專利名稱：量子點(diǎn)標(biāo)記快速免疫層析試紙條的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種檢測技術(shù)領(lǐng)域的方法，具體的說，涉及的是一種量子點(diǎn)標(biāo)記快速免疫層析試紙條的檢測方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有的膠體金標(biāo)記的免疫層析分析法已經(jīng)在臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中得到了廣泛應(yīng)用，其基本原理是以微孔膜為固相載體，包被目標(biāo)物(即被測物)的抗原或抗體，加入待測樣本后，經(jīng)微孔膜的滲濾作用或毛細(xì)管虹吸作用使標(biāo)本中的目標(biāo)物與膜上包被的抗原或抗體結(jié)合，通過膠體金標(biāo)記物與之反應(yīng)形成膠體金本身的顏色(紅色)，可通過肉眼觀察檢測結(jié)果。但是對于某些抗原或抗體含量極低的樣本，膠體金的顏色很淺很難用肉眼來判斷結(jié)果，靈敏度低。量子點(diǎn)是半徑小于或接近于激子玻爾半徑的一類半導(dǎo)體納米粒子，由于存在顯著的量子尺寸效應(yīng)和表面效應(yīng)，從而使它具有常規(guī)塊體材料所不具備的光吸收特性，研究發(fā)現(xiàn)量子點(diǎn)的激發(fā)光譜在吸收閥值以上幾乎是連續(xù)的，譜峰較寬，只需一個比其發(fā)射光波長短的任意波長的光源激發(fā)，可發(fā)射高亮度的熒光(峰窄、對稱)，熒光壽命長。量子點(diǎn)根據(jù)原料不同和同一原料粒子大小的不同，可產(chǎn)生不同顏色和不同波長的發(fā)射光，通過控制量子點(diǎn)的粒徑來精確調(diào)諧發(fā)射波長，是一類理想的熒光探針。
經(jīng)對現(xiàn)有技術(shù)的文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，中國專利申請?zhí)枮?3127115.4的專利，將目標(biāo)物抗體直接或間接包被在聚苯乙烯板的微孔中，用量子點(diǎn)標(biāo)記目標(biāo)物的另一抗體，通過免疫反應(yīng)，形成聚苯乙烯微孔板抗體-抗原(目標(biāo)物)-量子點(diǎn)標(biāo)記抗體的熒光復(fù)合物，通過對復(fù)合物的熒光強(qiáng)度檢測，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的定量測定。該專利是用量子點(diǎn)標(biāo)記的免疫分析法代替?zhèn)鹘y(tǒng)的酶聯(lián)免疫分析法，需要熒光酶標(biāo)檢測儀。檢索中還發(fā)現(xiàn)，中國專利申請?zhí)?00410010736.3的專利，用膠體金標(biāo)記抗體與目標(biāo)物結(jié)合，通過免疫反應(yīng)與膜上包被量子點(diǎn)標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成檢測帶，在用肉眼對檢測帶進(jìn)行初步定性或半定量檢測的基礎(chǔ)上，再利用膠體金對熒光納米粒子的熒光淬滅作用，通過檢測熒光信號的淬滅程度對檢測條帶進(jìn)行定量檢測。該專利要用兩種粒子標(biāo)記，方法不夠簡單；采用熒光信號的淬滅程度進(jìn)行定量檢測，干擾因素多，檢測靈敏度低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足和缺陷，利用量子點(diǎn)多波長激發(fā)、高強(qiáng)度熒光發(fā)射、發(fā)射峰窄、峰形對稱、發(fā)光穩(wěn)定性好的熒光特性，提供一種量子點(diǎn)標(biāo)記快速免疫層析試紙條的檢測方法，對被測物進(jìn)行定性或半定量檢測。