專利名稱：多通道測試裝置、其生產(chǎn)方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基于免疫擴(kuò)散的多通道測試裝置，該測試裝置能夠同時(shí)或平行進(jìn)行多個(gè)不同的分析。本發(fā)明還公開了所述裝置的制備和用途。
背景技術(shù)：
已知多種基于免疫擴(kuò)散的方法和測試裝置，例如下述專利和專利申請(qǐng)中所公開的US 4,757,002,US 3,990,852,US 4,562,147以及EP 0 250 137。也已經(jīng)公開了基于免疫擴(kuò)散的免疫層析方法，例如下述專利和專利申請(qǐng)中所公開的EP 0 291 194，EP 0 284 232(FI 93150)和WO 86/03839。
對(duì)于上述基于免疫擴(kuò)散和免疫層析的測試裝置來說，最常見的是每個(gè)測試裝置僅用于進(jìn)行一個(gè)分析。在很多情況下，對(duì)患有特定疾病或綜合征的病人進(jìn)行確診和選擇合適的治療方法可能需要進(jìn)行多個(gè)不同的分析。如果識(shí)別引發(fā)癥狀和疾病的病因或排除特定疾病需要進(jìn)行多個(gè)不同的測試，那么進(jìn)行診斷將變得非常昂貴，以至于通常只進(jìn)行一個(gè)或很少數(shù)目的分析，這些分析是基于治療醫(yī)師的判斷而隨機(jī)選擇的，或者是常用測試，在這種情況下，其它可選測試可能無法進(jìn)行。
多于一個(gè)測試通道的使用是已知的，例如US B1 6,171,870和US A12003/0040021中所公開的。US B1 6,171,870涉及生產(chǎn)此類通道的方法，該方法涉及將斥水(water-repellent)物質(zhì)例如蠟施加到多孔載體上。被處理的區(qū)域形成了通道之間的阻斷部分。在US A12003/0040021描述的方法中，樣品沿著處理過的通道移動(dòng)，而未處理的區(qū)域留在通道之間。
與現(xiàn)有技術(shù)中的方法和測試裝置相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)包括試劑和材料消耗的減少、樣品體積和負(fù)載的下降，以及環(huán)境友好性、貨架壽命和用戶友好性的改善。環(huán)境友好性的提高是由于使用過的測試裝置所引起的環(huán)境負(fù)載下降。由于試劑消耗和人力成本的節(jié)約，本發(fā)明的方法可以以極低的成本生產(chǎn)測試裝置。
與基于免疫擴(kuò)散和免疫色譜的常規(guī)測試裝置相關(guān)的問題在本發(fā)明中得到了解決，本發(fā)明的特征公開在下面的權(quán)利要求中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的基于免疫擴(kuò)散的測試裝置包含多孔載體材料以及其中的區(qū)帶(zone)或斑點(diǎn)(blot)的形式的特異結(jié)合試劑(免疫試劑)。與第二種特異結(jié)合試劑(免疫試劑)偶聯(lián)的可檢測的標(biāo)記被單獨(dú)或預(yù)先施加到所述多孔載體中，并且可被所述樣品移動(dòng)。任選提供有過濾器的樣品施加位點(diǎn)也位于該測試裝置上。該測試裝置的多孔載體材料優(yōu)選由硝酸纖維素制成，并且包含通道網(wǎng)絡(luò)，其是通過用激光處理蝕刻到所述多孔載體材料中的。該通道網(wǎng)絡(luò)包含兩個(gè)或更多個(gè)通道(1)，由處理過的區(qū)域(2)隔開，固定于其中的一種或多種特異結(jié)合試劑(3)，置于所述通道中鄰近樣品施加位點(diǎn)(5)或位于樣品施加位點(diǎn)(5)本身里的任選的標(biāo)記點(diǎn)(4)，其放置的方式使得所述樣品能夠均勻分布到各個(gè)通道中。
本發(fā)明的測試裝置能夠基于同時(shí)或平行進(jìn)行的對(duì)多種產(chǎn)生綜合征的試劑或分析物的識(shí)別對(duì)不同的疾病或綜合征進(jìn)行診斷。該測試裝置可用于同時(shí)識(shí)別多種產(chǎn)生過敏的試劑，心肌梗塞標(biāo)記物，產(chǎn)生性病的試劑，血液篩選分析物，產(chǎn)生呼吸系統(tǒng)感染的試劑，產(chǎn)生傳染病的試劑和/或癌癥標(biāo)記物。
有用的特異結(jié)合試劑的例子是抗體、抗體片段、重組抗體、重組抗體片段、抗原、凝集素、受體和/或配體。有用的標(biāo)記試劑是例如乳膠、金、金屬或染色劑微?；驘晒馕镔|(zhì)。
本發(fā)明公開了一種生產(chǎn)該測試裝置的方法，其中所述特異識(shí)別免疫試劑固定在多孔材料中，已經(jīng)使用物質(zhì)使其變?yōu)槎栊?，并且其中樣品施加位點(diǎn)任選提供有過濾器和可檢測的標(biāo)記，該可檢測的標(biāo)記上結(jié)合有特異結(jié)合試劑。通過用激光蝕刻多孔材料在所述多孔材料上形成具有預(yù)期形狀和尺寸的通道網(wǎng)絡(luò)。該網(wǎng)絡(luò)包含兩個(gè)或更多個(gè)通道(1)以及處理過的區(qū)域(2)；和一種或多種識(shí)別特異結(jié)合試劑被固定在各個(gè)通道(1)中作為區(qū)帶或斑點(diǎn)(3)。
使所述多孔材料變?yōu)槎栊缘挠杏玫奈镔|(zhì)是混合物，其包含天然或合成聚合物，例如白蛋白和酪蛋白或PEG(聚乙二醇)和PVA(聚乙烯醇)，非離子去垢劑例如己烷磺酸和TRITON-X-100、BRIJ和防腐劑，例如糖，如蔗糖和海藻糖，或它們的衍生物。
在施加所述試劑后，所述測試裝置被干燥并保持在相對(duì)濕度不超過8％并且被密封包裝，從而大大提高了所述測試裝置的耐儲(chǔ)存性。
該多通道測試裝置在同時(shí)或平行進(jìn)行多個(gè)檢測中是有用的，這使得人們能夠診斷在只使用一個(gè)標(biāo)記物的情況下可能很難診斷的目標(biāo)疾病和/或綜合征。所述樣品被施加到該測試裝置的施加位點(diǎn)(5)，其含有可被可分析樣品移動(dòng)的標(biāo)記以及與之偶聯(lián)的第二種特異結(jié)合試劑，所述樣品和試劑從該位點(diǎn)均勻移動(dòng)到該通過激光處理形成的通道網(wǎng)絡(luò)的通道中，在此處它們與所述特異結(jié)合試劑在其固定點(diǎn)(3)處反應(yīng)或不反應(yīng)，陽性或陰性結(jié)果可從此處直接讀出。
本發(fā)明還涉及用于同時(shí)或平行進(jìn)行用于識(shí)別目標(biāo)疾病和/或綜合征的多個(gè)檢測的測試裝置。樣品被施加到該測試裝置的施加位點(diǎn)(5)，所述樣品從該位點(diǎn)移動(dòng)到通道中，在此處其與可被所述樣品移動(dòng)的標(biāo)記和與之結(jié)合的第二種特異結(jié)合試劑混合并發(fā)生反應(yīng)，此后，所述樣品和試劑均勻移動(dòng)到該通過激光處理形成的通道網(wǎng)絡(luò)的通道中，在此處它們與所述特異結(jié)合試劑在其固定點(diǎn)(3)處反應(yīng)或不反應(yīng)，陽性或陰性結(jié)果可從此處直接讀出。
