子的“十八味人參補氣膏”100g，同法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各10μl，對照藥材溶液2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲酸(20～5)∶(6～1)∶(1.5～0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性樣品無干擾。
4、女貞子的薄層鑒別取本品100g，置錐形瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，放冷后，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗滌，溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為供試品溶液。另取齊墩果酸對照品，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。取缺女貞子的“十八味人參補氣膏”100g，同法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各10μl，對照品溶液2μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(40～10)∶(8～2)∶(1.5～0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無干擾。
5、人參的薄層鑒別取本品100g，置錐形瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，放冷后，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，棄去溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液用水飽和正丁醇提取三次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用氨試液50ml洗滌后，再用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)洗滌二次，每次50ml，棄去溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rg1、Re、Rb1對照品，分別加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。取缺人參的“十八味人參補氣膏”100g，同法制成陰性樣品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液和陰性樣品溶液各10μl，對照品溶液2μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(22～8)∶(10～4)∶(5～0.5)10℃以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與人參皂苷Re對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無干擾。(見圖6)本發(fā)明對制何首烏含量測定進行了系列試驗(1)儀器與試藥(2)儀器Agilent--1100液相色譜儀；對照品來源于中國藥品生物制品檢定所(批號0844-200003，供含量測定用)；樣品批號(1)030901 (2)030902 (3)030903試劑甲醇為色譜醇。
(2)色譜條件經(jīng)過摸索，采用檢測波長320nm，流速2.5～0.5ml/min，經(jīng)試驗，確定采用流動相乙腈-水(1～35∶99～65)。色譜柱C18(15cm×5μm)，柱溫45～20℃。
(3)供試品制備方法取本品25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
(4)提取時間的選擇取本品25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，分別(a)振搖、(b)提取(超聲處理或熱回流或冷浸)5分鐘、(c)提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘、(d)提取(超聲處理或熱回流或冷浸)15分鐘、(f)提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液測定，結果見下表選擇提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘可將所測成分完全提出。
提取時間

(5)標準曲線取不同濃度的2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品溶液分別進樣，以峰面積為縱坐標Y，進樣量為橫坐標X，做回歸得標準曲線，結果表明2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進樣量0.0366～5.49μg范圍內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系，結果見下表。
標準曲線

(6)精密度試驗精密量取對照品溶液10μl，注入液相色譜儀，進樣分析，重復測定5次，記錄峰面積，結果見下表。
精密度試驗

(7)穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液分別在制備好后0小時、4小時、8小時、12小時、16小時注入液相色譜儀，進樣測定結果，其峰面積均未見明顯變化，說明供試品溶液較穩(wěn)定，結果見下表。
穩(wěn)定性試驗

(8)重復性試驗取樣品(批號030901)25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。注入液相色譜儀，分別測定，結果見下表。
重復性試驗

(9)加樣回收率測定取樣品(批號030901)15g，置燒杯中，精密稱定，精密加入2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品一定量，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。注入液相色譜儀，分別測定，結果見下表。
加樣回收率

(10)樣品測定取樣品(批號(1)030901(2)030902(3)030903)25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。注入液相色譜儀，分別測定，結果見下表樣品測定

(11)陰性樣品測定取不含制何首烏的樣品25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。注入液相色譜儀，進樣10μl進行分析。結果對樣品測定無干擾。(附色譜圖)本發(fā)明提供了制何首烏含量測定的方法，該方法包括下列步驟照高效液相色譜法(中國藥典2000年版附錄VI D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，用乙腈-水(1～35∶99～65)為流動相；檢測波長為320nm。理論塔板數(shù)按2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計算應不低于6500～2000。
對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含36μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
本品每g含制何首烏以2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計，不得少于0.13mg。
為了考察質量標準提高后《十八味人參補氣膏》的穩(wěn)定性情況，進行了長期穩(wěn)定性試驗1、試驗條件將市售包裝《十八味人參補氣膏》置于室溫條件下(25℃±2℃)，相對濕度60％±10％，放置一定時間后進行觀察，取樣檢測，重點考察性狀，鑒別，含量，檢查，衛(wèi)生學檢查項目。
2、測試結論《十八味人參補氣膏》經(jīng)一年多來產(chǎn)品穩(wěn)定性試驗表明，產(chǎn)品的理化性質和衛(wèi)生學檢查等重點考察項目均符合《十八味人參補氣膏》質量標準要求，產(chǎn)品質量較為穩(wěn)定。
長期穩(wěn)定性試驗批號030101(RT25℃±2℃和RH60％±10％)

