專利名稱：一種瓊脂糖凝膠膜基片及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種瓊脂糖凝膠膜基片及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
生物芯片的概念源自于計(jì)算機(jī)芯片。狹義的生物芯片是指包被在固相載體上的高密度DNA、蛋白質(zhì)、細(xì)胞等生物活性物質(zhì)的微陣列，主要包括cDNA微陣列、寡核苷酸微陣列和蛋白質(zhì)微陣列。對于廣義生物芯片而言，除了上述被動(dòng)式微陣列芯片之外，還包括利用光刻技術(shù)和微加工技術(shù)在固體基片表面構(gòu)建流體分析單元和系統(tǒng)以實(shí)現(xiàn)生物分子進(jìn)行快速、大信息量并行處理和分析的微型固體薄型器件。包括核酸擴(kuò)增芯片、陣列毛細(xì)管電泳芯片、主動(dòng)式電磁生物芯片等。
最近幾年隨著蛋白功能研究時(shí)代的到來，蛋白芯片技術(shù)已成為進(jìn)行蛋白相關(guān)研究一種被廣泛應(yīng)用的技術(shù)。影響蛋白芯片技術(shù)應(yīng)用有許多限制因素，其中最關(guān)鍵的是由于蛋白結(jié)構(gòu)多樣性和蛋白多級結(jié)構(gòu)的存在，如何將蛋白分子固定于基片表面并保持蛋白活性的表面技術(shù)已成為蛋白芯片技術(shù)研究中一項(xiàng)關(guān)鍵性技術(shù)。目前用于蛋白樣品固定的表面按化學(xué)修飾形式可分為一維、二維和三維結(jié)構(gòu)，一維基片主要是在玻片表面修飾一層聚賴氨酸(poly-L-lysine，PLL)或在表面進(jìn)行硅烷化修飾上氨基、醛基、環(huán)氧、巰基基團(tuán)等，一維基片由于其表面較為疏水，固定于基片表面的蛋白分子易變性，有較強(qiáng)的非特異吸附。二維基片表面主要有兩種類型，一種是在表面修飾各種功能化的聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)化合物；另外一種是自組裝表面，在鍍金表面用長鏈烷基巰醇和長鏈烷基巰醇功能化的化合物進(jìn)行自組裝，二維基片表面在固定蛋白分子方面性能較佳，但存在化合物合成難題，不適合于大規(guī)模制備。三維基片表面主要有兩種類型，一種是在玻片表面修飾上樹枝狀大分子化合物，然后在樹枝狀大分子表面修飾上雙功能基團(tuán)連接臂，用于同蛋白分子共價(jià)結(jié)合。如美國Fullmoon公司的“protein slides”即屬于這種類型的用于蛋白固定的基片。這類三維基片表面較為穩(wěn)定，并且蛋白分子同基片表面通過共價(jià)作用或高親和力的方式結(jié)合，結(jié)合也很牢固。另一類三維結(jié)構(gòu)基片是濾過膜(filter membrane)和水凝膠(hydrogel)的三維基片。濾過膜主要有聚偏二氟乙烯(Polyvinylidene fluoride，PVDF)、硝酸纖維素(Nitrocellulose)膜用于蛋白芯片研究，這類膜通過靜電力和疏水力等作用力同蛋白分子結(jié)合，具有蛋白固定量高的特點(diǎn)，但這類膜表面非特異吸附較強(qiáng)，如德國Schleicher and schuell公司的Fast Slides膜基片是一種硝酸纖維素膜基片。水凝膠(Hydrogel)基片是一類目前應(yīng)用較多的三維基片，水凝膠基片通過擴(kuò)散的方式固定蛋白。水凝膠分子為蛋白分子提供半濕(semi-wet)的環(huán)境，易于保持蛋白活性；水凝膠基片本身有自發(fā)熒光背景非常低且非特異吸附低，在玻片表面機(jī)械強(qiáng)度較好。如美國Perkin-Elmer Life Scienc公司的Hydrogel聚丙烯酰胺水凝膠基片即為此類基片中的一種。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種帶有多個(gè)獨(dú)立區(qū)域的瓊脂糖凝膠膜基片及其制備方法與應(yīng)用。
