專利名稱：檢測阿維菌素類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測動物組織中阿維菌素類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒及方法。
背景技術(shù)：
阿維菌素類藥物(Avermectins，AVMS)屬于大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，商品化的阿維菌素為八個化學(xué)結(jié)構(gòu)十分相近的化合物中活性最強的兩個同體系的混合物，阿維菌素的二氫還原產(chǎn)物即為依維菌素，為另一種重要的抗寄生蟲藥。
阿維菌素對絕大多數(shù)有重要經(jīng)濟(jì)價值的寄生線蟲和節(jié)肢動物均有很強的抑殺作用，其殺蟲活性和殺蟲譜都稱劃時代的，且作用機(jī)制獨特，使用方便，被譽為近十幾年來抗寄生蟲藥物研究的重大突破。目前，阿維菌素類藥物開始大規(guī)模的生產(chǎn)和推廣應(yīng)用。
但阿維菌素類藥物的過量使用使其在動物源性食品中高殘留，使人體產(chǎn)生抗藥性，給人體造成一定的危害，因此我國已限量使用。2002年12月我國農(nóng)業(yè)部公告第235號文規(guī)定在所用食品牛的脂肪、肝中的最高殘留量為100μg/kg，腎的最高殘留量為50μg/kg；所用食品羊的肌肉、肝的最高殘留限量為25μg/kg，脂肪的最高殘留限量為50μg/kg，腎的最高殘留限量為20μg/kg，并將檢測獸藥中阿維菌素類藥物的殘留量列為殘留監(jiān)控重點。
目前，檢測阿維菌素類藥物殘留量的方法主要有薄層色譜法(TLC)，氣相色譜法(GC)，高效液相色譜法(HPLC)，氣-質(zhì)聯(lián)機(jī)(GC/MS)，液-質(zhì)聯(lián)機(jī)(HPLC/MS)，毛細(xì)管電泳(CE)等。用上述方法檢測存在著儀器設(shè)備復(fù)雜、樣本前處理和測定操作煩瑣的缺陷，不適合現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本篩查，而且費用高昂，使其推廣使用受到限制。

發(fā)明內(nèi)容
(一)要解決的技術(shù)問題本發(fā)明的目的是提供一種操作簡便、費用低廉、靈敏度高、能夠現(xiàn)場監(jiān)控且適合大量樣本篩查的檢測動物組織(羊、牛、豬肌肉、肝臟等)中阿維菌素類藥物殘留的酶聯(lián)免疫試劑盒及方法。
(二)技術(shù)方案本發(fā)明的檢測原理為在微孔條上預(yù)包被羊抗鼠抗抗體，加入阿維菌素類藥物抗體后，再加入酶標(biāo)記阿維菌素類藥物抗原和樣本或系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液，樣本中殘留的依維菌素與酶標(biāo)抗原競爭抗阿維菌素類藥物抗體，用顯色液顯色，樣本吸光值與依維菌素的含量呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)的依維菌素的殘留含量。同時根據(jù)酶標(biāo)板上的顏色的深淺，與系列濃度的依維菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液顏色的比較可判斷樣品中依維菌素殘留量的濃度范圍，根據(jù)依維菌素殘留量利用交叉反應(yīng)計算出樣本中其它阿維菌素類藥物的殘留量。
本發(fā)明中所指的阿維菌素類藥物包括阿維菌素、依維菌素、埃比菌素三種藥物。
本發(fā)明提供了一種用于檢測阿維菌素類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒，它含有(1)包被羊抗鼠抗抗體的酶標(biāo)板；(2)酶標(biāo)抗原；(3)阿維菌素類藥物抗體；(4)依維菌素標(biāo)準(zhǔn)品溶液；(5)底物顯色液；(6)終止液；(7)濃縮洗滌液；(8)濃縮稀釋液。
