專利名稱：免疫磁珠及制作方法和用于檢測的方法及測試板的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于免疫學(xué)檢測的標(biāo)記物、該標(biāo)記物的制作方法和用于檢測的方法及測試板，具體是一種免疫磁珠、免疫磁珠的制作方法及用于檢測的方法和測試板。
背景技術(shù)：
免疫分析是利用抗體(Antibody)能夠與相應(yīng)抗原(Antigen)及半抗原發(fā)生特異性結(jié)合的性質(zhì)，通過將特定抗體或抗原作為選擇性試劑來對相應(yīng)待測抗原或抗體進(jìn)行分析測定的方法。隨著學(xué)科之間的相互滲透，免疫學(xué)涉及和應(yīng)用的范圍不斷擴大，新的免疫學(xué)檢測方法不斷產(chǎn)生，在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、農(nóng)學(xué)以及食品科學(xué)的研究和應(yīng)用方面中發(fā)揮著越來越重要的作用。為提高抗原和抗體檢測的敏感性，將已知抗體或抗原標(biāo)記上易顯示的物質(zhì)，通過檢測標(biāo)記物，反映有無抗原抗體反應(yīng)，從而間接測出微量的抗原或抗體。常用的標(biāo)記物有酶、熒光素、放射性同位素、膠體金及電子致密物質(zhì)等。這種抗原或抗體標(biāo)記上顯示物所進(jìn)行的特異性反應(yīng)稱為免疫標(biāo)記技術(shù)。免疫標(biāo)記大大提高了試驗敏感性。目前免疫標(biāo)記技術(shù)主要有放射免疫、酶聯(lián)免疫、化學(xué)發(fā)光免疫、熒光免疫、以及膠體金免疫等，以上方法各有優(yōu)劣。放射免疫靈敏度高，但是操作人員需要接觸放射性物質(zhì)，測定完成后放射性材料會引起環(huán)境污染；熒光免疫靈敏度偏低，儀器昂貴，分析時容易受到散射光、來源于樣品的背景熒光和熒光淬滅等因素的干擾；化學(xué)發(fā)光免疫靈敏度不錯，但是儀器設(shè)備昂貴，膠體金免疫反應(yīng)速度快，但靈敏度和特異性差；目前應(yīng)用最廣的是酶聯(lián)免疫，其基本特點介于以上項目中間，靈敏度低于放射免疫，但是反應(yīng)時間長，反應(yīng)對溫度依賴性高，不能定量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述的不足，而提供一種靈敏度高、反應(yīng)時間短、儀器設(shè)備便宜、安全性高的用于檢測的免疫磁珠及該磁珠及制作方法；本發(fā)明的另一個目的在于提供該免疫磁珠用于檢測的方法及專用的測試板。
本發(fā)明的目的是通過如下的技術(shù)方案來實現(xiàn)的，它至少由磁性載體微球組成，該磁性載體微球結(jié)合有至少一種免疫配基。
所述的磁性載體微球由磁性納米粒和高分子骨架材料組成，其核心為金屬小顆粒，核心外為高分子材料，最外層為帶有各種可以結(jié)合不同免疫配基功能基因的功能層。
所述的金屬小顆粒選用Fe3O4或Fe2O3金屬材料，核心外高分子材料選用聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯酸、淀粉、葡聚糖、明膠、乙基纖維素中的至少一種。
一種免疫磁珠的制作方法，步驟為(1)先用乙磺酸對磁珠預(yù)處理；(2)將盡可能小的體積的碳化二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺加入磁珠溶液中，在渦旋震蕩器上震蕩活化磁珠；(3)偶聯(lián)抗體的制作；(4)對偶聯(lián)抗體用封閉液封閉；(5)免疫磁珠純化所述用乙磺酸(MES washing buffer)對磁珠預(yù)處理為吸取適量磁珠至EP管中，置于磁場中使磁珠與貯存液分離，用1-3倍體積的乙磺酸(MES Washing buffer)清洗磁珠至少一次，重懸磁珠于原體積的乙磺酸(MES washing