本發(fā)明所提供的瓊脂糖凝膠膜基片，是在基片表面形成瓊脂糖凝膠膜，其中，所述瓊脂糖凝膠膜被分隔成不少于兩個(gè)的獨(dú)立區(qū)域。
這里，常用分隔采用不高于1mm的橡膠或絲印槳料。基片選用玻璃基片。
該瓊脂糖凝膠膜基片的制備方法，有兩種方法方法一，包括如下步驟1)在基片上制備瓊脂糖凝膠膜；2)將粘貼有雙面膠的帶有多個(gè)分隔區(qū)域的橡膠貼在瓊脂糖凝膠膜表面形成不少于兩個(gè)的獨(dú)立區(qū)域，然后，在40～90℃下烘烤5分鐘～2小時(shí)，得到所述瓊脂糖凝膠基片；或者，采用絲網(wǎng)印刷方法在瓊脂糖凝膠膜表面形成不少于兩個(gè)的獨(dú)立區(qū)域，然后，固化漿料，得到所述瓊脂糖凝膠基片。
方法二，包括如下步驟1)將粘貼有雙面膠的具多個(gè)分隔區(qū)域的橡膠貼在基片上，將基片分隔為不少于兩個(gè)的獨(dú)立區(qū)域；或者，在基片上將漿料通過絲網(wǎng)印刷方法印刷于基片表面，固化漿料，將基片分隔為不少于兩個(gè)的獨(dú)立區(qū)域；2)在各個(gè)區(qū)域內(nèi)加入瓊脂糖溶液，干燥成膜，經(jīng)高碘酸鈉溶液氧化，洗滌干燥得到所述瓊脂糖凝膠基片。
這里，漿料可選用5100系列聚丙烯油墨、白干金屬油墨、玻璃油墨等。
本發(fā)明的瓊脂糖凝膠膜基片是一種性能優(yōu)良的生物芯片基底材料，可廣泛應(yīng)用于各種生物芯片的制備上。
瓊脂糖本身是一種高分子聚糖化合物，瓊脂糖水溶液是一種水凝膠，能夠在固體(如玻片/塑料片/硅片等)表面成膜；瓊脂糖膜能夠較好保持固定于其中的生物物質(zhì)活性。本發(fā)明利用瓊脂糖凝膠的良好成膜性和生物相容性，并將基片采用隔斷方法將基片分隔為多個(gè)獨(dú)立區(qū)域，由于分隔物的存在，使不同區(qū)域內(nèi)的不同生物樣品之間不會(huì)產(chǎn)生交叉污染。用含有多個(gè)獨(dú)立分隔點(diǎn)樣區(qū)域的瓊脂糖凝膠片制備芯片時(shí)，可以實(shí)現(xiàn)多項(xiàng)指標(biāo)樣品和多份相同、不同生物樣品的同時(shí)檢測，大大提高了芯片檢測效率。


圖1是一種多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片的主視圖，點(diǎn)陣設(shè)置為2×6個(gè)；圖2是圖1所示的仰視圖；圖3是一種多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片的主視圖，點(diǎn)陣設(shè)置為1×2個(gè)；圖4是一種多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片的主視圖，點(diǎn)陣設(shè)置為3×8個(gè)；圖5是一種多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片的主視圖，點(diǎn)陣設(shè)置為4×4個(gè)；圖6是點(diǎn)陣設(shè)置為1×2點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片制備蛋白芯片結(jié)果圖；圖7是點(diǎn)陣設(shè)置為2×5點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片制備蛋白芯片結(jié)果圖；圖8是點(diǎn)陣設(shè)置為2×6點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片制備抗核抗體檢測芯片結(jié)果圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提供了一種含有多個(gè)獨(dú)立分隔點(diǎn)樣區(qū)域的瓊脂糖凝膠基片，它含有獨(dú)立分隔的區(qū)域數(shù)目不小于2個(gè)；這些分隔物可以是粘貼有雙面膠的橡膠，也可以是疏水性絲網(wǎng)印刷漿料，并且這些分隔物不會(huì)破壞生物樣品的活性。
