專利名稱：一種丹參酮ⅱa磺酸鈉的高效液相分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種丹參酮IIA磺酸鈉的高效液相分析方法，對該藥物的有關(guān)物質(zhì)控制及藥物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高具有很好的作用，屬于醫(yī)藥
背景技術(shù)：
丹參為唇型科植物丹參的干燥根及根莖，具有祛瘀止血、活血調(diào)經(jīng)、清心除煩的功效，活血化瘀的常用中藥，其有效成分為脂溶性的二萜化合物和水溶性的酚酸類化合物。中醫(yī)有“一味丹參飲，功同四物湯”之說，其功效可見一斑。丹參是廣泛應(yīng)用于心血管等中藥復(fù)方中，以丹參為主要的中藥制劑開發(fā)也相當(dāng)活躍。
脂溶性丹參酮中主要有丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I、去氫丹參酮I等成分。上世紀(jì)60年代，Kakisawa確定了丹參酮IIA的結(jié)構(gòu)式；隨后，Baidlre等人合成了丹參酮IIA。由于丹參酮IIA腸道吸收差，臨床起效慢，故植物化學(xué)家錢名坤等人半合成了丹參酮IIA磺酸鈉，并由上海制藥一廠、中藥三廠等制備成注射液。注射液推向市場后，其確切的療效得到廣大醫(yī)患者的歡迎。
丹參酮IIA磺酸鈉原料及丹參酮IIA磺酸鈉注射液上市后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較為粗劣，有效控制有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的方法低下。
丹參酮IIA磺酸鈉有關(guān)物質(zhì)的檢查方法為薄層層析，原文如下取本品，加水制成每1ml中含有5mg的溶液，作為供試品溶液；另取丹參酮IIA對照品，加氯仿制成每1ml含有0.2mg的溶液，作為對照品溶液(1)；取丹參酮I磺酸鈉對照品，加水制成每1ml含有0.2mg的溶液作為對照品溶液(2)；照薄層色譜法(中國藥典2000年版二部附錄VB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(3∶1)為展開劑，展開后，晾干，置熒光燈下檢視，供試品溶液除紅色主斑點(diǎn)外，如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對照品溶液(1)、(2)比較均不得更深。
原料含量測定，采用紫外檢測，原文如下
取本品約25mg，精密稱定，置250ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IVA)，在波長271nm處測定吸收度，按C19H17NaO6S的吸收度(Et％ICm)為767計(jì)算，即得。
丹參酮IIA磺酸鈉注射液有關(guān)物質(zhì)不控制，含量測定也采用紫外測定法，原文如下精密稱取本品適量，用水稀釋制成每1ml中含丹參酮IIA磺酸鈉5μg的溶液，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄IVA)，在波長271nm處測定吸收度，按C19H17NaO6S的吸收系數(shù)(Et％ICm)為767計(jì)算，即得。
薄層分析法控制藥品的有關(guān)物質(zhì)，肉眼評判顏色深淺，精密度和靈敏度很差，而且檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)丹參酮IIA磺酸鈉和丹參酮I磺酸鈉薄層上分離很差。含量測定原料和制劑均采用紫外測定法，雜質(zhì)丹參酮I磺酸鈉和丹參酮IIA和主藥丹參酮IIA磺酸鈉結(jié)構(gòu)相近，其紫外吸收基團(tuán)完全一樣，專屬性差，靈敏度低，精密度更無從談起。
現(xiàn)在隨著分析技術(shù)和設(shè)備的進(jìn)步，丹參酮IIA磺酸鈉原料銷售商大都用高效液相分析方法控制含量，采用該含量測定的高效液相分析條件，丹參酮IIA不出峰，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)丹參酮IIA也有并應(yīng)該加于控制，所以簡單的采用該含量測定的高效液相分析條件不能有效的分析本品中所有的有關(guān)物質(zhì)，應(yīng)該采用其他辦法。高效液相分析法對本品有關(guān)物質(zhì)的控制也未見有任何報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是提供一種丹參酮IIA磺酸鈉的高效液相分析方法，該方法體現(xiàn)是用一種流動相梯度洗脫的高效液相條件能更有效、科學(xué)、便捷的控制丹參酮IIA磺酸鈉藥物原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)，為本藥物有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供了一個有效的方法。
本發(fā)明的高效液相條件為分析柱反相色譜柱，C18柱或C8柱等。
檢測波長271nm或228nm。
流速0.5ml/min-1.5ml/min本發(fā)明的高效液相流動相條件有機(jī)相可以是甲醇或乙腈，水相可以是磷酸鹽緩沖液或離子對試液；
水相磷酸緩沖鹽為1～100mmol/L的磷酸鹽溶液、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀，磷酸二氫銨等磷酸鹽中的一種或幾種，磷酸調(diào)PH值至2.5～4.0。