buffer)中；所述的活化磁珠為將盡可能小的體積的碳化二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)加入磁珠溶液中，在渦旋震蕩器上震蕩，溫度30-40℃，時間20-40分鐘，使碳化二亞胺(EDC)與N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)的分子比在1∶1-1∶3，使之分子數(shù)量為磁珠表面羧基的5-10倍，分別用1-3倍體積的乙磺酸(MES Washing buffer)以及相同體積硼酸(borate washing buffer)清洗磁珠。
所述的偶聯(lián)抗體的制作為將適量的抗體液加入至磁珠懸液中，25-37℃，反應(yīng)2-3hrs；抗體在磁珠中的濃度達(dá)到＞0.5mg/ml。
所述的封閉為加入5-10倍抗體體積的磁珠-抗體封閉液，25-37℃，時間20-40分鐘。
所述的免疫磁珠純化為用1倍體積的硼酸(borate washing buffer)清洗磁珠，兩次，并將磁珠轉(zhuǎn)移至新管中。
一種免疫磁珠用于檢測的方法是利用免疫學(xué)反應(yīng)夾心法，競爭法以及間接法檢測不同物質(zhì)的存在，并在測試板上設(shè)置對照體系(1)將與待檢測物質(zhì)相關(guān)的抗原、抗體、或者與其相關(guān)的蛋白質(zhì)類原料，按照上述免疫磁珠的制作方法制作相應(yīng)的免疫磁珠。
(2)將待檢測物質(zhì)相關(guān)的抗體或抗原包被在檢測試劑板的測試線位置，并設(shè)置相應(yīng)的與免疫磁珠標(biāo)記物可以反應(yīng)的抗體或抗原包被在檢測線的位置。
(3)將檢測樣品200微升加入測試板上樣孔，室溫下反應(yīng)3~5分鐘以后，將測試板放入磁信號檢測儀，進(jìn)行檢測。
此檢測儀器可以將已經(jīng)轉(zhuǎn)化成磁場信號的生物學(xué)反應(yīng)信號，通過測定磁場內(nèi)電壓的改變，對生物學(xué)物質(zhì)的反應(yīng)性質(zhì)強弱進(jìn)行定量分析。
一種基于免疫磁珠檢測的方法所用的測試板，它由包被試紙條、偶聯(lián)墊、樣品墊、吸水墊、覆蓋膜以及測試板外卡組成，包被試紙條包括由包被的目的蛋白形成的測試線和由對照抗體形成的對照線，偶聯(lián)墊為加入免疫磁珠的標(biāo)記條，樣品墊用于加入待測試樣品。
所述的包被試紙條的制作是(1)用定量控制的的加樣裝置將準(zhǔn)備包被的目的蛋白載于硝酸纖維素膜上，載量約4微克/厘米(ug/cm)，室溫下干燥；(2)封閉處理硝酸纖維素膜1.5％牛血清白蛋白-磷酸緩沖液(BSA-PBS)封閉60分鐘，室溫；(3)膜的洗滌0.01％十二烷基硫酸鈉-磷酸緩沖液(BSA-PBS)洗滌15分鐘，共三次；(4)膜的保存室溫干燥后，保存于4~20度，濕度小于15％。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有靈敏度高，定量準(zhǔn)確，不受顏色等光學(xué)因素干擾，磁信號穩(wěn)定，不易衰減，試劑簡單、穩(wěn)定、低廉，方法先進(jìn)，儀器簡便，檢測快速，適合現(xiàn)場檢測等特點。


圖1是本發(fā)明的測試板測試條結(jié)構(gòu)示意圖。
圖2是本發(fā)明測試板外卡結(jié)構(gòu)示意圖。
圖3為本發(fā)明測試結(jié)果對照圖。
圖4為本發(fā)明另一測試結(jié)果對照圖。
圖5為本發(fā)明又一測試結(jié)果對照圖。
圖6為本發(fā)明再一測試結(jié)果對照圖。
具體實施例方式
利用本發(fā)明磁性納米微球標(biāo)記技術(shù)可以廣泛的應(yīng)用于檢測微量蛋白質(zhì)、農(nóng)獸藥、激素類等物質(zhì)。
實施例一乙型肝炎病毒表面抗原的檢測基本反應(yīng)原理雙抗體夾心法偶聯(lián)抗體小鼠抗HBsAg單克隆抗體1包被抗體小鼠抗HBsAg單克隆抗體2對照包被物羊抗小鼠IgG的第二抗體反應(yīng)原料吸水墊、偶連墊、硝酸纖維素膜、樣品墊、覆蓋膜