本發(fā)明所述試劑盒中制備抗體所需免疫原是采用混合酸酐法將阿維菌素類藥物半抗原和人血清白蛋白進(jìn)行偶聯(lián)得到的。用人血清白蛋白作為免疫原載體蛋白的優(yōu)點為人血清白蛋白與被免疫動物之間蛋白關(guān)系較遠(yuǎn)，且結(jié)構(gòu)復(fù)雜，故免疫原性好，并能誘導(dǎo)較強的免疫應(yīng)答，使其產(chǎn)生特異性強的抗體。
本發(fā)明所述試劑盒中羊抗鼠抗抗體是以無病原體山羊作為免疫動物，以鼠源抗體為免疫原進(jìn)行免疫得到的。
本發(fā)明中酶標(biāo)板的制備過程為用包被緩沖液將羊抗鼠抗抗體稀釋成0.1-1μg/ml，每孔加入100μl，37℃溫育2h，再4℃過夜，傾去包被液，用洗滌液洗滌3次，每次30秒，拍干，然后在每孔中加入150-200μl封閉液，37℃溫育1-2h，傾去孔內(nèi)液體拍干，干燥后用鋁膜真空密封保存。
本發(fā)明所述試劑盒中酶標(biāo)抗原是將阿維菌素用二溴丁二酸法和戊二酸酐法合成阿維菌素類藥物半抗原，采用戊二醛法將阿維菌素類藥物半抗原與辣根過氧化物酶或細(xì)菌提取堿性磷酸酯酶偶聯(lián)得到酶標(biāo)記抗原。
本發(fā)明中抗原的合成過程為1.半抗原的合成將阿維菌素用二溴丁二酸法和戊二酸酐法合成阿維菌素類藥物半抗原。
2.免疫原合成將阿維菌素類藥物半抗原與人血清白蛋白(HSA)采用混合酸酐法(氯甲酸異丁酯)進(jìn)行偶聯(lián)得到免疫原。
本發(fā)明抗抗體的制備過程以羊作為免疫動物，以鼠源抗體為免疫原對無病菌體羊進(jìn)行免疫，得到羊抗鼠抗抗體，所述稀釋包被原抗抗體為0.02～0.05mol/L碳酸鹽緩沖液。
本發(fā)明所述試劑盒中顯色劑當(dāng)標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶時底物顯色液A液為過氧化氫或過氧化脲、底物顯色液B液為鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺；當(dāng)標(biāo)記酶為細(xì)菌提取堿性磷酸酯酶時底物顯色液為對硝基磷酸鹽緩沖液。
本發(fā)明所述試劑盒中終止液為1～2mol/L的硫酸、鹽酸或2mol/L氫氧化鈉。
本發(fā)明所述試劑盒中濃縮洗滌液中加入一定量的吐溫20和疊氮化鈉，其作用在于洗滌液中的吐溫20能減少抗體的非特異性吸附，還能對蛋白起到一定的保護(hù)作用，加入疊氮化鈉后，疊氮化鈉在溶液中抑制細(xì)菌的生長，對溶液的穩(wěn)定性起到保護(hù)作用。
本發(fā)明所述試劑盒中濃縮稀釋液為0.1M含有1％酪蛋白的磷酸鹽緩沖液，在濃縮稀釋液中加入一定量的酪蛋白的優(yōu)點為減少蛋白非特異性吸附，增加特異性抗體與酶標(biāo)抗原的結(jié)合率，同時起到保護(hù)蛋白的作用。
本發(fā)明所述試劑盒中標(biāo)準(zhǔn)品為依維菌素藥物溶液，其稀釋液為0.1M含有1％酪蛋白的磷酸鹽緩沖液。
本發(fā)明所述試劑盒中依維菌素系列標(biāo)準(zhǔn)溶液有6瓶，濃度分別為0μg/L、0.5μg/L、1.5μg/L、4.5μg/L、13.5μg/L、40.5μg/L。
本發(fā)明所述試劑盒中阿維菌素類藥物抗體用含有3‰N，N′-二甲基甲酰胺(DMF)的磷酸鹽緩沖液將抗體稀釋液稀釋成蛋白濃度為0.5-5.0μg/L的工作液。
本發(fā)明中單克隆抗體的制備過程為1.動物免疫將免疫原注入到Balb/c小鼠體內(nèi)，免疫劑量為80-100μg/只，使其產(chǎn)生多克隆抗體。
2.細(xì)胞融合和克隆化取免疫Balb/c小鼠脾細(xì)胞，按5-10∶1比例與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，得到單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。
3.細(xì)胞凍存和復(fù)蘇將雜交瘤細(xì)胞用凍存液制成1-5×106個/ml的細(xì)胞懸液，在液氮中長期保存。復(fù)蘇時取出凍存管，立即放入37℃水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)。
