專利名稱：異維a酸軟膠丸的測試方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥品檢測技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及異維A酸軟膠丸的溶出度和其中的抗氧劑、防腐劑的鑒別測試方法。
背景技術(shù)：
異維A酸軟膠丸目前執(zhí)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分別為中國藥典現(xiàn)行版(中國藥典2005版二部P216)，檢測項(xiàng)目為性狀、鑒別、含量、含量均勻度、崩解、微生物限度控制等；美國藥典現(xiàn)行版，檢測項(xiàng)目為性狀、鑒別、含量、含量均勻度、崩解、有關(guān)雜質(zhì)、微生物限度控制等。
由于異維A酸為一性狀極不穩(wěn)定的活性原料，遇光、熱、空氣等極易變性。故通過專門的工藝，并加入一定的藥用輔料，將其制成油狀混懸液，能使其性狀相對穩(wěn)定。目前藥典收載的檢測項(xiàng)目僅對藥物本身的活性原料作相應(yīng)的定性或定量檢測，而所用的藥用輔料在貯藏期內(nèi)對藥物穩(wěn)定性作用(如抗氧化作用、防腐作用等)均沒有明確的界定，故使該產(chǎn)品對抗氧劑，防腐劑使用的有效性，沒有明確的檢測方法和衡量標(biāo)準(zhǔn)。
另外，中國藥典和美國藥典等目前收載的軟膠丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，均未將溶出度測試列入其中。藥品作為一特殊商品，安全、有效是質(zhì)量控制的首要保障。由于生物等效性，使體外溶出度基本反映了體內(nèi)生物利用度?；诖?，溶出度作為藥品質(zhì)量的有效性和可控性的重要標(biāo)志之一，隨著對藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的不斷提高和完善，軟膠丸劑的溶出度試驗(yàn)應(yīng)作為檢測項(xiàng)目被列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于研究設(shè)計(jì)關(guān)于提高異維A酸軟膠丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的方法。
本發(fā)明提供了異維A酸軟膠丸之一溶出度測試的方法，本發(fā)明的方法基于下列原理溶出度測試作為模擬人體體內(nèi)生物利用度的一個(gè)有效途徑，已被列入固體制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的主要檢測項(xiàng)目之一，至今已有數(shù)十年歷史。經(jīng)過反復(fù)論證和臨床實(shí)驗(yàn)，按照與人體生物等效性相關(guān)的原理，選用一合理的試劑作為溶出度測試介質(zhì)，至關(guān)重要。目前常用的介質(zhì)基本包括0.1NHCl、0.1NNaOH、醋酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液，水等。
根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)原理，異維A酸膠丸主要通過胃腸道吸收，服用人群主要是18～30歲青年人居多。上述幾種介質(zhì)均能作為該實(shí)驗(yàn)的溶出介質(zhì)。
由于軟膠丸內(nèi)容物性狀多為油狀，在上述提及的幾種介質(zhì)中，均為水溶性介質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)利用異維A酸軟丸內(nèi)容物僅為混懸物，其主要活性成分并非脂溶性這一特點(diǎn)，經(jīng)過旋轉(zhuǎn)后的游離分散，使主要活性成分溶解于溶出介質(zhì)中，經(jīng)過稀釋、定量，用紫外分光光度計(jì)測定吸收值，計(jì)算溶出度。