本發(fā)明還涉及所述測試裝置在同時(shí)或平行進(jìn)行用于識(shí)別目標(biāo)疾病和/或綜合征的多個(gè)檢測中的用途。所述樣品與單獨(dú)的標(biāo)記(該標(biāo)記具有與之偶聯(lián)的第二種特異結(jié)合試劑)混合，并且該混合物被施加到該測試裝置的施加位點(diǎn)(5)，所述樣品和試劑從該位點(diǎn)均勻移動(dòng)到該通過激光處理形成的通道網(wǎng)絡(luò)的通道中，在此處它們與所述特異結(jié)合試劑在其固定點(diǎn)(3)處反應(yīng)或不反應(yīng)，陽性或陰性結(jié)果可從此處直接讀出。


圖1示出了具有八個(gè)通道的網(wǎng)絡(luò)，這是用于進(jìn)行多達(dá)八個(gè)不同檢測的優(yōu)選測試裝置。標(biāo)記點(diǎn)4同時(shí)作為樣品施加位點(diǎn)5起作用，通道1被處理過的區(qū)域2隔開，含有特異結(jié)合劑作為區(qū)帶3。
圖1a示出了根據(jù)圖1的用于進(jìn)行最多八個(gè)不同檢測的多通道測試裝置的較好實(shí)施方式。標(biāo)記點(diǎn)4同時(shí)作為樣品施加位點(diǎn)5起作用，通道1被處理過的區(qū)域2隔開，含有特異結(jié)合劑作為區(qū)帶3。該裝置標(biāo)記有關(guān)于該測試和制造商的信息。
圖2示出了一種測試裝置，該測試裝置可用于進(jìn)行六個(gè)不同的檢測及其對(duì)照反應(yīng)，或者任選地，通過六個(gè)不同的標(biāo)記進(jìn)行最多十二個(gè)不同的檢測。通道1之一分支為兩個(gè)通道1a、1b，它們被處理過的區(qū)域2隔開。樣品施加位點(diǎn)位于通道網(wǎng)絡(luò)的中間，每個(gè)通道1包含標(biāo)記點(diǎn)4以及一個(gè)或多個(gè)結(jié)合劑區(qū)帶3。
圖3示出了一種測試裝置，該測試裝置可用于進(jìn)行四個(gè)不同的檢測及其對(duì)照反應(yīng)，或者任選地，通過四個(gè)不同的標(biāo)記進(jìn)行最多八個(gè)不同的檢測。
圖4示出了一種測試裝置，該測試裝置可用于進(jìn)行四個(gè)不同的檢測及其對(duì)照反應(yīng)，或者任選地，通過四個(gè)不同的標(biāo)記進(jìn)行最多八個(gè)不同的檢測。
圖5示出了一種測試裝置，該測試裝置可用于進(jìn)行最多六個(gè)不同的檢測，或者任選地三個(gè)檢測，及其對(duì)照反應(yīng)。
圖6示出了一種測試裝置，該測試裝置可用于通過四個(gè)不同的標(biāo)記進(jìn)行十二個(gè)不同的檢測。
圖7示出了具有八個(gè)通道的網(wǎng)絡(luò)，這是用于進(jìn)行最多二十四個(gè)不同檢測的優(yōu)選測試裝置。每個(gè)通道1包含三個(gè)結(jié)合劑區(qū)帶3。
圖8示出了可用于同時(shí)進(jìn)行十六個(gè)不同檢測的測試裝置。
圖9示出了一種測試裝置，該測試裝置可用于通過五個(gè)不同的標(biāo)記進(jìn)行二十個(gè)不同的檢測。
圖10示出了可用于進(jìn)行二個(gè)檢測及對(duì)照反應(yīng)的測試裝置。該裝置標(biāo)記有關(guān)于該測試和制造商的信息。
圖11示出了可用于進(jìn)行二個(gè)檢測及對(duì)照反應(yīng)的測試裝置。該裝置標(biāo)記有關(guān)于該測試和制造商的信息。
圖12示出了一種通過激光蝕刻生產(chǎn)的測試裝置，該測試裝置可用于進(jìn)行三個(gè)平行檢測，或者任選地三個(gè)個(gè)別的檢測及其對(duì)照反應(yīng)。該裝置標(biāo)記有關(guān)于該測試和制造商的信息。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的目標(biāo)是基于免疫擴(kuò)散的多通道測試裝置，該裝置包含多孔載體材料，和在該材料中的區(qū)帶或斑點(diǎn)形式的一種或多種特異結(jié)合試劑(免疫試劑)，以及樣品施加位點(diǎn)，該樣品施加位點(diǎn)任選配置有過濾器，例如用于除去血細(xì)胞，并且任選包含可被可分析樣品移動(dòng)的標(biāo)記，其被第二種特異結(jié)合試劑(免疫試劑)包被。該標(biāo)記位于測試裝置上或被加入樣品中。
本發(fā)明測試裝置的特征在于它包含通道網(wǎng)絡(luò)，該通道網(wǎng)絡(luò)是通過在多孔載體材料上通過蝕刻，例如通過激光，而制備的。已向該測試裝置的通道提供了一種或多種相同或不同的特異結(jié)合劑，該特異結(jié)合劑是從不同的標(biāo)記物組中選擇的，可以一起使用，并且是診斷特定綜合征所需要的。因此，通過同時(shí)進(jìn)行用于識(shí)別特定目標(biāo)疾病和/或綜合征的多個(gè)檢測，使得診斷得以進(jìn)行。樣品施加位點(diǎn)可以是點(diǎn)或斑點(diǎn)或線或區(qū)帶的形式，位于例如長條(strip)的中間或另一端，使得樣品可以均勻地分布到各個(gè)通道中。如果相同的特異結(jié)合試劑以不同的濃度用于通道中，那么可以獲得半定量的結(jié)果。
本發(fā)明的測試裝置包含多個(gè)通道，可用于同時(shí)或平行測定多種分析物。在測試裝置中，可以任選地對(duì)下列試劑進(jìn)行分組識(shí)別與各種綜合征相關(guān)的致病劑(例如變應(yīng)原)的試劑心肌梗塞標(biāo)記物，用于識(shí)別性病和用于血液篩選的合適試劑，識(shí)別產(chǎn)生呼吸系統(tǒng)感染的試劑的標(biāo)記物，IgG、IgA和IgM抗體，識(shí)別產(chǎn)生其他感染性疾病的標(biāo)記物以及各種癌癥標(biāo)記物，用于它們的同時(shí)或平行測定。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是生產(chǎn)所述測試裝置的方法。該生產(chǎn)方法的特征在于，通過激光技術(shù)，在多孔材料上蝕刻出具有預(yù)期形狀和尺寸(見圖1-12)的多通道網(wǎng)絡(luò)，所述激光技術(shù)在基片上制造出某種形狀。不同的識(shí)別特異結(jié)合試劑被永久地連接(也就是固定)在每個(gè)通道的多孔物質(zhì)中。測試反應(yīng)的分析結(jié)果可以從這些點(diǎn)中讀出。
在這之后，采用可使自由反應(yīng)位點(diǎn)變?yōu)槎栊缘奈镔|(zhì)處理多孔材料，也就是說，它們不以人們不想要的方式反應(yīng)，例如通過減緩或阻止分析物或標(biāo)記移動(dòng)到永久固定的試劑區(qū)帶或斑點(diǎn)中?？蓹z測的、任選可見的標(biāo)記上結(jié)合了第二種特異結(jié)合試劑，該標(biāo)記被施加到樣品施加位點(diǎn)或測試通道的預(yù)定位置上。該結(jié)合試劑所結(jié)合的標(biāo)記也可以被加入到樣品中，在這種情況下，當(dāng)樣品被加入到樣品施加位點(diǎn)時(shí)，該標(biāo)記被轉(zhuǎn)移到裝置中。