本發(fā)明只需改變量子點(diǎn)的粒徑或種類，就可得到不同波長的熒光，用不同類型的量子點(diǎn)標(biāo)記不同的抗體，可產(chǎn)生多色熒光，實(shí)現(xiàn)多組分的檢測，方法簡單快速，不需要貴重的儀器，成本低。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的將量子點(diǎn)標(biāo)記目標(biāo)物的抗體涂覆于玻璃纖維膜上，目標(biāo)物的另一抗體與二抗分別包被在硝酸纖維素膜或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜上形成檢測帶與質(zhì)控帶。在聚脂或塑料板上將上兩種膜制成免疫層析試紙條，利用雙抗體夾心法原理結(jié)合量子點(diǎn)的熒光性質(zhì)檢測樣品中是否含有目標(biāo)物。在紫外燈照射下，通過觀察免疫層析試紙條上檢測帶與質(zhì)控帶的熒光線，判斷檢測結(jié)果。用不同粒徑或種類的量子點(diǎn)標(biāo)記不同目標(biāo)物的抗體，可產(chǎn)生多色熒光，實(shí)現(xiàn)多組分的同時檢測。
以下對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步說明1、量子點(diǎn)標(biāo)記目標(biāo)物抗體量子點(diǎn)標(biāo)記抗體的方法是通過常規(guī)的靜電作用、疏水作用、生物分子間的特異作用、化學(xué)連接劑等方法，將目標(biāo)物的抗體連接到量子點(diǎn)顆粒的表面。量子點(diǎn)可以是單一化合物形成的量子點(diǎn)粒子或是幾種物質(zhì)組裝成的復(fù)合物量子點(diǎn)粒子；目標(biāo)物抗體可以是多克隆抗體或單克隆抗體。
2、玻璃纖維膜和硝酸纖維素膜的處理將量子點(diǎn)標(biāo)記的抗體用微定量噴頭噴涂在玻璃纖維膜上，目標(biāo)物的另一抗體及二抗分別噴涂在硝酸纖維素膜或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜上形成檢測帶及質(zhì)控帶，制備時要求檢測帶與質(zhì)控帶平行，將膜干燥后放置于4℃待用。
3、免疫層析試紙條的制備在單面聚脂或塑料板上，依次粘貼上玻璃纖維或纖維素濾膜(樣品墊)、涂有量子點(diǎn)標(biāo)記抗體的玻璃纖維膜、吸水纖維素膜、已平行包被抗體的硝酸纖維素膜或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜，膜與膜之間都要緊密相連，將粘貼好的聚脂或塑料板切成3-5mm寬的試紙條，得到免疫層析試紙條，干燥封裝，4-25℃避光保存。
4、樣品的測試和結(jié)果判斷將試紙條的樣品墊端插入待測樣品液中，或用滴管將樣品液滴于樣品墊上，免疫層析后取出試紙條，在紫外燈下觀察結(jié)果。如果檢測帶與質(zhì)控帶處都有熒光，說明待測樣品中含有目標(biāo)物，檢測帶上的熒光越強(qiáng)目標(biāo)物的含量高；如果只有質(zhì)控帶有熒光，說明待測樣品中沒有目標(biāo)物；如果檢測帶與質(zhì)控帶處都沒有熒光，說明檢測無效。
本發(fā)明根據(jù)量子點(diǎn)的熒光性質(zhì)，即改變量子點(diǎn)的粒徑或種類，就可得到不同波長的熒光，用不同類型的量子點(diǎn)標(biāo)記不同目標(biāo)物的抗體，可產(chǎn)生多色發(fā)光，實(shí)現(xiàn)多組分的檢測。根據(jù)待測物的數(shù)量決定包被檢測帶的條數(shù)，如果要在樣品中檢測兩種物質(zhì)，那么檢測帶為兩條，檢測三種物質(zhì)就是三條，如此類推。
所述的紫外燈照射是指波長在320-400nm中心波長360nm的普通紫外燈。用波長小的光源照射使量子點(diǎn)產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度高，檢測靈敏度高。