4.單克隆抗體的制備與純化將Balb/c小鼠腹腔注入滅菌石蠟油0.4-0.7ml/只，7-14天后腹腔注射雜交瘤細(xì)胞5×105-106個/只，7-10天后采集腹水。用辛酸-飽和硫酸銨法進(jìn)行腹水純化，-20℃保存。
本發(fā)明還提供了一種應(yīng)用上述酶聯(lián)免疫試劑盒檢測阿維菌素類藥物的方法，它包括步驟(1)樣品前處理；(2)用試劑盒進(jìn)行檢測；(3)分析檢測結(jié)果。
本發(fā)明中樣品前處理采用均質(zhì)器均質(zhì)樣本，加入無水甲醇、乙醇或乙腈、丙酮混合，渦動、振蕩，然后離心，取上清液，稀釋，取樣分析。
本發(fā)明中用試劑盒檢測是向酶標(biāo)板微孔中加入阿維菌素類藥物抗體，溫育后洗滌拍干，再加入酶標(biāo)抗原及標(biāo)準(zhǔn)品溶液或樣品溶液，溫育后洗滌拍干，顯色、終止，用酶標(biāo)儀測定吸光度值。
本發(fā)明中檢測結(jié)果分析過程為用所獲得的每個濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度平均值(B)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)溶液(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100％，即百分吸光度值。計算公式為百分吸光度值(％)＝(B/B0)×100％以依維菌素標(biāo)準(zhǔn)品的濃度(μg/L)的半對數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用同樣的辦法計算樣品溶液的百分吸光度值，相對應(yīng)每一個樣品的濃度則可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出依維菌素的殘留量，根據(jù)依維菌素殘留量利用交叉反應(yīng)計算出樣本中其它阿維菌素類藥物的殘留量。
本發(fā)明中檢測結(jié)果的分析也可以采用回歸方程法，計算出樣品溶液濃度。
本發(fā)明中檢測結(jié)果的分析還可以利用計算機(jī)專業(yè)軟件，此法更便于大量樣品的快速分析，整個檢測過程只需1.5小時可以完成，最低檢測限為0.5μg/L。
(三)有益效果本發(fā)明中檢測阿維菌素類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒主要采用間接競爭ELISA方法定性或定量檢測動物組織(牛、羊、豬肌肉、肝臟等)樣品中阿維菌素類藥物的殘留量，樣品前處理過程簡單，能同時檢測大批樣品。
本發(fā)明采用高特異性的阿維菌素類藥物單克隆抗體，主要試劑以工作液形式提供，檢驗方法簡便易行，具有特異性高、靈敏度高、精確度高等特點，將在食品和飼料的阿維菌素類藥物殘留檢測中發(fā)揮重要作用。


圖1阿維菌素類藥物的檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實施例方式
下面結(jié)合具體的實施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明，而不用來限制本發(fā)明的范圍。
實施例1試劑盒組分的制備1.抗原的合成a.半抗原的合成將阿維菌素用二溴丁二酸法和戊二酸酐法合成阿維菌素類藥物半抗原。
b.免疫原合成將阿維菌素類藥物半抗原和人血清白蛋白，采用混合酸酐法進(jìn)行偶聯(lián)得到免疫原。
免疫原的制備過程取阿維菌素類藥物半抗原2g溶于30ml，50％的N，N-二甲基甲酰胺溶液中，再取0.5ml氯甲酸異丁酯溶于5ml無水二唖烷中，加到半抗原溶液中室溫攪拌反應(yīng)4小時，取載體蛋白32g溶于70ml pH9.6碳酸鹽緩沖液中，再將人血清白蛋白滴加到半抗原中4℃攪拌過夜。將反應(yīng)完的人工抗原對0.2M的磷酸鹽緩沖液透析7天，每天換液3～4次。最后將抗原凍干保存。
2.單克隆抗體的制備a.動物免疫將免疫原注入到Balb/c小鼠體內(nèi)，免疫劑量為80μg/只，使其產(chǎn)生多克隆抗體。
