專利名稱：肌酸激酶活性測(cè)定用試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于測(cè)定試樣中的肌酸激酶(CK)活性的試劑以及穩(wěn)定含有SH基的化合物(以下稱SH化合物)的方法。
背景技術(shù)：
CK是由二個(gè)亞組構(gòu)成的二聚物的磷酸酶。CK的亞組中有B型(腦型)和M型(肌型)兩種。CK因兩種亞組組合，而存在三種不同的異酶(CK-MM、CK-MB和CK-BB)，CK-MM多含于筋骨，CK-MB多含于心肌，CK-BB多含于腦中。因心肌梗塞和肌肉營(yíng)養(yǎng)不良等疾病，本存在于發(fā)病部位的CK異酶會(huì)流失到血液中，因此，在臨床檢查中存在于血清和血漿等試樣中的CK的活性值就成為診斷上述疾病的重要指標(biāo)。
CK在血液中會(huì)迅速鈍化，故從生物抽取的試樣中要加入SH化合物活化CK后再進(jìn)行活性測(cè)定。因此，CK活性測(cè)定用試劑中含有N-乙酰-L-半胱氨酸(以下稱NAC)和硫代丙三醇等SH化合物。
SH化合物為不穩(wěn)定物質(zhì)，試劑保存過(guò)程中SH基漸漸被氧化，從而使SH化合物變質(zhì)。因此，試劑要有穩(wěn)定SH化合物的物質(zhì)。一般使用螯合劑來(lái)穩(wěn)定SH化合物。作為穩(wěn)定SH化合物的螯合劑已知有二亞乙基三胺五醋酸(DTPA)(Japanese Laid-open Patent11-032798)。然而，DTPA雖然可以使SH化合物穩(wěn)定，但試劑保存期間試劑本身的吸光度會(huì)提高。因此，試劑與試樣剛混合后的吸光度(初期吸光度)也會(huì)升高，測(cè)定的精確度有時(shí)會(huì)因此而下降。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供含有可以防止試劑溶液中的SH化合物變質(zhì)及抑制試劑自身吸光度提高的螯合劑的CK活性測(cè)定用試劑，提供使用這種螯合劑穩(wěn)定SH化合物的方法。
本發(fā)明提供含有環(huán)己二胺四醋酸(以下稱CyDTA)和SH化合物的CK活性測(cè)定用試劑。
同時(shí)，本發(fā)明還提供SH化合物的穩(wěn)定方法，其特征是讓CyDTA與SH化合物共存于試劑中。
本發(fā)明可以提供保存穩(wěn)定性優(yōu)越的CK活性測(cè)定用試劑，該試劑中含有的螯合劑可以使SH化合物穩(wěn)定，還能抑制試劑本身的吸光度提高。


圖1顯示CK活性測(cè)定的反應(yīng)歷程的模式圖。
具體實(shí)施例方式
本實(shí)施方式的CK活性測(cè)定用試劑含有CyDTA和SH化合物。CyDTA為白色粉末狀，化學(xué)名稱為環(huán)己二胺四醋酸(trans-1，2-Diaminocyclohexane-N，N，N’，N’-tetraacetic acid)，有螯合作用。試劑中的CyDTA濃度以能穩(wěn)定SH化合物為準(zhǔn)，并無(wú)特別要求。本明細(xì)書(shū)中的“CyDTA”含有CyDTA的鹽。所謂CyDTA的鹽，有CyDTA的鉀鹽、鈉鹽、鎂鹽等。
作為SH化合物沒(méi)有特定，只要可以活化試樣中的CK即可，比如可以使用N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)、N-鳥(niǎo)苷-L-半胱氨酸、半胱胺、二硫蘇糖醇(DTT)、半胱氨酸、谷胱甘肽、巰基琥珀酸、硫葡萄糖、二硫赤蘚糖醇、巰基醋酸、2-巰基乙醇、溴2-氨乙基異硫糖醛(aminoethyl isothiouronium)2-巰基乙烷磺酸及硫代丙三醇。這些SH化合物也可以組合兩種以上使用，但最好單獨(dú)使用?；旌显嚇雍驮噭┑姆磻?yīng)液中的SH化合物的濃度(最終濃度)為0.1～200mM，優(yōu)選10～100mM。
關(guān)于CK活性測(cè)定用試劑的溶液狀態(tài)下的pH值并無(wú)特定，但最好是5.0～10.0。要維持pH值，最好讓試劑中含有緩沖劑。作為緩沖劑可以使用樹(shù)枝狀鹽酸緩沖劑、咪唑醋酸緩沖劑、磷酸緩沖劑、檸檬酸緩沖劑、蘋果酸緩沖劑、草酸緩沖劑、酞酸緩沖劑、甘氨酸緩沖劑、醋酸緩沖劑、琥珀酸緩沖劑、硼酸緩沖劑、碳酸緩沖劑等良好緩沖劑等。
CK活性測(cè)定用試劑中最好含有葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)、二磷酸吡啶核苷酸(NAD)或磷酸煙酰胺腺苷二核苷酸(NADP)、乙糖激酶(HK)或葡萄糖激酶(GK)、葡萄糖、腺苷二磷酸(ADP)和磷酸肌酸。
CK活性測(cè)定用試劑既可以將各種成份凍結(jié)干燥為固態(tài)也可以將其溶解在溶液里形成液態(tài)。