本發(fā)明將免疫反應(yīng)的高特異性與量子點(diǎn)的熒光特性相結(jié)合，利用量子點(diǎn)多波長激發(fā)、高強(qiáng)度熒光發(fā)射，發(fā)射峰窄、峰形對稱、發(fā)光穩(wěn)定性好的熒光特性，建立快速、特異、簡便、靈敏的免疫層析檢測方法，也可通過熒光信號的減弱對被測物進(jìn)行定量檢測，方法簡單，成本低，適用于血樣、尿樣、唾液等樣本，應(yīng)用于激素、蛋白質(zhì)、病毒、毒品、細(xì)菌、環(huán)境污染等檢測，可在醫(yī)院、海關(guān)、機(jī)場、家庭等場所使用。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明利用量子點(diǎn)的熒光特性，即多波長激發(fā)、高強(qiáng)度熒光發(fā)射，發(fā)射峰窄、峰形對稱、發(fā)光穩(wěn)定性好，將量子點(diǎn)標(biāo)記目標(biāo)物(即被測物)的抗體，然后將此標(biāo)記物涂覆于玻璃纖維膜上，目標(biāo)物的另一抗體(單抗或多抗)包被在硝酸纖維素膜或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜上形成檢測帶，在此包被膜上同時平行包被抗抗體(二抗)形成質(zhì)控帶。再將玻璃纖維或纖維素濾膜、涂有量子點(diǎn)標(biāo)記抗體的玻璃纖維膜、吸水纖維素濾膜、包被抗體的硝酸纖維素膜或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜依次粘貼在聚脂或塑料板上，利用雙抗體夾心法原理檢測樣品中是否含有目標(biāo)物。當(dāng)待測樣品中含有目標(biāo)物時，目標(biāo)物先與量子點(diǎn)標(biāo)記抗體結(jié)合，由于層析作用反應(yīng)結(jié)合物沿包被硝酸纖維素膜向前移動，當(dāng)遇到包被抗體時形成抗體-抗原(目標(biāo)物)-量子點(diǎn)標(biāo)記抗體復(fù)合物而富集在檢測帶上，多余的量子點(diǎn)標(biāo)記物繼續(xù)移動到控制帶位置，由于二抗與量子點(diǎn)標(biāo)記的抗體發(fā)生免疫反應(yīng)，又富集在控制帶上，2～20分鐘后，取出試紙條在任意波長的紫外燈照射下，用肉眼在檢測帶和質(zhì)控帶上看到兩條熒光線的，為陽性結(jié)果，通過測量熒光強(qiáng)弱進(jìn)行定量檢測；如果只看到質(zhì)控帶上一條熒光線，為陰性結(jié)果；如果檢測帶與質(zhì)控帶處都沒有熒光，說明檢測無效。
所述的量子點(diǎn)可選用以下顆粒(1)單一化合物的量子點(diǎn)，這些量子點(diǎn)可以是第III族和第V族組成的化合物，如GaAs，GaSb，InAs，InP，InGaAs，AlGaAs，InAlAs等任意一種；第II族和第VI族組成的化合物，如MgSe，MgTe，CaS，CaSe，CaTe，SrS，SrSe，SrTe，BaS，BaSe，BaTe，ZnS，ZnSe，ZnTe，CdS，CdSe，CdTe等任意一種；第IV族和第IV族組成的化合物，如SiC，SiGe中的任意一種；第IV族和第VI族組成的化合物。
(2)由量子點(diǎn)化合物與其它化學(xué)物質(zhì)組裝而成的量子點(diǎn)顆粒，這些顆?？梢允菬o機(jī)小分子與量子點(diǎn)化合物組裝而成，如ZnS包覆CdSe，二氧化硅包覆CdSe，二氧化硅包覆CdTe，量子點(diǎn)包覆磁性粒子等任意一種；可以是有機(jī)高分子聚合物與量子點(diǎn)化合物組裝而成，如聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交聯(lián)葡聚糖、樹形分子等任意一種包裹一種量子點(diǎn)或幾種量子點(diǎn)制成的顆粒。
