專利名稱：用膠體金標(biāo)記clq做指示劑的蛋白芯片/微陣列檢測系統(tǒng)及檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域，特別涉及膠體金標(biāo)記clq做指示劑的蛋白芯片/微陣列檢測系統(tǒng)及檢測方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有蛋白芯片或微陣列主要采用熒光素、酶和化學(xué)發(fā)光劑作為指示劑，需要嚴(yán)格的實驗條件和昂貴的檢測設(shè)備，限制了蛋白芯片/或微陣列的使用范圍。
近年來也有用膠體金/膠體銀作為蛋白芯片指示劑的報道，主要使用以下幾種方法(1)檢測物為抗原，以多克隆或單克隆抗體作為芯片探針，將生物素標(biāo)記待測抗原，以抗生物素蛋白鏈菌素包裹的膠體金作為芯片雜交的指示劑，但該方法需要標(biāo)記待測抗原，手續(xù)繁瑣，費時費力，只適合研究使用而不適合普及推廣；(2)檢測物為抗原，以多克隆抗體為芯片探針，以單克隆抗體(第二抗體)作為檢測抗體，用針對第二抗體的抗體包被膠體金作為芯片雜交指示劑；(3)檢測物為抗體，以純化的抗原或抗體作為芯片探針，以第二抗體、SPA或G蛋白包被的膠體金顆粒作為芯片雜交指示劑；但這兩種方法需要第二抗體，而且，針對每種不同的檢測目的物，就需要一種不同的第二抗體，因此試劑開發(fā)難度很大，成本也非常高；并且由于檢測抗原和抗體使用不同方案，在一張芯片上同時檢測抗原和抗體(特別是同一抗原抗體對)就非常復(fù)雜，甚至不可能實現(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容
為克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷與不足，本發(fā)明的目地在于提供一種用膠體金標(biāo)記clq做指示劑的蛋白芯片/微陣列檢測系統(tǒng)，該系統(tǒng)把膠體金clq作為指示劑，解決了膠體金免疫層析技術(shù)對每種把抗原都需要兩種特異性抗體的問題，不僅使新檢測項目的開發(fā)更容易、成本更低，利用該技術(shù)還可以在具有多個被檢抗體、抗原的檢測板上同時實現(xiàn)同一抗原、抗體對的檢測。
本發(fā)明的另一目地在于提供一種上述檢測系統(tǒng)的檢測方法，使用本發(fā)明的檢測方法，如果待測標(biāo)本中含有蛋白芯片/微陣列的檢測目的物，將與芯片上相應(yīng)位點的探針形成免疫復(fù)合物(IC)，膠體金標(biāo)記的Clq/Clq+金標(biāo)Clq復(fù)合物特異性地與結(jié)合，從而將膠體金固定到發(fā)生了免疫反應(yīng)的芯片點陣上。用緩沖液洗滌后，未結(jié)合的膠體金被去除，未發(fā)生免疫反應(yīng)的位點不呈色，發(fā)生了免疫反應(yīng)的位點呈現(xiàn)膠體金顆粒聚集的黃紅色，因此，隨待測標(biāo)本中含有檢測目的物的不同，芯片在于標(biāo)本進(jìn)行反應(yīng)后的呈色位點所組成的圖案(芯片雜交模式)也不同，據(jù)此可以確定待測標(biāo)本中含有何種檢測目的物。
為實現(xiàn)上述發(fā)明目地，本發(fā)明用膠體金標(biāo)記clq做指示劑的蛋白芯片檢測系統(tǒng)由蛋白芯片及指示劑組成，所述指示劑為膠體金標(biāo)記clq。
用膠體金標(biāo)記clq做指示劑的蛋白芯片檢測系統(tǒng)的檢測方法，包括以下步驟a、制備溶血液按體積比，取待測標(biāo)本20ul，溶于180ul含1％SDS和1mmol/L金標(biāo)Clq的0.1mol/L，且pH值為7.4的PBS中，將溶血液加入到蛋白芯片表面，5-10min后，用1％SDS的0.1mol/L pH7.4PBS洗滌微陣列；b、結(jié)果判讀檢測芯片上發(fā)生了反應(yīng)的位點將顯示膠體金的顏色，而未發(fā)生抗原抗體反應(yīng)的位點則無色，從而可目測出或使用芯片檢測儀分析檢測標(biāo)本中含有那種待測靶物質(zhì)。