其結(jié)構(gòu)如圖1-圖5所示，其中，圖1是一種多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片的主視圖，點(diǎn)陣設(shè)置為2×6個(gè)；圖2是圖1所示的仰視圖；圖3是一種多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片的主視圖，點(diǎn)陣設(shè)置為1×2個(gè)；圖4是一種多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片的主視圖，點(diǎn)陣設(shè)置為3×8個(gè)；圖5是一種多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片的主視圖，點(diǎn)陣設(shè)置為4×4個(gè)。
該瓊脂糖凝膠基片的制備方法可采用如下兩種方法來制備方法一，在清潔玻片或基片表面首先形成多個(gè)面積相等的獨(dú)立分隔區(qū)域，然后向多個(gè)獨(dú)立分隔區(qū)域中分別加入一定濃度瓊脂糖溶液，制備含有多個(gè)獨(dú)立分隔區(qū)域的瓊脂糖凝膠基片。為了能夠在清潔玻片或基片表面首先形成多個(gè)面積相等的獨(dú)立分隔區(qū)域，可以采用以下方法，但不僅限于以下方法。
在一定厚度的橡膠表面粘貼能夠同玻片或基片表面能夠結(jié)合的雙面膠，雙面膠和橡膠厚度之和不能夠高于1mm，采用沖壓方法在粘貼有雙面膠橡膠表面形成所需要的多個(gè)面積相等的分隔區(qū)域；將該橡膠粘貼于清潔玻片或基片表面；然后，在這些通過橡膠分隔的區(qū)域中加入瓊脂糖溶液，含有瓊脂糖溶液的基片放置干燥成膜，成膜后瓊脂糖基片放入高碘酸鈉溶液中氧化，然后超純水洗滌，離心甩干干燥。
同樣，也可以在清潔玻片或基片表面用絲網(wǎng)印刷方法形成多個(gè)面積相等的獨(dú)立分隔區(qū)域，將具有一定疏水性漿料通過絲網(wǎng)印刷方法印刷于玻片或基片表面，然后按所選擇疏水性漿料性質(zhì)在一定溫度和時(shí)間條件下進(jìn)行固化，固化后漿料厚度不能高于1mm。在這些通過疏水性漿料分隔區(qū)域中加入瓊脂糖溶液，將含有瓊脂糖溶液基片放置干燥成膜，成膜后瓊脂糖基片放入高碘酸鈉溶液中氧化，超純水洗滌，離心甩干干燥。這里，漿料可選用5100系列聚丙烯油墨、白干金屬油墨、玻璃油墨等。
方法二，在清潔玻片或基片形成整片瓊脂糖膜，然后在瓊脂糖基片表面粘貼含有多個(gè)獨(dú)立分隔的橡膠圍欄或通過絲網(wǎng)印刷方法在瓊脂糖膜層表面形成多個(gè)獨(dú)立分隔區(qū)域。
含有整片的瓊脂糖可以采用浸潤方法、滴加方法、刮膜方法和甩膠的方法制備浸潤方法就是將清潔玻片或基片浸入一定濃度的瓊脂糖溶液中，然后將玻片從溶液中取出，根據(jù)所要求膜厚度需要，可以反復(fù)多次，以形成較厚膜；滴加方法是將一定濃度溶液滴加于清潔玻片或基片表面，讓瓊脂糖溶液在整個(gè)玻片表面充分鋪展，然后干燥成膜。刮膜方法是取一定濃度和一定量的瓊脂糖溶液滴加玻片一端，然后用一定工具(如玻棒)將溶液通過刮的方法將瓊脂糖溶液均勻分布于玻片或基片表面，干燥成膜；甩膠方法是將瓊脂糖溶液滴加于玻片或基片表面，然后通過甩膠機(jī)將溶液在玻片或基片表面均勻分布，干燥成膜。