以下結(jié)合本發(fā)明的技術(shù)方案提供實(shí)施例。
實(shí)施例一將乙酸鎘溶解在含三辛基膦的油酸中，再加入溶解在三辛基膦中的金屬硒粉(Cd2+/Se2-＝1∶2)，在140℃下攪拌反應(yīng)5min-60min，并間隔一定時間取樣，經(jīng)過離心得到不同粒徑的(1.2nm-6.6nm)CdSe量子點(diǎn)，根據(jù)量子點(diǎn)粒徑的不同，可得到黃色到深棕紅色的溶液。CdSe量子點(diǎn)分散在正己烷，氯仿，甲苯等有機(jī)溶劑中儲存。采用細(xì)乳液聚合法使1.5nm的CdSe量子點(diǎn)形成聚集體，這些聚集體被聚苯乙烯聚合物包覆得到粒徑約為60-70nm帶有量子點(diǎn)的復(fù)合物顆粒，通過丙烯酸修飾使聚合物量子點(diǎn)微球表面帶有羧基官能團(tuán)。在連接劑碳二亞胺(EDC)的作用下，將帶有羧基的量子點(diǎn)復(fù)合物微球與抗癌胚抗原(CEA)的單抗連接，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時，采用離心分離純化，得到量子點(diǎn)微球標(biāo)記的抗體。將標(biāo)記好量子點(diǎn)的CEA單抗均勻的噴涂在玻璃纖維膜上，每毫升溶液鋪3平方厘米，干燥后封袋，放置4℃保存?zhèn)溆谩?br> 在硝酸纖維素膜上用機(jī)器劃兩條平行帶，兩條帶間隔8mm，兩條帶寬都為1.5mm，其中一條帶上噴涂CEA的多抗(用0.05M pH8.5磷酸鹽緩沖液稀釋至2mg/mL)形成檢測帶；另一條帶上噴涂羊抗鼠二抗形成質(zhì)控帶，室溫晾干20分鐘后，再放入含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液中封閉60分鐘，干燥后封袋，放置4℃保存?zhèn)溆谩?br> 在單面塑料板上，依次粘貼上玻璃纖維(長30厘米，寬2厘米)、涂有量子點(diǎn)標(biāo)記抗體的玻璃纖維膜(長30厘米，寬度根據(jù)抗體的滴度與實(shí)驗(yàn)要求確定，這里選擇5mm)、吸水玻璃纖維膜(長30厘米，寬3厘米)、已平行包被抗體的硝酸纖維素膜(長30厘米，寬1.5厘米)，最后貼上長30厘米，寬2厘米的吸水紙，吸收層析后多余的溶液，膜與膜之間都要緊密相連，制成免疫層析試紙大板。用切條機(jī)將粘貼好的塑料板縱向切成4mm寬的免疫試紙條，干燥下封裝，4-25℃避光保存。
將4mm寬的免疫試紙條樣品墊端插入待測血清中，或用滴管滴加3滴血清于樣品墊上，全部試驗(yàn)過程僅需5-20分鐘，取出試紙條在紫外燈下觀察結(jié)果。測定CEA強(qiáng)陽性標(biāo)本5分鐘報(bào)結(jié)果，測定弱陽性和陰性標(biāo)本20分鐘報(bào)結(jié)果。如果膜上的檢測帶與質(zhì)控帶處都有黃綠色熒光，即兩條熒光，說明待測樣品中含有CEA為陽性結(jié)果，在檢測帶的熒光越強(qiáng)CEA的含量高；如果只有質(zhì)控帶有黃綠色熒光，即一條熒光，說明待測樣品中沒有CEA為陰性結(jié)果；如果檢測帶與質(zhì)控帶處都沒有熒光，說明檢測無效。該檢測方法的靈敏度為15ng/ml，批內(nèi)與批間重復(fù)性較好。
實(shí)施例二氯化鎘溶解在含有巰基乙酸的堿性(pH 10)水溶液中，加入離子型碲源NaHTe(由碲粉和硼氫化鈉制備成)，100℃反應(yīng)5-240分鐘，反應(yīng)時間不同得到量子點(diǎn)的粒徑不同(1.8-4.2nm)，溶液顏色由綠色到橙色最終為紅色，合成表面帶有羧基的CdTe量子點(diǎn)。選用粒徑為2.5納米的量子點(diǎn)，在連接劑碳二亞胺(EDC)的作用下與抗β亞基絨毛膜促性腺激素(β-HCG)的單抗連接，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時，用Sephadex G-200層析柱分離純化，得到量子點(diǎn)標(biāo)記的抗體。