專利名稱：評價魚產(chǎn)品的鮮度的方法
相關(guān)申請該專利申請要求提交于2004年3月12日的臨時專利申請?zhí)?0/552,778和提交于2004年3月15日的臨時專利申請?zhí)?0/553,059的優(yōu)先權(quán)，將其全部公開內(nèi)容特此清楚地并入作為參考。
背景技術(shù)：
1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及檢測和評價基于蛋白質(zhì)的產(chǎn)品的鮮度或降解或酸敗的程度，作為基于蛋白質(zhì)的產(chǎn)品的質(zhì)量程度的指示。
2.相關(guān)領(lǐng)域的描述評價魚的鮮度或酸敗程度的傳統(tǒng)方法包括感覺評價(外觀，觸摸和嗅覺)。該方法是主觀的并且會產(chǎn)生爭論。
美國專利號5,744,321公開了快速評價魚，諸如鱈魚(codfish)、鲇魚(catfish)和美洲擬鰈(winter flounder)的細菌降解程度的比色方法，其通過將魚肉與細菌營養(yǎng)肉湯混合，并且將提取物與水溶性色素原諸如離子化的四唑染料鹽反應(yīng)來進行，所述離子化的四唑染料鹽與魚細菌進行還原反應(yīng)來產(chǎn)生水不溶性的甲染料或著色的反應(yīng)產(chǎn)物。接下來，將表面活性劑加入以輔助溶解形成的甲染料，并且產(chǎn)生溶菌作用和終止反應(yīng)，將脂族醇溶劑加入溶解形成的甲染料或著色的反應(yīng)產(chǎn)物，并防止隨時間進一步的分解和暗色化。溶解的反應(yīng)產(chǎn)物具有一定顏色，所述顏色根據(jù)魚樣品的細菌種群而強化并且可以通過與低、中等和高細菌種群的標(biāo)準顏色圖指示的視覺比較來比色地進行評價。該方法是復(fù)雜的因為其包括相當(dāng)多的步驟和試劑。
因此，對于魚供應(yīng)者、飯店、招待公司和食品服務(wù)公司等，仍舊存在提供精確、方便和客觀的評價魚產(chǎn)品的鮮度的方法的需要。
發(fā)明概述本發(fā)明提供評價魚產(chǎn)品的鮮度的方法，其包括從魚產(chǎn)品切割下小量樣品；加入有效量染色試劑到樣品上，所述染色試劑包括細胞-滲入染料和細胞-不滲透的熒光染料的至少一種；將與染色試劑一起加入的樣品溫育達預(yù)定的持續(xù)時間；和根據(jù)下列參數(shù)的至少其中之一來確定魚產(chǎn)品的鮮度從被溫育的樣品發(fā)射出的第一熒光的強度，從被溫育的樣品中發(fā)射的第二熒光的強度，從樣品的頂部開始到檢測第一熒光的樣品的最遠點的第一距離，和從樣品的頂部開始到檢測第二熒光的樣品的最遠點的第二距離。
在存在細胞內(nèi)酯酶活性的情況下，將細胞-滲透性染料轉(zhuǎn)化為發(fā)生第一熒光的化合物。細胞-不滲透熒光染料不穿過活細胞的完整的膜，但是可以滲透細胞被損壞的膜并且發(fā)射第二熒光。當(dāng)染色試劑包括細胞-滲透性染料和細胞-不滲透性染料兩者時，第一熒光應(yīng)與第二熒光區(qū)分開，即，它們發(fā)射不同的熒光顏色。細胞滲透性染料的實例包括鈣熒光素AM和C12-刃天青。細胞-不滲透染料的實例包括EthD-1同型二聚體，Sytox綠色染料，和YoYo-1染料。
此外，可以將細胞-滲透性染料諸如鈣熒光素AM和C12-刃天青與錐蟲藍染料組合使用。錐蟲藍染料染色取決于死細胞的膜完整性的損失。錐蟲藍染料在正常情況下，被完整的細胞膜排除在外。通常，當(dāng)細胞死亡時，它們對于錐蟲藍染料是可滲透的。因此，錐蟲藍染料可以結(jié)合細胞-滲透性染料來猝滅死細胞的熒光。加入錐蟲藍后的熒光的減少可以作為死細胞的測量。