b.細(xì)胞融合和克隆化取免疫Balb/c小鼠脾細(xì)胞，按5∶1比例與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，得到單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。
c.細(xì)胞凍存和復(fù)蘇將雜交瘤細(xì)胞用凍存液制成1×106個/ml的細(xì)胞懸液，在液氮中長期保存。復(fù)蘇時取出凍存管，立即放入37℃水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)。
d.單克隆抗體的制備與純化將Balb/c小鼠腹腔注入滅菌石蠟油0.4ml/只，7天后腹腔注射雜交瘤細(xì)胞5×105個/只，7天后采集腹水。用辛酸-飽和硫酸銨法進(jìn)行腹水純化，-20℃保存。
抗抗體的制備過程以羊作為免疫動物，以鼠源抗體為免疫原對無病原體羊進(jìn)行免疫，得到羊抗鼠抗抗體。
3.酶標(biāo)板的制備用包被緩沖液將羊抗鼠抗抗體稀釋成0.1μg/ml，每孔加入100μl，37℃溫育2h，4℃過夜，傾去包被液，用洗滌液洗滌3次，每次30秒，拍干，然后在每孔中加入150μl封閉液，37℃溫育1h，傾去孔內(nèi)液體，拍干，干燥后用鋁膜真空密封保存。
實施例2檢測阿維菌素類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒的組建組建檢測阿維菌素類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒，使其包含下述組分(1)包被羊抗鼠抗抗體的酶標(biāo)板；(2)用辣根過氧化物酶標(biāo)記的阿維菌素類藥物抗原；(3)蛋白濃度為0.5μg/L的阿維菌素類藥物抗體；(4)依維菌素標(biāo)準(zhǔn)品溶液6瓶，濃度分別為0μg/L、0.5μg/L、1.5μg/L、4.5μg/L、13.5μg/L、40.5μg/L；(5)底物顯色液由A液和B液組成，底物顯色液A液為過氧化脲，底物顯色液B液為四甲基聯(lián)苯胺；(6)終止液為2mol/L鹽酸；
(7)濃縮洗滌液為含有0.01M～0.05M磷酸鹽和1‰疊氮化鈉(NaN3)的緩沖液；(8)濃縮稀釋液為0.1M含有1％酪蛋白的磷酸鹽緩沖液。
實施例3檢測阿維菌素類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒的組建組建檢測阿維菌素類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒，使其包含下述組分(1)包被羊抗鼠抗抗體的酶標(biāo)板；(2)用細(xì)菌提取堿性磷酸酶標(biāo)記的阿維菌素抗原；(3)蛋白濃度為5.0μg/L的阿維菌素抗體；(4)依維菌素標(biāo)準(zhǔn)品溶液6瓶，濃度分別為0μg/L、0.5μg/L、1.5μg/L、4.5μg/L、13.5μg/L、40.5μg/L；(5)底物顯色液為對硝基磷酸鹽緩沖液；(6)終止液為2mol/L氫氧化鈉；(7)濃縮洗滌液為含有0.01M～0.05M磷酸鹽和1‰疊氮化鈉(NaN3)的緩沖液；(8)濃縮稀釋液為0.1M含有1％酪蛋白的磷酸鹽緩沖液。
實施例4樣品中阿維菌素類藥物殘留的檢測1.樣品前處理用均質(zhì)器均質(zhì)樣本，稱取5g樣本于50ml離心管中，加入10ml無水甲醇混合，渦動1min后于振蕩器上振蕩10min，接著3000rpm、15℃離心10min，取上清液20μl，用復(fù)溶液稀釋10倍，取20μl進(jìn)行分析。
2.用試劑盒檢測向羊抗鼠抗抗體包被的酶標(biāo)板微孔中加入阿維菌素類藥物抗體工作液100μl，用蓋板膜封板，37℃恒溫箱中反應(yīng)30min，倒出孔中液體，每孔加入250μl洗滌液，30秒后倒出孔中液體，如此重復(fù)操作共洗板5次，用吸水紙拍干。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的阿維菌素類藥物工作液50μl和依維菌素系列標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液50μl，重復(fù)洗滌步驟，每孔加入底物顯色液A液過氧化脲，底物顯色液B液四甲基聯(lián)苯胺(TMB)，輕輕振蕩混勻，37℃恒溫箱避光顯色15min，每孔加入2mol/L終止液鹽酸50μl，輕輕振蕩混勻，用酶標(biāo)儀，測定每孔吸光度值。
