專(zhuān)利名稱(chēng)：啤酒中氨基酸的對(duì)乙酰氨基苯磺酰氟柱前衍生及毛細(xì)管電泳定量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及啤酒中的氨基酸的鑒定方法，特別是通過(guò)毛細(xì)管電泳技術(shù)對(duì)啤酒中氨基酸進(jìn)行分離和定量檢測(cè)的方法。
背景技術(shù)：
氨基酸是啤酒中的主要營(yíng)養(yǎng)成分。啤酒中的氨基酸的種類(lèi)和含量的多少是評(píng)價(jià)啤酒質(zhì)量好壞的一個(gè)重要指標(biāo)。
目前用于測(cè)定啤酒中的氨基酸的方法主要有高效液相色譜法[1]、氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用方法[2]，也有文獻(xiàn)報(bào)道用核磁共振方法測(cè)定[3]。但是這些方法有一些缺點(diǎn)，如高效液相色譜方法使用的流動(dòng)相一般是甲醇和乙腈，它們對(duì)人體都有很大的傷害而且對(duì)環(huán)境造成污染，而后兩種方法儀器復(fù)雜而且極其昂貴。采用毛細(xì)管電泳儀進(jìn)行的毛細(xì)管電泳因其具有分離效率高、分離速度快、進(jìn)樣量少及操作成本低等優(yōu)點(diǎn)，越來(lái)越多地被用來(lái)作為食品中氨基酸的常規(guī)分析手段。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種利用對(duì)乙酰氨基苯磺酰氟衍生啤酒中氨基酸及毛細(xì)管電泳分離、定量檢測(cè)的方法，主要任務(wù)是衍生啤酒中的氨基酸，并且使衍生產(chǎn)物能在毛細(xì)管電泳上分離和測(cè)定。
本發(fā)明的是這樣實(shí)現(xiàn)的，啤酒中氨基酸的對(duì)乙酰氨基苯磺酰氟柱前衍生及毛細(xì)管電泳定量檢測(cè)方法，其特征是在已調(diào)pH為9.0-9.6的啤酒，加入對(duì)乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)的乙醇溶液和甲醇，混勻，在30℃-40℃的水浴中衍生化反應(yīng)25-35分鐘；進(jìn)樣至含有SDS和NaCl的硼酸緩沖液的毛細(xì)管電泳上分離和測(cè)定氨基酸的種類(lèi)和含量。
所述的啤酒中加入的對(duì)乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)的乙醇溶液和甲醇，分別為啤酒容積的1/4和1/800。
所述的硼酸緩沖液中含有的SDS(生化試劑，Alfa Aesar)為140mmol/L，含有的NaCl為20mmol/L(生化試劑，國(guó)藥集團(tuán))。
所述的毛細(xì)管電泳的毛細(xì)管電泳儀的毛細(xì)管總長(zhǎng)為60cm，有效柱長(zhǎng)為50cm，內(nèi)徑為50μm。
所述的毛細(xì)管電泳條件參數(shù)為毛細(xì)管內(nèi)徑為50μm，毛細(xì)管長(zhǎng)度為50cm，電壓為30kV，溫度為25℃，壓力進(jìn)樣0.5psi，5sec。
為了能夠連續(xù)檢測(cè)樣品和保證檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性，所述的進(jìn)行毛細(xì)管電泳時(shí)，要對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行沖洗壓力為20psi沖洗，按照沖洗目的的需要，沖洗的程序?yàn)锳、對(duì)于新的毛細(xì)管在使用前進(jìn)行的沖洗CH3OH1min，H2O 0.5min，0.1mol/L HCl 2min，H2O 0.5min，0.1mol/LM NaOH 2min，H2O 0.5min，緩沖液 2min。
B、進(jìn)樣前對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行的沖洗0.1mol/L NaOH2min，H2O 2min，緩沖液 2min。
C、檢測(cè)結(jié)束后對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行的沖洗0.1mol/L NaOH2min，
H2O 2min，空氣 2min。
所述的進(jìn)樣前用0.22μm膜過(guò)濾。
本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，工藝先進(jìn)，分離效率高、分離速度快、進(jìn)樣量少，操作成本低。一般只需一些常用的試劑，所有試劑用量均很少，與傳統(tǒng)的使用高效液相色譜方法相比分析成本低得多。通過(guò)建立重要的標(biāo)準(zhǔn)氨基酸對(duì)照電泳譜圖，進(jìn)而形成對(duì)啤酒中的氨基酸進(jìn)行分離和檢測(cè)。其有益效果具體表現(xiàn)在(1)衍生反應(yīng)條件溫和，最佳衍生反應(yīng)溫度為35℃，特別適合于對(duì)啤酒等生物樣品的分析。
(2)樣品用量少按照上述毛細(xì)管分離條件，每次進(jìn)樣所需樣品只有幾個(gè)nL，這樣可以大大節(jié)約資源(3)分離時(shí)間短利用上述電泳參數(shù)，一個(gè)樣品在14min內(nèi)分離完成，而一般高效液相色譜至少要30min。
(4)自動(dòng)化程度高只要在電泳儀上輸入好設(shè)定的沖洗程序，進(jìn)樣及分離程序，電泳儀可以自動(dòng)操作，無(wú)須操作人員的存在。


