專利名稱：鹵蟲檢毒測試方法及其測試盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鹵蟲檢毒測試方法及其測試盒。
背景技術(shù)：
目前，運(yùn)用鹵蟲總數(shù)的致死率作為生理活性指標(biāo)，對食品、植物提取物、藥品、水源等進(jìn)行初級的毒性篩選，是一種國際公認(rèn)的生物學(xué)檢測方法。其操作簡單、快速、覆蓋面寬、技術(shù)容易掌握。
但是，一直以來，普遍采用的方法多是取鹵蟲卵放入大試管中，加入人造海水，在一定條件下進(jìn)行孵化，一段時(shí)間后將試管取出，吸棄掉上浮而未孵化的蟲卵，將成活的幼蟲傾入另一置有新鮮人造海水的大試管中繼續(xù)孵化，得到實(shí)驗(yàn)所需的幼蟲。而后，根據(jù)鹵蟲的生活習(xí)性，在點(diǎn)滴反應(yīng)板上確定鹵蟲在10秒鐘內(nèi)泳動(dòng)次數(shù)為中毒閾指標(biāo)。因此在每次試驗(yàn)中，均用正常鹵蟲10只，在顯微鏡下觀察10秒鐘內(nèi)泳動(dòng)次數(shù)，求出其均值(X)及標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，確定X-3SD為中毒界限值，如果試驗(yàn)組鹵蟲在10秒鐘內(nèi)泳動(dòng)的次數(shù)小于中毒界限值即認(rèn)為該鹵蟲發(fā)生了中毒，如果鹵蟲死亡，運(yùn)動(dòng)明顯遲緩，也認(rèn)為發(fā)生了中毒。
綜上所述，目前采用的方法普遍存在著以下幾個(gè)問題和缺點(diǎn)，給科學(xué)快速地檢測帶來阻礙1.從試管孵化到最后點(diǎn)滴反應(yīng)板上的檢測，需要對待測幼蟲進(jìn)行多次容器轉(zhuǎn)移，不可避免地對鹵蟲造成了一定的機(jī)械損傷，從而對最后鹵蟲致死結(jié)果的準(zhǔn)確性造成了一定的影響，也增加了實(shí)驗(yàn)步驟的繁瑣性。2.經(jīng)過實(shí)驗(yàn)證明，鹵蟲的密度和鹵蟲的孵化率成反比關(guān)系，因此，大試管的大批量孵化方法顯然降低了鹵蟲的孵化率，提高了實(shí)驗(yàn)成本，延長了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。3.在測定中毒閾值和判斷中毒情況時(shí)，以“泳動(dòng)次數(shù)”為檢驗(yàn)指標(biāo)，耗用了大量的人力和時(shí)間，給測試帶來了很多人為因素，大大降低了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，也不適用于大規(guī)模的毒理試驗(yàn)。
引證文獻(xiàn)①.王志剛，程蘇云，童哲等，1992應(yīng)用鹵蟲生物測試法檢測白曲霉菌的產(chǎn)毒性，衛(wèi)生毒理學(xué)雜志，6(3)16-217；②.封幼玲，王為云，戴建華，1998鹵蟲檢測毒素的應(yīng)用，衛(wèi)生研究，27(增刊)129-130；
③.劉綺，2000一種新的生物監(jiān)測方法研究，中國環(huán)境監(jiān)測，16(5)38-40。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服目前鹵蟲檢毒方法中出現(xiàn)的步驟多、耗時(shí)長、準(zhǔn)確性差的缺點(diǎn)，提供了一種鹵蟲檢毒測試方法及其測試盒。
鹵蟲檢毒專用測試盒具有盒體，在盒體中央設(shè)有橫夾板，橫夾板把盒體分為均等兩室，橫夾板上鉆有多個(gè)微孔，橫夾板上方設(shè)有轉(zhuǎn)軸，轉(zhuǎn)軸上連接一塊遮光蓋板。
鹵蟲檢毒測試方法的步驟如下1)先將蟲卵放于鹵蟲檢毒專用測試盒的光室，在光培養(yǎng)下進(jìn)行人工海水預(yù)孵化，24～48小時(shí)后，轉(zhuǎn)換鹵蟲檢毒專用測試盒光室，暗室，孵化成功的幼蟲趨光，通過橫夾板的微孔游到光室，而死卵及卵的碎殼留在暗室，用吸管將這些廢物吸除，完成孵化過程；2)將待測試液注入光室，測試液通過微孔擴(kuò)散，在兩室中濃度達(dá)到平衡。在該環(huán)境下，光室中的鹵蟲飼毒24小時(shí)，再次轉(zhuǎn)換光室、暗室。沒有中毒的鹵蟲通過橫夾板的微孔游到光室，中毒鹵蟲留于暗室，吸取暗室中中毒鹵蟲，進(jìn)行計(jì)數(shù)，獲得準(zhǔn)確的致死率，完成測試過程。
