專利名稱：柚皮素及其衍生物用于制備抗心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥、食品和飲料等技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是涉及柚皮素及其衍生物的用途，更具體地說是涉及柚皮素及其衍生物用于制備抗心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品的用途。
背景技術(shù)：
(一)柚皮素及其衍生物的研究進(jìn)展1、概況柚皮素的植物來源是薔薇科植物櫻花Prunus yedoensis Mats.的花蕾，梅P.mumeSieb.etZucc.的花蕾等，柚皮素英文名稱是naringenin，分子式及分子量C15H12O5、272.25，結(jié)構(gòu)式如右圖。
柚皮素為白色針狀結(jié)晶(甲醇)，熔點(diǎn)260℃，柚皮素溶于乙醇、乙醚和苯，幾乎不溶于水。
柚皮素及其衍生物相當(dāng)一部分存在于柑桔屬(Citrus)植物的果實(shí)及果皮中，而且果實(shí)越不成熟，柚皮素及其衍生物含量越高，如柚皮苷、橙皮苷等(參見趙雪梅，朱大元，葉興乾等，柑桔屬中類黃酮的研究進(jìn)展，天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2002，14(1)89-92)，其它衍生物亦可以由上述柑桔屬植物的果實(shí)及果皮中存在的物質(zhì)通過相應(yīng)物理或化學(xué)方法制得。
2、柚皮素藥理作用柚皮素是柚皮甙(narigen)的甙元，具有抗菌、抗炎、抗癌、解痙和利膽作用。
①抗菌對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸、痢疾和傷寒桿菌都有較強(qiáng)的抗菌作用。柚皮素對(duì)真菌亦有作用，1000ppm噴于大米上能降低稻瘟菌感染40-90％，且對(duì)人和家畜沒有毒性。
②抗炎大鼠腹腔每天注射20mg/kg，明顯抑制植入羊毛球所引起的發(fā)炎過程。
③抗癌對(duì)大鼠白血病L1210和肉瘤均有活性。
④解痙和利膽為黃酮類化合物中具有較強(qiáng)作用者。柚皮素并有較強(qiáng)的增加實(shí)驗(yàn)動(dòng)物膽汁分泌的作用。
另有研究資料表明，柚皮素及其衍生物有防治高血脂癥、防治動(dòng)脈粥樣硬化、止咳、化痰、抗癌、抗炎及抗感染引起的內(nèi)毒素休克等作用(參見WO98/16220；WO98/16221；WO98/16239；WO99/21549；WO99/21570；CN1430967A；CN1555793A；WO01/14396；Kawaguchi K，Kikuchi S，Hasunuma R et al.Suppression of infection-induced endotoxin shockin mice by a citrus flavanone naringin.Planta Med.2004；70(1)17-22)。
有報(bào)道柚皮素抑制花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集(參見Corvazier E，Maclouf J.Interference of some flavonoids and non-steroidal anti-inflammatory drugs with oxidativemetabolism of arachidonic acid by human platelets and neutrophils.Biochim Biophys Acta.1985835(2)315-21)及柑桔屬果皮衍生的類黃酮化合物可作為膠原誘導(dǎo)的血小板聚集抑制劑(參見WO01/14396)，但是血小板聚集抑制劑僅作為腦梗死或心肌梗死發(fā)生的預(yù)防藥(參見H.Darius，R.Erbel，G.G.Belz et al.血小板聚集抑制劑、抗凝劑和溶栓劑在心臟病治療中的應(yīng)用，德國醫(yī)學(xué)，1994；11(2)75-77；佐藤美佳等，抗血小板藥物對(duì)腦梗塞復(fù)發(fā)的預(yù)防，日本醫(yī)學(xué)介紹，2001；22(5)202-203)，對(duì)于已經(jīng)發(fā)生的腦梗死或心肌梗死，目前普遍使用心、腦微循環(huán)改善劑(如硝酸甘油、單硝酸異山梨酯、尼莫地平、長春胺、丁咯地爾等)；神經(jīng)細(xì)胞代謝改善劑(如茴拉西坦、胞磷膽堿、乙酰谷酰胺等)；神經(jīng)修復(fù)劑(如單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂)等，目前還沒有關(guān)于抑制血小板聚集可以減輕缺血造成的組織損傷、減輕缺血——再灌注損傷、防治腦卒中后遺癥和血管性癡呆的確切結(jié)論。
專利CN1401326A報(bào)道植物巖青蘭地上干燥全草經(jīng)提取、層析分離得到的總黃酮具有顯著的PAF拮抗作用，可抑制PAF誘導(dǎo)的血小板聚集，可擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈流量，做成口服或注射劑，用于治療缺血性心腦血管疾病，心絞痛、心肌梗塞、腦梗塞。其總黃酮主要成分為柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷。但該專利僅說明了柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷約占總黃酮的70％，尚未將柚皮素-7-O-葡萄糖苷或北美圣草素-7-O-葡萄糖與總黃酮的活性關(guān)系明確或直接地闡明。
(二)心腦血管疾病的研究進(jìn)展1、概述心腦血管疾病一直以來都是威脅人類健康的大敵，在我國隨著物質(zhì)生活水平的逐年提高，生活方式的改變，以及我國逐漸步入老年社會(huì)，心腦血管疾患的威脅日益嚴(yán)重。心腦血管疾病是危害中國人群健康的第一位死因，其中腦梗死和心肌梗死的死亡率占相當(dāng)大的比例且呈明顯的上升趨勢，其危害日益嚴(yán)重，對(duì)該類疾病的預(yù)防和控制日益受到廣泛的關(guān)注。
2、流行病學(xué)情況目前的流行病調(diào)查結(jié)果表明，心腦血管疾病已是威脅中國人群健康的首要疾病，而隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和生活方式、飲食習(xí)慣的改變，該類疾病的死亡率逐年上升。1998年監(jiān)測地區(qū)共報(bào)告心腦血管疾病15405例，報(bào)告死亡率為173.66/10萬，較1997年上升了9％。研究表明，目前中國人此類疾病患者群的主要死亡因素為冠心病和腦卒中，此2種心腦血管疾患也是造成中青年人早死或殘疾的主要原因，對(duì)我國人民潛在壽命損失很高。
3、主要的治療藥物目前對(duì)于腦梗死和心肌梗死的最有效治療是溶栓治療，但是溶栓后造成的缺血——再灌注損傷，目前其機(jī)制還沒有完全闡明，臨床上也缺乏有效的防治藥物。另外在發(fā)生腦梗死或心肌梗死的病人中有相當(dāng)一部分因?yàn)樯眢w狀況或錯(cuò)過適當(dāng)?shù)臅r(shí)間而不能得到有效的溶栓治療，因此減少缺血造成的組織損傷，防治腦卒中后遺癥、血管性癡呆的藥物仍然占據(jù)重要地位，但是目前也沒有十分有效的藥物。目前普遍使用的心、腦微循環(huán)改善劑(如硝酸甘油、單硝酸異山梨酯、尼莫地平、長春胺、丁咯地爾等)；神經(jīng)細(xì)胞代謝改善劑(如茴拉西坦、胞磷膽堿、乙酰谷酰胺等)對(duì)減少缺血造成的組織損傷，防治腦卒中后遺癥、血管性癡呆有一定的效果，但療效不明顯，并且沒有再灌注損傷保護(hù)作用的明確結(jié)論。神經(jīng)修復(fù)劑——單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂(簡稱GM-1)能促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)在遭受各種原因損害后進(jìn)行功能恢復(fù)，其作用機(jī)制是促進(jìn)“神經(jīng)重塑”(包括神經(jīng)細(xì)胞的生存、軸突生長和突觸生成)，其對(duì)腦卒中后遺癥、血管性癡呆有一定的效果，但遠(yuǎn)期療效還在觀察當(dāng)中，另外該藥價(jià)格十分昂貴，很多病人無法承受長期治療的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
(三)老年癡呆癥的研究進(jìn)展1、概述癡呆癥包括阿爾茨海默癥(Alzheimer’s Disease，或稱阿爾茲海默癥，簡稱AD)、多重梗塞型癡呆(Multimfarct Dementia)、酒精性癡呆(Alcoholic Dementia)及正常腦壓水腦癥(Normal Pressure Hychocephalus)。
AD是一種慢性原發(fā)、進(jìn)行性腦變性的老年中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，是發(fā)生于老年期或老年前期的一種進(jìn)行性的神經(jīng)退行性疾病，是進(jìn)入暮年后的一種常見病態(tài)反應(yīng)，屬于非正常衰老狀態(tài)的早老性癡呆病癥。由于AD好發(fā)病于60歲以上老年人，所以習(xí)慣被稱為老年癡呆癥或早老性癡呆癥。
AD以記憶減退、認(rèn)知障礙、人格改變，行為異常和語言能力喪失為特征，主要表現(xiàn)為大腦皮層獲得性高級(jí)功能的全面障礙和認(rèn)知功能明顯受損，腦功能退化衰亡，即記憶功能迅速衰減及識(shí)別能力障礙，并伴有行為或人格方面的改變。
隨著全球人口老齡化，AD的防治已經(jīng)成為一個(gè)突出的、亟待解決的醫(yī)療和社會(huì)問題。該類疾病病程一般較長，約為3～20年。對(duì)AD患者常年的護(hù)理費(fèi)用是巨大的，不僅對(duì)整個(gè)社會(huì)的醫(yī)療保障系統(tǒng)有極大影響，對(duì)中國未來社會(huì)的小家庭模式也是極大的挑戰(zhàn)。因此，其發(fā)生給社會(huì)、家庭均帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神負(fù)擔(dān)，也給患者自身帶來極大的痛苦。
據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，目前65歲以上人群中患重度AD的比率達(dá)5％以上，到80歲此比率就上升到15％到20％。而老年癡呆病人的平均生存期為5.5年，使該病成為現(xiàn)代社會(huì)老年人的主要致死疾病之一。但由于AD的病因不完全明確，迄今尚無有效的防治藥物，目前該疾病仍是全球較為棘手的病癥之一，積極研究開發(fā)新的治療方法是一件刻不容緩的事情。
2、病理表現(xiàn)及發(fā)病機(jī)制AD的主要病理表現(xiàn)是在前腦基底、海馬和大腦皮層細(xì)胞外神經(jīng)炎斑的形成，細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)纖維纏結(jié)的出現(xiàn)以及神經(jīng)細(xì)胞和突觸數(shù)目的減少。斑點(diǎn)主要由淀粉樣前體蛋白(簡稱APP)的蛋白水解產(chǎn)物β-淀粉樣蛋白(Beta-Amyloid Protein，簡稱Aβ)聚集組成。在正常情況下，APP水解產(chǎn)物是可溶性的Aβ40，而在病理?xiàng)l件下，APP水解產(chǎn)物是長的易形成纖維的Aβ1-42，它先以一種未成熟的、非纖維狀的分散的斑點(diǎn)形式存在，最終經(jīng)過構(gòu)象改變，聚合成一種有毒的纖維狀物質(zhì)，即形成斑點(diǎn)。神經(jīng)纖維纏結(jié)主要存在于錐狀神經(jīng)元的胞內(nèi)和異常的神經(jīng)軸突中，為一非水溶性結(jié)構(gòu)，其主要組成為直徑10nm的雙螺旋纖維結(jié)構(gòu)(簡稱PHF)，主要成分是一種微管結(jié)合蛋白，即tau蛋白，正常的tau蛋白能穩(wěn)定微管蛋白的相互作用，而PHFs中的tau蛋白則以超磷酸化的形式存在。
AD的病因?qū)W復(fù)雜，目前主要有兩種假說tau蛋白假說和淀粉樣蛋白假說。tau蛋白假說的主要論點(diǎn)是由于tau蛋白的超磷酸化導(dǎo)致微管蛋白的不穩(wěn)定，引起高爾基體結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而影響APP的代謝，產(chǎn)生過量的Aβ。該假說還未在細(xì)胞或者動(dòng)物個(gè)體水平得到證實(shí)。淀粉樣蛋白假說的主要論點(diǎn)是在細(xì)胞外神經(jīng)病變發(fā)生的周圍淀粉樣蛋白的聚集，導(dǎo)致神經(jīng)炎斑的形成和隨后神經(jīng)纖維纏結(jié)的形成。因此，淀粉樣蛋白是AD病理鏈形成的起因。支持淀粉樣蛋白假說的證據(jù)很廣泛。