為了能夠?qū)⒄傊悄し指舫啥鄠€(gè)獨(dú)立分隔區(qū)域，可以采用以下方法，但不僅限于以下方法。將粘貼有雙面膠的一定厚度的橡膠采用沖壓方法在表面形成所需要的多個(gè)面積相等的分隔區(qū)域，將其粘貼于玻片或基片表面，雙面膠和橡膠厚度之和不能夠超過1mm。由于瓊脂糖水凝膠特性，粘貼于瓊脂糖膜表面的橡膠在水中容易脫落，這樣可造成樣品之間的污染，使在同一片瓊脂糖基片表面不能夠?qū)崿F(xiàn)多樣品的檢測；為了能夠?qū)⑾鹉z圍欄牢固粘貼于瓊脂糖膜表面，并且保證在芯片反應(yīng)過程中不脫落，可以在多點(diǎn)陣橡膠圍欄粘貼于瓊脂糖膜表面后，放入烘箱中在一定溫度下烘烤一定時(shí)間。在該方法中烘烤溫度為40～90℃，烘烤的時(shí)間為5分鐘～2小時(shí)；經(jīng)過烘烤后橡膠圍欄能夠牢固粘貼于瓊脂糖膜表面而在芯片反應(yīng)過程中不脫落。
同樣，也可以通過絲網(wǎng)印刷方法在瓊脂糖膜表面形成需要的多個(gè)獨(dú)立分隔的區(qū)域。通過絲網(wǎng)印刷方法將槳料絲印于瓊脂糖膜表面，然后按漿料要求進(jìn)行固化；通過絲網(wǎng)印刷到瓊脂糖膜表面的槳料應(yīng)該具有生物相容性，并且在其固化時(shí)不會(huì)造成瓊脂糖膜的損害，絲網(wǎng)印刷后槳料厚度不高于1mm。
本發(fā)明所用玻璃基片通常是尺寸為75.6mm×25mm×1mm的顯微鏡通用載玻片，可以使用未經(jīng)修飾的載玻片為基底材料，也可以對載玻片進(jìn)行表面修飾。
本發(fā)明的的多個(gè)獨(dú)立分隔點(diǎn)樣區(qū)域瓊脂糖凝膠基片是一種性能優(yōu)良的生物芯片基底材料。以含有多個(gè)獨(dú)立分隔點(diǎn)樣區(qū)域的瓊脂糖凝膠片制備芯片時(shí)，可以在采用美國Cartesian、Genomic Instrumentation、中國博奧生物等公司生產(chǎn)的微陣列點(diǎn)樣儀按一定規(guī)則將多樣品以陣列形式排布于多個(gè)獨(dú)立分隔的瓊脂糖凝膠基片表面，在進(jìn)行芯片反應(yīng)時(shí)可以將相同或不同的生物樣品加入各獨(dú)立分隔的瓊脂糖凝膠基片點(diǎn)陣內(nèi)進(jìn)行生物反應(yīng)。由于分隔物的存在，使加入的不同生物樣品之間不會(huì)產(chǎn)生交叉污染。用含有多個(gè)獨(dú)立分隔點(diǎn)樣區(qū)域的瓊脂糖凝膠片制備芯片時(shí)，可以實(shí)現(xiàn)多項(xiàng)指標(biāo)樣品和多份相同、不同生物樣品的同時(shí)檢測。
以下以具體的實(shí)施例來說明本發(fā)明。
實(shí)施例1、滴加法制備整片瓊脂糖凝膠基片，然后用絲網(wǎng)印刷方法制備多點(diǎn)陣瓊脂糖基片稱量0.01克瓊脂糖加入1000mL燒杯中，隨后加入500mL超純水，放入微波爐中用中火加熱溶解；用加樣槍取1000μL的瓊脂糖溶液滴加到用H2O2/H2SO4(3∶7)洗液清洗的普通載玻片表面，讓瓊脂糖溶液在玻片表面均勻分布；然后室溫下放置干燥成膜。
用光化學(xué)方法制備5行×2列的10點(diǎn)陣絲網(wǎng)板，絲網(wǎng)每點(diǎn)陣大小是10×10mm，兩點(diǎn)陣中心距離為12mm；用杜邦疏水性漿料L8026(杜邦公司)在上述整片滴加的瓊脂糖基片表面絲印5行×2列10點(diǎn)陣，絲網(wǎng)印刷后瓊脂糖凝膠基片放入烘箱中加熱固化，然后用超純水清洗，清洗后基片放入0.1M的高碘酸鈉(NaIO4)溶液中氧化反應(yīng)30min；氧化反應(yīng)后離心甩干，得到10點(diǎn)陣大小瓊脂糖凝膠基片。
按相同光化學(xué)方法制備1行×2列、2行×2列、2行×3列、3行×3列、4行×4列、5行×2列、6行×2列、8行×3列等不同大小和不同點(diǎn)陣絲印板，按上述相同方法進(jìn)行絲網(wǎng)印刷和高碘酸鈉進(jìn)行氧化，制備不同點(diǎn)陣形式的多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片。