MES緩沖液pH 4.7(0.1摩爾/升MES，0.9％Nacl)10％吐溫20---MES緩沖液MES清洗緩沖液(MES緩沖液，pH 4.7，含0.05％吐溫20)硼酸緩沖液pH 8.5(50毫摩爾/升)10％吐溫---硼酸緩沖液硼酸清洗緩沖液(硼酸緩沖液，pH 8.5，含0.05％吐溫20)磁珠貯存液(磷酸鹽緩沖液，0.05％硫柳汞)10％牛血清白蛋白---硼酸緩沖液偶聯(lián)緩沖液(pH7.0磷酸鹽緩沖液+5％蔗糖+0.5％吐溫20+1％BSA)蛋白稀釋液25mM磷酸鹽緩沖液(pH7.5)膜封閉液5mM磷酸鹽緩沖液(pH7.5)+1.5％BSA洗膜液5mM磷酸鹽緩沖液(pH7.5)+0.01％SDS所述的免疫磁珠由結(jié)合有小鼠抗HBsAg單克隆抗體1免疫配基的磁性載體微球構(gòu)成。
免疫磁珠的制作(1)磁珠預(yù)處理吸取20微升磁珠至小試管中，置于磁場中使磁珠與貯存液分離，用40微升MES清洗緩沖液清洗磁珠一次，重懸磁珠于20微升MES清洗緩沖液中；(2)活化磁珠分別將70微克的碳化二亞胺(EDC)和80微克N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)加入至磁珠溶液中，在渦旋震蕩器上震蕩，溫度37℃，30分鐘，隨后分別用2倍體積的MES清洗緩沖液以及相同體積硼酸清洗緩沖液清洗磁珠；(3)偶聯(lián)體的制作將1微升的小鼠抗HBsAg單克隆抗體1(5毫克/毫升)加入至磁珠懸液中，25-37℃，反應(yīng)3小時；加入10％的牛血清白蛋白封閉液，3微升，25-37℃，時間30分鐘；(4)所述的免疫磁珠純化為用1倍體積的硼酸清洗緩沖液清洗磁珠，兩次，并將磁珠轉(zhuǎn)移至新管中。
測試板及其制備，如圖1、圖2所示，它由含有包被試紙條、偶聯(lián)墊、樣品墊、吸水墊的測試條、覆蓋膜以及測試板外卡組成，包被試紙條包括由包被的目的蛋白形成的測試線3和由對照抗體形成的對照線2，免疫磁珠的標(biāo)記條4為加入免疫磁珠的偶聯(lián)墊，樣品墊5用于加入待測試樣品，1為吸水墊，6為測試板外卡上的點樣孔。
具體如下
(1)載有反應(yīng)物的硝酸纖維素膜制備用定量控制的的加樣裝置將準(zhǔn)備包被的目的蛋白(小鼠抗HBsAg單克隆抗體2)載于硝酸纖維素膜上，載量約4微克/厘米(ug/cm)，作為測試線；同時在測試線的下緣加入對照抗體，羊抗小鼠IgG的第二抗體，室溫下干燥；(2)封閉處理硝酸纖維素膜于培養(yǎng)皿中加入25毫升左右1.5％牛血清白蛋白-磷酸緩沖液(BSA-PBS)封閉60分鐘，室溫；(3)膜的洗滌0.01％十二烷基硫酸鈉-磷酸緩沖液(SDS-PBS)洗滌15分鐘，共三次；(4)膜的保存室溫干燥后，保存于4-20℃，濕度小于15％。此成品為包被試紙條；(5)磁珠標(biāo)記條制備用定量加樣裝置將免疫磁珠載于偶聯(lián)墊；(6)將以上所述的包被試紙條、磁珠標(biāo)記條、樣品墊、吸水墊、覆蓋膜、測試板外卡等組成測試板；(7)測試將檢測樣品200微升加入測試板外卡的點樣孔，室溫下反應(yīng)3-5分鐘以后，將測試板放入磁性信號檢測儀，進(jìn)行檢測。
陰性樣品檢測測試線處無反應(yīng)，對照線出現(xiàn)明顯的峰值變化。具體如圖3陽性標(biāo)準(zhǔn)參考品檢測測試線、對照線出現(xiàn)明顯的峰值變化。具體如圖4待測樣品檢測用明確的陰性樣品以及不同濃度的陽性樣本進(jìn)行測試，測試線的峰值高低與陽性樣品的濃度呈現(xiàn)一定的相關(guān)性。圖5、圖6與ELISA的結(jié)果比較將市售若干廠家的陽性對照參考品做不同濃度稀釋，稀釋到一定程度后，ELISA呈陰性反應(yīng)時，本法仍然可以檢測到明顯的峰值變化。反應(yīng)靈敏度可以比ELISA高出至少1-2個數(shù)量級。