β-淀粉樣蛋白異常沉積形成的老年斑是AD典型的病理特征。斑塊周圍顯著的神經(jīng)退行性改變和膠質(zhì)細(xì)胞的活化提示Aβ可能是引起AD中神經(jīng)元丟失和炎癥反應(yīng)的原因。在神經(jīng)退行性病變中，膠質(zhì)細(xì)胞的活化與神經(jīng)元的死亡具有同等重要的作用，且兩者之間存在一定聯(lián)系(參見Bales KR，Du Y，et al.The NF-kappaB/Rel family of proteins mediatesAbeta-induced neurotoxicity and glial activation.Brain Res Mol Brain Res.1998；57(1)63-72.)。通過免疫注射清除β-淀粉樣蛋白斑塊后，與AD相關(guān)的神經(jīng)系統(tǒng)病變可以修復(fù)。這一事實(shí)為β-淀粉樣蛋白學(xué)說提供了有力的證據(jù)。β-淀粉樣蛋白學(xué)說的其他證據(jù)包括21主體綜合癥患者由于Aβ產(chǎn)生過多，早期即可出現(xiàn)AD樣神經(jīng)系統(tǒng)病變，其年輕患者惟的神經(jīng)系統(tǒng)病變?yōu)閺浡訟β沉積，說明淀粉樣蛋白沉積可能是最早的神經(jīng)病理學(xué)改變；通過一些措施清除淀粉樣蛋白后，神經(jīng)系統(tǒng)病變?nèi)缟窠?jīng)元皺縮、小膠質(zhì)細(xì)胞激活可以逆轉(zhuǎn)。這些證據(jù)說明淀粉樣蛋白沉積是AD發(fā)病的中心環(huán)節(jié)(參見周慧芳，薛冰，王曉民，Alzheimer病研究進(jìn)展——β-淀粉樣蛋白學(xué)說與主要防治策略，自然科學(xué)進(jìn)展，2003，13(2)121-125.)。
3、流行病學(xué)情況隨著發(fā)達(dá)國家和發(fā)展中國家人均壽命的提高，患癡呆癥的老年人數(shù)迅速增加。在所有的癡呆癥中，以AD所占的比例最高(約50％～60％)。
據(jù)資料報(bào)道，隨著年齡的增長，在人體組織老化和基因的影響下，癡呆現(xiàn)象的發(fā)生率不斷升高；其中，AD隨年老急劇上升，從60歲起，每4年～5年上升一倍；AD的發(fā)病率在65歲左右的老年人中約占10％，在85歲以上的老年人中約占47％，已經(jīng)成為人類的第四號(hào)殺手。
過去學(xué)術(shù)界曾認(rèn)為中國是AD低危險(xiǎn)性國家，然而，早前于安徽屯溪召開的第二屆中國老年人癡呆癥和抑郁癥學(xué)術(shù)研討會(huì)暨國際老年癡呆學(xué)術(shù)研討會(huì)上，這一觀點(diǎn)受到挑戰(zhàn)。有5份研究報(bào)告表明，中國也是AD高危國家，這次會(huì)議報(bào)道的大量研究成果還表明，中國對(duì)AD的研究正在迅速接近國際先進(jìn)水平。
目前全球的AD病人估計(jì)在1200萬左右，中國現(xiàn)有老年癡呆患者大約為300萬～400萬，且呈迅速上升趨勢，確診后一般約7年～9年內(nèi)死亡。有資料表明，中國60歲以上人口早在1998年已達(dá)1.2億，并以年均3.2％的速度遞增，大大高于人口增長速度。75歲以上的老人有2000萬，80歲以上老人有800萬，并以年均5.4％的速度增加，下世紀(jì)中葉可達(dá)4億左右，將成為世界上老齡人口最多的國家。
1988年中美上海調(diào)查研究表明，中國65歲以上老年人的癡呆發(fā)生率為4.6％，其中AD的比重為63％，多發(fā)梗塞性癡呆為28％，腦組織損傷后遺癥、化學(xué)藥物中毒以及神經(jīng)系統(tǒng)失調(diào)或營養(yǎng)缺乏導(dǎo)致的癡呆約占10％。
上海的流行病學(xué)調(diào)查顯示，中國55歲、65歲以上癡呆的患病率分別為2.57％和4.6％。北京老年病醫(yī)療研究中心對(duì)北京地區(qū)2788名60歲以上老人的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，有208名老人患有癡呆癥，患病率達(dá)7.5％。其中女性病人139人，患病率達(dá)9.7％，顯著高于男性的5.8％。他們的研究還表明，高齡、低教育水平、居住在農(nóng)村是老年癡呆癥的高危因素。而解放軍總醫(yī)院對(duì)1728名離退休老干部的調(diào)查表明，有癡呆家庭史、“文革”中受迫害、電磁場暴露、腦外傷亦是老年癡呆癥的危險(xiǎn)因素。在廣州城區(qū)75歲以上老年人癡呆患病率的調(diào)查中，AD患病率為7.49％。
4、老年癡呆癥的治療藥物AD是老年人的常見病之一，是一種漸進(jìn)性的神經(jīng)功能退化性失調(diào)癥，目前本病的病因尚未得到充分闡明，一直是治療上的一個(gè)棘手問題。
抗癡呆藥物的研究和開發(fā)已引起世界各國醫(yī)藥界的高度重視。近年來，隨著對(duì)老年人神經(jīng)生理、生化、藥理等方面研究的不斷深入，導(dǎo)致相關(guān)藥物的開發(fā)研究不斷取得進(jìn)展。2001年有1270多種產(chǎn)品投放市場，這些產(chǎn)品中90％是80年代發(fā)現(xiàn)、90年代研究與開發(fā)成功的，此類藥物開發(fā)的新產(chǎn)品數(shù)目超過了任何其它治療類藥物開發(fā)的數(shù)目。
經(jīng)過近10年的臨床表明，乙酰膽堿酯酶(簡稱AChE)抑制劑對(duì)AD具有一定的治療作用，其主要藥物他克林、利斯的明、多奈哌齊、加蘭他敏已是這一領(lǐng)域中的代表性品種，從而也推動(dòng)了癡呆治療藥品市場的發(fā)展進(jìn)程。
(1)腦代謝激動(dòng)劑研究發(fā)現(xiàn)，老年癡呆癥患者存在有糖代謝及核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等代謝系統(tǒng)障礙，同時(shí)其腦血流量及耗氧量明顯低于同齡正常人。因此，腦代謝激動(dòng)劑和腦循環(huán)改善劑，特別是具有腦血管擴(kuò)張作用的腦代謝激動(dòng)劑就成為治療本病可供選用的藥物。此類藥物有吡拉西坦、吡硫醇、氫化麥角堿、都可喜、長春胺、長效長春胺、長春乙酯、尼莫地平、桂利嗪、環(huán)扁桃酯、氯酯醒、己酮可可堿、麥角溴煙酯等。這些藥物對(duì)老年癡呆癥的某些癥狀如記憶力減退、適應(yīng)環(huán)境能力降低等，有程度不同的改善作用。
(2)擬膽堿藥現(xiàn)已知腦內(nèi)乙酰膽堿含量與記憶密切相關(guān)，老年或癡呆病人腦內(nèi)乙酰膽堿量減少，補(bǔ)充膽堿類藥物能改善其記憶和思維能力。但直接給予膽堿或卵磷脂并不能使乙酰膽堿增加。有人試以膽堿或卵磷脂與能通過血腦屏障的膽堿酯酶抑制劑毒扁豆堿合用于本病患者，可使其記憶力有提高，而單獨(dú)給予卵磷脂效果不明顯。另有人單用毒扁豆堿給本病患者靜注，記憶測定成績較安慰劑提高約20％，并發(fā)現(xiàn)對(duì)行為障礙也有效。研究認(rèn)為，膽堿酯酶抑制劑可延遲乙酰膽堿的代謝分解，從而延長突觸后受體的興奮。另外，國內(nèi)研制的哈伯因(石杉?jí)A甲)，系中國學(xué)者從石杉屬植物千層塔中分離到的一種新生物堿，藥理實(shí)驗(yàn)證明，本品具有很強(qiáng)的擬膽堿活性，是一種高效、可逆的膽堿酯酶抑制劑。
(3)乙酰膽堿酯酶抑制劑(Acetylcholinesterase Inhibitors)乙酰膽堿酯酶抑制劑包括毒扁豆堿(商品名Synapton，F(xiàn)orest實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn))、四氫氨基吖啶(他克林，商品名Cognex，Parke-Davis公司生產(chǎn))、donepezil.(商品名Aricept，輝瑞/衛(wèi)材公司生產(chǎn))、metrifonate(拜耳公司生產(chǎn))和rivastigmine(商品名Exelon，諾華公司生產(chǎn))。這些化合物通過抑制乙酰膽堿酯酶在神經(jīng)腱內(nèi)濃縮乙酰膽堿，并能持續(xù)更長的作用時(shí)間。
四氫氨基吖啶是第一個(gè)通過FDA并在臨床上治療阿爾茨海默氏癥的膽堿酯酶抑制劑，但規(guī)定仍需作改進(jìn)。該品生物利用度要低于rivastigmine和donepezil，并有較大的副作用。多奈哌齊(Donopozil)是第二代也是第二個(gè)被美國FDA特許用于治療阿爾默海茨病(老年癡呆)的膽堿酯酶抑制劑，于1997年被FDA批準(zhǔn)用于臨床，可促進(jìn)輕、中度老年癡呆病人的認(rèn)知能力以及改善病人的精神狀態(tài)和保持腦功能活性等作用。與第一代膽堿酯酶抑制劑相比，該品有多項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)①作用時(shí)間長，每日只須口服一次；②藥效強(qiáng)、療效高；③安全性高、選擇性高，藥物不良反應(yīng)小。目前該品已進(jìn)入中國銷售，國內(nèi)也有廠家生產(chǎn)。
Sanochemia Pharmazeutika AG公司(維也納、奧地利)宣布第一個(gè)在歐洲上市的乙酰膽堿酯酶抑制劑-Reminyl(加蘭他敏)。該品被批準(zhǔn)在瑞典上市，并報(bào)送歐盟以期獲準(zhǔn)進(jìn)入歐洲其它市場。
丹麥的NeuroSearch公司最近利用NS2330進(jìn)行臨床研究開發(fā)。NS2330增加多巴胺和去甲腎上腺素的活性，同時(shí)也激活其抑制機(jī)制以刺激乙酰膽堿在大腦皮層(包括感知部位)的釋放。這樣所有三個(gè)神經(jīng)傳遞素的功能都將受到阿爾茨海默氏癥的影響。該公司希望NS2330能夠具有較好的治療效果，目前該藥的I期臨床工作已經(jīng)完成，F(xiàn)DA也同意該公司繼續(xù)II期臨床工作。
其它用來研究的化合物還包括xanomeline(諾和諾德/禮來公司生產(chǎn))、besperidine(赫司特公司生產(chǎn))和talsaclidine(勃林格殷格翰/法瑪西亞普強(qiáng)公司)。
①他克林(簡稱THA)他克林的化學(xué)名為四氫氨基吖啶，商品名Cognex，該藥是美國華納—蘭伯特公司開發(fā)并第一個(gè)上市的中樞系統(tǒng)的非競爭、可逆性膽堿酯酶抑制劑，1993年獲得FDA批準(zhǔn)后首先在美國上市，是改善AD認(rèn)知癥新藥和老年益智藥物，同年在英國、法國、加拿大等國上市，其化合物專利于1996年到期，目前市場上主要是美國派德—戴維斯的產(chǎn)品。
他克林尤其對(duì)女性AD癥具有顯著的療效，與卵磷脂合用可獲得理想的效果，能明顯改善患者的記憶力，因此他克林已被認(rèn)為是治療、預(yù)防早老性癡呆僅有的幾種藥物之。
他克林的不足之處是對(duì)肝功能及轉(zhuǎn)氨酶指數(shù)有較大影響，制約了市場的開發(fā)，其銷售額的增長也遠(yuǎn)不如其它AD藥物。經(jīng)過進(jìn)一步的研究，在他克林母核的基礎(chǔ)上加成篩選，由德國赫斯特魯塞爾公司研制出維那克林。該藥是他克林1位羥基衍生物，其藥物作用機(jī)制得到相應(yīng)的改善，但仍有一些不良反應(yīng)，隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，將被新一代乙酰膽堿酯酶抑制劑所替代。
②多奈哌齊多奈哌齊是具有高度選擇性、可逆性治療AD的藥物，為第二代中樞性乙酰膽堿酯酶抑制劑，是日本衛(wèi)材制藥公司開發(fā)的藥物，1996年11月25日獲得FDA的特許批準(zhǔn)用于臨床，商品名安理申。1997年初首先在美國上市，由衛(wèi)材/輝瑞共同開發(fā)全球市場，1999年10月安理申在中國上市，目前已形成了世界50多個(gè)國家地區(qū)的銷售網(wǎng)絡(luò)。
多奈哌齊是第二個(gè)獲準(zhǔn)治療老年癡呆癥的藥物，其最大優(yōu)勢是治療達(dá)標(biāo)劑量小、毒副作用低，耐受性好。專家普遍認(rèn)為，該藥在AD治療藥物中處于領(lǐng)先地位，在四個(gè)主要品種中占據(jù)了60％的市場份額，預(yù)計(jì)這一優(yōu)勢將延續(xù)到能夠?qū)膊≈委煯a(chǎn)生重要影響的新藥問世為止。
據(jù)Pharma Business雜志報(bào)道在2000年全球最暢銷500種藥品中，日本衛(wèi)材公司銷售額為4.31億美元，輝瑞公司的銷售額為1.19億美元，分別比上一年增長了27.3％和30.8％。2001年多奈哌齊在全球排第101名，銷售額合計(jì)約6.83億美元，2002年在全球超過了1100億日元，已是AD市場中的佼佼者。
2001年中國醫(yī)藥研究開發(fā)中心、重慶桑田藥業(yè)開發(fā)了多奈哌齊原料藥及其片劑產(chǎn)品，國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)其以四類新藥生產(chǎn)。
③利斯的明利斯的明是氨基酸甲酸類腦選擇性膽堿酯酶抑制劑，屬于該類藥的第二代產(chǎn)品，由瑞士諾華制藥英國公司開發(fā)，商品名艾斯能，1997年12月首先在瑞士上市，次年在英國上市。2000年4月21日獲得FDA批準(zhǔn)，同年6月底在美國上市，從而擴(kuò)展了阿爾茨海默癥治療藥物市場的格局。
研究結(jié)果顯示該藥雖然半衰期相對(duì)較短，但對(duì)膽堿酯酶抑制作用可達(dá)10小時(shí)，該藥不經(jīng)肝臟及P450代謝，對(duì)輕、中度早老性癡呆癥耐受性較好，同時(shí)具有抑制腦內(nèi)的丁酰膽堿酯酶作用，在歐洲、美國等45個(gè)國家進(jìn)行的一項(xiàng)前瞻性、隨機(jī)多中心雙盲研究中獲得較高的評(píng)價(jià)。
由于利斯的明在藥物市場中獲得越來越多的份額，2000年的銷售額比上一年增長了83％，為1.195億美元，2001年利斯的明在全球銷售額增加101％，已達(dá)2.4億美元。
④加蘭他敏加蘭他敏屬于第二代乙酰膽堿酯酶抑制劑藥物，其藥物成份與歐洲山區(qū)水仙花鱗莖提取的生物堿相同，該植物藥在一些國家、地區(qū)已經(jīng)有過30多年的臨床應(yīng)用，用于治療逆轉(zhuǎn)神經(jīng)肌肉阻滯、重癥肌無力和幼兒腦型麻痹癥等。