長期穩(wěn)定性試驗批號030102 (RT25℃±2℃和RH60％±10％)

長期穩(wěn)定性試驗批號030103 (RT25℃±2℃和RH60％±10％)



圖1制何首烏薄層色譜圖(日光下)1、陰性樣品2、樣品3、大黃素對照品圖2制何首烏薄層色譜圖(氨蒸氣熏)1、陰性樣品2、樣品3、大黃素對照品圖3五味子薄層色薄層色譜圖1、陰性樣品2、樣品3、五味子醇甲對照品圖4枸杞子薄層色譜圖1、陰性樣品2、樣品3、枸杞子對照藥材圖5女貞子薄層色譜圖1、陰性樣品2、樣品3、齊墩果酸對照品圖6人參薄層色譜圖1、陰性樣品2、樣品3、人參皂苷Rg1+人參皂苷Rb14、人參皂苷Re圖7制何首烏對照品色譜8制何首烏樣品色譜9制何首烏陰性樣品色譜圖具體實施方式
實例一十八味人參補氣膏檢驗批號030901鑒別(1)制何首烏薄層取本品100g，置錐形瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)200ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，放冷后，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)80ml使溶解，用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次50ml，合并溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液(溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液備用)，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)50ml洗滌，溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃素對照品，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚30～60℃-甲酸乙酯-甲酸(30～5∶9～2∶2～0.3)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；置氨蒸氣中熏后，斑點變?yōu)榧t色；(2)五味子薄層鑒別取鑒別(1)項下的供試品溶液，另取五味子醇甲對照品，加溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液3μl，分別點于同一高效硅膠GF254薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(40～10∶8～2∶1.5～0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)枸杞子薄層鑒別取鑒別(1)項下的供試品溶液。另取枸杞子對照藥材1g，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)30ml，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)20ml溶解后，用溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)提取二次，每次20ml，合并溶劑(醋酸乙酯、氯仿或乙醚)液，蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照藥材溶液2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲酸(20～5)∶(6～1)∶(1.5～0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(4)女貞子薄層鑒別取鑒別(1)項下的供試品溶液。另取齊墩果酸對照品，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液2μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(40～10)∶(8～2)∶(1.5～0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(5)人參鑒別取鑒別(1)項下的備用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液，用水飽和正丁醇提取三次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用氨試液50ml洗滌后，再用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)洗滌二次，每次50ml，棄去溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘渣加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)1ml使溶解，作為供試品溶液，另取人參皂苷Re對照品，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液2μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(22～8)∶(10～4)∶(5～0.5)10℃以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(6)制何首烏含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版附錄VID)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，用乙腈-水(1～35∶99～65)為流動相；檢測波長為320nm，理論塔板數(shù)按2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計算應不低于6500～2000對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)制成每1ml含36μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)攪拌使溶解，轉移至50ml量瓶中，用溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
計算 制何首烏含量 結果 本品每g含制何首烏(以2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計)0.170mg。
實例二批號030902按030901批檢測，檢測結果(1)五項鑒別均呈陽性，(2)每g含制何首烏(以2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計)0.15mg。
實例三批號030903按030901批檢測，檢測結果(1)五項鑒別均呈陽性，(2)每g含制何首烏(以2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計)0.17mg。
權利要求
