專利名稱：土壤和淡水線蟲以及植物線蟲的插管檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物類群的檢測方法，尤其是涉及一種存在于土壤、淡水和植物中的線蟲的插管檢測方法。
背景技術(shù)：
線蟲是自然界中廣泛分布的一大生物類群，有的寄生于動物、植物體內(nèi)，有的存在于土壤和水體中。前者引起病害，導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)損失；后者構(gòu)成人類食物鏈的一環(huán)，也是土壤和水體自凈功能的一個(gè)組成部分，同時(shí)還是自然界能量循環(huán)的一個(gè)環(huán)節(jié)。寄生于農(nóng)作物的線蟲需要檢測以獲得病原進(jìn)行準(zhǔn)確診斷；對于土壤和水體中的線蟲也可以進(jìn)行檢測以評價(jià)環(huán)境的質(zhì)量。
現(xiàn)有檢測植物線蟲都是沿用貝爾曼漏斗法。其基本裝置為一合適直徑的漏斗，漏斗管端接一段橡皮管，以彈簧止水夾控制管的開閉。漏斗放在鐵架的圓環(huán)上，其內(nèi)盛滿清水。掘開植株旁邊的土壤，切下一部分根系，洗凈后剪成1～2cm的小段，包在一塊方形的薄紗布內(nèi)，浸在水內(nèi)。線蟲從根組織中游出，經(jīng)紗布而沉落在漏斗管底。經(jīng)一晝夜后，打開彈簧夾，流出少量水，收集在玻璃皿內(nèi)，水內(nèi)含有線蟲。再用顯微鏡鑒定水內(nèi)含有的線蟲以屬于什么種類。(畢志樹，李進(jìn)，植物線蟲學(xué)，農(nóng)業(yè)出版社，211-212)。這種方法雖然能夠分離出線蟲，但是具有明顯的缺點(diǎn)1)取樣時(shí)傷及植株根系，農(nóng)民有時(shí)難以接受，特別是接近收獲的季節(jié)；2)費(fèi)工費(fèi)時(shí)；3)需要用很多漏斗，且占用很多實(shí)驗(yàn)室空間。
檢測土壤線蟲一般選用以下兩種方法土壤懸浮液傾注法在水桶中放3-4L水，然后加入大約500cm3的土壤并用力攪拌以打散土塊，于是線蟲游離出來。大約靜置1min后，土粒沉到底部，線蟲就留在懸浮液中。傾注懸浮液，通過各具850、250和45μm篩孔(相當(dāng)于20、250和325目/平方英寸)的一套篩到第二個(gè)桶里，再將液體倒回第一個(gè)桶，重復(fù)這整個(gè)過程，象前面一樣攪拌，讓土壤沉下，傾注過篩。最后第二桶的水再一次過篩，然后從篩里收集線蟲，即用細(xì)的水流從篩的背后將它們沖到燒杯內(nèi)。如果土壤有很多有機(jī)物質(zhì)，那么可通過一個(gè)裝置讓線蟲游離出來，即用一塊清潔的布扣緊燒杯口，然后將燒杯倒放在一個(gè)有水的漏斗中。
高比重溶液差別離心分離法首先從土壤中分離懸浮的有機(jī)物質(zhì)，而土壤保留線蟲，然后再用高比重溶液分離線蟲。把100cm3土壤懸浮在600mL水中并很好地?cái)嚢?，通過粗篩注入一個(gè)容器中以除去石頭、小須根等。將土壤懸浮液分裝到各離心管離心5min。土壤通常含很多粘土，離心時(shí)土面上會粘著線蟲。如果土壤沒有粘土，需在離心前加入少量高嶺土(Kaolin)。倒掉上清液，擦干離心管上部以除去雜物。加糖溶液到管中(490克蔗糖溶于1000mL水中)。使土壤在管中再懸浮并同上離心，將上清液倒入最細(xì)的篩并用自來水收集線蟲，讓它們在水中利用重力或再次離心而下沉。高比重溶液也可以用其他物質(zhì)如糖蜜來配制。(①和②引自〔美〕V.H.Dropkin著，潘滄?！ち指傋g，植物線蟲學(xué)導(dǎo)論，廈門廈門大學(xué)出版社，45-47)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供一種微生物。
本發(fā)明的另一目的旨在提供一種利用微生物將土壤和淡水線蟲以及植物線蟲誘入檢測管鑒定的檢測方法。
本發(fā)明所說的微生物為酵母菌Yr 0503，酵母菌Yr 0503是從福建省廈門市東孚垃圾填埋場的滲水池的污泥中分離得到的，菌株的分類命名為酵母菌，該菌株已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，登記入冊的編號為CGMCC No.1336，株號Yr 0503，保藏日期2005年3月24日。