與現(xiàn)有技術(shù)比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(1)與用熒光素、酶和化學(xué)發(fā)光劑作為蛋白芯片/微陣列的指示劑的方法相比，利用本發(fā)明的方法可以制作能目視檢測的芯片/微陣列，不依賴昂貴的熒光掃描儀最為檢測設(shè)備，特別適合獻(xiàn)血車這種沒有復(fù)雜裝備的簡易場合；(2)與現(xiàn)有蛋白芯片的膠體金/銀指示劑相比，利用本發(fā)明的方法的優(yōu)點在于；①對抗原、抗體的檢測方案相同，蛋白芯片/微陣列的設(shè)計更簡單；②在一張蛋白芯片上可以同時檢測同一抗原抗體對，在血型鑒定和病原體的全程檢測中具有重要意義；③不需要對待測標(biāo)本進(jìn)行標(biāo)記，簡化了檢測流程，節(jié)約了檢測時間；④不需要針對不同的檢測目的物去開發(fā)不同的二抗，蛋白芯片/微陣列的開發(fā)難度更小、成本更低，特別是使得那些難以制備二抗的目的物也可以實現(xiàn)蛋白芯片/微陣列的檢測。
具體實施例方式
下面結(jié)合優(yōu)選的具體實施方式
對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但不是限制本發(fā)明。
實施例1目視膠體金標(biāo)記Clq血液檢測a制作血液檢測微陣列以抗A抗體、抗B抗體、抗HBsAg、HCV重組抗原、HIVP24、HIVgp36和梅毒重組抗原作為檢測探針，以羊抗人IgG作為陽性對照，以胎牛血清白蛋白作為陰性對照，分別固定在微陣列基片上，形成3×3的微陣列，陣列內(nèi)每個點直徑1mm，間隔2mm，然后以小牛血清白蛋白封閉、干燥；b血液檢測與結(jié)果判讀檢測操作取20ul獻(xiàn)血者血液，溶于180ul含1％SDS和0.1mmol/L金標(biāo)Clq的0.1mol/L pH值為7.4PBS中，將溶血液加入到微陣列表面，5min后，用1％SDS的0.1mol/L pH7.4PBS洗滌微陣列。結(jié)果判讀；羊抗人IgG位點呈色表明檢測結(jié)果有效，否則應(yīng)更換檢測陣列再次檢測；抗A位點呈色而抗B位點不呈色，表明獻(xiàn)血者為A型；抗B位點呈色而抗A位點不呈色，表明獻(xiàn)血者為B型；抗A位點呈色且抗B位點呈色，表明獻(xiàn)血者為AB型；抗A位點和抗B位點都不呈色，表明獻(xiàn)血者為O型；血型A物質(zhì)位點呈色，表明獻(xiàn)血者可能是B型或O型；血型B物質(zhì)位點呈色，表明獻(xiàn)血者可能是A型或O型；血型A物質(zhì)、B物質(zhì)位點都呈色，獻(xiàn)血者為O型；血型A物質(zhì)、B物質(zhì)位點都不呈色，獻(xiàn)血者為AB型；抗D位點呈色，表明獻(xiàn)血者Rh(D)陽性，不呈色為陰性；抗HBsAg呈色表明獻(xiàn)血者HBsAg陽性；HCVAb抗抗體位點呈色表明獻(xiàn)血者HCVAb陽性；HIVP24/gp36嵌合抗原位點呈色表明獻(xiàn)血者HIV抗體陽性；抗HIVp24位點呈色表明獻(xiàn)血者HIV-1病毒陽性；抗HIVgp36位點呈色表明獻(xiàn)血者HIV病毒陽性；抗HCMV位點呈色表明獻(xiàn)血者HCMV病毒陽性；抗EBV位點呈色表明獻(xiàn)血者HCMV病毒陽性；梅毒抗抗體位點呈色表明獻(xiàn)血者梅毒抗體陽性。