將標(biāo)記好量子點(diǎn)的HCG單抗均勻的噴涂在玻璃纖維膜上，每毫升溶液鋪4平方厘米，干燥后封袋，放置4℃保存?zhèn)溆谩?br> 在硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜上用機(jī)器劃兩條平行帶，兩條帶間隔10mm，兩條帶寬都為1.5mm，其中一條帶上噴涂抗α亞基絨毛膜促性腺激素(α-HCG)的多抗(用0.05M pH8.5磷酸鹽緩沖液稀釋至3mg/mL)形成檢測帶；另一條帶上噴涂羊抗鼠二抗形成質(zhì)控帶，室溫晾干20分鐘后，再放入含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液中封閉60分鐘，干燥后封袋，放置4℃保存?zhèn)溆谩?br> 在單面聚脂板上，依次粘貼上纖維素濾膜(長30厘米，寬2厘米)、涂有量子點(diǎn)標(biāo)記抗體的玻璃纖維膜(長30厘米，寬度根據(jù)抗體的滴度與實(shí)驗(yàn)要求確定，這里選擇4mm)、吸水纖維素濾膜(長30厘米，寬3厘米)、已平行包被抗體的硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜(長30厘米，寬1.5厘米)，最后貼上長30厘米，寬2厘米的吸水紙，吸收層析后多余的溶液，膜與膜之間都要緊密相連，制成免疫層析試紙大板。用切條機(jī)將粘貼好的塑料板縱向切成4mm寬的免疫試紙條，封裝干燥下，4-25℃避光保存。
將4mm寬的免疫試紙條樣品墊端插入待測尿樣中，或用滴管滴加4滴尿樣于樣品墊上，全部試驗(yàn)過程僅需5分鐘，取出試紙條在紫外燈下觀察結(jié)果。如果膜上的檢測帶與質(zhì)控帶處都有黃色熒光，即兩條熒光，說明待測樣品中含有HCG為陽性結(jié)果，在檢測帶的熒光越強(qiáng)HCG的含量高；如果只有質(zhì)控帶有熒光，即一條熒光，說明待測樣品中沒有HCG為陰性結(jié)果；如果檢測帶與質(zhì)控帶處都沒有熒光，說明檢測無效。該檢測方法的靈敏度為30mIU/mL，批內(nèi)與批間重復(fù)性性較好，可用于早孕診斷。
實(shí)施例三氯化鎘溶解在含有巰基乙胺的酸性(pH4)水溶液中，加入離子型碲源NaHTe(由碲粉和硼氫化鈉制備成)，100℃反應(yīng)5-240分鐘，反應(yīng)時間不同得到量子點(diǎn)的粒徑不同(2.5-5.5nm)，溶液顏色由灰色到紅色最終為紫色，合成表面帶有氨基的CdTe量子點(diǎn)。選用粒徑為4納米的量子點(diǎn)，在磷酸緩沖液(0.05MpH＝7.4)中，將水溶性的表面包覆巰基乙胺的量子點(diǎn)和戊二醛混合，并向其加入一定量的抗甲胎蛋白(AFP)單抗，室溫下攪拌反應(yīng)4小時，用Sephadex G-200層析柱分離純化，得到量子點(diǎn)標(biāo)記的抗AFP單抗；選用實(shí)施例二方法合成的表面帶有羧基的CdTe量子點(diǎn)(2.5納米)，在連接劑碳二亞胺(EDC)的作用下與抗癌胚抗原(CEA)的單抗連接，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時，同樣用Sephadex G-200層析柱分離純化，得到量子點(diǎn)標(biāo)記的抗CEA單抗。