加蘭他敏是希雷與強(qiáng)生公司合作開發(fā)的化學(xué)合成藥物，制劑有片劑、膠囊、口服液等，臨床用于改善AD患者總體功能。該藥具有雙重作用機(jī)制，能較好的刺激和抑制乙酰膽堿酯酶，并且能夠調(diào)節(jié)腦內(nèi)的煙堿受體位點(diǎn)，可顯著改善輕、中度早老性癡呆病人的認(rèn)知功能，延緩腦細(xì)胞功能減退的進(jìn)程。
加蘭他敏于2000年7月被歐盟批準(zhǔn)后在英國、愛爾蘭首次上市，2001年獲美國FDA許可用于治療阿爾茨海默癥，現(xiàn)已在25個(gè)國家上市。希雷公司負(fù)責(zé)在英國、愛爾蘭的銷售，強(qiáng)生公司負(fù)責(zé)美國和其它歐洲國家的銷售。國外報(bào)道2001年加蘭他敏銷售額為1.36億美元。
1998年上海申興制藥廠已生產(chǎn)加蘭他敏原料藥，1999年國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)蘇州第六制藥廠生產(chǎn)四類新藥氫溴酸加蘭他敏膠囊，2001年上海申興產(chǎn)量同比增長3倍，年產(chǎn)量達(dá)到30kg。該藥進(jìn)入市場后，臨床推廣長足邁進(jìn)，2000年已在我國主要城市重點(diǎn)醫(yī)院抗癡呆藥品中嶄露頭角。
近幾年，乙酰膽堿脂酶抑制劑已成為AD的一線治療藥物，確認(rèn)了其有效緩解認(rèn)知功能障礙的地位，產(chǎn)品銷售量占據(jù)了抗癡呆藥物中的最大份額，研究表明石杉?jí)A甲、毒扁豆堿、美曲磷脂對(duì)阿爾茨海默癥也有一定的治療作用，中科院上海藥物所開發(fā)的石杉?jí)A甲化合物已申請了國際專利，其作用機(jī)制正在進(jìn)行深入的研究，北京四環(huán)制藥、寧波立華制藥、上海漢殷藥業(yè)和上海醫(yī)科大學(xué)紅旗藥廠獲得了新藥證書和生產(chǎn)文號(hào)。
(4)鉀通道阻滯劑研究表明，非選擇性的鉀通道阻滯劑通過延遲去極化和延長突觸前神經(jīng)末梢的鈣流入引起神經(jīng)遞質(zhì)(包括Ach)釋放增加。若要想這類藥物用于治療老年癡呆，則所用藥物應(yīng)具備能增加乙酰膽堿的釋放而不減少膜磷脂酰膽堿組成的優(yōu)點(diǎn)，而減少膜磷脂酰膽堿的組成可能是AchE抑制劑存在的副作用。磷脂酰膽堿是膽堿的貯存庫，被神經(jīng)元用來合成Ach。膜磷脂酰膽堿的損失使乙酰膽堿的合成受到限制，導(dǎo)致膽堿輸出量減少。臨床研究已表明非選擇性鉀通道阻滯劑對(duì)改善患者的識(shí)別能力僅有中度作用，其作用不強(qiáng)可能是這些藥物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)穿透力低，選擇性差或活性不夠等，有待于進(jìn)一步研究加以完善。
(5)谷氨酸受體調(diào)控劑在老年疾呆癥患者的大腦中，皮質(zhì)皮層和離皮層途徑的錐體細(xì)胞發(fā)生了神經(jīng)纖維混亂和退化。據(jù)報(bào)道，這些錐體細(xì)胞以谷氨酸為興奮遞質(zhì)。這些神經(jīng)元受損，功能喪失時(shí)會(huì)導(dǎo)致老年癡呆癥；但若功能過強(qiáng)，則會(huì)產(chǎn)生興奮性毒性，引起神經(jīng)元死亡，造成多種神經(jīng)退化性疾病。因此，調(diào)控退化的谷氨酸神經(jīng)元的突觸活性有望治療老年癡呆癥。研究表明，直接活化突觸后受體將有利于谷氨酸的傳遞，其部分激動(dòng)劑具有這樣的優(yōu)點(diǎn)，即當(dāng)內(nèi)源性谷氨酸低于正常水平時(shí)起激動(dòng)劑作用，而當(dāng)谷氨酸釋放過量時(shí)起拮抗劑作用，因此，部分激動(dòng)劑會(huì)對(duì)興奮毒性情況產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用。已有報(bào)道的藥物如美金剛胺(memantine)，當(dāng)谷氨酸以病理量釋放時(shí)，美金剛胺會(huì)減少谷氨酸的神經(jīng)毒性作用；當(dāng)谷氨酸釋放過少時(shí)，美金剛胺可以改善記憶過程所需谷氨酸的傳遞，臨床研究表明，美金剛胺用于老年癡呆癥患者具有較好的耐受性，在精神病理學(xué)和行為測定中產(chǎn)生溫和的有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的顯著改善。
(6)5-羥色胺3受體拮抗劑5-羥色胺3(簡稱5-HT3)受體拮抗劑原用于止吐，現(xiàn)有研究根據(jù)5-HT3受體在大腦中的分布狀態(tài)，推測此類拮抗劑應(yīng)有其它中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用。如5-HT3拮抗劑昂丹司瓊樞復(fù)寧能改善膽堿能神經(jīng)功能正常和不足的動(dòng)物如鼠、狨等的識(shí)別能力；在50歲以上與老年有關(guān)的記憶力受損(AAMI)病人的臨床試驗(yàn)中，昂丹司瓊能使相當(dāng)于喪失6年的記憶力得到改善。因此，昂丹司瓊及其他5-HT3受體拮抗劑(托烷司瓊、格拉司瓊等有可能給老年癡呆患者帶來福音。
(7)天然藥物方面的研究現(xiàn)今很多醫(yī)藥公司還把目光移向天然藥物，試圖從中開發(fā)出有效的治療藥物。在這方面同樣也取得了一定的進(jìn)展。
①阿樸脂蛋白E4(ApoE4)我們知道，阿爾茨海默氏癥的發(fā)病情況與遺傳基因有著較為緊密的聯(lián)系，阿樸脂蛋白E4 ApoE4是特別值得讓我們?nèi)プ⒁獠⒊委熀皖A(yù)防阿爾茨海默氏癥的方向進(jìn)行研究。在藥物開發(fā)中，ApoE4已經(jīng)進(jìn)行過人體藥物臨床試驗(yàn)，并極有可能成為療效比較確切的藥品。
②β-淀粉素(體)(Beta-amyloid)β-淀粉素是一種不能溶解的多肽。該種物質(zhì)能夠有效防止激烈氧化過程中導(dǎo)致的二乙基溴乙酰胺的破壞。在從事阿爾茨海默氏癥研究理論中就是利用β-淀粉素限制自由基的產(chǎn)生以及清除自由基，以防止自由基所帶來的損害。這種類型的化合物包括idebenone(武田公司、Osaka日本)，該化合物既是一種自由基的清道夫也是某種神經(jīng)增長因子的刺激物。早期研究表明，idebenone能有效治療中度癡呆癥。盡管葛蘭素威康公司(英國)和美國家用產(chǎn)品公司已經(jīng)在少數(shù)一些國家上市，但它已經(jīng)從日本退出市場，而且其III期臨床試驗(yàn)已經(jīng)被停止。
(8)其它類型藥物的研究進(jìn)展2000年上半年，一些研究表明，雌激素替代療法可以較明顯地延緩婦女阿爾茨海默氏癥的發(fā)作，并能降低阿爾茨海默氏癥的病情嚴(yán)重化。個(gè)別臨床研究也發(fā)現(xiàn)雌激素治療能夠提高感知度。雌激素對(duì)抗氧劑和抗炎藥的作用能力可以減少發(fā)病的機(jī)率，推動(dòng)乙酰膽堿的產(chǎn)生、促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的生長和存活。
2000年年中，日本的Toyama Chemical公司期望開始在英國進(jìn)行T-588的II期臨床研究，并能在美國進(jìn)行較早的試驗(yàn)。在紐約大學(xué)的合作下，公司發(fā)現(xiàn)T-588可以保護(hù)大腦神經(jīng)細(xì)胞。
日本藤澤制藥公司的FK-960在日本和美國進(jìn)行。該藥能夠提高感知度，具有新的作用機(jī)制。在最近有關(guān)研究報(bào)道是表明，咀嚼可以防止上年紀(jì)的人記憶力衰退，但其作用機(jī)制現(xiàn)在仍然沒有明確。研究人員通過研究小鼠的遺傳改變來研究人體老化的跡象。實(shí)驗(yàn)表明，拔除牙齒以防止咀嚼的小鼠的記憶力要遜于正常對(duì)照小組。此外，研究人員還研究了咀嚼時(shí)大腦的活動(dòng)情況，并發(fā)現(xiàn)下巴的活動(dòng)可以增強(qiáng)腦部海馬區(qū)的信號(hào)。
來自肯塔基州立大學(xué)的研究人員發(fā)現(xiàn)減少食用量可以保護(hù)大腦避免因年齡引起紊亂，這種紊亂類似于阿爾茨海默氏癥。最近出版的研究論文表明，通過喂養(yǎng)減少食物量的小鼠，研究人員發(fā)現(xiàn)它們大腦的損傷能減少。對(duì)熱量攝入量和人體神經(jīng)變性疾病的研究還沒有開始，但有一些相關(guān)性研究顯示，相比于美國和加拿大，中國和日本由于攝入較少的熱量，因此相應(yīng)的阿爾茨海默氏癥的發(fā)病率也減少。
加拿大的神經(jīng)生物技術(shù)公司在2000年上半年宣布了一個(gè)較為確切的產(chǎn)品memantine。該產(chǎn)品是一種非競爭性N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)阻斷劑，在美國進(jìn)行了III期臨床試驗(yàn)，主要用于治療阿爾茨海默氏癥。
5、老年癡呆癥的市場發(fā)展前景2000年世界七大藥品市場表明，AD藥品市場已從90年代中期的4億多美元增長了近一倍，2001年全球AD市場價(jià)值已近12億美元；國外分析家預(yù)測在未來十年內(nèi)AD患者將會(huì)增加到20％左右，AD藥品市場的增長速度將有較大幅度的上升。
由于患者的不斷增多，AD治療藥物的市場銷售額也一直在穩(wěn)步增長。90年代該類藥物已成為暢銷藥物，1995年世界銷售額已達(dá)50億美元。21世紀(jì)初，該類藥物的銷售額超過了排列在前三位的治療心血管病藥物、治療胃腸道病藥物和抗感染藥物市場的份額，其發(fā)展勢頭看好。
目前，該類疾病已越來越受到中國國家和社會(huì)的高度重視，而且由于該類疾病類似于糖尿病等富貴病，一樣需要長期服用治療藥物，因此其用藥市場隨著人口老齡化而逐漸擴(kuò)大，市場前景看好?；诖?，為及時(shí)了解中國治療AD藥物的市場狀況，中國國家食品藥品監(jiān)督管理局南方醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)研究所信息中心選取中國六個(gè)主要用藥城市(北京、上海、廣州、南京、杭州、成都)的百家抽樣醫(yī)院、60名醫(yī)生專家和120名消費(fèi)者，對(duì)中國國內(nèi)老年癡呆癥用藥市場(1999年及2000年)及其主要競爭品種進(jìn)行了全面的市場調(diào)研活動(dòng)。
(1)1999年～2000年中國治療老年癡呆藥物醫(yī)院用藥金額情況分析從1999年～2000年六城市(北京、上海、廣州、南京、杭州、成都)抽樣醫(yī)院治療老年癡呆癥用藥金額構(gòu)成情況來看，2000年六城市抽樣醫(yī)院銷售總金額較1999年同比增長28.49％。而在治療老年癡呆藥主要品種中，使用金額百分比較大的品種排名依次為吡拉西坦、銀杏葉制劑、氫化麥角堿、阿米三嗪/蘿巴新、阿尼西坦、尼麥角林、胞磷膽堿、石杉?jí)A甲、多奈哌齊、吡硫醇、長春西汀、加蘭他敏、氯酯醒、艾地苯醌。其中前四位品種市場份額(金額百分比)較大。
具體品種中，吡拉西坦的市場份額(金額百分比)2000年較1999年上升了8個(gè)百分點(diǎn)，仍居首位，金額增長率達(dá)55.59％。銀杏葉制劑、氫化麥角堿保持較穩(wěn)定的市場份額，使用金額都保持一定的增長。使用金額增長較快的品種有石杉?jí)A甲、加蘭他敏，其中加蘭他敏增長幅度最高。阿米三嗪/蘿巴新、阿尼西坦、尼麥角林、胞磷膽堿、長春西汀和吡硫醇總體市場出現(xiàn)萎縮，而艾地苯醌基本退出市場競爭。多奈哌齊由于是較新的品種，在1999年未見銷售，但在2000年市場份額(使用金額百分比)占0.45％，顯示出一定的市場潛力。
(2)1999年～2000年中國治療老年癡呆藥物醫(yī)院用藥金額走勢分析從1999年～2000年六城市老年癡呆用藥金額走勢情況來看，2000年整體用藥水平要明顯高于1999年整體用藥水平，出現(xiàn)上升趨勢。其中1999年用藥金額高峰期和2000年用藥金額高峰期均出現(xiàn)在二季度(2000年用藥量高峰期是第三季度)，表明在2000年二季度高價(jià)品種的使用量相對(duì)要高。從六城市用藥情況中可以反映出中國城市的一個(gè)用藥趨勢。
(3)主要用藥城市醫(yī)院用藥情況分析從各品種在各城市的用藥金額排序情況來看，其銷售情況表現(xiàn)得較好的品種主要有銀杏葉制劑、吡拉西坦、氫化麥角堿和阿米三嗪/蘿巴新。其中銀杏葉制劑2000年在上海、廣州、杭州和成都地區(qū)排在第一位，在北京地區(qū)排名第二，南京地區(qū)排名第三，表現(xiàn)得相當(dāng)好，較1999年有所增長，其幾個(gè)主打品牌達(dá)納康、銀杏天保、活血寧膠囊、百路達(dá)膠囊、天保寧、銀可絡(luò)的市場反應(yīng)有口皆碑；其次表現(xiàn)較好的則為吡拉西坦，該品2000年在北京和南京地區(qū)占據(jù)第一的位置，在其它幾個(gè)城市也是前三名之列，只有在杭州地區(qū)較弱(排名第5)；氫化麥角堿總體情況排在第三位，不過2000年排名較1999年排名有所提高。氫化麥角堿在各城市的排名基本保持不變，并在個(gè)別城市如上海和成都地區(qū)排名上升，而在南京地區(qū)排名下降一個(gè)位置。
(4)其它方面的市場評(píng)價(jià)隨著治療AD藥物臨床推廣的普及，AD已越來越受到社會(huì)和家庭的重視，從調(diào)查的醫(yī)生信息反饋來看，68％的醫(yī)生認(rèn)為社會(huì)大眾已經(jīng)開始關(guān)心和重視AD，與此同時(shí)，8.16％的醫(yī)生認(rèn)為市場供給嚴(yán)重不足，63.2％的醫(yī)生認(rèn)為市場供給不足?？梢姡珹D用藥市場供給不足，市場仍有空間，有近八成醫(yī)生認(rèn)可市場前景較好。