按以上相同方法，稱量0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0克瓊脂糖溶解于500ml超純水中，制備不同濃度瓊脂糖溶液，按上述方法滴加于清潔玻片表面制備整片滴加瓊脂糖，然后按上述相同方法進(jìn)行絲印制備1行×2列、2行×2列、2行×3列、3行×3列、4行×4列、5行×2列、6行×2列、8行×3列不同點(diǎn)陣大小和不同點(diǎn)陣形式的瓊脂糖凝膠基片。
實(shí)施例2、浸潤法制備整片瓊脂糖凝膠基片，然后用絲網(wǎng)印刷方法制備多點(diǎn)陣瓊脂糖基片稱量0.01克瓊脂糖加入1000mL燒杯中，隨后加入500mL超純水，放入微波爐中用中火加熱溶解。用H2O2/H2SO4(3∶7)洗液清洗的普通載玻片30片插入30片裝玻片架，將玻片架浸入溶解好的瓊脂糖溶液中，玻片架迅速提出溶液，如此反復(fù)，讓瓊脂糖溶液均勻分布玻片表面；然后室溫下放置自然揮發(fā)干燥成膜。
按實(shí)施例1中相同方法溶解不同濃度的瓊脂糖溶液，進(jìn)行基片表面的絲網(wǎng)印刷和氧化，制備1行×2列、2行×2列、2行×3列、3行×3列、4行×4列、5行×2列、6行×2列、8行×3列不同點(diǎn)陣大小和不同點(diǎn)陣形式的瓊脂糖凝膠基片。
實(shí)施例3、甩膠法制備整片瓊脂糖凝膠基片，然后用絲網(wǎng)印刷方法制備多點(diǎn)陣瓊脂糖基片稱量0.01克瓊脂糖加入1000mL燒杯中，隨后加入500mL超純水，放入微波爐中用中火加熱溶解。將用H2O2/H2SO4(3∶7)洗液清洗的普通載玻片放入甩膠機(jī)中，800μL的瓊脂糖溶液滴加到玻片中央，以500轉(zhuǎn)/分鐘速度勻膠，以1000轉(zhuǎn)/分鐘甩膠，讓瓊脂糖溶液均勻分布在玻片表面；然后室溫下放置自然揮發(fā)干燥成膜。
按實(shí)施例1中相同方法溶解不同濃度的瓊脂糖溶液，進(jìn)行基片表面的絲網(wǎng)印刷和氧化，制備1行×2列、2行×2列、2行×3列、3行×3列、4行×4列、5行×2列、6行×2列、8行×3列不同點(diǎn)陣大小和不同點(diǎn)陣形式的瓊脂糖凝膠基片。
實(shí)施例4、先制備整片瓊脂糖凝膠基片，然后用貼圍欄方法制備多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片稱量0.01克瓊脂糖加入1000mL燒杯中，隨后加入500mL超純水，放入微波爐中用中火加熱溶解10min；保持瓊脂糖溶液溫度為40～80℃；按實(shí)施例1或?qū)嵤├?或?qū)嵤├?中相同方法制備整片滴加瓊脂糖基片，按實(shí)施例1中方法用0.1M的高碘酸鈉溶液氧化反應(yīng)30min。
在天然橡膠表面粘貼雙面膠，然后采用機(jī)械沖壓方法在橡膠表面沖壓出1行×2列、2行×2列、2行×3列、3行×3列、4行×4列、5行×2列、6行×2列、8行×3列不同點(diǎn)陣大小和不同點(diǎn)陣形式的橡膠圍欄，將圍欄粘貼于瓊脂糖基片表面，放入烘箱中烘烤；烘完后瓊脂糖基片室溫放置自然冷卻，得到多點(diǎn)陣圍欄分隔的瓊脂糖基片。
實(shí)施例5、先在玻片表面絲網(wǎng)印刷，然后用滴加法制備多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片用光化學(xué)方法制備5行×2列的10點(diǎn)陣絲網(wǎng)板，絲網(wǎng)每點(diǎn)陣大小是10×10mm，兩點(diǎn)陣中心距離為12mm；用杜邦疏水性漿料L8026在清潔載玻片表面絲印5行×2列的10點(diǎn)陣，放入烘箱中加熱固化，然后用超純水清洗，離心甩干得到分隔為10點(diǎn)陣的玻片。類似此方法，可以在玻片表面絲印有多點(diǎn)陣絲印圍欄。