本發(fā)明可以為鹵蟲的生物活性測試提供了全新的方法及性能良好的承載裝置。通過減少容器轉(zhuǎn)移的次數(shù)，減少對鹵蟲的機(jī)械損傷，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定。同時(shí)，使用本測試盒，可以“測多少孵多少”，不再需要在實(shí)驗(yàn)前，為了確保有足夠的測試體而盲目地、大批量地孵化鹵蟲，以備實(shí)驗(yàn)之需。因此，在一定程度上降低了實(shí)驗(yàn)成本，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。另外，本發(fā)明利用鹵蟲趨光的生理特點(diǎn)，在測定鹵蟲急性毒性死亡率時(shí)以“微孔法”替代“反應(yīng)板法”；在測定中毒閾值時(shí)以“中毒個(gè)體數(shù)”代替“泳動(dòng)次數(shù)”，大大節(jié)省了人力和時(shí)間，提高了測試的準(zhǔn)確性。綜上所述，改良后的鹵蟲毒性測試系列方法具有快速安全、簡單實(shí)用、準(zhǔn)確可靠的特性；降低了人為判斷的主觀因素，適合于快速、大規(guī)模的活性篩選和毒性監(jiān)測工作。


圖1是鹵蟲檢毒測試盒的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是鹵蟲檢毒測試盒的縱剖面結(jié)構(gòu)示意圖；圖中盒體1、橫夾板2、遮光蓋板3。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明用不透光的塑料做成盒體1，在其中央設(shè)置一塊不透光、帶有“微孔”、四周與盒體密合的橫夾板2，由橫夾板把盒體一分為二。橫夾板上方設(shè)有轉(zhuǎn)軸，轉(zhuǎn)軸上連接一塊遮光蓋板3，蓋板可以自由覆蓋盒體兩室中的任何一室，將盒體分為光室與暗室。該盒即為鹵蟲檢毒專用載體，包括孵化、飼毒、死亡率統(tǒng)計(jì)等一系列的實(shí)驗(yàn)步驟都在該載體中完成。具體方法1.當(dāng)進(jìn)行鹵蟲卵孵化時(shí)，在測試盒中加入人工海水，一側(cè)放入蟲卵，照光，形成光室，在沒有蟲卵的另一側(cè)，將遮光蓋板沿轉(zhuǎn)軸翻轉(zhuǎn)，形成暗室；孵化24～48小時(shí)后，沿轉(zhuǎn)軸翻轉(zhuǎn)蓋板，轉(zhuǎn)換暗室與光室，使得孵化成功且泳動(dòng)正常的鹵蟲因趨光的生理特性，穿過帶有“微孔”的橫夾板進(jìn)入另一側(cè)；用吸管吸出暗室中的未孵化的蟲卵及破碎卵殼。2.在飼毒過程中，根據(jù)待測樣品的性質(zhì)配置成均一澄清的水溶液或二甲基亞砜(DMSO)溶液，加入光室，測試液通過微孔擴(kuò)散，在兩室中達(dá)到濃度平衡.在該環(huán)境下，光室中的鹵蟲飼毒24小時(shí)。3.進(jìn)行鹵蟲急性毒性死亡率統(tǒng)計(jì)時(shí)，再次轉(zhuǎn)變暗室和光室，飼毒后仍存活且活動(dòng)性能良好的鹵蟲會通過橫夾板的微孔趨光泳動(dòng)到光室，而死亡及活動(dòng)性能弱的中毒鹵蟲仍然留于暗室。將暗室中全部鹵蟲吸出，進(jìn)行計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)各項(xiàng)參數(shù)，完成測試過程。