同樣，隨著近年來OTC市場的蓬勃發(fā)展，有相當(dāng)部份品種(口服劑型)也在零售藥店中進(jìn)行銷售，由于長期服藥的特點(diǎn)，越來越多的患者選擇直接從藥店進(jìn)行購藥治療。從中國國家藥品監(jiān)督管理局南方醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)研究所零售研究部對(duì)這類藥品的監(jiān)測結(jié)果顯示，銀杏葉制劑的市場份額(銷售金額百分比)約占市場的4成左右，中成藥較受零售市場的青睞，都可喜(阿米三嗪/蘿巴新)的市場份額約占3成左右，其余品種則占據(jù)余下的市場份額。從所調(diào)查的消費(fèi)者情況反映，有67.80％的消費(fèi)者是從醫(yī)院藥房獲得所需藥品的；而有27.97％的消費(fèi)者直接到藥店購買；4.24％的病患者從所在單位門診部獲得；還有0.85％的病患者到批發(fā)商處購買。這表明，目前來說，醫(yī)院雖然是老年人用藥的主要銷售渠道，但也可以看出，零售渠道也占有不可忽視的比例。
AD的治療占世界藥品市場的第七位，到2005年底價(jià)值61億美元。而目前抗AD藥物主要是緩解癥狀，并不遏制病情的發(fā)展。因此，研究出一種有效的治療方法來阻止?jié)撛诘陌l(fā)病過程是很必要的，所以本發(fā)明認(rèn)為研制用于預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)和治療AD等方面的產(chǎn)品特別是藥物能夠具有顯著的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
但是經(jīng)文獻(xiàn)檢索等，到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)將柚皮素及其衍生物作為抗心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品應(yīng)用方面的報(bào)道；也就是說，迄今為止，尚未見柚皮素及其衍生物用于制備抗腦梗死、心肌梗死方面的產(chǎn)品，用于制備抗腦缺血——再灌注損傷、心肌缺血——再灌注損傷方面的產(chǎn)品，用于制備抗腦卒中后遺癥、血管性癡呆方面的產(chǎn)品和用于制備抗阿爾茨海默氏癥方面的產(chǎn)品的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題是公開了一種柚皮素及其衍生物的新用途，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。
也就是說，本發(fā)明意在明確柚皮素及其衍生物在心腦血管疾病、阿爾茨海默氏癥等方面的具體應(yīng)用，進(jìn)而將柚皮素及其衍生物用于制備抗心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品；所述的心腦系統(tǒng)疾病包括心腦血管疾病及其相關(guān)疾病、阿爾茨海默氏癥及其相關(guān)疾病等中的一種或多種，其中心腦血管疾病及其相關(guān)疾病包括腦梗死、心肌梗死、腦缺血——再灌注損傷、心肌缺血——再灌注損傷、卒中后遺癥或血管性癡呆等中的一種或多種，阿爾茨海默氏癥及其相關(guān)疾病包括阿爾茨海默氏癥等中的一種或多種。
所述的抗心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品是指用于預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究心腦系統(tǒng)疾病的產(chǎn)品，是包括醫(yī)藥、食品或飲料等領(lǐng)域產(chǎn)品中的一種或多種，例如包括藥物、試劑、食品、保健食品、添加劑或飲料等中的一種或多種，優(yōu)選藥物、保健食品或添加劑等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選藥物。
(一)技術(shù)構(gòu)思自主開發(fā)創(chuàng)新藥物是中國目前的一項(xiàng)緊迫任務(wù)，中國醫(yī)藥行業(yè)具有悠久的發(fā)展歷史，在預(yù)防和治療疾病等方面也積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，從中藥中尋找有效的活性成分是一條有效的途徑，也是中國創(chuàng)新藥物研制的優(yōu)勢之所在。
在篩選具心腦血管活性的天然成分過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)中藥枳實(shí)(fruit of Citrusaurantium.L)的乙醇浸膏具較強(qiáng)的心腦血管活性，通過對(duì)其進(jìn)行活性指導(dǎo)的分離，發(fā)現(xiàn)活性部位是包括柚皮素和其衍生物一系列黃酮的混合物，進(jìn)一步分離得到柚皮苷(naringin)、橙皮苷(hesperidin)等各單體，各單體均顯示強(qiáng)心腦血管活性。利用分離得到的柚皮苷、橙皮苷制備其它柚皮素的衍生物，進(jìn)一步研究柚皮素相關(guān)衍生物的心腦血管活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)柚皮素及其衍生物均具有較強(qiáng)的心腦血管活性。
所述的心腦血管活性具體地是指柚皮素及其衍生物在制備抗心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品的應(yīng)用，例如，柚皮素及其衍生物在制備治療腦梗死、心肌梗死的藥物中的應(yīng)用，柚皮素及其衍生物在制備預(yù)防或治療腦缺血——再灌注損傷、心肌缺血——再灌注損傷的藥物中的應(yīng)用，柚皮素及其衍生物在制備預(yù)防或治療腦卒中后遺癥、血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。
所述的缺血——再灌注損傷是指組織器官缺血的基礎(chǔ)上恢復(fù)血流后，組織器官的損傷反而加重；
所述的防治腦卒中后遺癥是指對(duì)已經(jīng)發(fā)生的腦血管事件減少其后遺癥(如偏癱，大、小便失禁，語言障礙等)的發(fā)生，并治療已經(jīng)產(chǎn)生的后遺癥。
柚皮素及其衍生物尤其在防治血管性癡呆方面表現(xiàn)出了相當(dāng)強(qiáng)的活性，鑒于此又研究了其對(duì)阿爾茨海默氏癥的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)柚皮素及其衍生物對(duì)防治阿爾茨海默氏癥同樣具有相當(dāng)強(qiáng)的活性。
目前抗AD藥物的作用主要是緩解癥狀，并不遏制病情的發(fā)展。因此，研究出一種有效的預(yù)防、診斷、治療和研究方法來阻止?jié)撛诘陌l(fā)病過程是很必要的。
根據(jù)所檢索的有關(guān)文獻(xiàn)資料，發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)柚皮素及其衍生物具有多種顯著的藥理活性。而進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)和研究結(jié)果，也證明和證實(shí)了柚皮素及其衍生物在預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)和治療AD等方面具有顯著的活性。
(二)柚皮素及其衍生物所述的柚皮素及其衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)通式如下 其中，R1是包括氫(H)或烷基等中的一種或多種，優(yōu)選包括氫、甲基(CH3)或乙基(C2H5)等中的一種或多種；R2是包括氫(H)、羥基或烷氧基等中的一種或多種，優(yōu)選包括氫、羥基、甲氧基或乙氧基等中的一種或多種；R3是包括氫、烷基或糖基等中的一種或多種，優(yōu)選包括氫、具有1～6個(gè)碳原子的烷基或者含1～6個(gè)單糖的糖基等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選包括氫、甲基、乙基或含3個(gè)單糖的糖基等中的一種或多種。
所述的烷基是包括具有1～6個(gè)碳原子的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)狀烷基等中的一種或多種，是包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、叔戊基、己基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基等中的一種或多種，優(yōu)選包括具有1～3個(gè)碳原子的烷基等中的一種或多種，特別優(yōu)選包括甲基或乙基等中的一種或多種；所述的烷氧基中的烷基是包括具有1～6個(gè)碳原子的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)狀烷基等中的一種或多種，是包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、叔戊基、己基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基等中的一種或多種，優(yōu)選包括具有1～3個(gè)碳原子的烷基等中的一種或多種，特別優(yōu)選包括甲基或乙基等中的一種或多種；所述的單糖是指吡喃葡萄糖、吡喃木糖、吡喃阿拉伯糖、吡喃鼠李糖，糖鏈可為直鏈或支鏈，連接方式可為(1-2)、(1-3)、(1-4)或(1-6)連接。
所述的柚皮素及其衍生物優(yōu)選包括單體柚皮素及其衍生物、橙皮素及其衍生物、異櫻花素及其衍生物或圣草酚及其衍生物等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選單體柚皮素及其衍生物。
當(dāng)R1為氫且R2為氫時(shí)，表示單體柚皮素及其衍生物；當(dāng)R1為甲基且R2為羥基時(shí)，表示橙皮素及其衍生物；當(dāng)R1為甲基且R2為氫時(shí)，表示異櫻花素及其衍生物；當(dāng)R1為氫且R2為羥基時(shí)，表示圣草酚及其衍生物。
再進(jìn)一步優(yōu)選的具體化合物是包括單體柚皮素、柚皮苷、柚皮素-7-O-β-蕓香糖苷、柚皮素-7-O-葡萄糖苷、柚皮素-7-O-鼠李糖苷、橙皮素、橙皮苷、新橙皮苷、橙皮素-7-O-葡萄糖苷、橙皮素-7-O-鼠李糖苷、異櫻花素、櫻花素、枸桔苷、異櫻花素-7-O-β-蕓香糖苷、異櫻花素-7-O-葡萄糖苷、異櫻花素-7-O-鼠李糖苷、圣草酚、圣草枸櫞苷、新圣草枸櫞苷、圣草酚-7-O-葡萄糖苷或圣草酚-7-O-鼠李糖苷等中的一種或多種。上述化合物的基團(tuán)如表1。
表1、柚皮素及其相關(guān)的衍生物


本發(fā)明所說的柚皮素及其衍生物大部分是從柑桔屬植物(Citrus)果實(shí)及果皮中提取分離的，相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道了柚皮素及其衍生物的提取分離方法，并對(duì)柚皮素及其衍生物的理化數(shù)據(jù)進(jìn)行了詳細(xì)的報(bào)道，本發(fā)明不再贅述。
另外還有部分柚皮素及其衍生物可以通過提取的天然柚皮素衍生物水解或其它理化方法轉(zhuǎn)化制備，相關(guān)文獻(xiàn)也有報(bào)道，本發(fā)明不再贅述。
(三)柚皮素及其衍生物的藥理活性本發(fā)明對(duì)柚皮素及其衍生物的心腦血管活性進(jìn)行了多方面的試驗(yàn)。通過實(shí)驗(yàn)證明，①柚皮素及其衍生物對(duì)采用結(jié)扎兩側(cè)頸總動(dòng)脈的小鼠急性腦缺血模型有明顯延長小鼠平均存活時(shí)間的作用；②對(duì)采用栓線法制備的大鼠局灶性腦缺血—再灌注模型有明顯降低腦含水量，縮小梗死面積的作用；③對(duì)大鼠腦缺血—再灌注損傷致血管性癡呆模型有明顯改善學(xué)習(xí)記憶功能的作用；④對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎造成心肌梗塞模型有明顯降低心肌缺血程度和范圍，減少心肌梗塞范圍的作用；⑤對(duì)大鼠心肌缺血—再灌注損傷模型有明顯減少心肌梗塞范圍的作用。
本發(fā)明通過實(shí)驗(yàn)還證明了柚皮素及其衍生物對(duì)β-淀粉樣肽誘導(dǎo)的阿爾茨海默病模型大鼠有明顯的改善其學(xué)習(xí)記憶功能的作用。
(四)柚皮素及其衍生物的用途1、概述本發(fā)明的目的是提供一種用于預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究抗心腦系統(tǒng)疾病的產(chǎn)品，是包括醫(yī)藥、食品和飲料等領(lǐng)域產(chǎn)品中的一種或多種，例如包括藥物、試劑、食品、保健食品、添加劑、飲料等中的一種或多種，優(yōu)選藥物、保健食品、添加劑，進(jìn)一步優(yōu)選藥物。
通過藥理活性篩選證明，柚皮素及其衍生物具有預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究心腦系統(tǒng)疾病的活性。已完成的急性毒性實(shí)驗(yàn)證明，小鼠灌胃給藥對(duì)該活性部位的最大耐受量超過2.0g/kg，相當(dāng)于臨床推薦用藥劑量的440倍，表明該柚皮素及其衍生物安全可靠。