稱量0.01克瓊脂糖加入1000mL燒杯中，隨后加入500mL超純水，放入微波爐中用中火加熱溶解。用加樣槍在玻片每個(gè)絲印小格中加入30μL瓊脂糖溶液，室溫放置干燥；干燥后基片放入0.1M高碘酸鈉(NaIO4)溶液中氧化反應(yīng)30min；氧化反應(yīng)后離心甩干，得到10點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片。
采用以上類似方法制備1行×2列、2行×2列、2行×3列、3行×3列、4行×4列、5行×2列、6行×2列和8行×3列不同點(diǎn)陣大小和不同點(diǎn)陣形式的瓊脂糖凝膠基片。
實(shí)施例6、先在玻片表面粘貼多點(diǎn)陣圍欄，然后用滴加法制備多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片將厚度為0.5mm的天然橡膠表面粘貼雙面膠，然后采用機(jī)械沖壓，沖壓出5行×2列的10點(diǎn)陣圍欄，圍欄每點(diǎn)陣大小是10×10mm，兩點(diǎn)陣中心距離為12mm；然后將10點(diǎn)陣圍欄粘貼于玻片表面。
稱量0.01克瓊脂糖加入1000mL燒杯中，隨后加入500mL超純水，放入微波爐中用中火加熱溶解。用加樣槍在玻片每個(gè)點(diǎn)陣中加入30μL瓊脂糖溶液，室溫放置干燥；干燥后基片放入0.1M高碘酸鈉(NaIO4)溶液中氧化反應(yīng)30min；氧化反應(yīng)后離心甩干，得到10點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片。
采用以上類似方法制備1行×2列、2行×2列、2行×3列、3行×3列、4行×4列、5行×2列、6行×2列、8行×3列不同點(diǎn)陣大小和不同點(diǎn)陣形式的瓊脂糖凝膠基片。
實(shí)施例7、多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片應(yīng)用于芯片制備生物芯片的制備過程如下1.將10mg/ml的人IgG樣品用60％的甘油點(diǎn)樣緩沖液(60％甘油/40％1×PBS)稀釋，配制出1.0mg/ml的人IgG樣品，取出10μL轉(zhuǎn)移加入384孔樣品板中；2.通過自動(dòng)點(diǎn)樣裝置將準(zhǔn)備好的點(diǎn)樣液按照一定點(diǎn)陣方式排分配到10點(diǎn)陣的瓊脂糖凝膠基片表面。每張芯片包含10(2行×5列)個(gè)陣列，每個(gè)陣列包含25個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)間距離是400μm。每個(gè)陣列形成獨(dú)立的反應(yīng)腔；3.將點(diǎn)樣后芯片室溫放置固定過夜；4.固定后芯片用0.1％BSA溶液搖動(dòng)封閉反應(yīng)30min；5.封閉后芯片用超純水清洗，然后離心甩干；6.在10點(diǎn)陣的瓊脂糖基片每個(gè)孔中加入30μL的熒光標(biāo)記的羊抗人抗體溶液，隨后室溫反應(yīng)30min；7.反應(yīng)后芯片用超純水清洗，離心甩干；8.芯片掃描和數(shù)據(jù)處理。檢測結(jié)果如圖7所示。
圖6所示的檢測結(jié)果，可采用與上相同的方法進(jìn)行，只需換用含2(1行×2列)個(gè)陣列的瓊脂糖凝膠膜基片制備芯片即可。
實(shí)施例8、多點(diǎn)陣瓊脂糖凝膠基片應(yīng)用于抗核抗體檢測芯片制備生物芯片的制備過程如下1.將各種抗核抗體樣品用60％的甘油點(diǎn)樣緩沖液(60％甘油/40％1×PBS)稀釋到一定濃度，每種樣品取出10μL轉(zhuǎn)移加入384孔樣品板中；2.通過自動(dòng)點(diǎn)樣裝置將準(zhǔn)備好的點(diǎn)樣液按照一定點(diǎn)陣方式排分配到12點(diǎn)陣的瓊脂糖凝膠基片表面。每張芯片包含12(6行×2列)個(gè)陣列，每個(gè)陣列包含63個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)陣間距離是400μm。