實施例二乙型肝炎病毒表面抗體的檢測基本反應(yīng)原理雙抗原夾心法反應(yīng)原料與基本試劑同實施例一偶聯(lián)抗原乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg包被抗原乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg對照包被物小鼠抗HBsAg單克隆抗體所述免疫磁珠由結(jié)合有乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg免疫配基的磁性載體微球構(gòu)成。
免疫磁珠的制作(1)磁珠預(yù)處理吸取20微升磁珠至小試管中，置于磁場中使磁珠與貯存液分離，用40微升MES清洗緩沖液清洗磁珠一次，重懸磁珠于20微升MES清洗緩沖液中；(2)活化磁珠分別將70微克的碳化二亞胺(EDC)和80微克N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)加入至磁珠溶液中，在渦旋震蕩器上震蕩，溫度37℃，30分鐘，隨后分別用2倍體積的MES清洗緩沖液以及相同體積硼酸清洗緩沖液清洗磁珠；(3)偶聯(lián)體的制作將1微升的乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg(5毫克/毫升)加入至磁珠懸液中，25-37℃，反應(yīng)3小時；加入10％的牛血清白蛋白封閉液，3微升，25-37℃，時間30分鐘；(4)所述的免疫磁珠純化為用1倍體積的硼酸清洗緩沖液清洗磁珠，兩次，并將磁珠轉(zhuǎn)移至新管中。
測試板的制備，具體如下(1)載有反應(yīng)物的硝酸纖維素膜制備用定量控制的的加樣裝置將準(zhǔn)備包被的目的蛋白乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg載于硝酸纖維素膜上，載量約4微克/厘米(ug/cm)，作為測試線；同時在測試線的下緣加入對照抗體小鼠抗HBsAg單克隆抗體，室溫下干燥；(2)封閉處理硝酸纖維素膜于培養(yǎng)皿中加入25毫升左右1.5％牛血清白蛋白-磷酸緩沖液(BSA-PBS)封閉60分鐘，室溫；(3)膜的洗滌0.01％十二烷基硫酸鈉-磷酸緩沖液(SDS-PBS)洗滌15分鐘，共三次；(4)膜的保存室溫干燥后，保存于4-20度，濕度小于15％。此成品為包被試紙條；(5)磁珠標(biāo)記條制備用定量加樣裝置將免疫磁珠載于偶聯(lián)墊；(6)將以上所述的包被蛋白的硝酸纖維素膜、磁珠標(biāo)記條、樣品墊、吸水墊、覆蓋膜、測試板外卡等組成測試板；(7)測試將檢測樣品200微升加入測試板外卡的點樣孔，室溫下反應(yīng)3-5分鐘以后，將測試板放入磁性信號檢測儀，進(jìn)行檢測。
陰性樣品檢測測試線處無反應(yīng)，對照線出現(xiàn)明顯的峰值變化。
陽性標(biāo)準(zhǔn)參考品檢測測試線、對照線出現(xiàn)明顯的峰值變化。
待測樣品檢測用明確的陰性樣品以及不同濃度的陽性樣本進(jìn)行測試，測試線的峰值高低與陽性樣品的濃度呈現(xiàn)一定的相關(guān)性。
與ELISA的結(jié)果比較將市售若干廠家的陽性對照參考品做不同濃度稀釋，稀釋到一定程度后，ELISA呈陰性反應(yīng)時，本法仍然可以檢測到明顯的峰值變化，反應(yīng)靈敏度可以比ELISA高出至少1-2個數(shù)量級。
實施例三環(huán)境、食品中有機小分子的檢測----以2，4-D為例基本反應(yīng)原理競爭法反應(yīng)原料與基本試劑同實施例一與二偶聯(lián)抗原氯霉素與卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)的全抗原包被抗體鼠抗氯霉素-牛血清白蛋白單克隆抗體對照包被物羊抗OVA多克隆抗體所述的免疫磁珠由結(jié)合有氯霉素與卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)的全抗原免疫配基的磁性載體微球構(gòu)成。
