專利名稱：中草藥核磁共振指紋圖譜鑒別方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于儀器分析方法中的核磁共振方法，具體地說是關(guān)于中草藥核磁共振指紋圖譜鑒別方法。
背景技術(shù)：
中草藥是中醫(yī)用于防治疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)，其真?zhèn)蝺?yōu)劣不僅直接決定著臨床療效乃至患者的生命安危，也嚴(yán)重影響中藥學(xué)的繼承發(fā)揚和中藥走向世界。因此只有對中藥材進(jìn)行現(xiàn)代意義下的科學(xué)的質(zhì)量控制，才能更好地保障中藥飲片和成藥的質(zhì)量，實現(xiàn)中藥質(zhì)量的安全、有效、穩(wěn)定、可控，掃除制約中藥走向世界的障礙，為中藥走向世界奠定良好的基礎(chǔ)。其中建立在中藥成分的系統(tǒng)測試、分析結(jié)果之上的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜是全面、客觀評價反映中藥內(nèi)在質(zhì)量的有效手段，同時也易被國際社會所接受。指紋圖譜技術(shù)也是在現(xiàn)有的技術(shù)條件下對中藥材、中成藥進(jìn)行嚴(yán)格質(zhì)量控制的最好解決辦法。它能從原藥材的栽培、引種、中成藥生產(chǎn)過程中生產(chǎn)工藝的規(guī)范與優(yōu)化，到產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供全方位的質(zhì)量保證。目前已被美國、歐洲、印度、日本等國家廣泛使用，并被多個國家的藥典所承認(rèn)。因此能真正反映中藥材、中成藥內(nèi)在質(zhì)量的指紋圖譜的建立是實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵。對于其他光譜如紫外、紅外、熒光、原子吸收以及色譜法如氣相色譜、高效液相色譜、色譜-光譜聯(lián)用法，也都可以進(jìn)行中藥質(zhì)量評價的研究。各種方法性能的差別導(dǎo)致其鑒別效果也各具特色。每種圖譜鑒別方法都有其局限性和相對優(yōu)勢。不同方法的難易程度、解決問題的角度、測試成本以及鑒別效果均有所差異。對于中草藥某成分的定性、定量分析而言，色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)較好。而對于單味中藥或中成藥的品種鑒定和真?zhèn)舞b別而言，特別是其特征性較差時，可靠、靈敏、簡便、價廉、重現(xiàn)性好、特征性強的鑒別方法尚未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對目前已有技術(shù)存在的上述缺點，提供了一種可靠、靈敏、簡便、價廉、重現(xiàn)性好、特征性強的中草藥核磁共振指紋圖譜鑒別方法。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的本發(fā)明包括將樣品用低分子量的極性溶劑提取，分別測試提取物的核磁共振圖譜，與相應(yīng)對照品的核磁共振圖譜進(jìn)行比較，即可獲得鑒別結(jié)果。所述低分子量的極性溶劑是指乙醇、甲醇、水、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇等。
具體操作方法如下取5-20克樣品，加50-200毫升低分子量的極性溶劑，于水浴上加熱回流30-120分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發(fā)，殘余物稱重。取1-50毫克殘余物進(jìn)行核磁共振分析，與相應(yīng)對照品的核磁共振圖譜進(jìn)行比較。
本發(fā)明的適用對象包括可粉碎成粉末的固體樣品，如中藥材或以生藥為主的中成藥的片劑、散劑、膠囊、水丸劑、錠劑等；粘性固體樣品需要將樣品切碎，如中成藥的蜜丸劑等；液體樣品則可以直接選擇合適溶劑提取。最常用的溶劑是甲醇、乙醇和水。