本實(shí)驗(yàn)的最終目的，是對藥物通過體外溶出度測試，將得到的結(jié)果與臨床所做的體內(nèi)生物利用度作比較，求出兩者相關(guān)性，確認(rèn)服用的有效性和安全性。由于體內(nèi)利用度實(shí)驗(yàn)費(fèi)用大，周期長，該實(shí)驗(yàn)不宜于長期、反復(fù)進(jìn)行。而體外溶出度正是解決了這一難題。經(jīng)反復(fù)測試，基本能掌握藥物的有效作用時(shí)間和用量，達(dá)到預(yù)期效果。
本發(fā)明的異維A酸軟膠丸溶出度的測試方法包括下列步驟取異維A酸軟膠丸6粒，用崩解時(shí)限測定項(xiàng)下的裝置，每杯置1粒，以900ml 0.1NHCl、0.1N氫氧化鈉或純化水為介質(zhì)；測試溫度為37.0℃±1℃；40～45分鐘時(shí)，立即取溶出液20ml經(jīng)0.45um的膜濾過，冷卻至室溫。精密量取續(xù)濾液5ml，用0.1mol/LHCl、0.1mol/L氫氧化鈉或純化水稀釋成25ml(10mg規(guī)格)；精密量取續(xù)濾液5ml，用0.1mol/L HCl、0.1mol/L氫氧化鈉或純化水稀釋成50ml(20mg規(guī)格)；對照液精密稱取異維A酸對照品10mg，用0.1mol/LHCl、0.1mol/L氫氧化鈉或純化水溶解并稀釋50ml；精密量取2ml，用0.1mol/LHCl、0.1mol/L氫氧化鈉或純化水稀釋成200ml，按照分光光度法檢測，在343nm的波長處分別測定吸收度，計(jì)算出每丸的溶出量。應(yīng)大于標(biāo)示量的75％。
本發(fā)明的另一目的是提供了異維A酸軟膠丸中抗氧劑，防腐劑的鑒別測試方法。
該軟膠丸劑主要由兩部分組成內(nèi)容物為油狀混懸物，外層為膠皮。由于膠皮主要原料為明膠。鑒于明膠原料的特殊性，因而在膠液內(nèi)加入微量防腐劑(＜0.04％)，以防止在貯藏期間引起生物變性。異維A酸軟膠丸的內(nèi)容物中主要活性成分異維A酸性狀極不穩(wěn)定，在貯藏期內(nèi)常常發(fā)生含量下降和有關(guān)雜質(zhì)超標(biāo)等質(zhì)量問題。故本發(fā)明人在藥液內(nèi)添加微量的抗氧劑(＜0.008％)，用以保持活性成分的穩(wěn)定性。
目前執(zhí)行的軟膠丸劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，均未將抗氧劑、防腐劑的鑒別列入，企業(yè)在產(chǎn)品最終檢驗(yàn)中，也未將此項(xiàng)作為監(jiān)控項(xiàng)目。但在制劑制備中，藥物內(nèi)添加的微量輔料成分究竟是否被破壞，沒有明確界定，尤其是在藥品貯藏期內(nèi)，防腐劑、抗氧劑的有效性和延續(xù)性，應(yīng)需得到確認(rèn)。本發(fā)明提供的異維A酸軟膠丸中抗氧劑的鑒別測試方法包括下列步驟(1)系統(tǒng)適用性條件 用DB-1毛細(xì)管柱(0.25mm×30m×0.25μm)、HP-5毛細(xì)管柱(0.25mm*30m*0.3μm)或DB-2毛細(xì)管柱(0.25mm×30m×0.25μm)，分流比為10∶1，尾吹為40ml/min，柱溫在50或100℃保持2～5分鐘，然后以20～30℃/分鐘的速率升到150或200℃，保持3～5分鐘。
(2)對照液的制備 稱取抗氧劑40mg，置100ml容量瓶中，用甲醇、乙醇或正己烷溶解并稀釋至刻度，精密吸取1ml，至10ml容量瓶中，并稀釋至刻度。
(3)供試液的制備 取本品20粒，剪開，去殼后，內(nèi)容物放入具塞錐形瓶中，加10ml甲醇、乙醇或正己烷，超聲20分鐘，靜置，取上清液，即得。
(4)測定法 取對照液和供試液各1μl，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，供試液中抗氧劑的保留時(shí)間應(yīng)分別與對照液中抗氧劑的保留時(shí)間一致。
所述的抗氧劑為叔丁基對羥基茴香醚或2.6-二叔丁基對甲酚。
本發(fā)明的異維A酸軟膠丸中防腐劑的鑒別測試方法包括下列步驟(1)系統(tǒng)適用性條件 用DB-1毛細(xì)管柱(0.25mm×30m×0.25μm)、HP-5毛細(xì)管柱(0.25mm*30m*0.3μm)或DB-2毛細(xì)管柱(0.25mm×30m×0.25μm)，分流比為10∶1，尾吹為40ml/min，柱溫在50或100℃保持2～5分鐘，然后以20～30℃/分鐘的速率升到150或200℃，保持3～5分鐘。