綜上所述，發(fā)明人對(duì)柚皮素及其衍生物進(jìn)行了理論探索，經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)研究特別是長期的藥理學(xué)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)所述及的柚皮素及其衍生物有顯著的預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究心腦系統(tǒng)疾病的活性。因此，柚皮素及其衍生物及其組合物可用于制備抗心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品，優(yōu)選以本發(fā)明柚皮素及其衍生物為原料制備而成的藥物。
2、柚皮素及其衍生物及其組合物的使用方法與要求本發(fā)明所述及的柚皮素及其衍生物可以單獨(dú)或與其它活性組分聯(lián)合使用，包括用于制備預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究心腦系統(tǒng)疾病的產(chǎn)品，是包括醫(yī)藥、食品和飲料等領(lǐng)域產(chǎn)品中的一種或多種，例如包括藥物、試劑、食品、保健食品、添加劑、飲料等中的一種或多種，優(yōu)選藥物、保健食品、添加劑，進(jìn)一步優(yōu)選藥物。
在具體使用方面，本發(fā)明所述的柚皮素及其衍生物能夠單獨(dú)使用，還能夠與其他許多化學(xué)物質(zhì)一起使用。無論這些化學(xué)物質(zhì)是否具有生物活性或具有治療疾病的功能，包括輔助功能如協(xié)同放大作用、拮抗或緩解柚皮素及其衍生物的副作用等，這些化學(xué)物質(zhì)是包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體、食品、天然產(chǎn)物、化學(xué)合成藥物或人類用藥等中的一種或多種；優(yōu)選包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體或者食品等中的一種或多種；進(jìn)一步優(yōu)選醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。
本文使用的“醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體”是包括任何和所有的生理適用的溶劑、分散介質(zhì)、胞衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑或吸收延遲劑等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體的例子包括一種或多種的水、鹽水、磷酸緩沖鹽水、葡萄糖、甘油或乙醇等及其組合物中的一種或多種。在許多情況下，在該組合物中最好包括等滲劑，例如，糖、諸如甘露醇、山梨醇、山梨醇的多元醇或氯化鈉等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體還可以包含少量的輔助物質(zhì)，例如潤濕劑或乳化劑、防腐劑或緩沖液等中的一種或多種，它們增強(qiáng)了該柚皮素及其衍生物的有效期或效力。
從具體的分類上看，所說的醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體是指醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括賦形劑，如淀粉或水等中的一種或多種；潤滑劑，如甘油或硬脂酸鎂等中的一種或多種；崩解劑，如微晶纖維素、瓊脂、碳酸鈣或碳酸氫鈉等中的一種或多種；填充劑，如淀粉或乳糖等中的一種或多種；粘接劑，如預(yù)膠化淀粉、糊精、纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等中的一種或多種；滲透壓調(diào)節(jié)劑，如葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一種或多種；稀釋劑，如水等；吸收促進(jìn)劑，如季銨化合物等；表面活性劑，如十六烷醇等；吸附載體，如高嶺土或皂粘土等中的一種或多種；潤滑劑，如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂或聚乙二醇等中的一種或多種；另外，還可以在組合物中加入其它輔劑，如香味劑或甜味劑等中的一種或多種。
例如，將活性組分柚皮素及其衍生物溶解、混懸或乳化于適宜的水性溶劑中(例如，蒸餾水、生理鹽水或格林溶液等中的一種或多種)或油性溶劑中(例如，植物油例如橄欖油、芝麻油、棉籽油、玉米油或丙二醇等中的一種或多種)中，即可制得注射制劑，其中溶劑中可含有分散劑(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯硬化蓖麻油60、聚乙二醇、苯甲醇、氯代丁醇或苯酚等中的一種或多種)、滲透壓調(diào)節(jié)劑(例如，氯化鈉、甘油、D9—甘露糖、D—山梨醇或葡萄糖等中的一種或多種)。在這種情況下，如有必要，可加入添加劑，例如增溶劑(例如，水楊酸鈉或醋酸鈉等中的一種或多種)、穩(wěn)定劑(例如，人血清白蛋白等)、止痛劑(例如，苯甲醇等)等。
本發(fā)明所述及的柚皮素及其衍生物還可以以組合物的形式聯(lián)合使用，特別是與用其它化學(xué)物質(zhì)如藥物對(duì)動(dòng)物尤其是哺乳動(dòng)物包括人或其他動(dòng)物進(jìn)行治療所用的組合物或者是類似的組合物。所述哺乳動(dòng)物，包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、豬、馬、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、獼猴或恒河猴等中的一種或多種，優(yōu)選人、小鼠、大鼠、猴、豬、兔或犬等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選人、大鼠或猴等中的一種或多種。例如，可以將本發(fā)明柚皮素及其衍生物加入適于給與受治療者的藥用組合物中。通常，該藥用組合物包含本發(fā)明柚皮素及其衍生物和藥學(xué)上可接受的載體。
柚皮素及其衍生物的組合物特別是藥物組合物可以有各種形式，包括例如液體、半固體和固體等劑量形式中的一種或多種；其中所說的藥物組合物包括治療有效量的柚皮素及其衍生物為活性成分，以及一種或多種醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。
柚皮素及其衍生物的藥物組合物可以采用本領(lǐng)域公知的常規(guī)生產(chǎn)方法制成各種劑型，例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。所述的劑型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑或注射劑等中的一種或多種，采取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一種或多種)、粘膜透析等中的一種或多種給藥途徑進(jìn)行抗AD及其相關(guān)病癥的治療或科學(xué)研究。
藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.1～99.9％的活性成分柚皮素及其衍生物，進(jìn)一步優(yōu)選含有重量比為1％～95％的活性成分柚皮素及其衍生物，再優(yōu)選含有重量比為5％～90％的活性成分柚皮素及其衍生物，最優(yōu)選含有重量比為10％～40％的活性成分柚皮素及其衍生物。
柚皮素及其衍生物的藥物組合物一般必須無菌且在生產(chǎn)儲(chǔ)存條件下穩(wěn)定?？梢詫⒃摻M合物配制成溶液、微乳液、分散液、脂質(zhì)體或其它適合于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。通過將所需量的該柚皮素及其衍生物與所需上述成分的一種或組合一起加入適當(dāng)?shù)娜軇┲胁⒔又M(jìn)行除菌過濾制備無菌注射液。一般而言，通過將該柚皮素及其衍生物加入含有基本分散介質(zhì)和所需的上述其它成分的無菌溶媒中制備分散液。在用于制備無菌注射液的無菌粉劑的情況下，推薦的制備方法是真空干燥和冷凍干燥劑。例如，通過諸如卵磷脂的包衣、在分散液的情況下通過保持所需顆粒大小和通過使用表面活性劑，可以保持溶液的適當(dāng)流動(dòng)性。通過在該組合物中包括延遲吸收的藥劑(例如單硬脂酸鹽或明膠)可以達(dá)到注射組合物的延長吸收。
用于患者時(shí)，本發(fā)明所述的柚皮素及其衍生物劑量為1～500mg/kg·天(d)，該劑量或用量通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定，優(yōu)選5～20mg/kg·d。也就是說，以下的劑量范圍均是安全可靠的，柚皮素及其衍生物劑量為1～3600mg/d(以70kg體重計(jì)算)；口服1～2000mg，優(yōu)選50～1000mg；注射2～400mg，優(yōu)選50～200mg；膏劑(lotion)0.5～5％，優(yōu)選1～2％。
本發(fā)明柚皮素及其衍生物及其藥用組合物可以包括“治療有效量”或“預(yù)防有效量”的本發(fā)明柚皮素及其衍生物?！爸委熡行Я俊笔侵冈诒匾膭┝亢蜁r(shí)間下有效達(dá)到所需治療效果的量。柚皮素及其衍生物的治療有效量可以根據(jù)諸如個(gè)體的病況、年齡、性別和體重以及該柚皮素及其衍生物在該個(gè)體引起所需反應(yīng)的能力等因素而變化。治療有效量亦指該柚皮素及其衍生物的有益治療效果超過其任何毒性或有害效果的量?！邦A(yù)防有效量”是指在必要?jiǎng)┝亢蜁r(shí)間下有效達(dá)到所需預(yù)防效果的量。因?yàn)轭A(yù)防劑量用于患病前或疾病早期的受治療者，預(yù)防有效量通常小于治療有效量。本發(fā)明柚皮素及其衍生物的治療或預(yù)防有效量的典型的非限制性范圍是5～20mg/kg，更優(yōu)選為5～10mg/kg。應(yīng)注意，劑量值將根據(jù)欲減輕的疾病類型和嚴(yán)重性變化，也就是說用于患者時(shí)，本發(fā)明所述的柚皮素及其衍生物劑量或用量，通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定。另外，應(yīng)理解，對(duì)于任何特定受治療者，應(yīng)隨著時(shí)間根據(jù)個(gè)體需要和給與或監(jiān)督給與所述組合物的人的專業(yè)判斷調(diào)整特定劑量制度，并且本文設(shè)定的劑量范圍僅為例證性的，并不會(huì)限制要求保護(hù)的組合物的范圍或?qū)嵺`。
也就是說，需要根據(jù)治療的對(duì)象、給藥途徑、所治療疾病和狀況等，變化本發(fā)明柚皮素及其衍生物的每次和/或每日的劑量或用量。例如，經(jīng)靜脈給予哺乳動(dòng)物，尤其是成年人(如體重60kg)，所述柚皮素及其衍生物的單劑量約為5～10mg，優(yōu)選約10mg，優(yōu)選每日給藥1～3次?？梢哉{(diào)整劑量單位，以提拱最佳所需反應(yīng)(例如，治療或預(yù)防應(yīng)答)。例如，可以單次大劑量給藥，可以在一段時(shí)間內(nèi)給予幾個(gè)均分量或根據(jù)治療情況的迫切性按比例降低或增加劑量。配制易于給藥和劑量統(tǒng)一的劑量單位形式的非腸道組合物尤其有利。本文使用的劑量單位形式，指適于欲治療的哺乳動(dòng)物受治療者的單元?jiǎng)┝康奈锢矸蛛x單位；每個(gè)單位含有預(yù)定量的計(jì)算用于與所需藥用載體一同產(chǎn)生所需治療效果的活性物柚皮素及其衍生物。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格，由以下確定并直接取決于以下(a)該柚皮素及其衍生物的獨(dú)特特征和欲達(dá)到的特定治療或預(yù)防效果，和(b)在混合這種用于治療個(gè)體敏感性柚皮素及其衍生物的技術(shù)中的內(nèi)在限制。
3、柚皮素及其衍生物及其組合物的藥物劑型和給藥途徑本發(fā)明所述的柚皮素及其衍生物及其組合物制備的用于預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究心腦系統(tǒng)疾病的產(chǎn)品，其中按照飲料、食品技術(shù)領(lǐng)域的要求制備的產(chǎn)品能夠用于預(yù)防、保護(hù)和治療心腦系統(tǒng)疾病；按照醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域的要求制備的產(chǎn)品能夠用于患者的治療或保健，既能夠單獨(dú)直接用于制備治療或保健的藥物，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行混合或組合，直接或間接用于制備治療或保健的藥物。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與本節(jié)上文中所述的相同。
在本發(fā)明中，所需物料包括本發(fā)明的原料、上述配套使用的化學(xué)物質(zhì)等，均應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況和需要，采用食品級(jí)或藥用級(jí)的物料。