1.一種十八味人參補氣膏質量標準檢測方法，其特征在于該檢測方法包括增加其中的制何首烏、五味子、枸杞子、女貞子和人參五味藥的定性鑒別，建立了制何首烏中2、3、5、4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種十八味人參補氣膏質量標準檢測方法，其特征在于其中所述的制何首烏、五味子、枸杞了、女貞子和人參的定性鑒別包括下列步驟鑒別(1)制何首烏薄層取本品100g，置錐形瓶中，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿200ml，搖勻，提取用超聲處理、熱回流或冷浸20分鐘，放冷后，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿80ml使溶解，用溶劑醋酸乙酯、氯仿或乙醚提取二次，每次50ml，合并溶劑備用，用溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿50ml洗滌，溶劑蒸干，殘渣加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿1ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃素對照品，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚30～60℃-甲酸乙酯-甲酸30～5∶9～2∶2～0.3的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；置氨蒸氣中熏后，斑點變?yōu)榧t色；(2)五味子薄層鑒別取鑒別(1)項下的供試品溶液，另取五味子醇甲對照品，加溶劑醋酸乙酯、氯仿或乙醚制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液3μl，分別點于同一高效硅膠GF254薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸40～10∶8～2∶1.5～0.1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈254nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)枸杞子薄層鑒別取鑒別(1)項下的供試品溶液，另取枸杞子對照藥材1g，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿30ml，提取用超聲處理、熱回流或冷浸20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿20ml溶解后，用溶劑醋酸乙酯、氯仿或乙醚提取二次，每次20ml，合并溶劑蒸干，殘渣加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿1ml使溶解，作為對照藥材溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照藥材溶液2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲酸20～5∶6～1∶1.5～0.1為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；(4)女貞子薄層鑒別取鑒別(1)項下的供試品溶液，另取齊墩果酸對照品，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液2μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸40～10∶8～2∶1.5～0.1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(5)人參鑒別取鑒別(1)項下的備用溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿液，用水飽和正丁醇提取三次，每次50ml，合并正丁醇提取液，用氨試液50ml洗滌后，再用溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿洗滌二次，每次50ml，棄去溶劑，蒸干，殘渣加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿1ml使溶解，作為供試品溶液，另取人參皂苷Re對照品，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μl，對照品溶液2μl，分別點于同一高效硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水22～8∶10～4∶5～0.510℃以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種十八味人參補氣膏質量標準檢測方法，其特征在于其中所述的制何首烏中2、3、5、4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定包括下列步驟照高效液相色譜法測定(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，用乙腈-水1～35∶99～65為流動相；檢測波長為320nm，理論塔板數(shù)按2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計算應不低于6500～2000；(2)對照品溶液的制備精密稱取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，加溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿制成每1ml含36μg的溶液，即得；(3)供試品溶液的制備取本品25g，置燒杯中，精密稱定，加25ml溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿攪拌使溶解，轉移至50ml量瓶中，用溶劑甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)少量多次反復洗滌燒杯，洗液并入同一量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)4ml，搖勻，提取(超聲處理或熱回流或冷浸)10分鐘，放冷后，加溶劑(甲醇、乙醇、水、正丁醇或氯仿)稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；(4)測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，本品每g含制何首烏以2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷C20H22O9計，不得少于0.13mg。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥技術領域。本發(fā)明公開了中藥十八味人參補氣膏質量標準檢測方法。本發(fā)明改進了原有質量標準，進加了其中制何首烏、五味子、枸杞子、女貞子和人參等五味藥的定性鑒別，建立了制何首烏中2、3、5、4’－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷的含量測定。本發(fā)明的方法提高了質量標準，有利于產(chǎn)品穩(wěn)定性和工業(yè)化生產(chǎn)的質量控制。
文檔編號G01N33/15GK1743843SQ200410089328
公開日2006年3月8日 申請日期2004年12月9日 優(yōu)先權日2004年12月9日
發(fā)明者徐福鶯, 邵寶平, 謝松, 沈繡紅 申請人:上海雷允上藥業(yè)有限公司