按照本發(fā)明的一個實施方案，測定的步驟可以通過將至少一個參數(shù)與在鮮度和至少一個參數(shù)之間的預(yù)先建立的相關(guān)性進行比較來進行。
第一熒光和第二熒光的強度可以由數(shù)字裝置進行量化，并且預(yù)先建立的相關(guān)性可以根據(jù)第一熒光和第二熒光的量化的強度來建立。
按照本發(fā)明的另一個實施方案，第一熒光和第二熒光可以由光學(xué)裝置記錄在圖像中，并且在鮮度和第一熒光和第二熒光的至少一個的強度之間的預(yù)先建立的相關(guān)性可以在標(biāo)準顏色圖中進行描述。
優(yōu)選地，染色試劑包括有效量的鈣熒光素AM和有效量的EthD-1同型二聚體。接著，第一產(chǎn)物的鮮度可以根據(jù)從樣品中發(fā)射的紅色(EthD-1同型二聚體)熒光和綠色(鈣熒光素)熒光來進行測定。
按照本發(fā)明的又一個實施方案，在染色試劑中包含的細胞一不滲透性熒光染料是錐蟲藍染料。接著，第一產(chǎn)物的鮮度可以根據(jù)在樣品中出現(xiàn)的藍色來確定。優(yōu)選地，鮮度根據(jù)錐蟲藍染料透入樣品的距離來進行確定，其中更新鮮的魚對應(yīng)更短的滲透距離。
通過所考慮的隨后的詳細描述結(jié)合附圖，本發(fā)明的其它目的和特點將變得顯而易見。然而，要理解的是，圖僅出于舉例說明的目的進行設(shè)計，而不被視為對本發(fā)明的限制，本發(fā)明的限制應(yīng)該參考后附的權(quán)利要求。還應(yīng)該理解的是，圖不一定按規(guī)定比例來繪出，除非另外指出，它們僅傾向于概念性地舉例說明本文所述的結(jié)構(gòu)和方法。
附圖簡述在附圖中

圖1顯示在樣品中所用的取樣管。
圖2顯示通過使用活著的/死亡的熒光測定，于1℃并且在不同的貯存日收集的鮭魚(salmon)樣品的熒光圖像。
圖3顯示通過使用活著的/死亡的熒光測定，在1℃貯存并且在第1天和第8天收集的鮭魚樣品的熒光圖像。
圖4舉例說明這樣的相關(guān)性，所述相關(guān)性為鮭魚樣品的鮮度和從樣品的頂部開始到檢測綠色熒光的樣品中的最遠點的距離與從樣品的頂部開始到檢測紅色熒光的樣品中的最遠點的距離的比率之間的相關(guān)性。
圖5顯示從活的虹鱒魚(raibow trout)收集的樣品的熒光圖像。
圖6顯示從虹鱒魚產(chǎn)品收集的樣品的熒光圖像，所述虹鱒魚產(chǎn)品在4℃貯存了達7天。
圖7舉例說明這樣的相關(guān)性，所述相關(guān)性為虹鱒魚樣品的鮮度和從樣品的頂部開始到檢測綠色熒光的樣品中的最遠點的距離與從樣品的頂部開始到檢測紅色熒光的樣品中的最遠點的距離的比率之間的相關(guān)性。
圖8舉例說明這樣的相關(guān)性，所述相關(guān)性為多佛鰨魚(Dover sole)樣品的鮮度和從樣品的頂部開始到檢測綠色熒光的樣品中的最遠點的距離與從樣品的頂部開始到檢測紅色熒光的樣品中的最遠點的距離的比率之間的相關(guān)性。
圖9顯示通過使用活著的/死亡的熒光測定，多佛鰨魚樣品從染料添加到16分鐘的時間-推移圖像，所述多佛鰨魚樣品在1℃貯存了達5天。
圖10顯示鮭魚樣品的熒光圖像，所述鮭魚樣品在1℃貯存并且在貯存的第1天和第5天收集。