(2)對照液的制備 稱取防腐劑40mg，置100ml容量瓶中，用甲醇、乙醇、正己烷溶解并稀釋至刻度，精密吸取1ml，至10ml容量瓶中，用甲醇、乙醇、正己烷稀釋至刻度。
(3)供試液的制備 取本品20粒，剪開，去殼后，內(nèi)容物放入具塞錐形瓶中，加10ml甲醇、乙醇、正己烷，超聲20分鐘，靜置，取上清液，即得。
(4)測定法 取對照液和供試液各1μl，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，供試液中防腐劑的保留時(shí)間應(yīng)分別與對照液中防腐劑的保留時(shí)間一致。
所述的防腐劑為山梨酸鉀、對羥基苯甲酸乙酯或苯甲酸鈉。
本發(fā)明提供的異維A酸軟膠丸溶出度和其中的抗氧劑、防腐劑鑒別測試方法，在藥典規(guī)定的基礎(chǔ)上，提高了異維A酸軟膠丸劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供保障，有利于對產(chǎn)品穩(wěn)定性的監(jiān)測，有較大的實(shí)用價(jià)值。
在本發(fā)明的檢測產(chǎn)品中，異維A酸軟膠丸有10mg和20mg兩個(gè)規(guī)格，每粒軟膠丸的內(nèi)容物重量均為0.25g，本發(fā)明在檢測中樣品均以“?！北硎?。
具體實(shí)施例方式實(shí)例1 溶出度測試實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)用儀器島津紫外分光光度儀實(shí)驗(yàn)用對照品異維A酸對照品實(shí)驗(yàn)用樣品本公司生產(chǎn)的異維A酸膠丸6粒實(shí)驗(yàn)用試劑二氯甲烷、正己烷、NaOH、HCl等方法一、取異維A酸軟膠丸6粒，用崩解時(shí)限測定法下的裝置，每杯置1粒；以900ml 0.1NHCl為介質(zhì)；測試溫度為37.0℃±1℃；40分鐘時(shí)，立即取溶出液20ml經(jīng)0.45um的膜濾過，冷卻至室溫。精密量取濾液5ml，用0.1mol/LHCl稀釋成25ml(10mg規(guī)格)；精密量取續(xù)濾液5ml，用0.1mol/L HCl稀釋成50ml(20mg規(guī)格)；對照液精密稱取異維A酸對照品10mg，用0.1mol/LHCl溶解并稀釋50ml；精密量取2ml，用0.1mol/LHCl稀釋成200ml，按分光光度法，在343nm的波長處分別測定吸收度，計(jì)算出每丸的溶出量。應(yīng)大于標(biāo)示量的75％。
方法二、取異維A酸軟膠丸6粒，用崩解時(shí)限測定法下的裝置，每杯置1粒；以900ml0.1N氫氧化鈉為介質(zhì)；測試溫度為3 7.0℃±1℃；45分鐘時(shí)，立即取溶出液20ml經(jīng)0.45um的膜濾過，冷卻至室溫。精密量取濾液5ml，用0.1mol/L氫氧化鈉稀釋成25ml(10mg規(guī)格)；精密量取續(xù)濾液5ml，用0.1mol/L氫氧化鈉稀釋成50ml(20mg規(guī)格)；對照液精密稱取異維A酸對照品10mg，用0.1mol/L氫氧化鈉溶解并稀釋50ml；精密量取2ml，用0.1mol/L氫氧化鈉稀釋成200ml，按分光光度法，在343nm的波長處分別測定吸收度，計(jì)算出每丸的溶出量。應(yīng)大于標(biāo)示量的75％。
方法三、取異維A酸軟膠丸6粒，用崩解時(shí)限測定法下的裝置，每杯置1粒；以900ml純化水為介質(zhì)；測試溫度為37.0℃±1℃；45分鐘時(shí)，立即取溶出液20ml經(jīng)0.45um的膜濾過，冷卻至室溫。精密量取濾液5ml，用純化水稀釋成25ml(10mg規(guī)格)；精密量取續(xù)濾液5ml，用純化水稀釋成50ml(20mg規(guī)格)；。
對照液精密稱取異維A酸對照品10mg，用純化水溶解并稀釋50ml；精密量取2ml，用純化水稀釋成200ml，按分光光度法，在343nm的波長處分別測定吸收度，計(jì)算出每丸的溶出量。應(yīng)大于標(biāo)示量的75％。