此外，本發(fā)明還描述了測試裝置在同時(shí)或平行進(jìn)行多個(gè)檢測以識(shí)別某些疾病和/或綜合征中的用途。分支的通道也可以用于對(duì)照該裝置的適當(dāng)功能，采用通道之一作為測試通道，其它的通道作為功能性或?qū)φ?control)通道。也可以在測試裝置中加入指明裝置和試劑的功能性的獨(dú)立的對(duì)照通道。
本發(fā)明的多通道測試裝置及其在診斷方法中的應(yīng)用與上述專利和專利申請(qǐng)中公開的現(xiàn)有技術(shù)中的測試裝置的不同點(diǎn)在于一個(gè)或多個(gè)不同的或相同的平行測試，優(yōu)選2-40個(gè)，更優(yōu)選4-30個(gè)，最優(yōu)選8-24個(gè)平行測試可以采用從多孔材料制得的極小對(duì)象來進(jìn)行。
采用激光來生產(chǎn)通道網(wǎng)絡(luò)是制造本發(fā)明的測試裝置的優(yōu)選方法。在該生產(chǎn)方法中使用的機(jī)器不昂貴，運(yùn)行成本主要由耗電量構(gòu)成。與使用斥水物質(zhì)例如熱蠟相比，通過使用激光，可以避免在制造過程中使用化學(xué)品。通過使用激光，可以獲得精確的蝕刻結(jié)果(打印)，并且由于打印(壓印)的精確程度，如果需要的話，測試裝置可以在制造過程中被標(biāo)記，從而減少把裝置搞混的危險(xiǎn)。
可以通過下述方法制造大量的測試在滾軸上蝕刻單個(gè)的通道、平行通道或通道網(wǎng)絡(luò)，并在同一生產(chǎn)線上加入所需要的試劑和處理，最后以期望的方式將測試彼此分開成為單個(gè)的測試用于一個(gè)或多個(gè)檢測，或者成為多個(gè)平行測試的測試組合。
此外，測試裝置可以用于分析小體積的患者樣品，例如尿、血、血漿、血清、唾液、組織液、糞便、環(huán)境樣品等。小的樣品體積，即使小至每個(gè)測試裝置1.0-50μl，優(yōu)選2.0-40μl，更優(yōu)選4.0-20μl，或最優(yōu)選5.0-10.0μl就足夠了，這有很多優(yōu)點(diǎn)，特別是在針對(duì)從小兒或指尖血樣收集的樣品進(jìn)行檢測方面。
生產(chǎn)檢測裝置檢測裝置的生產(chǎn)包括六個(gè)主要步驟。形成通道網(wǎng)絡(luò)，施加和固定特異性試劑，使多孔通道變?yōu)槎栊?，施加用第二種特異性試劑包被的標(biāo)記，生產(chǎn)樣品施加位點(diǎn)和穩(wěn)定測試裝置并確保其儲(chǔ)存性質(zhì)。在提到的主要步驟之間，可以干燥測試長條。如果將標(biāo)記加入到樣品中，那么將標(biāo)記施加到測試裝置的步驟可以省略。
在本發(fā)明的測試裝置中，通過在測試裝置中形成通道，多個(gè)不同或相同的平行測試(圖1-12)可以在很密集的多孔材料項(xiàng)目(item)上進(jìn)行。
生產(chǎn)通道試劑和樣品的通道化可以通過用斥水或部分斥水的物質(zhì)，例如蠟、聚烯烴、聚丙烯酰胺顏料或其混合物，處理多孔的透水材料，例如硝酸纖維素、聚磺酸酯(polysulphonate)、尼龍或紙，而獲得。多孔材料上斥水材料的施加是在它們的熔解溫度上進(jìn)行的，優(yōu)選在50℃和80℃之間的溫度，有利地通過使用打印(printing)、刷或噴霧技術(shù)，從而在多孔材料上形成斥水圖形，該圖形具有預(yù)期的形狀并且包圍通道網(wǎng)絡(luò)，所述通道網(wǎng)絡(luò)包括彼此由被處理的區(qū)域分開的數(shù)個(gè)通道，樣品由于毛細(xì)作用和擴(kuò)散而沿所述通道移動(dòng)。在施加之后，立即將基片冷卻至室溫。以保持試劑反應(yīng)性的方式將其施加到通道網(wǎng)絡(luò)中是可能的。
自然，所述通道也可以通過對(duì)適當(dāng)大小的載體材料進(jìn)行壓制以形成具有預(yù)期形狀和尺寸的通道網(wǎng)絡(luò)來生產(chǎn)。
但是，根據(jù)本發(fā)明，通道化優(yōu)選是通過用激光處理多孔和透水的材料例如硝酸纖維素來進(jìn)行的。通過采用合適的激光能，在不希望流體流動(dòng)到其中的硝酸纖維素基片區(qū)域的硝酸纖維素可以被蝕刻掉，而處理過的區(qū)域僅被纖維素下面的塑料膜(Mylar膜)覆蓋。不同形狀的圖形(圖1-12)是由含硝酸纖維素或某種其它多孔材料的通道以及通道邊緣或處理過的區(qū)域形成的，所述處理過的區(qū)域完全延伸到基片邊緣，并已采用合適的預(yù)先編程的計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行了激光蝕刻，其中采用了設(shè)備最大輸出功率的10-90％，優(yōu)選10-80％，更優(yōu)選12-60％，最優(yōu)選15-40％，蝕刻速度優(yōu)選在100mm/s到1500mm/s，更優(yōu)選400mm/s到1000mm/s，分辨率在50/1000到1000/1000，優(yōu)選在100/1000到800/1000，更優(yōu)選在150/1000到500/1000，最優(yōu)選在200/1000到300/1000。
隔開通道的處理過的區(qū)域可以完全延伸到測試裝置的邊緣，或者任選地，未處理的區(qū)域可以留在圖形邊緣上。測試裝置可以通過蝕刻用關(guān)于制造商或測試的信息進(jìn)行標(biāo)記，例如通過激光處理。
將試劑施加到載體中將進(jìn)行測試所需的各種試劑施加并(如果需要的話)固定到通道網(wǎng)絡(luò)中是可能的。可以以很小的體積使用試劑。所需的試劑包括至少兩種特異結(jié)合試劑，其中一種被固定，另一種與可被樣品溶液移動(dòng)的標(biāo)記相結(jié)合，以及至少一種可檢測的標(biāo)記。
特異結(jié)合試劑合適的物質(zhì)包括各種結(jié)合試劑，特異性免疫化學(xué)試劑，例如抗體、抗體片段、重組抗體、重組抗體片段、抗原，以及其它配體例如受體、凝集素、生物素、抗生物素蛋白等。特別合適的是單克隆和多克隆抗體、抗原及其片段。至于過敏測試，合適的變應(yīng)原包括由樹、草或雜草的花粉制得的提取物，由霉菌的孢子、螨蟲、室內(nèi)灰塵、動(dòng)物皮膚的表皮、昆蟲、乳膠、寄生蟲、藥物或食物制得的提取物等。
可以通過已知的方法將結(jié)合試劑固定或采用化學(xué)或物理手段連接到多孔載體結(jié)構(gòu)上的預(yù)期位點(diǎn)處，對(duì)照反應(yīng)的結(jié)合試劑也可以任選地被固定或采用化學(xué)或物理手段連接到同一通道或分支的通道上。
使多孔物質(zhì)變?yōu)槎栊栽谏a(chǎn)了通道網(wǎng)絡(luò)并施加了特異結(jié)合試劑之后，通過使用所謂的封閉試劑將多孔載體物質(zhì)變?yōu)槎栊?，從而通過合適除去載體物質(zhì)的自由反應(yīng)位點(diǎn)和特異結(jié)合試劑的非特異結(jié)合位點(diǎn)，的混合物所述混合物中含有天然和/或合成的聚合物，例如白蛋白或酪蛋白和/或PEG(聚乙二醇)和PVA(聚乙烯醇)，非離子去垢劑，例如己烷磺酸和TRITON-X-100、BRIJ，以及防腐劑，例如糖，如蔗糖和海藻糖，或它們的衍生物。在這之后，對(duì)測試裝置進(jìn)行干燥。
如果期望的話，可以在測試裝置制備好之后再加入封閉試劑，與樣品的施加相關(guān)。