本發(fā)明所述的柚皮素及其衍生物及其組合物，可以用本領(lǐng)域已知的各種方法給藥，盡管在許多治療用途中推薦的給藥途徑/給藥方式是噴霧劑或口服給藥。但是，技術(shù)人員會(huì)理解給藥途徑/給藥方式隨所需的結(jié)果而變化。在某些具體實(shí)施中，該活性化合物可以與保護(hù)該化合物免于快速釋放的載體一同制備例如空釋制劑，包括移植物傳遞系統(tǒng)、透皮貼傳遞系統(tǒng)或微囊傳遞系統(tǒng)等中的一種或多種。此外，還可以使用生物可降解的、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚羥基乙酸、膠原蛋白、聚正酯或聚乳酸等中的一種或多種。制備這種制劑的許多方法均已申請專利或一般為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知(參見例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J.R.Robinson編輯，Marcel DekkerInc.，紐約，1978)。
本發(fā)明所述的柚皮素及其衍生物及其組合物，通常通過口服、鼻吸入、直腸或腸胃外給藥等中的一種或多種方式，施用于需要這種治療的患者。
也就是說，柚皮素及其衍生物的藥物組合物可以采用本領(lǐng)域公知的方法制成各種劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、注射劑等，采取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射、皮下注射等)、粘摸透析等給藥途徑進(jìn)行心腦血管疾病或阿爾茨海默氏癥的防治。
用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑或膠囊等中的一種或多種。在實(shí)施時(shí)，本發(fā)明柚皮素及其衍生物可以與例如惰性稀釋劑或可同化的食用載體一同口服。該柚皮素及其衍生物(和共它成分，如果需要)亦可以包于硬或軟殼明膠膠囊、壓制成片劑或直接加入受治療者的膳食中。關(guān)于口服治療給藥，可以將所述柚皮素及其衍生物與賦形劑一起加入并以可食片劑、頰含片劑、錠劑、膠囊、懸液、糖漿或糯米紙囊劑等等中的一種或多種形式使用。
為了以非腸道給藥之外給予本發(fā)明柚皮素及其衍生物，可能需要用防止其失活的材料對(duì)該柚皮素及其衍生物包衣或與該柚皮素及其衍生物一同給予。亦可以將補(bǔ)充的活性化合物加入該組合物中。在具體實(shí)施時(shí)，將本發(fā)明柚皮素及其衍生物與一種或多種可以用于治療疾病的其它治療藥物共配制和/或共給予。這種聯(lián)合使用，可以優(yōu)越地利用較低劑量的該給予的治療藥物，因此避免可能的毒性或與各種單一療法相關(guān)的并發(fā)癥。
制成液體制劑如水劑、油懸浮劑或其它液體制劑中的一種或多種，如糖漿或酏劑等中的一種或多種；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液劑、水劑或油性懸浮劑等中的一種或多種。
以上所述的使用形式中，優(yōu)選的形式是片劑、包衣片劑、膠囊、栓劑或注射劑等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選片劑、膠囊或注射劑等中的一種或多種，特別優(yōu)選注射劑。
綜上所述，本發(fā)明柚皮素及其衍生物及其組合物可用于制備預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究心腦系統(tǒng)疾病的產(chǎn)品，是包括醫(yī)藥、食品和飲料等領(lǐng)域產(chǎn)品中的一種或多種，例如包括藥物、試劑、食品、保健食品、添加劑、飲料等中的一種或多種，優(yōu)選藥物、保健食品、添加劑，進(jìn)一步優(yōu)選藥物。
(五)技術(shù)特長本發(fā)明對(duì)柚皮素及其衍生物拓展了新的醫(yī)藥用途，也為預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究心腦系統(tǒng)疾病提供了一種新的藥物來源。本發(fā)明的柚皮素及其衍生物安全低毒，藥理作用較強(qiáng)，可用于制備預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究心腦系統(tǒng)疾病的產(chǎn)品。
本發(fā)明有針對(duì)性地研究柚皮素及其衍生物，柚皮素及其衍生物藥理作用較強(qiáng)，其原料來源豐富、廣泛、價(jià)廉，制備工藝簡單，得率高；且使用安全，而且使用范圍特別廣，能夠最大限度發(fā)揮作用，易推廣應(yīng)用，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明所述及的柚皮素及其衍生物，以及藥物組合物是一種安全、高效、穩(wěn)定、價(jià)廉的防治心腦血管疾病或阿爾茨海默氏癥的藥物。其制備成本低廉，如柚皮苷在某些藥材中含量高達(dá)12％，而且提取方法簡單；活性成分明確；活性高，如柚皮苷活性高于燈盞花素；毒性較低，柚皮苷口服的最大耐受量＞5g/kg。
此外，柚皮素及其衍生物化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究心腦系統(tǒng)疾病的效果明顯，故其更適于預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)。
總之，本發(fā)明積極適應(yīng)了現(xiàn)代醫(yī)療和科研領(lǐng)域的工作需要和人性化服務(wù)的需要，是用于預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究心腦系統(tǒng)疾病等方面的安全原料。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明研究了現(xiàn)有的柚皮素及其衍生物的新的藥理作用和新的用途，提供了一種能夠用于制備抗心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品的原料，便于醫(yī)療行業(yè)和相關(guān)行業(yè)如食品、飲料等領(lǐng)域的安全使用。
本發(fā)明制備粉針劑一般采用常規(guī)的冷凍干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取柚皮素及其衍生物，加入賦形劑，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，灌裝，半軋塞，冷凍干燥，壓塞軋蓋即可。所用的賦形劑選自甘露醇、水解明膠、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷等中的一種或幾種。每瓶含柚皮素及其衍生物10～100mg。
本發(fā)明制備粉針劑也可采用噴霧干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取柚皮素及其衍生物，加或不加賦形劑(賦形劑同上)，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，噴霧干燥，無菌分裝，壓塞軋蓋即可。每瓶含柚皮素及其衍生物10～100mg。
本發(fā)明制備小針劑時(shí)，以注射用水作為溶媒配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。每支含柚皮素及其衍生物10～100mg。
本發(fā)明制備葡萄糖輸液或氯化鈉輸液，以注射用水作為溶媒，加入適量葡萄糖或氯化鈉配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。每瓶含柚皮素及其衍生物10～100mg。
本發(fā)明制備片劑、膠囊、顆粒劑、口服液等口服制劑，輔料可以是乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸鹽等，按常規(guī)技術(shù)制備。
在本發(fā)明中，以上所述的具體實(shí)施方式
和以下所述的實(shí)例均是為了更好地闡述本發(fā)明，并不是用來限制發(fā)明的范圍。
下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)描述。
實(shí)施例2、柚皮素及其衍生物對(duì)大鼠局灶性腦缺血—再灌注損傷的保護(hù)作用組別①空白對(duì)照組給予與藥物組等體積的生理鹽水；②陽性對(duì)照藥組給予藥物燈盞花素片(上海雷允上藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)031111)，劑量50mg/kg；③試驗(yàn)藥物組給予被檢測藥物，劑量為50mg/kg；方法將SD大鼠，280～300g，用10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉，頸正中切口，分離、結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈近心端、頸外動(dòng)脈及其分支動(dòng)脈。分離右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈，沿頸內(nèi)動(dòng)脈向下分離翼顎動(dòng)脈，根部結(jié)扎該分枝。在頸外動(dòng)脈近端備線、頸內(nèi)動(dòng)脈遠(yuǎn)端及頸總動(dòng)脈放置動(dòng)脈夾，頸總動(dòng)脈分叉處靠頸外動(dòng)脈側(cè)切口，插入4-0尼龍線，其深度為17～20mm，栓線進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈，入顱至大腦前動(dòng)脈，阻斷大腦中動(dòng)脈所有血流來源。撤掉動(dòng)脈夾，扎緊備線，外留1cm長線頭，縫合皮膚。缺血同時(shí)灌胃給藥或灌胃給生理鹽水。繼續(xù)缺血2小時(shí)后再灌注，勿需再次麻醉和切開皮膚，輕輕提拉所留線頭至有阻力時(shí)提示尼龍線頭端已至頸外動(dòng)脈切口處，血流再通。假手術(shù)組除不插線外，其余步驟同上。再灌注24h后存活鼠，一部分每組8只)處死取大腦，稱左右腦半球濕重，置160℃烤箱內(nèi)24小時(shí)后稱干重，按以下公式計(jì)算腦組織含水量腦組織含水量(％)＝(濕重-干重)/濕重×100％；一部分(每組8只)快速斷頭取鼠大腦，切下厚約2mm冠狀腦片，立刻置于2％TTC溶液中，37℃孵育30分鐘。梗塞區(qū)呈現(xiàn)白色，非梗塞區(qū)呈現(xiàn)紅色。數(shù)碼相機(jī)拍攝記錄，用Medbrain 2.0軟件(南京美易科技公司)測出腦片總體積及梗塞區(qū)體積，并計(jì)算梗塞區(qū)占整個(gè)腦組織的百分比(％)。
從表3看出，生理鹽水組缺血側(cè)(大腦右半球)的腦組織含水量顯著高于假手術(shù)組(P＜0.01)，柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷及燈盞花素組缺血側(cè)(大腦右半球)的腦組織含水量顯著高于其大腦左半球(P＜0.01)，與其大腦左半球無顯著性差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷均可降低缺血再灌注損傷腦組織的含水量，減輕缺血側(cè)腦半球水腫程度，對(duì)大鼠缺血再灌注腦損傷有保護(hù)作用。
從表4看出，假手術(shù)組腦組織無梗塞，生理鹽水組缺血側(cè)腦組織有梗塞現(xiàn)象，梗塞區(qū)占整個(gè)腦組織的百分比為31.2±8.50％，柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷及燈盞花素組均可顯著縮小缺血側(cè)腦組織梗塞體積，與生理鹽水組相比有非常顯著差異(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷引起的腦梗塞有顯著保護(hù)作用。
表3、對(duì)大鼠缺血—再灌注腦組織含水量的影響(x±SD，n＝8)

**P＜0.01與生理鹽水組比較；##P＜0.01與大腦左半球比較表4、對(duì)大鼠腦缺血再灌注的腦梗塞體積的影響(x±SD，n＝8)

與生理鹽水組(模型組)比較，**P＜0.01以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷對(duì)腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用。