圖11舉例說明通過使用錐蟲藍測定，錐蟲藍染色染料滲透到鮭魚樣品中的滲透深度，所述鮭魚樣品貯存于1℃，并且在貯存的第1天，第4天，和第7天進行收集。
圖12舉例說明錐蟲藍染料滲透到鮭魚樣品中的距離，所述鮭魚樣品在1℃從貯存的第1天到第8天進行收。
本發(fā)明優(yōu)選實施方案的詳述實驗材料和方法鮭魚片將兩個包裝的在良好狀態(tài)下的冷凍鮭魚片切成8個部分。當(dāng)仍在冷凍狀態(tài)時，每個部分是約60克。將四個部分置于持續(xù)溫度為1℃(+/-0.5℃)的冷室中，將其它的四個部分置于維持在4℃的標(biāo)準實驗室電冰箱中。將所有的這些部分貯存在可再密封的袋中以防止當(dāng)不取樣時氧化和脫水。
取樣方法每天收集鮭魚片的樣品并且觀察變化。對于精確的測量，一致的樣品的大小是重要的。制作取樣的工具來從魚鉆出樣品。用在本實驗中的工具是clear Lexan(聚碳酸酯樹脂)管，所述管具有4.8mm的外部直徑，2.1mm的內(nèi)部直徑，和90mm的長度。將管的一端削平以形成切割表面(見圖1)。當(dāng)插入魚產(chǎn)品的肉中時，將部分的肉擠壓到管的底部開口。接著，通過輕輕扭曲和提高，將樣品移動并保持在管中?？梢詫⒕哂?mm外部直徑的施用器用于輕輕敲打樣品并去除任何空氣隙。所述管優(yōu)選地被設(shè)計具有食品安全質(zhì)量并且是在視覺上透明的。使用其它的丙烯酸類或聚碳酸酯材料也可以是適合的。因此，通過這樣的工具獲得的樣品具有約2.1mm×～5到25mm的大小。
該取樣方法具有一些優(yōu)點，包括·小的，可再現(xiàn)的樣品大小·標(biāo)準樣品大小·整潔的標(biāo)記容器·廉價、一次性的無毒工具·牢固·可通過管觀察的樣品染色，溫育可將少量染色溶液加入所述管的頂部開口，并且溫育達適當(dāng)?shù)臅r期，例如約10分鐘。典型地，染色溶液的體積可以在1μl-1ml的范圍內(nèi)。溫育時間可以從1分鐘到1小時。
染色溶液可以是包含鈣熒光素AM和溴乙非啶(ethidium)同型二聚體的溶液，例如由Molecular Probes′活著的/死亡的生存力/細胞毒性試劑盒(L3224)制作的溶液。所述L3224試劑盒包括兩種探針鈣熒光素AM和溴乙非啶同型二聚體-1。鈣熒光素AM是熒光酯酶底物，其被水解為綠色-熒光產(chǎn)物(鈣熒光素)。因此，綠色熒光是具有酯酶活性以及具有完整細胞膜來維持酯酶產(chǎn)物的細胞的指示物。綠色熒光意為基于酯酶活性的某種水平，它們是活著的。溴乙非啶同型二聚體是高-親和性、紅色熒光核酸染色劑，其僅能夠通過死細胞的受損的膜。當(dāng)它們是紅色時，它們是“死的”。鈣熒光素AM的濃度的范圍從0.1到50μM。EthD-1同型二聚體的濃度范圍在0.1到100μM。
活著的/死亡的生存力/細胞毒性測定提供一些優(yōu)點·簡易性。將試劑同時加入樣品中，其接著在融解過程中或緊隨其后溫育3-10分鐘。在分析前不要求任何洗滌步驟。
·特異性和可靠性。綠色熒光細胞是活的；紅色熒光細胞是死亡的。
·變化性。所述活著的/死亡的生存力/細胞毒性測定與黏附性細胞諸如星形膠質(zhì)細胞，非黏附性細胞和某些組織是相容的。結(jié)果可以使用標(biāo)準熒光素長通(longpass)濾色片裝置通過熒光顯微鏡，以及通過流式細胞術(shù)或熒光測定法來進行分析。兩種探針的熒光發(fā)射容易地被分辨且是可區(qū)別的。單一或多個波長的LEDs可以用于提供從360-520nm的激發(fā)光范圍。其它發(fā)光源包括熒光泡，混合的氣體泡，手持UV源，投影燈，和激光器。