圖1不同品種金銀花的核磁共振指紋圖譜圖2不同品質(zhì)金銀花的核磁共振指紋圖譜圖3北沙參的核磁共振指紋圖譜圖4不同廠家六味地黃丸的核磁共振指紋圖譜圖中1-蒙花(大毛花)的核磁共振氫譜2-雜交一代的核磁共振氫譜3-金銀花的標(biāo)準(zhǔn)核磁共振氫譜4-蒙花(大毛花)的核磁共振碳譜5-雜交一代的核磁共振碳譜6-金銀花的標(biāo)準(zhǔn)核磁共振碳譜7-金銀花的標(biāo)準(zhǔn)核磁共振氫譜8-受潮變質(zhì)蒙花(大毛花)的核磁共振氫譜9-金銀花的標(biāo)準(zhǔn)核磁共振碳譜10-受潮變質(zhì)蒙花(大毛花)的核磁共振碳譜
具體實施例方式
實施例1.對不同品種金銀花的核磁共振指紋圖譜將樣品粉碎，過40目篩，稱取樣品5克，加50ml乙醇，在水浴上回流30分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發(fā)后得到提取物。測試提取物的1HNMR(見圖1-1，2)譜和13CNMR譜(見圖2-4，5)，并將其與金銀花對照藥材的1HNMR(見圖1-3)譜和13CNMR(見圖2-6)譜比較，根據(jù)相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> 實施例2.對不同品質(zhì)金銀花的核磁共振指紋圖譜所用劣質(zhì)金銀花為保存過程中受潮變質(zhì)的金銀花，將樣品粉碎，過40目篩，稱取樣品5克，加50ml乙醇，在水浴上回流30分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發(fā)后得到提取物。測試提取物的1HNMR譜(見圖3-7)和13CNMR譜(見圖4-9)，并將其與金銀花對照藥材的1HNMR譜(見圖3-8)和13CNMR譜(見圖4-10)比較，根據(jù)相似程度判斷其優(yōu)劣。
實施例3.北沙參的核磁共振指紋圖譜將樣品粉碎，過40目篩，稱取樣品5克，加50ml甲醇，在水浴上回流30分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發(fā)后得到提取物。測試提取物的1HNMR譜和13CNMR譜，并將其與北沙參對照藥材的1HNMR譜和13CNMR譜比較，根據(jù)相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> 實施例4.不同廠家六味地黃丸的核磁共振指紋圖譜將樣品切碎，過40目篩，稱取樣品5克，加50ml甲醇，在水浴上回流30分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發(fā)后得到提取物。測試提取物的1HNMR譜和13CNMR譜，并將其與北沙參對照藥材的1HNMR譜和13CNMR譜比較，根據(jù)相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> 實施例5.對僅含水溶物的液體樣品丹參注射液的核磁共振指紋圖譜取注射液10ml，將水蒸干得到提取物。測試提取物的1HNMR譜和13CNMR譜，并將其與丹參注射液對照品的1HNMR譜和13CNMR譜比較，根據(jù)相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> 實施例6.銀杏葉的核磁共振指紋圖譜將樣品粉碎，過40目篩，稱取樣品5克，加50ml丙酮，在水浴上回流30分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發(fā)得到提取物。測試提取物的1HNMR譜和13CNMR譜，并將其與銀杏對照藥材的1HNMR譜和13CNMR譜比較，根據(jù)相似程度判斷其真?zhèn)巍?br> 本發(fā)明的優(yōu)點是基于核磁共振檢測方法的特點，核磁共振圖譜具有單一性，即氫譜和碳譜的譜峰與每一個氫和碳都有嚴(yán)格的對應(yīng)關(guān)系；全面性，即所測樣品中的任一質(zhì)子和碳原子都有其相關(guān)的譜峰；定量性，即譜圖的信號的相對強弱反映混合物中各組分的相對含量；易辨性，即通過化合物的結(jié)構(gòu)研究可歸屬指紋圖譜中的各個信號。因此在規(guī)范的分離提取程序下，植物中藥提取物的核磁共振圖譜與植物中藥品種間存在嚴(yán)格的對應(yīng)關(guān)系，可以提供反映分子結(jié)構(gòu)的一維特征信號(例如1HNMR和13CNMR)和二維特征信號(例如gHMQC，gHMBC等)，核磁共振檢測可以提供反映分子結(jié)構(gòu)特征的多維多息特征信號的優(yōu)勢，使核磁共振指紋圖譜鑒別技術(shù)能夠提供大量的特征信號從多方面，多角度來描述樣品的結(jié)構(gòu)特征，從而使中藥核磁共振指紋圖譜鑒別技術(shù)真正達(dá)到了重復(fù)性高、特征性強、信息量大、使用范圍廣、鑒別效果準(zhǔn)確的優(yōu)勢。