制備標(biāo)記點(diǎn)合適的標(biāo)記試劑包括可被樣品流移動(dòng)的各種塑料或金屬微粒，例如乳膠、金、脂質(zhì)體、染色劑、熒光團(tuán)、熒光染料或其它此類金屬物質(zhì)的微?；蛉旧珓?，其能結(jié)合分析物并與特異結(jié)合劑例如抗體、受體、凝集素或其它配體結(jié)合。熒光顆粒、熒光染色劑或超順磁顆粒也可以作為標(biāo)記。
標(biāo)記可以固定在多孔載體中的測試裝置的樣品施加位點(diǎn)或另一個(gè)與樣品施加位點(diǎn)不同的位點(diǎn)上。標(biāo)記試劑也可以在可分析樣品施加到測試長條上之前加入到可分析樣品中。
制備樣品施加位點(diǎn)樣品施加位點(diǎn)可以任選地配有過濾器，通過在樣品施加位點(diǎn)上放置過濾器來實(shí)現(xiàn)，該過濾器阻止例如血細(xì)胞被攜帶到通道中。樣品施加位點(diǎn)可以配有標(biāo)記，該標(biāo)記上已經(jīng)結(jié)合了第二種特異結(jié)合試劑。
穩(wěn)定測試裝置并確保其儲(chǔ)存性質(zhì)可以通過處理測試裝置例如通過干燥為其提供低于8％的相對(duì)濕度，在這之后，密封包裝該測試裝置并儲(chǔ)存在干燥處，以維持測試裝置的相對(duì)濕度低于8％從而使測試裝置變得耐儲(chǔ)存。這樣，該裝置保持其功能性長達(dá)24-36個(gè)月，在功能性上沒有任何明顯的下降，包括敏感性或特異性。
必要時(shí)，該測試裝置可以放置在由紙板或塑料制成的箱子中，需要時(shí)，其可以配備有描述測試裝置的操作和使用的說明書。
測試裝置的結(jié)構(gòu)測試裝置的結(jié)構(gòu)及其可能的變化描述于圖1-12中。
測試裝置包括多個(gè)通道1，優(yōu)選2-10個(gè)，更優(yōu)選3-8個(gè)，通道1可以在分支點(diǎn)上進(jìn)一步分為多個(gè)分支的通道，優(yōu)選2-5個(gè)(1a、1b)，更優(yōu)選2-3個(gè)。處理過的區(qū)域2將通道1彼此隔開，并指導(dǎo)樣品在測試裝置中的移動(dòng)。
通道1或分支的通道(1a、1b)含有一種或多種結(jié)合試劑作為結(jié)合劑區(qū)帶或斑點(diǎn)3。此外，測試裝置包含一個(gè)或多個(gè)標(biāo)記點(diǎn)4，其可以任選地與樣品施加位點(diǎn)5結(jié)合。樣品施加位點(diǎn)5可以任選地配有過濾器。
圖1示出了一種測試裝置，其中具有預(yù)期大小例如25×25mm的硝酸纖維素膜已被分為八個(gè)相同的通道1。該通道是通過在多孔材料例如硝酸纖維素膜上打印圖形，并在硝酸纖維素膜的處理過的斥水性區(qū)帶2上用壓印裝置轉(zhuǎn)移熱的、熔融的、約60℃的聚烯烴來制備的。每個(gè)通道都含有特異結(jié)合劑3。位于測試裝置中間的標(biāo)記點(diǎn)4含有針對(duì)待測分析物的第二種標(biāo)記試劑。樣品施加位點(diǎn)5同時(shí)作為測試裝置的標(biāo)記點(diǎn)4起作用。根據(jù)圖1的測試裝置的特征在于每個(gè)通道中都可以含有不同的特異結(jié)合劑(例如變應(yīng)原)，并且對(duì)每種結(jié)合劑都相同的微粒標(biāo)記(例如抗人IgE)位于通道的中間。
圖1a示出了一種測試裝置，其中硝酸纖維素膜已被分為八個(gè)相同的通道1。該通道是通過在多孔材料例如硝酸纖維素膜上通過激光蝕刻圖形來制備的，使得處理過的區(qū)域2留在通道之間，在激光處理過程中，已經(jīng)在所述處理過的區(qū)域上加入了與測試和制造商有關(guān)的標(biāo)記。每個(gè)通道都含有特異結(jié)合劑3。位于測試裝置中間的標(biāo)記點(diǎn)4含有針對(duì)待測分析物的第二種標(biāo)記試劑。樣品施加位點(diǎn)5同時(shí)作為測試裝置的標(biāo)記點(diǎn)4起作用。根據(jù)圖1的測試裝置的特征在于每個(gè)通道中都可以含有不同的特異結(jié)合劑(例如變應(yīng)原)，并且對(duì)每種結(jié)合劑都相同的微粒標(biāo)記(例如抗人IgE)位于通道的中間。
圖2示出了一種測試裝置，其中通道1之一包含分支的通道1a和1b，其在結(jié)合劑區(qū)帶3上含有特異結(jié)合劑。其它的通道1包含兩個(gè)結(jié)合劑區(qū)帶3，其中另一個(gè)可以是對(duì)照區(qū)帶。所有的通道1含有單獨(dú)的標(biāo)記點(diǎn)4。該裝置的中心包含單獨(dú)的樣品施加位點(diǎn)5。
圖3示出了一種測試裝置，其中四個(gè)相同或不同的通道1包含分支的通道1a和1b，其在結(jié)合劑區(qū)帶3上含有特異結(jié)合劑，并且在通道分支點(diǎn)的下游含有四個(gè)單獨(dú)的微粒標(biāo)記點(diǎn)4，該微粒標(biāo)記點(diǎn)4已用特異結(jié)合劑包被。該裝置包含單獨(dú)的樣品施加位點(diǎn)5。
圖4示出了一種測試裝置，其具有四個(gè)相同或不同的通道1，所述通道1分支為通道1a和1b，其相應(yīng)在結(jié)合劑區(qū)帶3上含有特異結(jié)合劑，并且在通道分支點(diǎn)的下游含有四個(gè)單獨(dú)的微粒標(biāo)記點(diǎn)4，該微粒標(biāo)記點(diǎn)4已用特異結(jié)合劑包被。該裝置包含單獨(dú)的樣品施加位點(diǎn)5。
圖5示出了一種測試裝置，其中樣品施加位點(diǎn)位于該測試裝置或長條的一個(gè)末端。該裝置包含三個(gè)通道1，在每一個(gè)通道1中具有兩個(gè)結(jié)合劑區(qū)帶3。標(biāo)記點(diǎn)4與樣品施加位點(diǎn)5相同。
圖6示出了一種測試裝置，其中四個(gè)不同的通道1進(jìn)一步分支為三個(gè)通道1a、1b和1c，在所述通道1的12個(gè)單獨(dú)的結(jié)合劑區(qū)帶3中，含有最多12種不同的結(jié)合劑。而且，該裝置包含四個(gè)單獨(dú)的標(biāo)記點(diǎn)4。該測試裝置包含單獨(dú)的樣品施加位點(diǎn)5。
圖7示出了一種測試裝置，包含八個(gè)相同的通道1以及它們之間的處理過的區(qū)域2。每一個(gè)通道1中含有三種特異結(jié)合劑，任選針對(duì)不同的分析物，位于三個(gè)單獨(dú)的結(jié)合劑區(qū)帶3中。位于測試裝置中間的標(biāo)記點(diǎn)4含有針對(duì)待測分析物的另一種標(biāo)記試劑。
圖8示出了包含八個(gè)通道1的測試裝置，每個(gè)通道1分支為兩個(gè)通道1a和1b，并含有結(jié)合劑區(qū)帶3。該裝置包含組合的標(biāo)記和樣品施加位點(diǎn)4、5。
圖9示出了包含五個(gè)通道1的測試裝置，每個(gè)通道包含四個(gè)結(jié)合劑區(qū)帶3。該裝置包含四個(gè)單獨(dú)的標(biāo)記點(diǎn)4和樣品施加位點(diǎn)5。
圖10示出了用于檢測病毒抗原的測試裝置，其中樣品施加位點(diǎn)5位于該測試裝置或長條的一個(gè)末端。該裝置包含三個(gè)通道1，每一個(gè)通道1中含有結(jié)合劑區(qū)帶和分離的標(biāo)記點(diǎn)4。該裝置標(biāo)記有關(guān)于制造商和測試的信息。