每個(gè)陣列形成獨(dú)立的反應(yīng)腔；3.將點(diǎn)樣后芯片室溫放置固定過夜；4.固定后芯片用0.1％BSA溶液搖動(dòng)封閉反應(yīng)30min；5.封閉后芯片用超純水清洗，然后離心甩干；6.在12點(diǎn)陣的瓊脂糖基片每個(gè)孔中加入30μL的血清樣品，隨后室溫反應(yīng)30min；7.反應(yīng)后芯片用超純水清洗，離心甩干；8.加入熒光標(biāo)記的羊抗人抗體溶液，室溫下反應(yīng)30min；9.反應(yīng)后芯片用超純水清洗，離心甩干；10芯片掃描和數(shù)據(jù)處理。結(jié)果如圖8所示。
權(quán)利要求
1.一種瓊脂糖凝膠膜基片，是在基片表面具有瓊脂糖凝膠膜，其特征在于所述瓊脂糖凝膠膜被分隔成不少于兩個(gè)的獨(dú)立區(qū)域。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的瓊脂糖凝膠膜基片，其特征在于所述分隔采用不高于1mm的橡膠或絲印槳料。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的瓊脂糖凝膠膜基片，其特征在于所述基片為玻璃基片。
4.權(quán)利要求1所述瓊脂糖凝膠膜基片的制備方法，包括如下步驟1)在基片上制備瓊脂糖凝膠膜；2)將粘貼有雙面膠的帶有多個(gè)分隔區(qū)域的橡膠貼在瓊脂糖凝膠膜表面形成不少于兩個(gè)的獨(dú)立區(qū)域，然后，在40～90℃下烘烤5分鐘～2小時(shí)，得到所述瓊脂糖凝膠基片；或者，采用絲網(wǎng)印刷方法在瓊脂糖凝膠膜表面形成不少于兩個(gè)的獨(dú)立區(qū)域，然后，固化漿料，得到所述瓊脂糖凝膠基片。
5.權(quán)利要求1所述的瓊脂糖凝膠膜基片的制備方法，包括如下步驟1)將粘貼有雙面膠的具多個(gè)分隔區(qū)域的橡膠貼在基片上，將基片分隔為不少于兩個(gè)的獨(dú)立區(qū)域；或者，在基片上將漿料通過絲網(wǎng)印刷方法印刷于基片表面，固化漿料，將基片分隔為不少于兩個(gè)的獨(dú)立區(qū)域；2)在各個(gè)區(qū)域內(nèi)加入瓊脂糖溶液，干燥成膜，經(jīng)高碘酸鈉溶液氧化，洗滌干燥得到所述瓊脂糖凝膠基片。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于所述漿料選自聚丙烯油墨、白干金屬油墨、玻璃油墨。
7.權(quán)利要求1-3任一所述的瓊脂糖凝膠膜基片在制備生物芯片上的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種瓊脂糖凝膠膜基片及其制備方法與應(yīng)用。本發(fā)明所提供的瓊脂糖凝膠膜基片，是在基片表面形成瓊脂糖凝膠膜，其中，所述瓊脂糖凝膠膜被分隔成不少于兩個(gè)的獨(dú)立區(qū)域。本發(fā)明利用瓊脂糖凝膠的良好成膜性和生物相容性，并將基片采用隔斷方法將基片分隔為多個(gè)獨(dú)立區(qū)域，由于分隔物的存在，使不同區(qū)域內(nèi)的不同生物樣品之間不會(huì)產(chǎn)生交叉污染。用含有多個(gè)獨(dú)立分隔點(diǎn)樣區(qū)域的瓊脂糖凝膠片制備芯片時(shí)，可以實(shí)現(xiàn)多項(xiàng)指標(biāo)樣品和多份相同、不同生物樣品的同時(shí)檢測，大大提高了芯片檢測效率。
文檔編號(hào)G01N35/00GK1818649SQ20061006505
公開日2006年8月16日 申請日期2006年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月17日
發(fā)明者潘滿根, 楊文軍, 邢婉麗, 徐峰, 王佳, 張梁, 程京 申請人:北京博奧生物芯片有限責(zé)任公司, 清華大學(xué)