3.檢測結(jié)果分析用所獲得的每個濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度平均值(B)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)溶液(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100％，得到百分吸光度值。以依維菌素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/L)的半對數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用同樣的辦法計算樣品溶液的百分吸光度值，相對應(yīng)每一個樣品的濃度，則可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出依維菌素的殘留量，根據(jù)依維菌素殘留量利用交叉反應(yīng)計算出樣本中其它阿維菌素類藥物的殘留量。
實驗例1標(biāo)準(zhǔn)品精密度試驗分別從三個不同的時間段制備的酶標(biāo)板中各抽出一批酶標(biāo)板，每批各抽取10個試劑盒，每板各抽出20個微孔，測定4.5μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值，計算變異系數(shù)。
表1標(biāo)準(zhǔn)可重復(fù)性試驗(CV％)

通過上述試驗結(jié)果可以得出，每批試劑盒各10次標(biāo)準(zhǔn)品變異系數(shù)在3.9％～9.4％之間，符合精密度小于或等于20％的規(guī)定。
實驗例2樣本精密度和準(zhǔn)確度試驗a.樣品精密度試驗取伊維菌素標(biāo)樣，添加到樣品中，分別取三個不同批次的試劑盒各三個，每個濃度重復(fù)5次，分別計算變異系數(shù)，結(jié)果見表。
表2牛肉樣本的精密度試驗

表3牛肝樣本的精密度試驗


結(jié)果表明牛肉樣品的變異系數(shù)均小于20％，牛肝樣品的變異系數(shù)均小于20％，符合了變異系數(shù)小于35％的規(guī)定。
b.樣本準(zhǔn)確度試驗取兩個濃度的依維菌素標(biāo)樣，對樣品進(jìn)行添加回收試驗，每個濃度做4個平行，分別計算回收率。
表4準(zhǔn)確度試驗

結(jié)果表明牛肉、牛肝樣本的添加回收率為68.1％～108.4％實驗例3交叉反應(yīng)率試驗選擇與阿維菌素類藥物有類似結(jié)構(gòu)和類似功能的3種阿維菌素類藥物測定交叉反應(yīng)率。通各種藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線分別得到其50％抑制濃度。用下式計算試劑盒對其它藥物的交叉反應(yīng)率。交叉反應(yīng)越大，那么此試劑盒對阿維菌素類藥物的檢測的特異性就越好。
交叉反應(yīng)率(％)＝(引起50％抑制依維菌素的濃度/引起50％抑制的類似物濃度)×100％表5試劑盒的特異性

實驗例4試劑盒保存條件為2-8℃，經(jīng)過6個月的測定，試劑盒的最大吸光度值(零標(biāo)準(zhǔn))、50％抑制濃度、阿維菌素類藥物添加實際測定值均在正常范圍之內(nèi)。
考慮在運輸和使用過程中，會有非正常保存條件出現(xiàn)，將試劑盒在37℃保存的條件下放置6天，進(jìn)行加速老化實驗，結(jié)果表明該試劑盒各項指標(biāo)完全符合要求。
考慮到試劑盒冷凍情況發(fā)生，將試劑盒放入-20℃冰箱冷凍5天，測定結(jié)果也表明試劑盒各項指標(biāo)完全正常。從以上結(jié)果可得出試劑盒可以在2-8℃保存6個月以上。