圖11示出了用于心肌梗塞檢測的測試裝置，其中樣品施加位點(diǎn)5位于該測試裝置或長條的一個(gè)末端。該裝置包含三個(gè)通道1，每一個(gè)通道1中含有結(jié)合劑區(qū)帶3和分離的標(biāo)記點(diǎn)4。該裝置標(biāo)記有關(guān)于制造商和測試的信息。
圖12示出了三種測試裝置，其中樣品施加位點(diǎn)5位于該測試裝置的一個(gè)末端。該裝置包含標(biāo)記點(diǎn)4和結(jié)合劑區(qū)帶3，其中另一個(gè)結(jié)合劑區(qū)帶是對(duì)照點(diǎn)。
上述測試裝置的形式和尺寸只能被視為本發(fā)明的方法可以制造的測試裝置的例子。
測試裝置用于進(jìn)行同時(shí)或平行檢測本發(fā)明基于多孔材料例如硝酸纖維素中的流體流動(dòng)，由于擴(kuò)散和毛細(xì)作用，所述的流體流動(dòng)實(shí)際上在各個(gè)方向以相同的速度發(fā)生，這一點(diǎn)是公知的。所述輻射狀或側(cè)向流動(dòng)使得樣品能夠移動(dòng)到多個(gè)通道中，只要多孔材料的通道化已經(jīng)以可靠的方式進(jìn)行，其中該樣品中含有可分析的分析物和測試試劑，所述通道同時(shí)進(jìn)行不同的測試。施加到測試裝置中的樣品與加入到樣品中的標(biāo)記反應(yīng)或與施加到該裝置中的一種或多種標(biāo)記反應(yīng)，該復(fù)合物隨后與固定的結(jié)合劑反應(yīng)，所述結(jié)合劑進(jìn)一步放置在測試裝置的不同的通道內(nèi)。免疫試劑也可以被固定，而不干擾其功能性。將樣品施加到測試裝置中是通過將少量樣品或其稀釋液施加到樣品施加位點(diǎn)5上來進(jìn)行的，樣品從樣品施加位點(diǎn)5向標(biāo)記點(diǎn)4移動(dòng)，并沿著通道進(jìn)一步進(jìn)入測試區(qū)帶3，標(biāo)記的特異結(jié)合劑、樣品中的分析物以及其它與固體載體結(jié)合的特異結(jié)合劑之間的反應(yīng)發(fā)生在此處。如果標(biāo)記是有顏色的微粒的話，該反應(yīng)能夠由裸眼看到；或者，該反應(yīng)可以作為發(fā)光的點(diǎn)、斑點(diǎn)、線或其它形狀在UV-光下由裸眼讀出；或者該反應(yīng)可以通過合適的裝置，光度計(jì)、熒光計(jì)或測量磁場變化的裝置讀出和解釋。
在另一個(gè)實(shí)施方式中，標(biāo)記點(diǎn)4位于樣品施加位點(diǎn)5中，在這種情況下，樣品中的分析物和標(biāo)記的特異結(jié)合劑在樣品沿通道流動(dòng)之前形成復(fù)合物。
在又一個(gè)實(shí)施方式中，標(biāo)記向樣品中的施加是在向測試裝置中加入樣品之前進(jìn)行的。
該測試裝置在過敏測試中是特別有用的，其中目前需要相對(duì)大量的血清以確定I gE類的過敏特異性抗體。當(dāng)應(yīng)用本發(fā)明時(shí)，通過將幾種不同的變應(yīng)原分配到測試裝置的各個(gè)通道中，可以由很少量的樣品，甚至只有10-40μl的血清、血漿或全血，用同一個(gè)測試裝置同時(shí)檢測患者對(duì)多至24種或更多種不同變應(yīng)原的敏化。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，將幾種不同的標(biāo)記連接到測試裝置中。因此，一個(gè)小的樣品移動(dòng)該標(biāo)記，該標(biāo)記任選是彼此不同的，并置于不同的通道中。這樣的測試裝置很適合于抗不同致病劑的免疫球蛋白特異性抗體檢測。
應(yīng)用測試的實(shí)施例下面的實(shí)施方式應(yīng)當(dāng)被看作是實(shí)例，應(yīng)該理解本發(fā)明的其它可能的應(yīng)用對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。
實(shí)施例1通過激光形成通道網(wǎng)絡(luò)圖1a中所述的圖形是通過Domino DGM-1“High Resolution LaserMarker”裝置，將不希望流體在其中流動(dòng)的區(qū)域中的硝酸纖維素蝕刻掉而在多孔的硝酸纖維素載體上制備的。在測試裝置上形成了包含八個(gè)通道1的網(wǎng)絡(luò)，所述通道1之間由處理過的區(qū)域2隔開。為了避免裝置被搞混的危險(xiǎn)，通過不蝕刻硝酸纖維素而形成關(guān)于產(chǎn)品和制造商的標(biāo)記。
預(yù)編程到計(jì)算機(jī)程序中的預(yù)期圖形是通過采用10-2500mm/秒的700mm/秒的標(biāo)記速度、最大輸出功率20W的20％的激光(85-132V/170-260V，I相輸入和20W輸出)和250/1000的分辨率進(jìn)行蝕刻的。
這樣生產(chǎn)的具有通道網(wǎng)絡(luò)的測試裝置模塊(matrix)用于根據(jù)下面的實(shí)施例同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測。
實(shí)施例2用于過敏檢測的測試裝置特異性可分析變應(yīng)原作為溶液(濃度1-5mg/ml)加入到按照實(shí)施例1生產(chǎn)的測試裝置的網(wǎng)絡(luò)的通道1中，從而當(dāng)它們連接到樣品施加位點(diǎn)的硝酸纖維素時(shí)，形成了不可溶區(qū)帶3。各個(gè)通道中施加不同的變應(yīng)原(由樹、草或雜草的花粉制得的提取物，由霉菌的孢子、螨蟲、室內(nèi)灰塵、動(dòng)物皮膚的表皮、昆蟲、乳膠、寄生蟲、藥物或食物制得的提取物)。在這之后，封閉通道1的反應(yīng)性硝酸纖維素，即使之變?yōu)槎栊?，其中采用含有牛血清白蛋?BSA)(0.1-5.0％)、己烷磺酸和海藻糖(1.0-3.0％)。將溶液(10-100μl)施加到測試裝置的中間，此后，由于擴(kuò)散和毛細(xì)作用，其移動(dòng)到各個(gè)通道中，并與硝酸纖維素的自由反應(yīng)點(diǎn)結(jié)合(即封閉)。
此后，于室溫干燥測試裝置，直到其相對(duì)濕度低于8％。
干燥后，向測試裝置中間手工施加1.0-10.0μl的水溶液，其中含有用抗-IgE包被的有顏色的乳膠顆粒(0.2-1.0％)，該混合物中還含有0.1-1.0％的BSA，0.01-0.05％吐溫20和0.5-1.5％海藻糖。將顆粒溶膠干燥到測試裝置的中間。
當(dāng)使用測試時(shí)，來自患有過敏的人的10-50μl血清或其稀釋液被施加到測試裝置中間的樣品施加位點(diǎn)5上。樣品溶解了中間的標(biāo)記。標(biāo)記的抗-IgE抗體與過敏特異性IgE分子反應(yīng)，并由于毛細(xì)作用擴(kuò)散到測試通道中。
如果可分析樣品中含有針對(duì)測試裝置區(qū)帶3中的一種或多種變應(yīng)原的特異性IgE抗體，那么將在含有待測變應(yīng)原抗體的反應(yīng)通道中形成有顏色的區(qū)帶。