實(shí)施例3、柚皮素及其衍生物對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響組別①空白對(duì)照組給予與藥物組等體積的生理鹽水；②陽性對(duì)照藥組給予藥物燈盞花素片(上海雷允上藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)031111)，劑量100mg/kg；③試驗(yàn)藥物組給予被檢測藥物，劑量為100mg/kg；方法將SD大鼠，280～300g，用10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉，頸正中切口，分離、結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈近心端、頸外動(dòng)脈及其分支動(dòng)脈。分離右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈，沿頸內(nèi)動(dòng)脈向下分離翼顎動(dòng)脈，根部結(jié)扎該分枝。在頸外動(dòng)脈近端備線、頸內(nèi)動(dòng)脈遠(yuǎn)端及頸總動(dòng)脈放置動(dòng)脈夾，頸總動(dòng)脈分叉處靠頸外動(dòng)脈側(cè)切口，插入4-0尼龍線，其深度為17～20mm，栓線進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈，入顱至大腦前動(dòng)脈，阻斷大腦中動(dòng)脈所有血流來源。撤掉動(dòng)脈夾，扎緊備線，外留1cm長線頭，縫合皮膚。繼續(xù)缺血2小時(shí)后再灌注，勿需再次麻醉和切開皮膚，輕輕提拉所留線頭至有阻力時(shí)提示尼龍線頭端已至頸外動(dòng)脈切口處，血流再通。假手術(shù)組除不插線外，其余步驟同上。大鼠再灌注8h后灌胃給藥，假手術(shù)組和模型組灌胃給予純凈水。大鼠灌胃1次/d，連續(xù)灌胃7d，然后進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn)評(píng)價(jià)大鼠的學(xué)習(xí)記憶的功能。定位航行試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)歷時(shí)4d，將大鼠面向池壁從4個(gè)不同象限放入水中，記錄大鼠尋找平臺(tái)所需時(shí)間(逃避潛伏期)，超過2min者，按2min計(jì)算，將4次測試的平均值記作大鼠尋找平臺(tái)的潛伏期，連續(xù)測試4d。每一象限結(jié)束后，讓大鼠在平臺(tái)上休息10s。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中保持操作者位置以及周圍環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定。
表5結(jié)果顯示大鼠局灶性腦缺血2h再灌注7d后造成血管性癡呆大鼠模型，模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶功能受損，受訓(xùn)第4天水迷宮逃避潛伏期時(shí)間與假手術(shù)組相比顯著延長(P＜0.01)，柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷及燈盞花素均可改善血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，顯著減少血管性癡呆大鼠水迷宮逃避潛伏期的時(shí)間，受訓(xùn)第4天水迷宮逃避潛伏期時(shí)間與模型組相比，差異具有顯著性意義(P＜0.01)，結(jié)果表明柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷及燈盞花素對(duì)血管性癡呆具有治療作用，改善其學(xué)習(xí)記憶功能。
表5、對(duì)術(shù)后7d實(shí)驗(yàn)性血管性癡呆大鼠水迷宮逃避潛伏期的影響(S，x±SD，n＝10)

與假手術(shù)組比較，##P＜0.01；與模型組比較**P＜0.01實(shí)施例4、柚皮素及其衍生物的對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎造成心肌梗塞模型的治療作用組別①空白對(duì)照組給予與藥物組等體積的生理鹽水；②陽性對(duì)照藥組給予藥物燈盞花素片(上海雷允上藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)031111)，劑量50mg/kg；③試驗(yàn)藥物組給予被檢測藥物，劑量為50mg/kg；方法犬稱重后以3％戊巴比妥鈉30mg/kg靜注麻醉。分離氣管并插入氣管插管，接SC-M5型麻醉呼吸機(jī)(上海醫(yī)療儀器廠)，待開胸后行機(jī)械通氣，呼吸頻率16～18次/分，潮氣量350～550ml。沿胸骨左緣第4肋間開胸，暴露心臟，剪開心包并作心包吊床。在左冠狀動(dòng)脈前降支第二至第三分支間游離冠狀動(dòng)脈，并在其下穿二根絲線，備用于兩步結(jié)扎。采用Harris兩步結(jié)扎法首次結(jié)扎前2分鐘，從股動(dòng)脈靜注利多卡因5mg/kg預(yù)防心律失常。在結(jié)扎時(shí)將一段直徑1mm的鋼絲插入第一松結(jié)內(nèi)，將鋼絲與冠狀動(dòng)脈一起結(jié)扎，而后抽出鋼絲。30分鐘后完全結(jié)扎第二結(jié)。
結(jié)扎2小時(shí)后取心臟，稱取全心重量；切去心房及右心室，稱出左心室重量，并在冠脈結(jié)扎線下，平行于冠狀溝將左心室切成等厚的5片，用生理鹽水洗凈，置0.05％氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)液37℃染色30分鐘。染色過程中不時(shí)搖動(dòng)染色液使之與心肌充分接觸。染色后立即用水沖去多余染料。梗死區(qū)不著色，非梗死區(qū)著暗藍(lán)色，剪去著色部分，將未著色的梗死區(qū)稱重，計(jì)算出梗塞區(qū)重量占全心及左心室重量的百分比。
結(jié)果1、對(duì)心肌梗塞范圍的定量組織學(xué)檢測的影響用定量組織學(xué)檢測心肌梗塞范圍即用N-BT染色顯示燈盞花素、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷對(duì)心肌梗塞范圍的影響與心外膜電圖測定的結(jié)果一致。燈盞花素、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷減少心肌梗塞范圍，心肌梗塞區(qū)與全心重量的比值和梗塞區(qū)與左心室重量的比值與生理鹽水組比較具有非常顯著性差異(P＜0.01)。結(jié)果見表6。
表6、對(duì)N-BT染色測定心肌梗塞范圍的影響(x±s，n＝5只/組)

**P＜0.01與生理鹽水組比較以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，燈盞花素、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷能顯著降低冠脈結(jié)扎犬的心肌缺血程度，縮小心肌缺血范圍，對(duì)心肌缺血有治療作用。
實(shí)施例5、柚皮素及其衍生物的對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用1、造模SD大鼠，2％戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉，仰臥位固定。以心電圖機(jī)記錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖監(jiān)測心臟情況。頸前正中切開，行氣管插管，接人工呼吸機(jī)，頻率為55次/分，潮氣量1ml。分離一側(cè)股靜脈供給藥用。在胸左側(cè)第四五肋間處切開胸壁并沿胸骨左緣2mm處切斷第四和第五肋骨，剪開心包膜，暴露心臟，于左冠狀動(dòng)脈前降支下穿1根0/3號(hào)縫合線，穩(wěn)定10min(穩(wěn)定后心電圖不正常者棄去)，將兩個(gè)線頭穿過一小段細(xì)硅膠管，在另一小段細(xì)硅膠管上打結(jié)作為缺血結(jié)扎(無ST段及T波改變者淘汰)，缺血10min后從股靜脈緩慢注射給藥，30min后剪斷結(jié)扎線，使前降支再灌注30min。
2、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的測定再灌注結(jié)束后，股動(dòng)脈取血，紫外分光法測定血清LDH、CK活性。
3、心肌梗塞范圍測定法在冠脈結(jié)扎線下，平行于冠狀溝，等厚地將心室肌橫切成5片，將5片心肌置于硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)染液中，37℃振搖染色15min后取出，正常心肌染為暗藍(lán)色，梗塞區(qū)心肌則不著色。在解剖鏡下分離梗塞區(qū)，分別稱重，以梗塞區(qū)心肌重量占心肌重量的百分比(％)作為衡量梗塞范圍的指標(biāo)。
心肌缺血再灌注后，血清LDH、CK活性明顯增加，心肌梗塞區(qū)重量明顯增加，與假手術(shù)對(duì)照組比較有非常顯著性差異(P＜0.01)；燈盞花素、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷降低血清LDH活性、CK活性、心肌梗塞區(qū)/全心重量百分比低于模型組，差異具有非常顯著性意義(P＜0.01)，提示燈盞花素、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷對(duì)心肌缺血再灌注損傷有保護(hù)作用。結(jié)果見表7。
表7、對(duì)大鼠心臟缺血再灌注損傷的影響(x±s，n＝10)

**P＜0.01與生理鹽水組比較；△△P＜0.01與生理鹽水組比較實(shí)施例6、柚皮素及其衍生物的對(duì)(β-淀粉樣肽)Aβ1-40誘導(dǎo)的阿爾茨海默病模型大鼠的影響1、分組①空白對(duì)照組給予與藥物組等體積的生理鹽水；②陽性對(duì)照藥組給予藥物燈盞花素片(上海雷允上藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)031111)，劑量100mg/kg；③試驗(yàn)藥物組給予被檢測藥物，劑量為100mg/kg；2、方法將Aβ1-40溶于無菌蒸餾水(10ug/ul)，用前37℃下孵育1周。SD大鼠、250～300g，采用腹腔注射10％水合氯醛(0.35g/kg)麻醉，頭頂部去毛，消毒皮膚并切開。立體定向儀固定頭部，暴露頭骨，選雙側(cè)海馬齒狀回背側(cè)細(xì)胞帶為注射區(qū)。定位坐標(biāo)為(AP-3.5mm，ML±2.0mm，DV 2.7mm)，以鉆頭鉆開顱骨，緩慢注射Aβ1-40，留針5min以保證溶液充分的擴(kuò)散，然后緩慢撤針。造模24h后分別灌胃給藥連續(xù)10d。對(duì)照組及模型組只以等量蒸餾水進(jìn)行灌胃。連續(xù)灌胃10d，然后進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn)評(píng)價(jià)大鼠的學(xué)習(xí)記憶的功能。定位航行試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)歷時(shí)4d，將大鼠面向池壁從4個(gè)不同象限放入水中，記錄大鼠尋找平臺(tái)所需時(shí)間(逃避潛伏期)，超過2min者，按2min計(jì)算，將4次測試的平均值記作大鼠尋找平臺(tái)的潛伏期，連續(xù)測試4d。每一象限結(jié)束后，讓大鼠在平臺(tái)上休息10s。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中保持操作者位置以及周圍環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定。
表8、對(duì)術(shù)后10d實(shí)驗(yàn)性阿爾茨海默病大鼠水迷宮逃避潛伏期的影響(x±SD，n＝10，s)

與假手術(shù)組比較，##P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05結(jié)果顯示大鼠海馬注射β-淀粉樣肽制成阿爾茨海默病模型，模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶功能受損，受訓(xùn)第4天水迷宮逃避潛伏期時(shí)間與假手術(shù)組相比顯著延長(P＜0.01)，柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷均可改善阿爾茨海默病大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能，顯著減少阿爾茨海默病大鼠水迷宮逃避潛伏期的時(shí)間，受訓(xùn)第4天水迷宮逃避潛伏期時(shí)間與模型組相比，差異具有顯著性意義(P＜0.01)，結(jié)果表明柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、橙皮素、異櫻花素、枸桔苷、圣草酚、圣草枸櫞苷對(duì)阿爾茨海默病具有治療作用，改善其學(xué)習(xí)記憶功能。結(jié)果見表8。
實(shí)施例7、柚皮素及其衍生物粉針劑的制備取柚皮素及其衍生物30g，加入右旋糖苷30g，加500ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至2000ml，加3.0g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；灌裝到無菌的西林瓶中，每瓶2ml，半軋塞；冷凍干燥，再壓塞軋蓋即可。
實(shí)施例8、柚皮素及其衍生物粉針劑的制備取柚皮素及其衍生物60g，加500ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；冷凍干燥得無菌粉末，分裝成1000瓶。
實(shí)施例9、柚皮素及其衍生物粉針劑的制備取柚皮素及其衍生物40g，加入乳糖50g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；噴霧干燥得無菌粉末，分裝成1000瓶。
實(shí)施例10、柚皮素及其衍生物粉針劑的制備(1)處方注射用柚皮素及其衍生物半成品 150g甘露醇 400g注射用水 加至10000ml共制成 10000瓶(2)制備工藝按以上處方稱取處方量柚皮素及其衍生物，加入到適量注射用水中，攪拌使其溶解；加入處方量甘露醇，攪拌使完全溶解，加注射用水至全量；加入液體量的0.1％針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；灌裝，半軋塞；冷凍干燥，壓塞軋蓋。共制得9735瓶，成品率為97.35％。