酵母菌Yr 0503的篩選、分離、培養(yǎng)方法如下配制玉米粉瓊脂培養(yǎng)基(CMA)待用。從垃圾填埋場的滲水池底部挖取污泥，裝入滅菌過的容器中帶回實(shí)驗(yàn)室，在無菌室中挑取一點(diǎn)點(diǎn)污泥，移入經(jīng)干熱滅菌的培養(yǎng)皿(直徑可選為9cm)中。熔化CMA培養(yǎng)基，待其冷至凝固前(溫度可選為42～45℃)，以無菌操作倒入培養(yǎng)皿內(nèi)，每皿約20ml，蓋上皿蓋，立即旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，靜置，待培養(yǎng)基冷卻凝固后將培養(yǎng)皿倒放，轉(zhuǎn)入25℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。待瓊脂平板表面長出菌落時(shí)，在解剖鏡下尋找似油滴狀(有光澤)的菌落，挑取其單個(gè)菌落，在CMA或PDA瓊脂平板上以斜線法劃線接種，使其與混雜的微生物菌種在瓊脂平板表面分散開，使單個(gè)菌體能固定在一點(diǎn)，在生長繁殖后形成單個(gè)菌落，從而達(dá)到分離提純的目的。如果不純，則還需要繼續(xù)進(jìn)行分離純化。純化后在25～28℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
本發(fā)明所說的利用微生物將土壤和淡水線蟲以及植物線蟲誘入檢測管鑒定的檢測方法，其步驟為步驟一取線蟲檢測管，長3～15cm(優(yōu)選9cm)，寬1.5～5cm(優(yōu)選2.9cm)，高1～3cm(優(yōu)選1.5cm)，其一端封閉，另一端開放；步驟二檢測管裝入載玻片，再往檢測管里加入纖維素，管口用過濾物塞住，經(jīng)高壓滅菌，再冷卻后取出；步驟三配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基；步驟四將配制好的液體培養(yǎng)基分裝，用過濾物塞住或包住管口，經(jīng)高壓滅菌，冷卻后接種微生物菌；或?qū)⑴渲坪玫墓腆w培養(yǎng)基分裝，用錫箔紙包住管口，經(jīng)高壓滅菌后傾倒成平面，冷卻凝固后接種微生物菌；所說的微生物菌為酵母菌(Yr 0503)、交鏈孢(Alternaria spp.)、鐮刀菌(Fusarium spp.)、頭孢霉屬未定種(Cephalosporium sp.)、盾克霉屬未定種(Coniothyrium sp.)或莖點(diǎn)霉屬的一個(gè)種(Phoma lingam)等中的一種；步驟五將培養(yǎng)好的培養(yǎng)基逐份裝入步驟二所完成的檢測管中；步驟六在待測的土壤或待測植株的根周土壤中設(shè)置小孔，在小孔內(nèi)注入滅菌水，將檢測管管口朝下，插入土壤的小孔內(nèi)；步驟七插入土壤中的檢測管在土壤中留置3～5天，然后拔出檢查，若是透明的檢測管，則用解剖鏡對著管壁檢查；若是不透明的檢測管，則在拔去塞子之后抽出管內(nèi)的載玻片，在顯微鏡下觀察。
在步驟一中，檢測管容2片載玻片裝入。
在步驟二中，高壓滅菌的溫度為121℃，時(shí)間為20min，載玻片長7.6cm，寬2.6cm。
在步驟三中，所說的培養(yǎng)基選自糖蜜培養(yǎng)基，淘米水培養(yǎng)基，馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA)，麥芽汁培養(yǎng)基、米曲汁培養(yǎng)基、豆芽汁培養(yǎng)基、草浸汁培養(yǎng)斟、玉米粉培養(yǎng)基(CMA)和察培克培養(yǎng)基中的至少一種。
在步驟四中，將配制好的液體培養(yǎng)基分裝，裝量為檢測管容量的1/5～1/3，溫度為121℃，1Kg/cm2高壓滅菌20min.，冷卻后接種微生物菌，在25～28℃下振蕩培養(yǎng)3～7天后，在5～10℃冰箱中冷藏備用。