用不透光的塑料加工成如圖1所示的盒體1，確保容器的密封，結(jié)合處光滑。在盒體中央設(shè)置一塊不透光、帶有“微孔”、四周與盒體密合的橫夾板2，由橫夾板把盒體等分成兩部分。橫夾板中部鉆有等大的6個(gè)微孔，微孔大小以直徑1.5mm～2.00mm為宜(相當(dāng)于3～8只鹵蟲幼體寬度總和)?？讖降倪@種大小即保證了鹵蟲在趨光泳動(dòng)過程中，不會因微孔表面張力而受到阻礙，又能保證待測液的溶質(zhì)、溶劑分子可以在卡板左右兩室中短時(shí)間內(nèi)迅速達(dá)到平衡，遠(yuǎn)遠(yuǎn)早于鹵蟲對外界毒性脅迫產(chǎn)生逃匿反應(yīng)的時(shí)間。橫夾板頂部的轉(zhuǎn)軸連接一塊遮光蓋板3，蓋板可以自由沿轉(zhuǎn)軸扇頁式翻轉(zhuǎn)覆蓋于盒體兩室中的任何一室的頂部，使得以中央橫夾板為分界，將盒體分為光室與暗室。由于死亡鹵蟲及中毒鹵蟲一般泳動(dòng)性能差、處于液層底部，所以，在實(shí)驗(yàn)過程中，只要保持測試盒平放、不晃動(dòng)，死亡及運(yùn)動(dòng)性能低下的鹵蟲不會通過橫夾板中部的“微孔”從暗室流到光室影響測試結(jié)果。
權(quán)利要求
1.一種鹵蟲檢毒專用測試盒，其特征在于，它具有盒體(1)，在盒體中央設(shè)有橫夾板(2)，橫夾板把盒體分為均等兩室，橫夾板上鉆有多個(gè)微孔，橫夾板上方設(shè)有轉(zhuǎn)軸，轉(zhuǎn)軸上連接一塊遮光蓋板(3)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鹵蟲檢毒專用測試盒，其特征在于，所述的微孔直徑為1.5mm～2.00mm。
3.一種鹵蟲檢毒測試方法，其特征在于，方法步驟如下1)先將蟲卵放于鹵蟲檢毒專用測試盒的光室，在光培養(yǎng)下進(jìn)行人工海水預(yù)孵化，24～48小時(shí)后，轉(zhuǎn)換鹵蟲檢毒專用測試盒光室，暗室，孵化成功的幼蟲趨光，通過橫夾板的微孔游到光室，而死卵及卵的碎殼留在暗室，用吸管將這些廢物吸除，完成孵化過程；2)將待測試液注入光室，測試液通過微孔擴(kuò)散，在兩室中濃度達(dá)到平衡.在該環(huán)境下，光室中的鹵蟲飼毒24小時(shí)，再次轉(zhuǎn)換光室、暗室.沒有中毒的鹵蟲通過橫夾板的微孔游到光室，中毒鹵蟲留于暗室，吸取暗室中中毒鹵蟲，進(jìn)行計(jì)數(shù)，獲得準(zhǔn)確的致死率，完成測試過程。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種鹵蟲檢毒測試方法，其特征在于，所述的鹵蟲檢毒專用測試盒具有盒體(1)，在盒體中央設(shè)有橫夾板(2)，橫夾板把盒體分為均等兩室，橫夾板上鉆有多個(gè)微孔，橫夾板上方設(shè)有轉(zhuǎn)軸，轉(zhuǎn)軸上連接一塊遮光蓋板(3)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種鹵蟲檢毒測試方法，其特征在于，所述的微孔直徑為1.5mm～2.00mm。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鹵蟲檢毒測試方法及其測試盒。方法的步驟如下1)先將蟲卵放于鹵蟲檢毒專用測試盒的光室，在光培養(yǎng)下進(jìn)行人工海水孵化，24－48小時(shí)后，轉(zhuǎn)換光室，暗室，孵化成功的幼蟲趨光，通過橫夾板的微孔游到光室，而死卵等碎殼留在暗室，用吸管將這些廢物吸除，完成孵化過程；2)將待測試液注入光室，測試液通過微孔擴(kuò)散，在兩室中濃度達(dá)到平衡。在該環(huán)境下，光室中的鹵蟲飼毒24小時(shí)，再次轉(zhuǎn)換光室、暗室。沒有中毒的鹵蟲通過橫夾板的微孔游到光室，中毒鹵蟲留于暗室，吸取暗室中毒鹵蟲，進(jìn)行計(jì)數(shù)，獲得準(zhǔn)確的致死率。本發(fā)明快速安全、簡單實(shí)用、準(zhǔn)確可靠；降低人為判斷的主觀因素，適合于快速的、大規(guī)模的活性篩選和毒性監(jiān)測工作。
文檔編號G01N33/00GK1725009SQ20051005070
公開日2006年1月25日 申請日期2005年7月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月14日
發(fā)明者陸胤, 陳紹瑗, 傅承新 申請人:浙江大學(xué)