實(shí)施例3用于過敏測試的測試裝置采用合適的壓印機(jī)，將圖1所示的形成的圖形打印到多孔的硝酸纖維素載體上，其中形成了通道網(wǎng)絡(luò)，通過將有色的約60℃的聚烯烴在多孔載體上轉(zhuǎn)移，從而它封閉了預(yù)期區(qū)域中的載體的孔，并且在測試裝置上形成了網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)含有被處理過的區(qū)域2隔開的八個(gè)通道1。
將待測的特異性變應(yīng)原(濃度1-5mg/ml)加入到該網(wǎng)絡(luò)的通道中，從而它們形成了連接到樣品施加位點(diǎn)的硝酸纖維素的不可溶區(qū)帶3。各個(gè)通道中施加不同的變應(yīng)原(由樹、草或雜草的花粉制得的提取物，由霉菌的孢子、螨蟲、室內(nèi)灰塵、動(dòng)物皮膚的表皮、昆蟲、乳膠、寄生蟲、藥物或食物制得的提取物)。在這之后，封閉通道1的反應(yīng)性硝酸纖維素，即使之變?yōu)槎栊裕渲胁捎煤信Ｑ灏椎鞍?BSA)(0.1-5.0％)、己烷磺酸和海藻糖(1.0-3.0％)。將溶液(10-100μl)施加到測試裝置的中間，此后，由于擴(kuò)散和毛細(xì)作用，其移動(dòng)到各個(gè)通道中，并與硝酸纖維素的自由反應(yīng)點(diǎn)結(jié)合(即封閉)。
此后，于室溫干燥測試裝置，直到其相對(duì)濕度低于8％。干燥后，向測試裝置中間施加1.0-10.0μl的水溶液，其中含有用抗-IgE包被的有顏色的乳膠顆粒(0.2-1.0％)，該混合物中還含有0.1-1.0％的BSA，0.01-0.05％吐溫20和0.5-1.5％海藻糖。將顆粒溶膠干燥到測試裝置的中間。
當(dāng)使用測試時(shí)，來自患有過敏的人的10-50μl血清或其稀釋液被施加到測試裝置中間的樣品施加位點(diǎn)上。樣品溶解了放置在中間的標(biāo)記。樣品的抗-IgE抗體與過敏特異性IgE分子反應(yīng)，并由于毛細(xì)作用擴(kuò)散到測試通道中。
如果可分析樣品中含有針對(duì)測試裝置區(qū)帶3中的一種或多種變應(yīng)原的特異性IgE抗體，那么將在含有待測變應(yīng)原抗體的反應(yīng)通道中形成有顏色的區(qū)帶。
實(shí)施例4用于性病測試和血液篩選的測試裝置實(shí)施例4描述了本發(fā)明在性病測試中的應(yīng)用，其中，從病人的樣品中抗體和病毒抗原及細(xì)菌抗原被同時(shí)測定。
圖2中所示的測試裝置中已按實(shí)施例1所述制備了多通道網(wǎng)絡(luò)，該測試裝置被進(jìn)一步制備，從而使得分支為兩個(gè)部分的第一通道1形成用于HIV1和HIV2抗體測試的測試通道。待測病毒的典型多肽或重組抗原被以線(Line)的形式置于這些通道中(0.1-0.5μl)，濃度為0.5-5.0mg/ml。有色標(biāo)記點(diǎn)4置于通道1中，是通過用識(shí)別HIV1和HIV2病毒的第三種多肽或重組抗原包被例如金顆粒產(chǎn)生的。
同一測試裝置的第二通道1用于檢測HIV病毒抗原，通過將例如制備的抗HIV病毒p24-抗原的單克隆抗體的線或斑點(diǎn)(0.5-5.0mg/ml)置于該通道中，并將所謂的對(duì)照試劑區(qū)帶置于同一未分支通道1中，其中，所述對(duì)照試劑區(qū)帶包含針對(duì)同一待測標(biāo)記抗體的單克隆抗體。
第三通道1用于檢測白血病病毒(HTLV-1/2)的抗體，通過以上述方法生產(chǎn)該病毒的典型重組抗原的測試線3和對(duì)照線3，并將所需的標(biāo)記置于同一通道的標(biāo)記點(diǎn)4中，所述標(biāo)記是通過用HTLV1/2病毒的另一種典型的重組抗原包被金顆粒生產(chǎn)的。
以同樣的方式，將由適于檢測梅毒螺旋體(Treponema pallidum)細(xì)菌抗體的特異重組抗原制備的試劑區(qū)帶3置于第四通道1中。
在第五通道1中，放置了檢測乙肝病毒表面抗原的測試系統(tǒng)，采用了兩種生產(chǎn)的針對(duì)表面抗原的特異抗體，一種在測試區(qū)帶3中，另一種在標(biāo)記點(diǎn)4中。
檢測丙肝病毒所需的試劑被置于第六通道1中。HCV的典型重組抗原置于測試線3中，標(biāo)記點(diǎn)4是通過用抗人IgG包被金顆粒制備的。
用含有白蛋白(BSA)(0.1-5.0％)、TRITON-X-100、BRI和蔗糖的所謂封閉溶液處理測試裝置的所有通道1，通過將足量的該溶液加入到測試裝置的樣品施加位點(diǎn)5來進(jìn)行，該溶液從樣品施加位點(diǎn)5擴(kuò)散到各個(gè)通道中，并填充硝酸纖維素的反應(yīng)點(diǎn)。在真空柜中干燥測試裝置以加速干燥。
此后，通過使用合適的自動(dòng)分配裝置，將每種測試的特征性的所需上述標(biāo)記加入到測試裝置的預(yù)定標(biāo)記點(diǎn)4。按上述實(shí)施例所述進(jìn)行干燥。
當(dāng)分析病人樣品時(shí)，將10-50μl的血清、血漿或全血施加到測試裝置的中間，結(jié)果可以在1-10分鐘的反應(yīng)時(shí)間后讀出。當(dāng)結(jié)果為陽性時(shí)，測試區(qū)帶出現(xiàn)有顏色的線或斑點(diǎn)，并且在那些通道或分支通道的對(duì)照區(qū)帶(如果有的話)中出現(xiàn)第二種有顏色的區(qū)帶。
實(shí)施例5用于性病測試和血液篩選的測試裝置實(shí)施例5描述了本發(fā)明在性病測試中的應(yīng)用，其中，從病人的樣品中抗體和病毒抗原及細(xì)菌抗原被同時(shí)測定。
為了檢測HIV病毒抗原，圖3中所示的測試裝置中已按實(shí)施例1所述進(jìn)行了通道化，該測試裝置是通過采用如下手段制備的將生產(chǎn)的抗HI V病毒p24抗原的多克隆抗體(0.5-5.0mg/ml)制備的斑點(diǎn)置于第一個(gè)通道1中，并將所謂的對(duì)照試劑區(qū)帶置于同一未分支通道中，其中，所述對(duì)照試劑區(qū)帶包含針對(duì)待測標(biāo)記抗體的多克隆抗體。
以同樣的方式，將由適于檢測梅毒螺旋體細(xì)菌抗體的特異重組抗原制備的試劑區(qū)帶3置于第二通道1中。
在第三通道1中，放置了檢測乙肝病毒表面抗原的測試系統(tǒng)，采用了兩種生產(chǎn)的針對(duì)表面抗原的特異抗體，一種在測試區(qū)帶3中，另一種在標(biāo)記點(diǎn)4中。
檢測丙肝病毒所需的試劑被置于第四通道1中。HCV的典型重組抗原置于測試線3中，標(biāo)記點(diǎn)4是通過用抗人IgG包被金顆粒制備的。用含有酪蛋白(0.1-5.0％)、己烷磺酸和海藻糖(1.0-3.0％)的所謂封閉溶液處理測試裝置的所有通道1，通過將足量的該溶液加入到測試裝置的樣品施加位點(diǎn)5來進(jìn)行，該溶液從樣品施加位點(diǎn)5擴(kuò)散到各個(gè)通道中，并填充硝酸纖維素的反應(yīng)區(qū)帶。在真空柜中干燥測試裝置以加速干燥。
此后，將每種測試的特征性的上述所需標(biāo)記加入到預(yù)定標(biāo)記點(diǎn)4。按上述實(shí)施例所述進(jìn)行干燥。
實(shí)施例6用于心肌梗塞測試的測試裝置很好描述了本發(fā)明應(yīng)用的實(shí)例是用于由病人的全血、血漿或血清樣品檢測心肌梗塞的測試裝置。