將量子點(diǎn)標(biāo)記的AFP單抗與量子點(diǎn)標(biāo)記的CEA單抗等體積混合，并且均勻的噴涂在玻璃纖維膜上，每毫升溶液鋪1.5平方厘米，干燥后封袋，放置4℃保存?zhèn)溆谩?br> 在硝酸纖維素膜上用機(jī)器劃三條平行帶，每條帶間隔5mm，帶寬都為1.5mm，第一條帶上噴涂CEA的多抗(用0.05M pH8.5磷酸鹽緩沖液稀釋至2mg/mL)形成檢測帶A；第二條帶上噴涂AFP的多抗(用0.05M pH8.5磷酸鹽緩沖液稀釋至2.5mg/mL)形成檢測帶B；第三條帶上噴涂羊抗鼠二抗形成質(zhì)控帶，室溫晾干20分鐘后，再放入含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液中封閉60分鐘，干燥后封袋，放置4℃保存?zhèn)溆谩?br> 在單面塑料板上，依次粘貼上玻璃纖維(長30厘米，寬2厘米)、涂有量子點(diǎn)標(biāo)記抗體的玻璃纖維膜(長30厘米，寬度根據(jù)抗體的滴度與實(shí)驗(yàn)要求確定，這里選擇6mm)、吸水纖維素濾膜(長30厘米，寬3厘米)、已平行包被三種抗體的硝酸纖維素膜(長30厘米，寬2.5厘米)，最后貼上長30厘米，寬2厘米的吸水紙，吸收層析后多余的溶液，膜與膜之間都要緊密相連，制成免疫層析試紙大板。用切條機(jī)將粘貼好的塑料板縱向切成5mm寬的免疫試紙條，封裝干燥下，4-25℃避光保存。
將5mm寬的免疫試紙條樣品墊端插入待測血清中，或用滴管滴加3滴血清于樣品墊上，全部試驗(yàn)過程僅需15分鐘，取出試紙條在紫外燈下觀察結(jié)果。測定CEA強(qiáng)陽性標(biāo)本5分鐘報(bào)結(jié)果，測定弱陽性和陰性標(biāo)本20分鐘報(bào)結(jié)果。如果膜上的檢測帶與質(zhì)控帶處都有熒光(檢測帶A為黃色熒光，檢測帶B為紅色熒光，質(zhì)控帶橙色熒光)，即三條熒光，說明待測樣品中既含有CEA，又含有AFP；如果檢測帶A為黃色熒光，檢測帶B無熒光，質(zhì)控帶為黃色熒光，說明待測樣品中只含有CEA，沒有AFP；如果檢測帶A無熒光，檢測帶B有紅色熒光，質(zhì)控帶為紅色熒光，說明待測樣品中只含有AFP，沒有CEA；如果只有質(zhì)控帶有熒光，即一條熒光，說明待測樣品中既沒有CEA，又沒有AFP；如果檢測帶與質(zhì)控帶處都沒有熒光，說明檢測無效。該方法檢測CEA的靈敏度為5.6ng/ml，檢測AFP的靈敏度為8ng/ml，批內(nèi)與批間重復(fù)性性較好，一次可檢測兩種物質(zhì)。
權(quán)利要求
1.一種量子點(diǎn)標(biāo)記快速免疫層析試紙條的檢測方法，其特征在于，將量子點(diǎn)標(biāo)記目標(biāo)物的抗體涂覆于玻璃纖維膜上，目標(biāo)物的另一抗體與二抗分別包被在硝酸纖維素膜或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜上形成檢測帶與質(zhì)控帶，在聚脂或塑料板上將上面制備的玻璃纖維膜和硝酸纖維素膜制成免疫層析試紙條，利用雙抗體夾心法原理結(jié)合量子點(diǎn)的熒光性質(zhì)檢測樣品中是否含有目標(biāo)物，在紫外燈照射下，通過觀察免疫層析試紙條上檢測帶與質(zhì)控帶的熒光線，判斷檢測結(jié)果；用不同粒徑或種類的量子點(diǎn)標(biāo)記不同目標(biāo)物的抗體，能實(shí)現(xiàn)多組分的同時檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)標(biāo)記快速免疫層析試紙條的檢測方法，其特征是，所述的量子點(diǎn)是單一化合物形成的量子點(diǎn)粒子或是幾種物質(zhì)組裝成的復(fù)合物量子點(diǎn)粒子。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)標(biāo)記快速免疫層析試紙條的檢測方法，其特征是，所述量子點(diǎn)標(biāo)記目標(biāo)物的抗體是多克隆抗體或單克隆抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)標(biāo)記快速免疫層析試紙條的檢測方法，其特征是，所述量子點(diǎn)標(biāo)記抗體的方法，是通過靜電作用、疏水作用、生物分子間的特異作用、化學(xué)連接劑中的任意一種方法，將目標(biāo)物的抗體連接到量子點(diǎn)顆粒的表面。