·簡單量化。個體細胞的測量僅產(chǎn)生兩個種群；幾乎沒有任何不確定染色的細胞。組織可以在“中期”階段具有染色的混合種群。
染色溶液還可以是錐蟲藍溶液。將錐蟲藍用作測定細胞生存力的比色染料。錐蟲藍溶液的濃度可以在0.1到10mM的范圍內(nèi)。在細胞生物學(xué)實驗中，錐蟲藍是用于區(qū)分活細胞和死細胞的最常用的染色劑。僅死細胞吸收該染料，出現(xiàn)藍色，并還可以出現(xiàn)不對稱。相反地，在未吸收藍色染料的情況下，活的、健康細胞外觀是圓形的，并且是有折射力的。然而，該染料的使用是時間-敏感性的?；罴毎S時間吸收錐蟲藍，并且會影響計數(shù)和生存力結(jié)果。為了防止活細胞吸收該染料而因此呈現(xiàn)為死細胞，可以將用錐蟲藍染色的樣品進行稀釋。例如，錐蟲藍染色的樣品可以通過浸入在0.1M磷酸緩沖液(pH7.4)中的2％戊二醛而進行固定并且貯存以進行后來的觀察。為了使死細胞吸收最小化，取樣優(yōu)選地在5-30分鐘內(nèi)結(jié)束。此外，與細胞蛋白質(zhì)相比，錐蟲藍對于血清蛋白質(zhì)具有更大的親和性。對于具有高血清條件的細胞而言，背景可能太暗。在該情形下，細胞優(yōu)選地分離自組織。
圖像觀察和記錄可以采用反射熒光圖像來確證作為貯存時間和溫度的結(jié)果，對于染色模式發(fā)生的任何變化。
為了量化和/或自動化所述方法，可以使用具有圖像捕獲，貯存，和/或分析功能的成像裝置，諸如CCD或CMOS裝置。這些裝置包括具有數(shù)字照相機的UVP BioDocIt系統(tǒng)；具有遠攝物鏡的Nikon CoolPix 995數(shù)字照相機；用亮場、DIC、相和熒光透鏡裝備的Nikon Eclipse E800照相顯微鏡；藍和綠LED光和CCD檢測系統(tǒng)。
在本研究中，使用4X，0.13 n.a.水平熒光物鏡來觀察樣品。使用CoolCam液冷、三芯色CCD照相機(Cool Camera Company，Decatur，GA30033)來采集數(shù)字圖像，并使用Image Pro Plus 4.5版軟件(MediaCybernetics，Silver Springs，MD 20910)來將其捕獲到Pentium IV 3.0GHz個人電腦中。將數(shù)字圖像貯存用于將來打印并且使用ImageJ或ImageProPlus來進行分析。將Adobe PhotoShop和Micorsoft PowerPoint應(yīng)用用于顯示。
采集數(shù)字圖像從而使量化方法可以來自比較作為細胞存活力或“鮮度”的函數(shù)的染色樣品的顏色。染色樣品的顏色和染色劑向樣品的滲透深度是評價樣品的鮮度的重要標(biāo)準。
結(jié)果活著的/死亡的熒光測定染色溶液包含5.0μM的鈣熒光素AM和10.0μM的EthD-1同型二聚體。其制備自Molecular Probes′LIVE/DEAD存活力/細胞毒性試劑盒(L3224)的試劑。將約10-30μl的染色溶液加到樣品的頂部上(2.1mm×～2-10mm)。樣品的鮮度可以根據(jù)溫育約5-10分鐘后，熒光發(fā)射的紅和綠色的比率的變化來確定。通過在波長490±40nm激發(fā)樣品并且在525±20nm采集來獲得熒光圖像。