或?qū)⑴渲坪玫墓腆w培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)，裝量約為管子容量的1/3～1/2，用錫箔紙封口，經(jīng)高壓滅菌后傾倒成平面，冷卻凝固后接種微生物菌，在25～28℃下培養(yǎng)3～7天后，在5～10℃冰箱中冷藏備用。
在步驟五中，培養(yǎng)好的微生物菌培養(yǎng)基逐份裝入步驟二所完成的檢測管中，每只管裝量2～5ml，以管內(nèi)的纖維素吸飽為宜。
在步驟六中，在小孔內(nèi)注入5～10ml滅菌水。
除了上述可以插入載玻片的管子之外，還可以利用大小不同的試管做檢測管。當(dāng)用試管做檢測管時(shí)，雖然省卻了步驟一和步驟二，但是檢查、鑒定時(shí)不如上述方法方便，因?yàn)殍b定蟲種必須把線蟲從檢測管的管壁上洗下來，再用吸管移到載玻片上進(jìn)行仔細(xì)觀察。
無論哪一種檢測管，都可以把它放在培養(yǎng)箱中25～28℃培養(yǎng)3～4天后再取出鏡檢，這樣線蟲得以繁殖，會大大提高檢出率。
用這種方法檢測土壤和淡水線蟲以及植物線蟲，大大方便了檢疫檢驗(yàn)人員操作，有利于大規(guī)模檢測；同時(shí)使植株免于掘土切根之患，達(dá)到保護(hù)植物的目的。因?yàn)橛袝r(shí)土壤和植物中的線蟲數(shù)量很少，本發(fā)明能把線蟲誘入管子內(nèi)，在其培養(yǎng)的微生物上蟲量迅速擴(kuò)增，從而提高檢測的靈敏度。本發(fā)明用于土壤線蟲的普查和某些植物線蟲病害的調(diào)查，也可以利用本方法以檢測土壤的線蟲為指標(biāo)進(jìn)行環(huán)境評價(jià)。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
實(shí)施例1取糖蜜和清水，按1∶8至1∶6的比例稀釋，或糖蜜和廢糖蜜按1∶20至1∶10的比例稀釋，混合后將pH調(diào)至5.5至7，以6～6.5最佳。將配制好的液體培養(yǎng)基分裝入三角燒瓶內(nèi)，裝量約為燒瓶容量的1/5～1/3，用棉花塞塞住或用8層紗布包住瓶口，經(jīng)高壓滅菌，冷卻后接種酵母菌，25～28℃振蕩培養(yǎng)3～7天后，將發(fā)酵液注入線蟲檢測管中，每只管裝量2～5ml，然后用8層紗布包住管口，或者用滅菌棉花(或其他有孔介質(zhì))塞住管口。
在待測的土壤中挖出或鉆出一個(gè)小孔，在孔內(nèi)注入5～10ml滅菌水；然后將檢測管倒翻過來插入土壤的小孔內(nèi)。
用這種接種了酵母菌糖蜜發(fā)酵液的檢測管10支插入校園內(nèi)10棵榕樹的根周土壤中，3天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果9支檢測管中有大量自由生活線蟲，自由生活線蟲的陽性率為90％。
實(shí)施例2與實(shí)施例1類似，其不同的是采用固體培養(yǎng)基。將配制好的糖蜜溶液分裝入試管，每支試管裝量為1/2，用錫鉑紙扣住管口，并包住管壁上沿，經(jīng)高壓滅菌后倒成平面，冷卻凝固后接種酵母菌，25℃培養(yǎng)3天后取出置于5～10℃冰箱中冷藏備用。
用這種接種了酵母菌的糖蜜瓊脂培養(yǎng)基檢測管10支插入果園內(nèi)的10棵柑橘樹的根周土壤中，4天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果每支檢測管中都有大量線蟲，其中有小桿類的線蟲，也有長針線蟲等能夠傳播病毒的線蟲。線蟲陽性率為100％。
實(shí)施例3與實(shí)施例1類似，其不同的是培養(yǎng)基用淘米水培養(yǎng)基，將淘米水靜置一段時(shí)間后傾去上清液，其沉淀物用比重計(jì)測定為1.4Be左右，調(diào)節(jié)pH為6.0～6.5。
用這種加入酵母菌淘米水發(fā)酵液的檢測管10支插入街道中央綠化帶的10株馬櫻丹的根周土壤中，5天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果9支檢測管中有大量線蟲，線蟲的陽性率為90％。
實(shí)施例4與實(shí)施例1類似，其不同的是培養(yǎng)基用馬鈴薯汁培養(yǎng)基把200g馬鈴薯洗凈去皮，切成小塊或推成細(xì)絲，按1∶5的比例加1000ml水(W∶V)，煮沸30min.(注意防止燒糊，可用水浴)，用紗布過濾，濾汁添水至煮前的體積。再加20g蔗糖，調(diào)pH至6左右。