水相的離子對試劑溶液為1～100mmol/L的離子對試劑四丁基溴化銨、四甲基溴化銨。
梯度洗脫在0分鐘～8至20分鐘時，有機(jī)相和水相比例為0～80∶20～40，在8至20分鐘～20至40分鐘時，有機(jī)相和水相為為80～95∶5～20。
采用該液相色譜條件，能有效的分析出丹參酮IIA磺酸鈉原料及制劑中的有關(guān)物質(zhì)，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中丹參酮IIA、丹參酮I磺酸鈉等有關(guān)物質(zhì)均能在一張圖譜上分析出，做到同時檢出，所以該方法能更有效、科學(xué)、便捷的控制丹參酮IIA磺酸鈉原料及制劑的質(zhì)量。
具體實(shí)施例實(shí)施例1 丹參酮IIA磺酸鈉原料及制劑的液相分析。
取本品原料或制劑適量，流動相配成0.5mg/ml的溶液，供測試。
分析柱反相色譜柱，C18柱或C8柱等。
檢測波長271nm或228nm。
流速0.5ml/min-1.5ml/min高效液相流動相條件有機(jī)相可以是甲醇或乙腈，水相可以是磷酸鹽緩沖液或離子對試液；水相磷酸緩沖鹽為1～100mmol/L的磷酸鹽溶液、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀，磷酸二氫銨等磷酸鹽中的一種或幾種，磷酸調(diào)PH值至2.5～4.0。
水相的離子對試劑溶液為1～100mmol/L的離子對試劑四丁基溴化銨、四甲基溴化銨。
梯度洗脫在0分鐘～8至20分鐘時，有機(jī)相和水相比例為0～80∶20～40，在8至20分鐘～20至40分鐘時，有機(jī)相和水相為為80～95∶5～20。
結(jié)果顯示，丹參酮IIA磺酸鈉原料及制劑原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中丹參酮IIA、丹參酮I磺酸鈉等有關(guān)物質(zhì)均能在一張圖譜上分析出。
實(shí)施例2 原料丹參酮IIA磺酸鈉有關(guān)物質(zhì)專屬性實(shí)驗(yàn)。
以流動相甲醇20mmol/l磷酸二氫鈉溶液PH值3.5(70∶30)為溶劑，分別配制下列溶液①取相當(dāng)于約5mg的丹參酮IIA磺酸鈉原料，加1mol/L鹽酸溶液1ml，放置2-3小時，加流動相稀釋至10ml；②取相當(dāng)于約5mg的丹參酮IIA磺酸鈉原料，加1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，放置2～3小時，加流動相稀釋至10ml；③取丹參酮IIA磺酸鈉原料約5mg，加3％過氧化氫溶液1ml，放置2-3小時，加流動相稀釋至10ml；④取丹參酮IIA磺酸鈉原料配制相當(dāng)于0.5mg/ml的丹參酮IIA磺酸鈉溶液在100℃放置1.5小時；⑤取本品配制相當(dāng)于0.5mg/ml的丹參酮IIA磺酸鈉溶液在3000Lx光照條件下照射2小時；⑥取本品配制相當(dāng)于0.5mg/ml的丹參酮IIA磺酸鈉溶液；取上述過濾后溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，檢測波長271nm，流速1ml/min，梯度洗脫，0～12分鐘甲醇20mmol/l磷酸二氫鈉溶液PH值3.5(70∶30)，12分鐘～15分鐘流動相從70∶30變?yōu)?5∶15，15分鐘～40分鐘甲醇20mmol/l磷酸二氫鈉溶液PH值3.5為85∶15，記錄色譜圖，并考察分離度。結(jié)果該色譜系統(tǒng)可將中的雜質(zhì)和酸、堿、氧化、熱、光、條件下的主要降解產(chǎn)物較好地分離，空白輔料沒有干擾，在上述各圖中丹參酮IIA磺酸鈉制劑峰與相鄰峰的分離度均大于2.0，丹參酮IIA也在32分鐘左右出峰，表明該色譜系統(tǒng)的靈敏度、專屬性良好。
實(shí)施例3 丹參酮IIA磺酸鈉原料有關(guān)物質(zhì)的測定。
取三批丹參酮IIA磺酸鈉原料，生產(chǎn)廠家上海紫源制藥有限公司，精密稱取適量(約相當(dāng)于5mg)，置10ml量瓶中，加流動相約10ml，超聲20分鐘使丹參酮IIA磺酸鈉原料溶解，再加流動相至刻度，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液適量，用流動相稀釋成每1ml含丹參酮IIA磺酸鈉0.5mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，作為對照溶液；取對照溶液10μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分峰的高度約為滿量程的20％。精密量取供試品溶液和對照溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，檢測波長271nm，流速1ml/min，梯度洗脫，0～12分鐘甲醇20mmol/l磷酸二氫鈉溶液PH值3.5(70∶30)，12分鐘～15分鐘流動相從70∶30變?yōu)?5∶15，15分鐘～40分鐘甲醇20mmol/l磷酸二氫鈉溶液PH值3.5為85∶15，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。結(jié)果如下

實(shí)施例4 丹參酮IIA磺酸鈉注射液有關(guān)物質(zhì)專屬性實(shí)驗(yàn)。