實(shí)例2 抗氧劑叔丁基對羥基茴香醚鑒別測試實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)用儀器島津氣相色譜儀實(shí)驗(yàn)用對照品抗氧劑叔丁基對羥基茴香醚對照品40mg實(shí)驗(yàn)用樣品本公司生產(chǎn)的異維A酸膠丸20粒實(shí)驗(yàn)用試劑甲醇、乙醇、正己烷等方法一供試品制備取樣品20粒，剪開，取內(nèi)容物至量具塞玻璃容器內(nèi)，加甲醇15ml，超聲溶解離心，靜置，取上清液，即得。
色譜系統(tǒng)色譜柱型號(hào)DB-1(0.25mm*30m*0.25μm)程序升溫第一階段100℃保持4分鐘第二階段100℃～200℃升溫速率為30℃/s第三階段200℃保持5分鐘分流比10∶1方法二供試品制備取樣品20粒，剪開，取內(nèi)容物至具塞玻璃容器內(nèi)，加正己烷20ml，45℃水溶解，放至高溫，即得。
色譜系統(tǒng)色譜柱型號(hào)HP-5(0.25mm*30m*0.3μm)程序升溫第一階段50℃保持5分鐘第二階段50℃～150℃升溫速率為30℃/s第三階段150℃保持3分鐘分流比10∶1方法三供試品制備取樣品20粒，剪開，取內(nèi)容物至具塞玻璃容器內(nèi)，加乙醇30ml，60℃水溶解，放至高溫，即得。
色譜系統(tǒng)色譜柱型號(hào)DB-2(0.25mm*30m*0.25μm)程序升溫第一階段100℃保持3分鐘第二階段100℃～200℃升溫速率為20℃/s第三階段200℃保持5分鐘分流比10∶1實(shí)驗(yàn)結(jié)果溶出度測試結(jié)果＞75％/30min抗氧劑鑒定結(jié)果供試液中抗氧劑的保留時(shí)間分別與對照液中抗氧劑的保留時(shí)間一致。
實(shí)例3方法同實(shí)例2，抗氧劑替換為2.6-二叔丁基對甲酚。
實(shí)例4 防腐劑山梨酸鉀鑒別測試實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)用儀器島津氣相色譜儀實(shí)驗(yàn)用對照品防腐劑山梨酸鉀對照品40mg實(shí)驗(yàn)用樣品本公司生產(chǎn)的異維A酸膠丸20粒實(shí)驗(yàn)用試劑甲醇、乙醇、正己烷等方法一供試品制備取樣品20粒，剪開，取內(nèi)容物至量具塞玻璃容器內(nèi)，加甲醇15ml，超聲溶解離心，靜置，取上清液，即得。
色譜系統(tǒng)色譜柱型號(hào)DB-1(0.25mm*30m*0.25μm)程序升溫第一階段100℃保持4分鐘第二階段100℃～200℃升溫速率為30℃/s第三階段200℃保持5分鐘分流比10∶1方法二供試品制備取樣品20粒，剪開，取內(nèi)容物至具塞玻璃容器內(nèi)，加正己烷20ml，45℃水溶解，放至高溫，即得。
色譜系統(tǒng)色譜柱型號(hào)HP-5(0.25mm*30m*0.3μm)程序升溫第一階段50℃保持5分鐘第二階段50℃～150℃升溫速率為30℃/s第三階段150℃保持3分鐘分流比10∶1
方法三供試品制備取樣品20粒，剪開，取內(nèi)容物至具塞玻璃容器內(nèi)，加乙醇30ml，60℃水溶解，放至高溫，即得。
色譜系統(tǒng)色譜柱型號(hào)DB-2(0.25mm*30m*0.25μm)程序升溫第一階段100℃保持3分鐘第二階段100℃～200℃升溫速率為20℃/s第三階段200℃保持5分鐘分流比10∶1實(shí)驗(yàn)結(jié)果溶出度測試結(jié)果＞75％/30min防腐劑鑒定結(jié)果供試液中防腐劑的保留時(shí)間分別與對照液中防腐劑的保留時(shí)間一致。
實(shí)例5方法同實(shí)例4，防腐劑替換為對羥基苯甲酸乙酯。
實(shí)例6方法同實(shí)例4，防腐劑替換為苯甲酸鈉。
權(quán)利要求
1.一種異維A酸軟膠丸溶出度的測試方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)取異維A酸軟膠丸6粒，用崩解時(shí)限測定項(xiàng)下的裝置，每杯置1粒；以900ml 0.1NHCl、0.1N氫氧化鈉或純化水為介質(zhì)；測試溫度為37.0℃±1℃；40～45分鐘時(shí)，立即取溶出液20ml經(jīng)0.45um的膜濾過，冷卻至室溫，精密量取濾液5ml，用0.1mol/L HCl、0.1mol/L氫氧化鈉或純化水稀釋成25ml即10mg規(guī)格；精密量取續(xù)濾液5ml，用0.1mol/L HCl、0.1mol/L氫氧化鈉或純化水稀釋成50ml即20mg規(guī)格；(2)對照液精密稱取異維A酸對照品10mg，用0.1mol/LHCl、0.1mol/L氫氧化鈉或純化水溶解并稀釋至50ml；精密量取2ml，用0.1mol/L HCl、0.1mol/L氫氧化鈉或純化水稀釋成200ml；(3)按分光光度法，在343nm的波長處分別測定吸收度，計(jì)算出每丸的溶出量，應(yīng)大于標(biāo)示量的75％。