圖2和3顯示在相同的溫度(1℃)貯存不同的天數(shù)的鮭魚樣品的測定結(jié)果。在染色劑添加后，如在圖2中顯示的成像需要5分鐘。綠色指示酯酶活性(新鮮)。紅色指示具有受損的膜的細胞的核。染色劑從頂部到底部通過的距離似乎與貯存的天數(shù)相關(guān)。在樣品染色后，如在圖3中顯示的成像需要30分鐘。
下面的表顯示在貯存于1℃并且在24小時間隔取樣的冷凍鮭魚樣品上的熒光鮮度活著的/死亡的測定(5.0μM的鈣熒光素AM和10.0μM的EthD-1同型二聚體-1)的歸納數(shù)據(jù)。圖4顯示在魚產(chǎn)品的鮮度和綠色熒光和紅色熒光的通過的距離之間的比率之間的相關(guān)性。
表1 活著的/死亡的熒光測定的歸納數(shù)據(jù)
圖5-8顯示在相同的溫度上貯存不同天數(shù)的其它魚種類的熒光測定結(jié)果。圖5顯示新鮮虹鱒魚(Oncorhynchus mykiss)樣品的熒光結(jié)果。圖6顯示在4℃貯存達7天的虹鱒魚樣品的熒光結(jié)果。在圖6中，上部圖像反映樣品的綠色和紅色信息；中間的圖像是來自綠色信息的灰度圖像；下面的圖像是來自紅色信息的灰度圖像。圖5和圖6的成像在將染色劑添加到虹鱒魚樣品后，都需要30分鐘。將染色劑加入管的頂部(圖像的左側(cè))的開口。
圖7的圖表根據(jù)虹鱒魚樣品的的測定結(jié)果，所述結(jié)果來自對于在4℃貯存了7天的魚每日采集的3條魚(共12個樣品)。所述樣品在染色劑添加后，成像30分鐘。該圖表舉例說明對于在同一天所采樣品的綠色和紅色熒光通過的距離的平均比率。
圖8顯示多佛鰨魚(Microstomus pacificus)的鮮度與綠色和紅色熒光通過的距離的比率之間的相關(guān)性。與圖8相關(guān)的方法與圖7的相同，除了圖7中的虹鱒魚樣品用多佛鰨魚(Microstomus pacificus)所取代。
如在圖9中所顯示的時間-推移圖像證明染料吸收隨時間變化。所用的樣品是在1℃貯存達5天的多佛鰨魚(Microstomus pacificus)的樣品。
圖10顯示被置于盤中的鮭魚樣品的熒光圖像。
錐蟲藍測量將約10-30μl的錐蟲藍染色試劑(0.5％w/v)加到樣品的頂部上(2.1mm×2～10mm)。測量錐蟲藍染料向樣品滲透的深度。溫育時間是10分鐘。樣品已經(jīng)貯存于1℃并且在室溫進行標(biāo)記。將傳遞(Trasimitted)/反射光用于觀察樣品。
圖11和12顯示鮭魚樣品的鮮度與滲透到樣品中的錐蟲藍染料的距離之間的相關(guān)性。如在圖12中所顯示，在染料的滲透距離與樣品的總長度的比率上，第1天是獨特的，第2天和第3天是相似的，第4天到第8天是相似的。第1天顯著不同于其它的天數(shù)，并且第2天和第3天顯著不同于第4天到第8天。
下面的表列出了錐蟲藍測定的歸納數(shù)據(jù)。
表2 錐蟲藍測定的歸納數(shù)據(jù)
本發(fā)明并不由上述實施方案所局限，所述實施方案僅作為實施例出現(xiàn)，但是可以在由后附的專利權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)，以各種方式進行改進。
權(quán)利要求