免疫磁珠的制作(1)磁珠預(yù)處理吸取20微升磁珠至小試管中，置于磁場中使磁珠與貯存液分離，用40微升MES清洗緩沖液清洗磁珠一次，重懸磁珠于20微升MES清洗緩沖液中；(2)活化磁珠分別將70微克的碳化二亞胺(EDC)和80微克N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)加入至磁珠溶液中，在渦旋震蕩器上震蕩，溫度37℃，30分鐘，隨后分別用2倍體積的MES清洗緩沖液以及相同體積硼酸清洗緩沖液清洗磁珠；(3)偶聯(lián)體的制作將1微升的氯霉素與卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)的全抗原(5毫克/毫升)加入至磁珠懸液中，25-37℃，反應(yīng)3小時；加入10％的牛血清白蛋白封閉液，3微升，25-37℃，時間30分鐘；(4)所述的免疫磁珠純化為用1倍體積的硼酸清洗緩沖液清洗磁珠，兩次，并將磁珠轉(zhuǎn)移至新管中。
測試板的制備，具體如下(1)載有反應(yīng)物的硝酸纖維素膜制備用定量控制的的加樣裝置將準(zhǔn)備包被的目的蛋白鼠抗氯霉素-牛血清白蛋白單克隆抗體載于硝酸纖維素膜上，載量約4微克/厘米(ug/cm)，作為測試線；同時在測試線的下緣加入對照抗原羊抗OVA多克隆抗體，室溫下干燥；
(2)封閉處理硝酸纖維素膜于培養(yǎng)皿中加入25毫升左右1.5％牛血清白蛋白-磷酸緩沖液(BSA-PBS)封閉60分鐘，室溫；(3)膜的洗滌0.01％十二烷基硫酸鈉-磷酸緩沖液(SDS-PBS)洗滌15分鐘，共三次；(4)膜的保存室溫干燥后，保存于4-20度，濕度小于15％。此成品為包被試紙條；(5)磁珠標(biāo)記條制備用定量加樣裝置將免疫磁珠載于偶聯(lián)墊；(6)將以上所述的包被蛋白的硝酸纖維素膜、磁珠標(biāo)記條、樣品墊、吸水墊、覆蓋膜、測試板外卡等組成測試板；(7)測試將檢測樣品200微升加入測試板外卡的點樣孔，室溫下反應(yīng)3-5分鐘以后，將測試板放入磁性信號檢測儀，進(jìn)行檢測。
陰性樣品檢測測試線、對照線出現(xiàn)明顯的峰值變化。
陽性標(biāo)準(zhǔn)參考品檢測根據(jù)陽性標(biāo)準(zhǔn)參考品的濃度不同，測試線出現(xiàn)不同的峰值變化。
待測樣品檢測用明確的陰性樣品以及不同濃度的陽性樣本進(jìn)行測試，測試線的峰值高低與陽性樣品的濃度呈現(xiàn)一定的負(fù)相關(guān)性。
基本結(jié)果按照參考品的濃度，可以檢測到低于目前國家標(biāo)準(zhǔn)的檢測濃度。
權(quán)利要求
1.一種免疫磁珠，它至少由磁性載體微球組成，其特征在于該磁性載體微球結(jié)合有至少一種免疫配基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫磁珠，其特征在于所述的磁性載體微球由磁性納米粒和高分子骨架材料組成，其核心為金屬小顆粒，核心外為高分子材料，最外層為帶有各種可以結(jié)合不同免疫配基功能基因的功能層。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫磁珠，其特征在于所述的金屬小顆粒選用Fe3O4或Fe2O3金屬材料，核心外高分子材料選用聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯酸、淀粉、葡聚糖、明膠、乙基纖維素中的至少一種。
4.一種如權(quán)利要求1或2或3所述的免疫磁珠的制作方法，其特征在于(1)先用乙磺酸對磁珠預(yù)處理；(2)將盡可能小的體積的碳化二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺加入磁珠溶液中，在渦旋震蕩器上震蕩活化磁珠；(3)偶聯(lián)抗體的制作；(4)對偶聯(lián)抗體用封閉液封閉；(5)免疫磁珠純化。