2.一種異維A酸軟膠丸中抗氧劑的測試方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)系統(tǒng)適用條件用DB-1毛細(xì)管柱0.25mm×30m×0.25μm、HP-5毛細(xì)管柱0.25mm*30m*0.3μm或DB-2毛細(xì)管柱0.25mm×30m×0.25μm；分流比為10∶1；尾吹為40ml/min，柱溫在50或100℃保持2～5分鐘；然后以20～30℃/分鐘的速率升到150或200℃，保持3～5分鐘；(2)對照液的制備 稱取抗氧劑40mg，置100ml容量瓶中，用甲醇、乙醇或正己烷溶解并稀釋至刻度，精密吸取1ml，置10ml容量瓶中，并稀釋至刻度；(3)供試液的制備 取本品20粒，剪開，去殼，內(nèi)容物放入具塞錐形瓶中，加10ml甲醇、乙醇或正己烷，超聲20分鐘，靜置，取上清液，即得；(4)測定方法 取對照液和供試液各1μl，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，供試液中抗氧劑的保留時(shí)間應(yīng)分別與對照液中抗氧劑的保留時(shí)間一致。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種異維A酸軟膠丸中抗氧劑的測試方法，其特征在于其中所述的抗氧劑為叔丁基對羥基茴香醚或2.6-二叔丁基對甲酚。
4.一種異維A酸軟膠丸中防腐劑的測試方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)系統(tǒng)適用條件用DB-1毛細(xì)管柱0.25mm×30m×0.25μm、HP-5毛細(xì)管柱0.25mm*30m*0.3μm或DB-2毛細(xì)管柱0.25mm×30m×0.25μm；分流比為10∶1；尾吹為40ml/min；柱溫在50或100℃保持2～5分鐘，然后以20～30℃/分鐘的速率升到150或200℃，保持3～5分鐘；(2)對照液的制備 稱取防腐劑40mg，置100ml容量瓶中，用甲醇、乙醇或正己烷溶解并稀釋至刻度，精密吸取1ml，置10ml容量瓶中，并稀釋至刻度；(3)供試液的制備 取本品20粒，剪開，去殼，內(nèi)容物放入具塞錐形瓶中，加10ml甲醇、乙醇或正己烷，超聲20分鐘，靜置，取上清液，即得；(4)測定方法 取對照液和供試液各1μl，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，供試液中防腐劑的保留時(shí)間應(yīng)分別與對照液中防腐劑的保留時(shí)間一致。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種異維A酸軟膠丸中防腐劑的測試方法，其特征在于其中所述的防腐劑為山梨酸鉀、對羥基苯甲酸乙酯或苯甲酸鈉。
全文摘要
本發(fā)明提供了異維A酸軟膠丸的溶出度和其中的抗氧劑、防腐劑的鑒別測試方法。通過本發(fā)明方法提高了異維A酸軟膠丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，有利于監(jiān)控產(chǎn)品起始期和有效貯藏期內(nèi)異維A酸軟膠丸的穩(wěn)定性，具有較大的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)G01N30/00GK101063675SQ20061002625
公開日2007年10月31日 申請日期2006年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月29日
發(fā)明者朱海芒 申請人:上海信誼萬象藥業(yè)股份有限公司