1.一種評價魚產(chǎn)品的鮮度的方法，其包括從魚產(chǎn)品上切下少量的樣品；加入有效量的染色劑到樣品上，所述染色劑包括細胞-滲透性染料和細胞-不滲透性熒光染料的至少一種；其中所述細胞-滲透性染料轉(zhuǎn)化為在細胞內(nèi)酯酶活性存在情況下發(fā)射第一熒光的化合物；其中所述細胞-不滲透性熒光染料可以滲透到細胞的受損的膜中并且發(fā)射第二熒光；并且其中當(dāng)指示劑包括所述細胞-滲透性染料和所述細胞-不滲透性染料兩者時，所述第一熒光和所述第二熒光彼此是可區(qū)分的；將與所述染色劑一起加入的所述樣品溫育達預(yù)定的持續(xù)時間；和根據(jù)選自由下列組成的組的至少一個參數(shù)來確定魚產(chǎn)品的鮮度從所述被溫育的樣品發(fā)射出的所述第一熒光的強度，從所述被溫育的樣品中發(fā)射的所述第二熒光的強度，從所述樣品的頂部開始到檢測所述第一熒光的所述樣品的最遠點的第一距離；從所述樣品的頂部開始到檢測所述第二熒光的所述樣品的最遠點的第二距離。
2.權(quán)利要求1的方法，其中確定的步驟通過將所述至少一個參數(shù)與所述鮮度和所述至少一個參數(shù)之間的預(yù)先建立的相關(guān)性進行比較來進行。
3.權(quán)利要求3的方法，其中所述第一熒光和所述第二熒光的強度通過數(shù)字化裝置進行量化，并且所述預(yù)先建立的相關(guān)性根據(jù)所述第一熒光和所述第二熒光的量化的強度來建立。
4.權(quán)利要求3的方法，其中所述第一熒光和所述第二熒光的強度由光學(xué)裝置記錄在圖像中，并且將在所述鮮度和所述第一熒光和所述第二熒光的至少其中之一的強度的預(yù)先建立的相關(guān)性在標(biāo)準顏色圖中進行描述。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述染色劑包括細胞-滲透性染料和細胞-不滲透性染料二者。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述魚產(chǎn)品的鮮度根據(jù)所述第一熒光和所述第二熒光的強度的比率進行確定。
7.權(quán)利要求5的方法，其中所述魚產(chǎn)品的鮮度根據(jù)所述第一距離和所述第二距離的比率進行確定。
8.權(quán)利要求5的方法，其中所述細胞-滲透性染料是鈣熒光素AM，并且所述細胞-不滲透性染料是EthD-1同型二聚體-1，由此所述第一熒光是綠色的，所述第二熒光是紅色的。
9.權(quán)利要求5的方法，其中所述細胞滲透性染料是C12-刃天青，細胞-不滲透性染料是Sytox Green染料，由此所述第一熒光是紅色的，所述第二熒光是綠色的。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述細胞-滲透性染料選自由鈣熒光素AM和C12-刃天青組成的組，所述細胞-不滲透性染料選自由EthD-1同型二聚體、YoYo-1、和Sytox Green染料組成的組。
11.權(quán)利要求1的方法，其中當(dāng)所述染色劑包括所述細胞-滲透性染料時，所述染色劑還包括錐蟲藍染料。
12.一種評價魚產(chǎn)品的鮮度的方法，其包括從魚產(chǎn)品上切下少量的樣品；加入染色劑到所述樣品上，所述染色劑包括有效量的鈣熒光素AM和有效量的EthD-1同型二聚體；將與所述染色劑一起加入的所述樣品溫育達預(yù)定的持續(xù)時間；和根據(jù)綠色熒光的強度和從所述被溫育的樣品的頂部開始到檢測所述綠色熒光的所述被溫育的樣品的最遠點的第一距離的至少其中之一，和紅色熒光的強度和從所述被溫育的樣品的頂部開始到檢測所述紅色熒光的所述被溫育樣品的最遠點的第二距離的至少其中之一來確定魚的鮮度。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述鮮度的確定根據(jù)所述綠色熒光和所述紅色熒光的強度的比率來確定。