生產(chǎn)了根據(jù)圖4的測試裝置用于四種不同的分析物。如實(shí)施例1所述生產(chǎn)的測試裝置包含四個(gè)相同的通道，每個(gè)通道進(jìn)一步分支為兩個(gè)單獨(dú)的通道。這樣測試裝置就可以用于由一份樣品同時(shí)測定病人樣品中肌鈣蛋白I、肌紅蛋白、肌酸激酶MB同功酶(CKMB)和C反應(yīng)蛋白(CRP)的存在。
至于測試裝置的通道1a和1b，將0.1-0.5μl濃度為1.0-5.0mg/ml的肌鈣蛋白I的抗體施加到通道1a中，將0.1-0.5μl濃度為1.0-5.0mg/ml的抗小鼠抗體施加到通道1b中。通道1a形成所謂的測試通道，通道1b形成所謂的內(nèi)部功能性對(duì)照通道。
另一個(gè)反應(yīng)對(duì)是由有顏色的顆粒形成的，該顆粒由生產(chǎn)的針對(duì)肌鈣蛋白I的抗體包被，并按實(shí)施例1所述施加到通道1中的預(yù)定標(biāo)記點(diǎn)4。
除了肌鈣蛋白I之外，針對(duì)肌紅蛋白、CKMB和C反應(yīng)蛋白(CRP)的特異測試也以上述方式制備于測試裝置中。
用含有聚乙二醇(PEG)、TRITON-X-100和海藻糖(1.0-3.0％)的所謂封閉溶液處理測試裝置的所有通道1，通過將足量的該溶液加入到測試裝置的樣品施加位點(diǎn)5來進(jìn)行，該溶液從樣品施加位點(diǎn)5擴(kuò)散到各個(gè)通道中，并填充硝酸纖維素的反應(yīng)區(qū)帶。在真空柜中干燥測試裝置以加速干燥。
此后，將每種測試的特征性標(biāo)記施加到測試裝置的預(yù)定標(biāo)記點(diǎn)4。按上述實(shí)施例所述進(jìn)行干燥。
將樣品施加到測試裝置中間，樣品從此處輻射狀擴(kuò)散到各個(gè)相同的通道中，如果病人樣品中含有對(duì)應(yīng)于心肌梗塞標(biāo)記物的分析物，那么將啟動(dòng)測試和對(duì)照反應(yīng)。分析由血清、血漿或全血樣品進(jìn)行，當(dāng)采用全血時(shí)，合適的過濾系統(tǒng)從全血樣品中除去紅細(xì)胞和白細(xì)胞。
實(shí)施例7用于心肌梗塞測試的測試裝置如實(shí)施例1所述生產(chǎn)根據(jù)圖11的測試裝置，其中含有關(guān)于肌鈣蛋白I和肌紅蛋白特異性測試的信息的標(biāo)記。
如實(shí)施例6所述產(chǎn)生肌鈣蛋白I和肌紅蛋白的特異性測試。如實(shí)施例6所述，也進(jìn)行通道的封閉和標(biāo)記的加入。通道之一作為對(duì)照通道，以確保測試被正確地儲(chǔ)存并且試劑是有功能的。
實(shí)施例8用于呼吸系統(tǒng)感染測試的測試裝置下面的實(shí)例描述了本發(fā)明在呼吸系統(tǒng)感染中的應(yīng)用，其中期望由病人的血清、血漿或全血樣品測定針對(duì)所尋找的細(xì)菌或病毒抗原的類別特異性抗體。
如實(shí)施例1所述生產(chǎn)根據(jù)圖6的測試裝置。由每種可分析的細(xì)菌或病毒制備的抗原置于測試通道1中的點(diǎn)3，濃度為0.1-0.5mg/ml，每種試劑的總體積為0.1-0.5μl。通道1的非反應(yīng)區(qū)帶被封閉，并且按實(shí)施例1所述干燥測試裝置。分別在每個(gè)測試通道的分支點(diǎn)的標(biāo)記點(diǎn)4中放置由抗-IgG、抗-IgM或抗-IgA抗體制成的偶聯(lián)物。按上文所述進(jìn)行干燥。
將病人的樣品(血清、血漿或全血)施加到測試裝置中間的樣品施加位點(diǎn)5，由于毛細(xì)作用，樣品從此處擴(kuò)散并首先轉(zhuǎn)移到偶聯(lián)物(Conjugate)點(diǎn)，并在待測的標(biāo)記點(diǎn)4中與微粒標(biāo)記反應(yīng)，隨后進(jìn)一步向測試區(qū)帶3移動(dòng)，如果樣品中含有針對(duì)可分析的細(xì)菌或病毒的待測亞類特異性抗體的話，在測試區(qū)帶3處將發(fā)生反應(yīng)。以與上述實(shí)施例類似的方式檢測出陽性結(jié)果。
實(shí)施例9用于癌癥診斷的測試裝置實(shí)施例9描述了本發(fā)明在癌癥診斷測試裝置中的應(yīng)用。如實(shí)施例1所述生產(chǎn)根據(jù)圖9的測試裝置。該測試裝置包含五個(gè)實(shí)際上相同的通道。將0.1-0.5μl生產(chǎn)的針對(duì)癌癥標(biāo)記物的單克隆抗體CA125(癌癥抗原125)、PSA(前列腺特異性抗原)、pKAc(蛋白激酶A催化亞基)、CEA(癌胚抗原)、AFP(甲胎蛋白)加入到各個(gè)通道(從左至右)的各個(gè)測試點(diǎn)，濃度為0.1-5.0mg/ml。在施加抗體后，進(jìn)行充分的干燥，然后利用聚乙烯醇(PVA)、己烷磺酸和蔗糖進(jìn)行封閉。然后對(duì)測試裝置進(jìn)行干燥，此后即可用于標(biāo)記的加入。
向每個(gè)測試通道起始處的標(biāo)記區(qū)帶4中分別加入針對(duì)相應(yīng)癌癥標(biāo)記物制備的特異性標(biāo)記，在該特異性標(biāo)記中，按上述實(shí)施例所述，用生產(chǎn)的針對(duì)待測標(biāo)記物的第二抗體包被金顆粒。在加入后，干燥測試裝置，并將其包裝在保護(hù)性塑料盒中。
將10μl的病人樣品(血清、血漿、全血等)施加到樣品施加位點(diǎn)5，樣品從此處移動(dòng)到對(duì)應(yīng)于各個(gè)癌癥標(biāo)記物的通道1中，從標(biāo)記點(diǎn)4溶解標(biāo)記，并進(jìn)一步向測試區(qū)帶3。如果樣品中含有可分析的癌癥標(biāo)記物的話，在待測通道中將出現(xiàn)可見的測試結(jié)果。
實(shí)施例10用于病毒抗原檢測的測試裝置實(shí)施例10描述了本發(fā)明在用于病毒抗原檢測的測試裝置中的應(yīng)用。
為了檢測Rota病毒，通過向第一通道1中的測試區(qū)帶3中置入斑點(diǎn)，來生產(chǎn)圖10所示的測試裝置，該測試裝置已按實(shí)施例1所述進(jìn)行了通道化，所述斑點(diǎn)由生產(chǎn)的針對(duì)病毒抗原的特異性抗體制成，該抗體是針對(duì)標(biāo)記點(diǎn)4所用的標(biāo)記抗體的抗體。
同一測試裝置的第三通道1用于檢測腺病毒抗原，通過向該通道的測試區(qū)帶3中放入線或斑點(diǎn)來進(jìn)行，該線或斑點(diǎn)包含針對(duì)放置在標(biāo)記區(qū)帶4中的待測標(biāo)記抗體的特異性抗體。
該測試裝置的第二通道用作對(duì)照通道，以測試該測試裝置的功能性。向標(biāo)記點(diǎn)中加入非特異性偶聯(lián)物，并向測試區(qū)帶中加入抗小鼠抗體。
按實(shí)施例1所述，封閉通道1的反應(yīng)點(diǎn)并干燥測試裝置。向各個(gè)測試通道的分支點(diǎn)的標(biāo)記點(diǎn)4中加入每種檢測的特征性標(biāo)記。按上文所述進(jìn)行干燥。