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)標(biāo)記快速免疫層析試紙條的檢測方法，其特征是，所述將量子點(diǎn)標(biāo)記目標(biāo)物的抗體涂覆于玻璃纖維膜上，是指將制備好的量子點(diǎn)標(biāo)記抗體均勻噴涂或涂覆在玻璃纖維膜上，室溫干燥后封袋，置4℃保存?zhèn)溆谩?br> 6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)標(biāo)記快速免疫層析試紙條的檢測方法，其特征是，所述的目標(biāo)物的另一抗體與二抗分別包被在硝酸纖維素膜或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜上形成檢測帶與質(zhì)控帶，具體為用包被緩沖液稀釋抗體到設(shè)定濃度噴涂或涂覆在膜上，室溫晾干后，再將膜放入含有牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液中，20-37℃封閉60分鐘，干燥后封袋，放置4℃保存?zhèn)溆谩?br> 7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)標(biāo)記快速免疫層析試紙條的檢測方法，其特征是，改變量子點(diǎn)的粒徑或種類，得到不同波長的熒光，用不同類型的量子點(diǎn)標(biāo)記不同目標(biāo)物的抗體，產(chǎn)生多色發(fā)光，實(shí)現(xiàn)多組分的檢測，其中根據(jù)待測物的數(shù)量決定包被檢測帶的條數(shù)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)標(biāo)記快速免疫層析試紙條的檢測方法，其特征是，所述的紫外燈照射是指波長在320-400nm中心波長360nm的普通紫外燈。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的量子點(diǎn)標(biāo)記快速免疫層析試紙條的檢測方法，其特征是，所述的在紫外燈下觀察結(jié)果，具體為如果檢測帶與質(zhì)控帶處都有熒光，說明待測樣品中含有目標(biāo)物，檢測帶上的熒光越強(qiáng)目標(biāo)物的含量高；如果只有質(zhì)控帶有熒光，說明待測樣品中沒有目標(biāo)物；如果檢測帶與質(zhì)控帶處都沒有熒光，說明檢測無效。
全文摘要
一種檢測技術(shù)領(lǐng)域的量子點(diǎn)標(biāo)記快速免疫層析試紙條的檢測方法。本發(fā)明將量子點(diǎn)標(biāo)記目標(biāo)物的抗體涂覆于玻璃纖維膜上，目標(biāo)物的另一抗體與二抗分別包被在硝酸纖維素膜或硝酸纖維素/醋酸纖維素混合膜上形成檢測帶與質(zhì)控帶；在聚酯或塑料板上將玻璃纖維膜和硝酸纖維素膜制成免疫層析試紙條，利用雙抗體夾心法原理結(jié)合量子點(diǎn)的熒光性質(zhì)檢測樣品中是否含有目標(biāo)物，在紫外燈照射下，通過觀察免疫層析試紙條上檢測帶與質(zhì)控帶的熒光線，判斷檢測結(jié)果；用不同粒徑或種類的量子點(diǎn)標(biāo)記不同目標(biāo)物的抗體，能實(shí)現(xiàn)多組分的同時檢測。本發(fā)明簡單快速，成本低，適用于激素、蛋白質(zhì)、病毒、毒品、細(xì)菌、農(nóng)藥、環(huán)境污染等檢測，可在醫(yī)院、海關(guān)、機(jī)場、家庭等使用。
文檔編號G01N21/64GK1811449SQ20061002408
公開日2006年8月2日 申請日期2006年2月23日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月23日
發(fā)明者高峰, 賀蓉, 崔大祥, 潘碧峰 申請人:上海交通大學(xué)