本發(fā)明通過測定檢品的核磁共振圖譜，將其圖譜與其對照品的核磁共振圖譜或與已建立的中藥材和中成藥的標(biāo)準(zhǔn)核磁共振波譜庫進(jìn)行比較，同時也可以利用計算機自動檢索波譜庫進(jìn)行輔助判斷，確定檢品的真?zhèn)蝺?yōu)劣。
使用本發(fā)明可以使天然植物或以天然植物原料為主的中藥材、中成藥以及其各種提取物和添加劑獲得其特征的核磁共振指紋圖譜。該圖譜可用于中藥樣品的品種鑒定和真?zhèn)舞b別以及對產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性考察。不同藥材核磁共振譜圖是其所有成分磁共振譜圖的疊加，是中藥材整體化學(xué)特征的反映。每種藥材核磁共振譜圖的輪廓是相對固定的，因此可以看作是一個穩(wěn)定的譜圖，從這個意義上來說，核磁共振指紋圖譜鑒別技術(shù)就成為類似藥材外形鑒別的特殊圖形的宏觀形態(tài)鑒別方法，但它獨立于傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)特征之外，而其準(zhǔn)確性則能有效地減少人的主觀判斷造成的錯誤，從而使其圖譜特征的差異較其形態(tài)特征差異更具直觀性。同時核磁共振圖譜上不同位置的特征峰則反映了中藥含有的特征化學(xué)成分的存在和結(jié)構(gòu)特征，從微觀上反映中藥的化學(xué)特征。
本發(fā)明的方法可以對中藥生產(chǎn)、貯存、加工以及最終產(chǎn)品進(jìn)行全程的質(zhì)量控制，從而保證產(chǎn)品的質(zhì)量，提高產(chǎn)品的信譽。
權(quán)利要求
1.一種中草藥核磁共振指紋圖譜鑒別方法，其特征在于取5-20克樣品，加50-200毫升低分子量的極性溶劑，于水浴上加熱回流30-120分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發(fā)，殘余物稱重。取1-15毫克殘余物進(jìn)行核磁共振分析，與相應(yīng)對照品的核磁共振圖譜進(jìn)行比較。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中草藥核磁共振指紋圖譜鑒別方法，其特征在于所述的低分子量的極性溶劑是甲醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中草藥核磁共振指紋圖譜鑒別方法，其特征在于所述的低分子量的極性溶劑是乙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中草藥核磁共振指紋圖譜鑒別方法，其特征在于所述的低分子量的極性溶劑是水。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中草藥核磁共振指紋圖譜鑒別方法，其特征在于取5－20克樣品，加50－200毫升低分子量的極性溶劑，于水浴上加熱回流30－120分鐘，濾取提取液，將溶劑揮發(fā)，殘余物稱重。取1－15毫克殘余物進(jìn)行核磁共振分析，與相應(yīng)對照品的核磁共振圖譜進(jìn)行比較。所述低分子量的極性溶劑是指乙醇、甲醇、水、氯仿、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇等。本發(fā)明的優(yōu)點是基于核磁共振圖譜具有單一性、全面性、易辨性，能夠提供大量的特征信號從多方面，多角度來描述樣品的結(jié)構(gòu)特征，從而使中藥核磁共振指紋圖譜鑒別方法真正達(dá)到了重復(fù)性高、特征性強、信息量大、使用范圍廣、鑒別效果準(zhǔn)確的優(yōu)勢。該方法可以應(yīng)用于天然植物或以天然植物原料為主要防治疾病的中藥材、中成藥以及其各種提取物和添加劑的品種鑒定和真?zhèn)舞b別。
文檔編號G01N24/00GK1731163SQ20051004439
公開日2006年2月8日 申請日期2005年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月10日
發(fā)明者孫慶雷, 林云良, 王曉, 程傳格, 劉建華, 李福偉, 耿巖玲 申請人:山東省分析測試中心