用這種加入酵母菌馬鈴薯汁發(fā)酵液的檢測管10支插入出入境檢驗(yàn)檢疫局提供的10份進(jìn)口的百合球莖的根周土壤中，3天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果每支檢測管都有大量自由生活線蟲，自由生活線蟲的陽性率為100％。
實(shí)施例5與實(shí)施例1類似，其不同的是培養(yǎng)基用麥芽汁培養(yǎng)基把干麥芽粉和水按1∶4的比例混和，在58～65℃下糖化3～4h，得到糖度10°左右(巴林)的麥芽汁，煮沸后紗布過濾，調(diào)節(jié)pH至6左右。
用這種加入酵母菌麥芽汁發(fā)酵液的檢測管20支插入果園內(nèi)10棵香蕉樹的根周土壤中，3天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果每支檢測管都被有大量線蟲，線蟲的陽性率為100％。
實(shí)施例6與實(shí)施例1類似，其不同的是培養(yǎng)基用米曲汁培養(yǎng)基將曲霉接種于大米飯上，于28℃培養(yǎng)4天，制成大米曲，風(fēng)干后稱取1kg，加水3L，保溫60℃數(shù)小時(shí)，至無淀粉反應(yīng)時(shí)為止。煮沸，用紗布過濾，加水調(diào)至12BX。
用這種加入米曲汁酵母菌發(fā)酵液的檢測管10支插入校園內(nèi)10棵龍眼樹的根周土壤中，4天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果7支檢測管中都有大量線蟲，線蟲的陽性率為70％。
實(shí)施例7與實(shí)施例1類似，其不同的是培養(yǎng)基用豆芽汁培養(yǎng)基在1000ml水中加入100g黃豆芽，煮沸半小時(shí)，用紗布過濾，濾液用水補(bǔ)充至1000ml，加糖50g，自然pH。
用這種加入酵母菌豆芽汁發(fā)酵液的檢測管10支插入菜園內(nèi)10株絲瓜的根周土壤中，3天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果每支檢測管都有大量線蟲，線蟲的陽性率為100％。
實(shí)施例8與實(shí)施例1類似，其不同的是培養(yǎng)基用草浸汁培養(yǎng)基，其配方為干草(粉碎)50g或鮮草200g，KH2PO42g，瓊脂15g，蒸餾水1000ml，pH 5.5～7。干草(常常使用稻草)或鮮草(可用草皮修剪下來的草)在高壓滅菌鍋中先在120℃下煎煮30min后過濾。
用這種加入酵母菌草浸汁發(fā)酵液的檢測管10支插入校園內(nèi)10塊草坪的土壤中，3天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果4支檢測管中有自由生活線蟲，自由生活線蟲的陽性率為40％。
實(shí)施例9與實(shí)施例1類似，其不同的是培養(yǎng)基為CMA培養(yǎng)基，其配方為玉米(玉米片)20g，蔗糖20g，瓊脂17g，蒸餾水1000ml。玉米片在500ml水中60℃下煮1h。用布過濾，把濾液加入溶于500ml水中的瓊脂液中，再加水補(bǔ)足1000ml。
用這種加入酵母菌CMA發(fā)酵液的檢測管10支插入花圃內(nèi)10棵四季桔的根周土壤中，5天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果8支檢測管中都有大量線蟲，線蟲的陽性率為80％。
實(shí)施例10與實(shí)施例1類似，其不同的是培養(yǎng)基采用察培克(Czapek)培養(yǎng)基，其配方為NaNO33g，K2HPO41g，MgSO4·7H2O 0.5g，KCl 0.5g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01g，蔗糖30g，瓊脂15g，蒸餾水1000ml(蔗糖要在臨滅菌前放入)。