將病人的樣品(稀釋的糞便樣品)施加到測試裝置的樣品施加位點(diǎn)5，由于毛細(xì)作用，樣品從此處擴(kuò)散并首先移動(dòng)到偶聯(lián)物點(diǎn)中，并在待測的標(biāo)記點(diǎn)4中與微粒標(biāo)記反應(yīng)，隨后繼續(xù)向測試區(qū)帶3移動(dòng)，如果樣品中含有可分析的病毒抗原的話，在測試區(qū)帶3處將發(fā)生反應(yīng)。以與上述實(shí)施例類似的方式檢測出陽性結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種基于免疫擴(kuò)散的測試裝置，其包含多孔載體材料，其中以區(qū)帶或斑點(diǎn)的形式施加了特異結(jié)合試劑(免疫試劑)；可被樣品移動(dòng)的可檢測的標(biāo)記，其與第二種特異結(jié)合試劑相偶聯(lián)并且被單獨(dú)或預(yù)先施加到所述多孔載體中；以及任選提供有過濾器的樣品施加位點(diǎn)，其特征在于，它包含所述多孔載體材料中的通道網(wǎng)絡(luò)，該通道網(wǎng)絡(luò)是通過用激光處理蝕刻多孔載體材料而形成的，該通道網(wǎng)絡(luò)包含兩個(gè)或更多個(gè)通道(1)，由處理過的區(qū)域(2)隔開，固定于其中的一種或多種特異結(jié)合試劑(3)，置于所述通道中鄰近樣品施加位點(diǎn)(5)或位于樣品施加位點(diǎn)(5)本身里的任選的標(biāo)記點(diǎn)(4)，樣品施加位點(diǎn)(5)放置的方式使得所述樣品能夠均勻分布到各個(gè)通道中。
2.權(quán)利要求1的測試裝置，其特征在于，它能夠基于同時(shí)或平行進(jìn)行的對(duì)一種或多種產(chǎn)生綜合征的試劑或分析物的識(shí)別進(jìn)行診斷。
3.權(quán)利要求1的測試裝置，其特征在于，它用于同時(shí)識(shí)別多于一種產(chǎn)生過敏的試劑，心肌梗塞標(biāo)記物，產(chǎn)生性病的試劑，血液篩選分析物，產(chǎn)生呼吸系統(tǒng)感染的試劑，其它產(chǎn)生感染性疾病的試劑和/或癌癥標(biāo)記物。
4.權(quán)利要求1的測試裝置，其特征在于，所述多孔載體是硝酸纖維素。
5.權(quán)利要求1的測試裝置，其特征在于，所述特異結(jié)合試劑是抗體、抗體片段、重組抗體、重組抗體片段、抗原、凝集素、受體和/或配體。
6.權(quán)利要求1的測試裝置，其特征在于，所述被標(biāo)記的試劑是乳膠、金、金屬或染色劑微?；驘晒馕镔|(zhì)。
7.一種生產(chǎn)權(quán)利要求1的測試裝置的方法，其中所述特異識(shí)別免疫試劑被固定在多孔材料中，用使該多孔材料變?yōu)槎栊缘奈镔|(zhì)處理該多孔材料，并且其中樣品施加位點(diǎn)任選提供有過濾器和可檢測的標(biāo)記，該可檢測的標(biāo)記上結(jié)合有特異結(jié)合試劑，其特征在于，(a)通過用激光蝕刻多孔材料在所述多孔材料上形成具有預(yù)期形狀和尺寸的通道網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)包含兩個(gè)或更多個(gè)通道(1)以及處理過的區(qū)域(2)；(b)一種或多種識(shí)別特異結(jié)合試劑作為區(qū)帶或斑點(diǎn)(3)被固定在各個(gè)通道(1)中。
8.權(quán)利要求7的方法，其特征在于，使所述多孔材料變?yōu)槎栊缘奈镔|(zhì)是混合物，其包含天然或合成聚合物，例如白蛋白和酪蛋白或PEG(聚乙二醇)和PVA(聚乙烯醇)，非離子去垢劑例如己烷磺酸和TRITON-X-100、BRIJ和防腐劑，例如糖，如蔗糖和海藻糖，或它們的衍生物。
9.權(quán)利要求7的方法，其特征在于，在施加所述試劑后，所述測試裝置被干燥到相對(duì)濕度不超過8％并且被密封包裝。
10.權(quán)利要求1的測試裝置在同時(shí)或平行進(jìn)行用于診斷所尋找的疾病和/或綜合征的多個(gè)檢測中的用途，其特征在于，所述樣品被施加到該測試裝置的施加位點(diǎn)(5)，其含有可被可分析樣品移動(dòng)的標(biāo)記以及與標(biāo)記偶聯(lián)的第二種特異結(jié)合試劑，所述樣品和試劑從該位點(diǎn)均勻移動(dòng)到該通過激光處理形成的通道網(wǎng)絡(luò)的通道中，在此處它們與所述特異結(jié)合試劑在其固定點(diǎn)(3)處反應(yīng)或不反應(yīng)，陽性或陰性結(jié)果可從此處直接讀出。
11.權(quán)利要求1的測試裝置在同時(shí)或平行進(jìn)行用于識(shí)別所尋找的疾病和/或綜合征的多個(gè)檢測中的用途，其特征在于，所述樣品被施加到該測試裝置的施加位點(diǎn)(5)，所述樣品從該位點(diǎn)移動(dòng)到通道中，在此處其與可被所述樣品移動(dòng)的標(biāo)記和與標(biāo)記結(jié)合的第二種特異結(jié)合試劑混合并發(fā)生反應(yīng)，此后，所述樣品和試劑均勻移動(dòng)到該通過激光處理形成的通道網(wǎng)絡(luò)的通道中，在此處它們與所述特異結(jié)合試劑在其固定點(diǎn)(3)處反應(yīng)或不反應(yīng)，陽性或陰性結(jié)果可從此處直接讀出。
12.權(quán)利要求1的測試裝置在同時(shí)或平行進(jìn)行用于識(shí)別所尋找的疾病和/或綜合征的多個(gè)檢測中的用途，其特征在于，所述樣品與單獨(dú)的標(biāo)記和與標(biāo)記偶聯(lián)的第二種特異結(jié)合試劑混合，并且該混合物被施加到該測試裝置的施加位點(diǎn)(5)，所述樣品和試劑從該位點(diǎn)均勻移動(dòng)到該通過激光處理形成的通道網(wǎng)絡(luò)的通道中，在此處它們與所述特異結(jié)合試劑在其固定點(diǎn)(3)處反應(yīng)或不反應(yīng)，陽性或陰性結(jié)果可從此處直接讀出。
全文摘要
本發(fā)明的目的是基于免疫擴(kuò)散和免疫層析的多通道檢測裝置，其使得同時(shí)或平行檢測多個(gè)分析物成為可能。在該檢測裝置中，有可能對(duì)識(shí)別變應(yīng)原、心肌梗死標(biāo)記物、性病分析物、血液篩選分析物、呼吸道疾病產(chǎn)生劑，IgG、IgA和IgM抗體、其他感染性疾病產(chǎn)生劑的標(biāo)記以及各種癌癥標(biāo)記的不同組合進(jìn)行分組，該多通道檢測裝置包括多孔載體材料，其上通過激光蝕刻載體材料以形成含有多個(gè)通道的有形圖形已形成通道網(wǎng)絡(luò)。在通道中，已固定各種特異結(jié)合劑，其使得靶疾病和/或綜合癥的診斷成為可能。樣品施加位點(diǎn)任選地提供濾器和任選地含有標(biāo)記，所述標(biāo)記可被分析樣品和特異結(jié)合劑移動(dòng)。本發(fā)明還公開了該裝置的制備方法及其用途。
文檔編號(hào)G01N33/558GK1768267SQ200480008672
公開日2006年5月3日 申請(qǐng)日期2004年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月28日
發(fā)明者A·尼斯卡寧, H·拉伊內(nèi), M·薩拉梅基 申請(qǐng)人:安尼生物科技公司