權(quán)利要求
1.一種檢測阿維菌素類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于它含有(1)包被羊抗鼠抗抗體的酶標(biāo)板；(2)酶標(biāo)抗原；(3)阿維菌素類藥物抗體；(4)依維菌素標(biāo)準(zhǔn)品溶液；(5)底物顯色液；(6)終止液；(7)濃縮洗滌液；(8)濃縮稀釋液。
2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于酶標(biāo)板中包被的羊抗鼠抗抗體是將鼠源抗體對無病原體羊進(jìn)行免疫得到的，所用包被緩沖液為0.02～0.05mol/L碳酸鹽緩沖液，所用的封閉液為含有1％小牛血清、1‰疊氮化鈉和2％酪蛋白的溶液。
3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于酶標(biāo)抗原是通過將阿維菌素用二溴丁二酸法和戊二酸酐法合成阿維菌素類藥物半抗原，再將阿維菌素類藥物半抗原和辣根過氧化物酶或細(xì)菌提取堿性磷酸酯酶采用戊二醛法進(jìn)行偶聯(lián)得到的。
4.如權(quán)利要求1-3之任一所述的試劑盒，其特征在于當(dāng)標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶時，底物顯色液A液為過氧化氫或過氧化脲、底物顯色液B液為鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺、終止液為1～2mol/L的硫酸或鹽酸緩沖液；當(dāng)標(biāo)記酶為細(xì)菌提取堿性磷酸酯酶時，底物顯色液為對硝基磷酸鹽緩沖液、終止液為2mol/L的氫氧化鈉；濃縮洗滌液為含有0.01M～0.05M磷酸鹽和1‰疊氮化鈉的緩沖液；濃縮稀釋液為0.1M含有1％酪蛋白的磷酸鹽緩沖液。
5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于制備抗體所需要的免疫原采用混合酸酐法將阿維菌素類藥物半抗原與人血清白蛋白偶聯(lián)得到，抗體稀釋液為含有3‰ N，N′-二甲基甲酰胺的磷酸鹽緩沖液。
6.如權(quán)利要求1或5所述的試劑盒，其特征在于依維菌素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度分別為0μg/L、0.5μg/L、1.5μg/L、4.5μg/L、13.5μg/L、40.5μg/L。
7.一種檢測樣品中阿維菌素類藥物殘留的方法，包括步驟(1)樣品前處理；(2)用權(quán)利要求1-6之任一所述的試劑盒進(jìn)行檢測；(3)分析檢測結(jié)果。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種檢測阿維菌素類藥物的酶聯(lián)免疫試劑盒，它含有包被羊抗鼠抗抗體的酶標(biāo)板，酶標(biāo)抗原，阿維菌素類藥物抗體，依維菌素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，底物顯色液，終止液，濃縮洗滌液，濃縮稀釋液。本發(fā)明還公開了一種應(yīng)用上述酶聯(lián)免疫試劑盒檢測阿維菌素類藥物的方法，它包括步驟首先進(jìn)行樣品前處理，然后用試劑盒進(jìn)行檢測，最后分析檢測結(jié)果。本發(fā)明提供的檢測動物組織中阿維菌素類藥物殘留的酶聯(lián)免疫試劑盒及檢測方法操作簡便、費用低廉、靈敏度高、能夠現(xiàn)場監(jiān)控且適合大量樣本篩查。
文檔編號G01N33/52GK1766625SQ200510086770
公開日2006年5月3日 申請日期2005年11月3日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月3日
發(fā)明者沈建忠, 何方洋, 史為民, 丁雙陽, 張素霞, 萬宇平, 馮才偉, 吳小平, 馮才茂, 汪善良, 李軍, 趙正苗, 張照亮, 羅曉琴, 孫倩 申請人:北京望爾生物技術(shù)有限公司