用這種加入酵母菌察培克發(fā)酵液的檢測管10支插入花圃內(nèi)10株菊花的根周土壤中，3天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果9支檢測管中有大量線蟲，線蟲的陽性率為90％。
實(shí)施例11與實(shí)施例1類似，其不同的是其所接種的微生物為交鏈孢(Alternaria sp.)。
把這種裝接種了交鏈孢的馬鈴薯汁瓊脂培養(yǎng)基檢測管20支插入果園內(nèi)10棵柑橘樹的根周土壤中，3天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果16支檢測管中有大量線蟲，線蟲的陽性率為80％。其中有燕麥真滑刃線蟲(Aphelenchus avenae)、墻草滑刃線蟲(Aph.parietinus)等，此外還有較多的自由生活線蟲及其他線蟲。
實(shí)施例12與實(shí)施例1類似，其不同的是其所接種的微生物為鐮刀菌(Fusarium sp.)。把這種裝接種了鐮刀菌的馬鈴薯汁瓊脂培養(yǎng)基檢測管20支插入果園內(nèi)10棵柑橘樹的根周土壤中，5天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果18檢測管中有大量線蟲，線蟲的陽性率為90％。其中有燕麥真滑刃線蟲(Aphelenchus avenae)等，此外還有較多的自由生活線蟲及其他線蟲。
實(shí)施例13與實(shí)施例1類似，其不同的是其所接種的微生物為頭孢霉屬未定種(Cephalosporium sp.)。把這種裝接種了頭孢霉的馬鈴薯汁瓊脂培養(yǎng)基檢測管10支插入市區(qū)10棵榕樹的根周土壤中，4天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果9支檢測管中有大量線蟲，線蟲的陽性率為90％。其中有較多的自由生活線蟲及其他線蟲。
實(shí)施例14與實(shí)施例1類似，其不同的是其所接種的微生物為盾克霉屬未定種(Coniothyrium sp.)。把這種裝接種了盾克霉的馬鈴薯汁瓊脂培養(yǎng)基檢測管10支插入花圃內(nèi)10株紅紫蘇的根周土壤中，4天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果9支檢測管中有大量線蟲，線蟲的陽性率為90％。其中有根結(jié)線蟲(Meloidogyne spp.)幼蟲等，此外還有較多的自由生活線蟲。
實(shí)施例15與實(shí)施例1類似，其不同的是其所接種的微生物為莖點(diǎn)霉屬的一個(gè)種(Phoma lingam)。把這種裝接種了莖點(diǎn)霉的馬鈴薯汁瓊脂培養(yǎng)基檢測管10支插入花圃內(nèi)10株雞冠花的根周土壤中，3天后拔出帶回實(shí)驗(yàn)室檢查，結(jié)果8支檢測管中有大量線蟲，線蟲的陽性率為80％。其中有根結(jié)線蟲(Meloidogyne spp.)幼蟲等，此外還有較多的自由生活線蟲。
權(quán)利要求
1.一種微生物，其特征在于微生物為酵母菌Yr 0503，菌株的分類命名為酵母菌，已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，登記入冊的編號為CGMCCNo.1336，株號Yr 0503，保藏日期2005年3月24日。
2.利用微生物將土壤和淡水線蟲以及植物線蟲誘入檢測管鑒定的檢測方法，其特征在于其步驟為步驟一取線蟲檢測管，長3～15cm，寬1.5～5cm，高1～3cm，其一端封閉，另一端開放；步驟二檢測管裝入載玻片，再往檢測管里加入纖維素，管口用過濾物塞住，經(jīng)高壓滅菌，再冷卻后取出；步驟三配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基；步驟四將配制好的液體培養(yǎng)基分裝，用過濾物塞住或包住管口，經(jīng)高壓滅菌，冷卻后接種微生物菌；或?qū)⑴渲坪玫墓腆w培養(yǎng)基分裝，用錫箔紙包住管口，經(jīng)高壓滅菌后傾倒成平面，冷卻凝固后接種微生物菌；所說的微生物菌為酵母菌(Yr 0503)、交鏈孢(Alternaria spp.)、鐮刀菌(Fusarium spp.)、頭孢霉屬未定種(Cephalosporium sp.)、盾克霉屬未定種(Coniothyrium sp.)或莖點(diǎn)霉屬的一個(gè)種(Phoma lingam)等中的一種；步驟五將培養(yǎng)好的培養(yǎng)基逐份裝入步驟二所完成的檢測管中；步驟六在待測的土壤或待測植株的根周土壤中設(shè)置小孔，在小孔內(nèi)注入滅菌水，將檢測管管口朝下，插入土壤的小孔內(nèi)；步驟七插入土壤中的檢測管在土壤中留置3～5天，然后拔出檢查，對透明的檢測管，用解剖鏡對著管壁檢查；對不透明的檢測管，拔去塞子之后抽出管內(nèi)的載玻片，在顯微鏡下觀察。