以流動相甲醇20mmol/l磷酸二氫鈉溶液PH值3.5(70∶30)為溶劑，分別配制下列溶液①取相當(dāng)于約5mg的本品，加1mol/L鹽酸溶液1ml，放置2-3小時，加流動相稀釋至10ml；②取相當(dāng)于約5mg的本品，加1mol/L氫氧化鈉溶液1ml，放置2-3小時，加流動相稀釋至10ml；③取相當(dāng)于丹參酮IIA磺酸鈉制劑約5mg，加3％過氧化氫溶液1ml，放置2-3小時，加流動相稀釋至10ml；④取本品配制相當(dāng)于0.5mg/ml的丹參酮IIA磺酸鈉溶液在100℃放置1.5小時；⑤取本品配制相當(dāng)于0.5mg/ml的丹參酮IIA磺酸鈉溶液在3000Lx光照條件下照射2小時；⑥取本品配制相當(dāng)于0.5mg/ml的丹參酮IIA磺酸鈉溶液；取上述過濾后溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，檢測波長271nm，流速1ml/min，梯度洗脫，0～12分鐘甲醇20mmol/l磷酸二氫鈉溶液PH值3.5(70∶30)，12分鐘～15分鐘流動相從70∶30變?yōu)?5∶15，15分鐘～40分鐘甲醇20mmol/l磷酸二氫鈉溶液PH值3.5為85∶15，記錄色譜圖，并考察分離度。結(jié)果該色譜系統(tǒng)可將中的雜質(zhì)和酸、堿、氧化、熱、光、條件下的主要降解產(chǎn)物較好地分離，空白輔料沒有干擾，在上述各圖中丹參酮IIA磺酸鈉制劑峰與相鄰峰的分離度均大于2.0，丹參酮IIA也在32分鐘左右出峰，表明該色譜系統(tǒng)的靈敏度、專屬性良好。
實(shí)施例5 丹參酮IIA磺酸鈉注射液有關(guān)物質(zhì)的測定。
取三批丹參酮IIA磺酸鈉注射液，生產(chǎn)廠家上海第一生化藥業(yè)有限公司，精密量取適量(約相當(dāng)于5mg)，置10ml量瓶中，加流動相約10ml，超聲20分鐘使丹參酮IIA磺酸鈉原料溶解，再加流動相至刻度，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液適量，用流動相稀釋成每1ml含丹參酮IIA磺酸鈉0.5mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，作為對照溶液；取對照溶液10μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分峰的高度約為滿量程的20％。精密量取供試品溶液和對照溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，檢測波長271nm，流速1ml/min，梯度洗脫，0～12分鐘甲醇20mmol/l磷酸二氫鈉溶液PH值3.5(70∶30)，12分鐘～15分鐘流動相從70∶30變?yōu)?5∶15，15分鐘～40分鐘甲醇20mmol/l磷酸二氫鈉溶液PH值3.5為85∶15，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。結(jié)果如下

權(quán)利要求
1.一種丹參酮IIA磺酸鈉的高效液相分析方法，其特征是該方法采用高效液相色譜儀按反相色譜法進(jìn)行梯度洗脫，在0分鐘～8至20分鐘時，有機(jī)相和水相比例為0～80∶20～40，在8至20分鐘～20至40分鐘時，有機(jī)相和水相為例為80～95∶5～20。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相分析方法，其特征是有機(jī)相是甲醇或乙腈，水相是磷酸鹽緩沖溶液或離子對試劑溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相分析方法，其特征是色譜柱為反相色譜柱；檢測波長是271nm或228nm；流速是0.5ml/min～1.5ml/min。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高效液相分析方法，特征是水相磷酸緩沖鹽溶液為1～100mmol/L的磷酸鹽溶液、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀，磷酸二氫銨等磷酸鹽中的一種或幾種，磷酸調(diào)PH值至2.5～4.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高效液相分析方法，特征是水相的離子對試劑溶液為1～100mmol/L的離子對試劑四丁基溴化銨、四甲基溴化銨。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的丹參酮IIA磺酸鈉高效液相分析方法，特征是用此分析方法可使丹參酮IIA磺酸鈉中的有關(guān)物質(zhì)丹參酮IIA、丹參酮I磺酸鈉等同時檢出。
全文摘要
本發(fā)明為一種丹參酮ⅡA磺酸鈉的高效液相分析方法，該方法采用反相色譜梯度洗脫法，在0分鐘～8至20分鐘時，有機(jī)相和水相比例為0～80∶20～40，在8至20分鐘～20至40分鐘時，有機(jī)相和水相為80～95∶5～20。本方法可把丹參酮ⅡA磺酸鈉中的丹參酮ⅡA、丹參酮Ⅰ磺酸鈉及其它有關(guān)物質(zhì)同時檢出，解決了一般液相分析的不足，能全面有效的控制丹參酮ⅡA磺酸鈉原料及制劑的質(zhì)量，快速、便捷的檢測出丹參酮ⅡA磺酸鈉原料及制劑的有關(guān)物質(zhì)。
文檔編號G01N30/28GK1952656SQ20051009484
公開日2007年4月25日 申請日期2005年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月17日
發(fā)明者秦引林, 何龍其 申請人:秦引林