實施例2自動膠體金標(biāo)記Clq血液檢測a制作膠體金標(biāo)記Clq血液檢測微陣列將血型A物質(zhì)、B物質(zhì)、血型A抗體、B抗體、D抗體、抗HBsAg、HCV重組抗原、HCV抗體、HIVp24、HIVgp36、HIVp24抗體、HIVgp36抗體、TP重組抗原作為檢測探針，以羊抗人IgG作為陽性對照，以胎牛血清白蛋白作為陰性對照，分別固定在制作好的微陣列基片上，形成5×3的微陣列，陣列內(nèi)每個點直徑0.2mm，間隔0.5mm，然后以小牛血清白蛋白封閉、干燥；b封裝血液檢測微陣列將蓋片密封地扣蓋在帶有上述檢測探針微陣列的基片上，在蓋片的條形碼區(qū)域印上或貼上標(biāo)識該微陣列信息(檢測內(nèi)容、探針排列方式等)的條碼，即制得血液檢測微陣列；c血液檢測與結(jié)果判斷檢測操作取20ul獻(xiàn)血者血液，溶于180ul含1％SDS、0.1-5mmol/L膠體金標(biāo)記Clq和1-5mmol/L Clq的0.1mol/L pH7.4PBS中，將溶血液加入到微陣列表面，5min后，用1％SDS的0.1mol/L pH7.4PBS洗滌微陣列，將檢測微陣列。結(jié)果判讀微陣列掃描儀對檢測微陣列進(jìn)行掃描，從閱讀窗讀取微陣列的雜交模式，從條碼區(qū)讀取微陣列檢測內(nèi)容與探針排列方式等信息，并據(jù)此調(diào)用內(nèi)置軟件對檢測結(jié)果進(jìn)行判斷，檢測結(jié)果可以打印也可以存入計算機。
權(quán)利要求
1.用膠體金標(biāo)記clq做指示劑的蛋白芯片檢測系統(tǒng)，由蛋白芯片及指示劑組成，其特征在于所述指示劑為膠體金標(biāo)記clq。
2.用膠體金標(biāo)記clq做指示劑的蛋白芯片檢測系統(tǒng)的檢測方法，其特征在于包括以下步驟a、制備溶血液按體積比，取待測標(biāo)本20ul，溶于180ul含1％SDS和1mmol/L金標(biāo)Clq的0.1mol/L，且pH值為7.4的PBS中，將溶血液加入到蛋白芯片表面，5-10min后，用1％SDS的0.1mol/L pH7.4PBS洗滌微陣列；b、結(jié)果判讀檢測芯片上發(fā)生了反應(yīng)的位點將顯示膠體金的顏色，而未發(fā)生抗原抗體反應(yīng)的位點則無色，從而可目測出或使用芯片檢測儀分析檢測標(biāo)本中含有那種待測靶物質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明公開了用膠體金標(biāo)記c1q做指示劑的蛋白芯片檢測系統(tǒng)及其檢測方法，該檢測系統(tǒng)由蛋白芯片及指示劑組成，所述指示劑為膠體金標(biāo)記c1q；所述檢測方法包括將待測標(biāo)本與膠體金標(biāo)記c1q同時加入到檢測芯片上，然后采用洗滌的方法去除未結(jié)合的金標(biāo)c1q，可通過目視或芯片檢測儀檢測芯片/微陣列判斷待測標(biāo)本中是否含有芯片/微陣列的檢測靶物質(zhì)；采用本發(fā)明的指示劑及檢測方法在一張蛋白芯片上可同時檢測同一抗原抗體對，無需針對不同的檢測目的物去開發(fā)不同的二抗，且蛋白芯片/微陣列的開發(fā)難度更小、成本更低，特別適合獻(xiàn)血車這種沒有復(fù)雜裝備的簡易場合。
文檔編號G01N33/52GK1766616SQ20051005732
公開日2006年5月3日 申請日期2005年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月17日
發(fā)明者趙樹銘, 蔣天倫, 菅強, 張玲, 府偉靈, 黎儒青, 肖瑞卿 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院