實(shí)施例11、柚皮苷注射劑的制備處方柚皮苷20g乙醇(95％)2000g丙二醇(C.P.) 1000g注射用水 加至10000ml制成1000支工藝取20℃乙醇(95％)2000g，加入活性炭5g攪拌，經(jīng)砂芯組減壓過濾，備用。取處方量柚皮苷加入上述乙醇2000g中，加熱至約40℃，充分?jǐn)嚢?，使之溶解澄明，然后加入處方量丙二醇，再加入新鮮注射用水使全量成10000ml，充分?jǐn)嚢?，混勻，加入活性?g，經(jīng)砂芯組減壓過濾澄明，合并前后濾液，再以專用砂芯精濾澄明。檢查含量及澄明度合格后灌封，100℃流通蒸氣滅菌30min，即得每只10ml含柚皮苷20mg的注射劑。
實(shí)施例12、柚皮素及其衍生物小針劑的制備取柚皮素及其衍生物5g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶10ml，滅菌即可。
實(shí)施例13、柚皮素及其衍生物小針劑的制備取柚皮素及其衍生物10g，加入丙二醇30g，加200ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶5ml，滅菌即可。
實(shí)施例14、柚皮素及其衍生物葡萄糖輸液的制備取柚皮素及其衍生物2g，加入聚乙二醇10g，加入葡萄糖500g，加2000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至5000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶100ml，滅菌即可。
實(shí)施例15、柚皮素及其衍生物葡萄糖輸液的制備取柚皮素及其衍生物2g，加入葡萄糖250g，加1000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至5000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶250ml，滅菌即可。
實(shí)施例16、柚皮素及其衍生物氯化鈉輸液的制備取柚皮素及其衍生物1g，加入氯化鈉90g，加1000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至10000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶250ml，滅菌即可。
實(shí)施例17、柚皮素及其衍生物片劑的制備(1)處方柚皮素及其衍生物1000.0g微晶纖維素 1170.0g預(yù)膠化淀粉 690.0g乳糖125.0g5％PVP無水乙醇 適量硬脂酸鎂15.0g共制成 10000片(2)制備工藝按以上處方分別稱取處方量的主藥與輔料，按等量遞加法混合均勻后照處方工藝項(xiàng)下進(jìn)行制軟材、制顆粒，干燥，整粒等過程，計(jì)算好片重后用單沖壓片機(jī)和10.5mm淺凹沖模壓片，控制裸片硬度5～7kg，共制得片劑9698片，成品率為96.98％。
采用滾轉(zhuǎn)噴霧法包衣，包衣工藝如下包衣液的配制胃溶薄膜衣料85G61235，由上海卡樂康包衣技術(shù)有限公司提供包衣工藝將待包衣裸片(硬度5kg～7kg)放入包衣鍋中，啟動(dòng)攪拌裝置和鼓風(fēng)加熱裝置，待裸片溫度升至40℃時(shí)，開始打開噴槍對(duì)準(zhǔn)片床的上1/3處噴入包衣液包衣，控制片床溫度38℃～42℃，氣磅壓力6kg，包衣液流速為50mL/min，包衣膜重占包衣片重的3％。
實(shí)施例18、柚皮苷片劑的制備處方柚皮苷 100g淀粉 30g乳糖 40g羧甲基淀粉鈉 5g淀粉漿(7％) 適量硬脂酸鎂 1％(1.45g)制成1000片工藝取處方量柚皮苷，粉碎過100目篩，再將處方量的淀粉、乳糖粉碎過100目篩，混勻。將柚皮苷加入混勻的淀粉和乳糖中，混勻。加入適量50％乙醇拌勻，經(jīng)16目鐵篩絲網(wǎng)制粒，60℃以下干燥，整粒，加入適量硬脂酸鎂混勻，分析含量后壓片?？芍瞥?000片每片含100mg柚皮苷的片劑。
實(shí)施例19、柚皮素及其衍生物膠囊劑的制備(1)處方柚皮素及其衍生物1000.0g微晶纖維素 1000g羧甲基淀粉鈉140g無水乙醇適量滑石粉 80g共制成 10000膠囊(2)制備工藝 按以上處方分別取原料藥柚皮素及其衍生物及處方中其它輔料分別過100目篩，置60℃烘干，稱取處方量柚皮素及其衍生物與微晶纖維索、羧甲基淀粉鈉等量遞加法混合均勻，用適量無水乙醇制軟材，30目篩制粒，50～60℃干燥2小時(shí)，用30目篩整粒，加入處方量的滑石粉和羧甲基淀粉鈉混合均勻。
實(shí)施例20、柚皮素膠囊劑的制備處方柚皮素 50g淀粉 140g微粉硅膠 10g制成1000粒工藝取處方量柚皮素，粉碎過100目篩，加入處方量的淀粉、微粉硅膠中，混勻，直接裝入膠囊，可制成1000粒每粒含50mg柚皮素的膠囊劑。
實(shí)施例21、橙皮素膠囊劑的制備處方橙皮素 50g淀粉 140g微粉硅膠 10g制成1000粒工藝取處方量橙皮素，粉碎過100目篩，加入處方量的淀粉、微粉硅膠中，混勻，直接裝入膠囊，可制成1000粒每粒含50mg橙皮素的膠囊劑。
權(quán)利要求
1.柚皮素及其衍生物在制備抗心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品中的應(yīng)用。
2.柚皮素及其衍生物的組合物在制備抗心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的柚皮素及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品是指用于預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究心腦系統(tǒng)疾病的產(chǎn)品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的柚皮素及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品是包括醫(yī)藥、食品或飲料領(lǐng)域產(chǎn)品中的一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的柚皮素及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗心腦系統(tǒng)疾病產(chǎn)品是包括藥物、試劑、食品、保健食品、添加劑或飲料中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的柚皮素及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于，所述的心腦系統(tǒng)疾病是包括心腦血管疾病及其相關(guān)疾病、阿爾茨海默氏癥及其相關(guān)疾??；所述的心腦血管疾病及其相關(guān)疾病是包括腦梗死、心肌梗死、腦缺血——再灌注損傷、心肌缺血——再灌注損傷、卒中后遺癥、血管性癡呆中的一種或多種；所述的阿爾茨海默氏癥及其相關(guān)疾病是包括阿爾茨海默氏癥中的一種或多種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的柚皮素及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于，所述的柚皮素及其衍生物是包括單體柚皮素及其衍生物、橙皮素及其衍生物、異櫻花素及其衍生物或圣草酚及其衍生物中的一種或多種。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的柚皮素及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于，所述的柚皮素及其衍生物是包括單體柚皮素、柚皮苷、柚皮素-7-O-β-蕓香糖苷、柚皮素-7-O-葡萄糖苷、柚皮素-7-O-鼠李糖苷、橙皮素、橙皮苷、新橙皮苷、橙皮素-7-O-葡萄糖苷、橙皮素-7-O-鼠李糖苷、異櫻花素、櫻花素、枸桔苷、異櫻花素-7-O-β-蕓香糖苷、異櫻花素-7-O-葡萄糖苷、異櫻花素-7-O-鼠李糖苷、圣草酚、圣草枸櫞苷、新圣草枸櫞苷、圣草酚-7-O-葡萄糖苷或圣草酚-7-O-鼠李糖苷中的一種或多種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的柚皮素及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于，所述的柚皮素及其衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)通式如下 其中，R1是包括氫或烷基中的一種或多種；R2是包括氫、羥基或烷氧基中的一種或多種；R3是包括氫、烷基或糖基中的一種或多種；所述的烷基是包括具有1～6個(gè)碳原子的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)狀烷基中的一種或多種；所述的烷氧基中的烷基是包括具有1～6個(gè)碳原子的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)狀烷基中的一種或多種。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的柚皮素及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于，所述的R1是包括氫、甲基或乙基中的一種或多種；R2是包括氫、羥基、甲氧基或乙氧基中的一種或多種；R3是包括氫、具有1～6個(gè)碳原子的烷基或者含1～6個(gè)單糖的糖基中的一種或多種。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的柚皮素及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于，所述的R3是包括氫、甲基、乙基或含3個(gè)單糖的糖基中的一種或多種；所述的單糖是指吡喃葡萄糖、吡喃木糖、吡喃阿拉伯糖、吡喃鼠李糖，糖鏈可為直鏈或支鏈，連接方式可為(1-2)、(1-3)、(1-4)或(1-6)連接。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的柚皮素及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于，所述的烷基是包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、叔戊基、己基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基中的一種或多種；所述的烷氧基中的烷基是包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、叔戊基、己基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基中的一種或多種。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的柚皮素及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于，所述的烷基是包括具有1～3個(gè)碳原子的烷基中的一種或多種；所述的烷氧基中的烷基是包括具有1～3個(gè)碳原子的烷基中的一種或多種。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的柚皮素及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于，所述的烷基是包括甲基或乙基中的一種或多種；所述的烷氧基中的烷基是包括甲基或乙基中的一種或多種。
15.根據(jù)權(quán)利要求9所述的柚皮素及其衍生物的應(yīng)用，其特征在于，所述的柚皮素及其衍生物是包括如下化合物中的一種或多種當(dāng)R1為氫且R2為氫時(shí)，表示單體柚皮素及其衍生物；當(dāng)R1為甲基且R2為羥基時(shí)，表示橙皮素及其衍生物；當(dāng)R1為甲基且R2為氫時(shí)，表示異櫻花素及其衍生物；當(dāng)R1為氫且R2為羥基時(shí)，表示圣草酚及其衍生物。
全文摘要
本發(fā)明涉及柚皮素及其衍生物在制備抗心腦系統(tǒng)疾病方面的新用途，該類化合物包括單體柚皮素及其衍生物、橙皮素及其衍生物、異櫻花素及其衍生物或圣草酚及其衍生物等，具有預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究腦梗死、心肌梗死、腦缺血——再灌注損傷、心肌缺血——再灌注損傷、卒中后遺癥或血管性癡呆等心腦血管疾病，阿爾茨海默氏癥及其相關(guān)疾病的活性。該類化合物安全低毒，藥理作用較強(qiáng)；其原料來源豐富、廣泛、價(jià)廉，制備成本低廉、工藝簡單，得率高；且臨床療效確切，有效劑量低。本發(fā)明為預(yù)防、診斷、檢測、保護(hù)、治療和研究心腦系統(tǒng)疾病提供了一種新的藥物來源，且容易推廣應(yīng)用，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號(hào)G01N33/48GK1864675SQ20061002375
公開日2006年11月22日 申請日期2006年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月6日
發(fā)明者李鐵軍, 陸波, 邱彥, 毛俊琴, 陳強(qiáng), 徐江平, 芮耀誠 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)