14.權(quán)利要求12的方法，其中所述鮮度的確定根據(jù)所述第一距離和所述第二距離的比率來確定。
15.權(quán)利要求12的方法，其中所述鮮度通過將所述綠色熒光和所述紅色熒光的強度與所述鮮度和所述綠色熒光和所述紅色熒光之間的預(yù)先建立的相關(guān)性進行比較來進行確定。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述綠色熒光和所述紅色熒光的強度由數(shù)字化裝置來進行量化，所述預(yù)先建立的相關(guān)性根據(jù)所述綠色熒光和所述紅色熒光的量化的強度來進行確定。
17.權(quán)利要求15的方法，其中由光學(xué)裝置來將所述綠色熒光和所述紅色熒光的強度記錄在圖像中，將在所述鮮度和所述綠色熒光和所述紅色熒光的強度之間預(yù)先建立的相關(guān)性描述在標(biāo)準顏色圖中。
18.權(quán)利要求12的方法，其中所述染色劑包括0.1-50μM的鈣熒光素AM。
19.權(quán)利要求12的方法，其中所述染色劑包括0.1-100μM的EthD-1同型二聚體。
20.權(quán)利要求12的方法，其中所述染色劑的量從約1μL到1mL。
21.權(quán)利要求12的方法，其中所述溫育步驟的預(yù)定持續(xù)時間從約1到45分鐘。
22.權(quán)利要求12的方法，其中所述溫育步驟的預(yù)定持續(xù)時間從約5到10分鐘，并且所述溫育步驟在室溫進行。
23.權(quán)利要求12的方法，其中所述魚產(chǎn)品選自由鮭魚(salmon)、虹鱒魚(rainbow trout)、多佛鰨魚(Dover sole)和大比目魚(halibut)組成的組。
24.一種評價魚產(chǎn)品的鮮度的方法，其包括從所述魚產(chǎn)品切下少量的樣品；將包括有效量的錐蟲藍染料的染色劑加到所述樣品上；將與所述染色劑一起加入的樣品溫育達預(yù)定的持續(xù)時間；根據(jù)從被溫育樣品的頂部開始到檢測藍色熒光的被溫育樣品的最遠點的滲透距離來確定所述魚產(chǎn)品的鮮度。
25.權(quán)利要求24的方法，其中通過將滲透距離與所述鮮度和滲透距離之間的預(yù)先建立的相關(guān)性進行比較來確定鮮度。
26.權(quán)利要求24的方法，其中所述染色劑包括0.1-10mM的錐蟲藍染料。
27.權(quán)利要求24的方法，其中所述染色劑的量從1μL到1mL。
28.權(quán)利要求24的方法，其中所述溫育步驟的預(yù)定時期從約2分鐘到45分鐘。
29.權(quán)利要求24的方法，其中溫育步驟的預(yù)定時間周期從約10-30分鐘，并且在室溫進行所述溫育。
全文摘要
一種評價魚產(chǎn)品的鮮度的方法，其通過從魚產(chǎn)品上切下少量樣品，加入包含細胞－滲透性染料和細胞－不滲透性熒光染料至少之一的染色劑到所述樣品上，將所述樣品溫育達預(yù)定的持續(xù)時間，并且根據(jù)從樣品發(fā)射的熒光來確定所述魚產(chǎn)品的鮮度來進行。
文檔編號G01N33/02GK101084434SQ200580008025
公開日2007年12月5日 申請日期2005年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月12日
發(fā)明者B·利伯曼 申請人:文特實驗室有限公司