圖1是20種常見(jiàn)的氨基酸柱前衍生化后的高效毛細(xì)管電泳圖；圖2是青島啤酒中氨基酸的高效毛細(xì)管電泳圖。
具體實(shí)施例方式
儀器與條件毛細(xì)管電泳儀，毛細(xì)管總長(zhǎng)60cm，有效柱長(zhǎng)50cm，內(nèi)徑50μm。20種氨基酸(生化試劑，國(guó)藥集團(tuán))。SDS(生化試劑，AlfaAesar)。
實(shí)驗(yàn)步驟定量移取每種氨基酸(0.05mmol/L)40μL或0.8mL已調(diào)pH為9.3的啤酒至2mL的具塞磨口試管內(nèi)，并加入PAABS-F的乙醇溶液(0.05mmol/L)200μL和1μL甲醇，混勻，塞緊后將其放入35℃恒溫水浴中衍生化反應(yīng)30分鐘，用0.22μm膜過(guò)濾后，進(jìn)樣至含有SDS和NaCl的硼酸緩沖液的毛細(xì)管電泳上分離和測(cè)定氨基酸的種類(lèi)和含量。表1是用本發(fā)明的方法測(cè)定的青島啤酒中氨基酸的含量。
表1

權(quán)利要求
1.一種啤酒中氨基酸的對(duì)乙酰氨基苯磺酰氟柱前衍生及毛細(xì)管電泳定量檢測(cè)方法，其特征是在已調(diào)pH為9.0-9.6的啤酒，加入對(duì)乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)的乙醇溶液和甲醇，混勻，在30℃-40℃的水浴中衍生化反應(yīng)25-35分鐘；進(jìn)樣至含有SDS和NaCl的硼酸緩沖液的毛細(xì)管電泳上分離和測(cè)定氨基酸的種類(lèi)和含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的啤酒中加入的對(duì)乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)的乙醇溶液和甲醇，分別為啤酒容積的1/4和1/800。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的硼酸緩沖液中含有的SDS(生化試劑，Alfa Aesar)為140mmol/L，含有的NaCl為20mmol/L(生化試劑，國(guó)藥集團(tuán))。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的毛細(xì)管電泳的毛細(xì)管電泳儀的毛細(xì)管總長(zhǎng)為60cm，有效柱長(zhǎng)為50cm，內(nèi)徑為50μm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的毛細(xì)管電泳條件參數(shù)為毛細(xì)管內(nèi)徑為50μm，毛細(xì)管長(zhǎng)度為50cm，電壓為30kV，溫度為25℃，壓力進(jìn)樣0.5psi，5sec。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是進(jìn)行毛細(xì)管電泳時(shí)，要對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行沖洗壓力為20psi沖洗，按照沖洗目的的需要，沖洗的程序?yàn)锳、對(duì)于新的毛細(xì)管在使用前進(jìn)行的沖洗CH3OH 1min，H2O 0.5min，0.1mol/L HCl 2min，H2O 0.5min，0.1mol/LM NaOH 2min，H2O 0.5min，緩沖液 2min。B、進(jìn)樣前對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行的沖洗0.1mol/L NaOH2min，H2O 2min，緩沖液 2min。C、檢測(cè)結(jié)束后對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行的沖洗0.1mol/L NaOH2min，H2O 2min，空氣 2min。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種啤酒中氨基酸的對(duì)乙酰氨基苯磺酰氟柱前衍生及毛細(xì)管電泳定量檢測(cè)方法，在已調(diào)pH為9.0－9.6的啤酒，加入對(duì)乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS－F)的乙醇溶液和甲醇，混勻，在30℃－40℃的水浴中衍生反應(yīng)25－35分鐘；進(jìn)樣至含有SDS和NaCl的硼酸緩沖液的毛細(xì)管電泳上分離和測(cè)定氨基酸的種類(lèi)和含量。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單，工藝先進(jìn)，分離效率高、分離速度快、進(jìn)樣量少，操作成本低。一般只需一些常用的試劑，所有試劑用量均很少，與傳統(tǒng)的使用高效液相色譜方法相比分析成本低得多。通過(guò)建立重要的標(biāo)準(zhǔn)氨基酸對(duì)照電泳譜圖，進(jìn)而形成對(duì)啤酒中的氨基酸進(jìn)行分離和檢測(cè)。
文檔編號(hào)G01N27/447GK1825111SQ20061003907
公開(kāi)日2006年8月30日 申請(qǐng)日期2006年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月21日
發(fā)明者瞿其曙, 湯曉慶, 胡效亞, 劉尹, 陸曉 申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)