3.如權(quán)利要求2所述的利用微生物將土壤和淡水線蟲以及植物線蟲誘入檢測管鑒定的檢測方法，其特征在于在步驟一中，取線蟲檢測管，長9cm，寬2.9cm，高1.5cm，其一端封閉，另一端開放。
4.如權(quán)利要求2所述的利用微生物將土壤和淡水線蟲以及植物線蟲誘入檢測管鑒定的檢測方法，其特征在于在步驟一中，檢測管容2片載玻片裝入。
5.如權(quán)利要求2所述的利用微生物將土壤和淡水線蟲以及植物線蟲誘入檢測管鑒定的檢測方法，其特征在于在步驟二中，高壓滅菌的溫度為121℃，時(shí)間為20min，載玻片長7.6cm，寬2.6cm。
6.如權(quán)利要求2所述的利用微生物將土壤和淡水線蟲以及植物線蟲誘入檢測管鑒定的檢測方法，其特征在于在步驟三中，所說的培養(yǎng)基選自糖蜜培養(yǎng)基，淘米水培養(yǎng)基，馬鈴薯培養(yǎng)基，麥芽汁培養(yǎng)基、米曲汁培養(yǎng)基、豆芽汁培養(yǎng)基、草浸汁培養(yǎng)斟、玉米粉培養(yǎng)基和察培克培養(yǎng)基中的至少一種。
7.如權(quán)利要求2所述的利用微生物將土壤和淡水線蟲以及植物線蟲誘入檢測管鑒定的檢測方法，其特征在于在步驟四中，將配制好的液體培養(yǎng)基分裝，裝量為檢測管容量的1/5～1/3，121℃，1Kg/cm2高壓滅菌20min.，冷卻后接種微生物菌，在25～28℃下振蕩培養(yǎng)3～7天后，在5～10℃冰箱中冷藏備用。
8.如權(quán)利要求2所述的利用微生物將土壤和淡水線蟲以及植物線蟲誘入檢測管鑒定的檢測方法，其特征在于在步驟四中，將配制好的固體培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)，裝量為管子容量的1/3～1/2，用錫箔紙封口，經(jīng)高壓滅菌后傾倒成平面，冷卻凝固后接種微生物菌，在25～28℃下培養(yǎng)3～7天后，在5～10℃冰箱中冷藏備用。
9.如權(quán)利要求2所述的利用微生物將土壤和淡水線蟲以及植物線蟲誘入檢測管鑒定的檢測方法，其特征在于在步驟五中，培養(yǎng)好的微生物菌培養(yǎng)基逐份裝入步驟二所完成的檢測管中，每只管裝量2～5ml，以管內(nèi)的纖維素吸飽為宜。
10.如權(quán)利要求2所述的利用微生物將土壤和淡水線蟲以及植物線蟲誘入檢測管鑒定的檢測方法，其特征在于在步驟六中，在小孔內(nèi)注入5～10ml滅菌水。
全文摘要
土壤和淡水線蟲以及植物線蟲的插管檢測方法，涉及一種生物類群的檢測方法，提供一種微生物，為酵母菌Yr0503，菌株分類命名為酵母菌，保藏編號CGMCC No.1336。利用微生物將土壤和淡水線蟲及植物線蟲誘入檢測管鑒定的檢測方法的步驟為取檢測管，裝載玻片，加纖維素，高壓滅菌冷卻后取出；配培養(yǎng)基，分裝，高壓滅菌冷卻后接種微生物；培養(yǎng)基裝入檢測管；在土壤中設(shè)孔，在孔內(nèi)注滅菌水，檢測管插入土壤孔內(nèi)留置，拔出檢查。方便檢驗(yàn)人員操作，使植株免于掘土切根之患，達(dá)到保護(hù)植物的目的，檢測靈敏度高。用于土壤線蟲的普查和某些植物線蟲病害的調(diào)查，也可以檢測土壤的線蟲為指標(biāo)進(jìn)行環(huán)境評價(jià)。
文檔編號G01N33/48GK1861783SQ200510072408
公開日2006年11月15日 申請日期2005年5月11日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月11日
發(fā)明者潘滄桑, 劉凡, 林競 申請人:廈門大學(xué)