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的免疫磁珠的制作方法，其特征在于所述用乙磺酸對磁珠預(yù)處理為吸取適量磁珠至EP管中，置于磁場中使磁珠與貯存液分離，用1-3倍體積的乙磺酸清洗磁珠至少一次，重懸磁珠于原體積的乙磺酸中；所述的活化磁珠為將盡可能小的體積的碳化二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺加入磁珠溶液中，在渦旋震蕩器上震蕩，溫度30-40℃，時間20-40分鐘，使碳化二亞胺與N-羥基琥珀酰亞胺的分子比在1∶1-1∶3，使之分子數(shù)量為磁珠表面羧基的5-10倍，分別用1-3倍體積的乙磺酸以及相同體積硼酸清洗磁珠。所述的偶聯(lián)抗體的制作為將適量的抗體液加入至磁珠懸液中，25-37℃，反應(yīng)2-3小時；抗體在磁珠中的濃度達(dá)到＞0.5mg/ml。所述的封閉為加入5-10倍抗體體積的磁珠-抗體封閉液，25-37℃，時間20-40分鐘。所述的免疫磁珠純化為用1倍體積的硼酸清洗磁珠兩次，并將磁珠轉(zhuǎn)移至新管中。
6.一種如權(quán)利要求1或2或3所述的免疫磁珠用于檢測的方法，其特征在于利用免疫學(xué)反應(yīng)夾心法，競爭法以及間接法檢測不同物質(zhì)的存在，并在測試板上設(shè)置對照體系(1)將與待檢測物質(zhì)相關(guān)的抗原、抗體、或者與其相關(guān)的蛋白質(zhì)類原料，按照上述免疫磁珠的制作方法制作相應(yīng)的免疫磁珠；(2)將待檢測物質(zhì)相關(guān)的抗體或抗原包被在檢測試劑板的測試線位置，并設(shè)置相應(yīng)的與免疫磁珠標(biāo)記物可以反應(yīng)的抗體或抗原包被在檢測線的位置；(3)將檢測樣品200微升加入測試板上樣孔，室溫下反應(yīng)3~5分鐘以后，將測試板放入磁信號檢測儀，進(jìn)行檢測。
7.一種基于權(quán)利要求6所述的免疫磁珠用于檢測的方法所用的測試板，其特征在于該測試板由包被試紙條、偶聯(lián)墊、樣品墊(5)、吸水墊(1)、覆蓋膜以及測試板外卡組成，包被試紙條包括由包被目的蛋白形成的測試線(3)和由對照抗體形成的對照線(2)，偶聯(lián)墊為加入免疫磁珠的標(biāo)記條(4)，樣品墊(5)用于加入待測試樣品。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的免疫磁珠用于檢測的方法所用的測試板，其特征在于所述的包被試紙條是(1)用定量控制的的加樣裝置將準(zhǔn)備包被的目的蛋白載于硝酸纖維素膜上，載量約4微克/厘米，室溫下干燥；(2)封閉處理硝酸纖維素膜1.5％牛血清白蛋白-磷酸緩沖液(BSA-PBS)封閉60分鐘，室溫；(3)膜的洗滌0.01％十二烷基硫酸鈉-磷酸緩沖液(BSA-PBS)洗滌15分鐘，共三次，(4)膜的保存室溫干燥后，保存于4~20度，濕度小于15％。
全文摘要
一種免疫磁珠及制作方法和用于檢測的方法及測試板，所述的免疫磁珠至少由磁性載體微球組成，該磁性載體微球結(jié)合有至少一種免疫配基；所述的磁性載體微球由磁性納米粒和高分子骨架材料組成，其核心為金屬小顆粒，核心外為高分子材料，最外層為帶有各種可以結(jié)合不同免疫配基功能基因的功能層；免疫磁珠的制作方法包括磁珠預(yù)處理；活化磁珠；偶聯(lián)抗體的制作；對偶聯(lián)抗體用封閉液封閉；免疫磁珠純化等；用于檢測的方法是利用免疫學(xué)反應(yīng)夾心法，競爭法以及間接法檢測不同物質(zhì)的存在，并在測試板上設(shè)置對照體系測試板由包被試紙條、偶聯(lián)墊、樣品墊、吸水墊、覆蓋膜以及測試板外卡組成，它具有靈敏度高，定量準(zhǔn)確，不受光學(xué)因素干擾，磁信號穩(wěn)定，不易衰減，試劑簡單、穩(wěn)定、低廉，檢測快速，適合現(xiàn)場檢測等特點。
文檔編號G01N33/546GK1975423SQ20061005330
公開日2007年6月6日 申請日期2006年9月6日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月6日
發(fā)明者周海夢, 孟凡國, 胡衛(wèi)江 申請人:浙江清華長三角研究院