含有G6PDH的試劑可由第一試劑和第二試劑兩個(gè)試劑組成，這時(shí)第一試劑和/或第二試劑可以是凍結(jié)干燥狀態(tài)，兩個(gè)試劑也可以是液態(tài)。CyDTA和SH化合物可以在第一試劑和第二試劑的任何一個(gè)當(dāng)中，也可含在兩個(gè)試劑當(dāng)中，但最好是在第一試劑當(dāng)中。
當(dāng)CK活性測(cè)定用試劑是由第一試劑和第二試劑組成的套裝試劑時(shí)，最好第一試劑中含有葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)、環(huán)己二胺四醋酸(CyDTA)、二磷酸吡啶核苷酸(NAD)或磷酸煙酰胺腺苷二核苷酸(NADP)、乙糖激酶(HK)或葡萄糖激酶(GK)、葡萄糖、腺苷二磷酸(ADP)、鎂離子及SH化合物，第二試劑含有磷酸肌酸。第一試劑可以將上述物質(zhì)溶解在蒸餾水等適當(dāng)?shù)娜軇┲衼?lái)配制，第二試劑可以將磷酸肌酸溶解在蒸餾水等適當(dāng)?shù)娜軇┲信渲啤?br> 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)、乙糖激酶(HK)和葡萄糖激酶(GK)其來(lái)源無(wú)特定，可以來(lái)自細(xì)菌、酵母、動(dòng)植物等，也可來(lái)源于用基因重組技術(shù)生成的物質(zhì)。G6PDH的最終濃度為0.5～40U/ml之間，最好是1～10U/ml。HK或GK的最終濃度為0.5～20U/ml之間，最好為1～6U/ml。
本實(shí)施方式的CK活性測(cè)定用試劑的測(cè)定對(duì)象是試劑中含有的全部CK的活性、CK-MM的活性、CK-MB的活性和CK-BB的活性之中的任意一個(gè)。在臨床檢查中一般是測(cè)定試劑中的全部CK的活性或CK-MB的活性。通過(guò)在CK活性測(cè)定用試劑中加入與CK的M型亞組特異締合的抗體(以下稱抗CK-M抗體)，即可測(cè)定試劑中的CK-MB的活性(Wurzburg et al.，1977，J.Clin.Chem.Clin.Biochem.，15131-135)。作為抗CK-M抗體，只要是能特別識(shí)別M型亞組的抗體，它既可以是多克隆抗體也可以是單克隆抗體，還可以將二者混合起來(lái)使用。另外，還可以使用抗體的碎片及其衍生物?？贵w的碎片及其衍生物具體來(lái)說(shuō)有Fab，F(xiàn)ab’，F(xiàn)(ab)2以及sFv碎片等(Blazar et al.，1997，J.Immunol.，1595821-5833及Bird et al.，1988，Science，242423-426)?？贵w的次類并不限定于IgG，也可以是IgM等。
用于測(cè)定的試樣，可以是血清，血漿、血液、髓液、尿液和精液等，以血漿或血清為好。
下面就CK活性測(cè)定的反應(yīng)過(guò)程進(jìn)行說(shuō)明。
在含有CK的試樣中加入含有上述成份的CK活性測(cè)定用試劑，將出現(xiàn)如圖1所示的反應(yīng)。在圖1中，被SH化合物活化的CK催化了由磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP的反應(yīng)(反應(yīng)1)。含在試劑中的HK或GK又會(huì)從含在試劑中的葡萄糖和反應(yīng)1生成的ATP生成葡萄糖-6-磷酸(G6P)和ADP(反應(yīng)2)。含在試劑中的G6PDH又從反應(yīng)2中生成的G6P和NAD或NADP生成6-磷酸葡萄糖酸δ-內(nèi)酯和NADH或NADPH(反應(yīng)3)。NADH或NADPH生成后試樣和試劑的混合液中波長(zhǎng)340nm附近的吸光度就會(huì)升高。監(jiān)視此吸光度升高過(guò)程，就可以測(cè)定試樣中的CK的活性。
如上所述，試劑中的SH化合物在試劑的保存過(guò)程中會(huì)逐漸變質(zhì)，因此必須使其穩(wěn)定。通常，螯合劑都是以穩(wěn)定SH化合物為目的添加到試劑中的。作為這種螯合劑的一種，二亞乙基三胺五醋酸(DTPA)可以防止長(zhǎng)期保存試劑時(shí)SH化合物變質(zhì)，但是，試劑在保存過(guò)程中自身的吸光度會(huì)升高。而乙二胺四醋酸(EDTA)可以做到試劑即使長(zhǎng)期保存，其自身的吸光度也不會(huì)升高，但是不能有效地控制SH化合物的變質(zhì)。當(dāng)用經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期保存的含有EDTA的試劑測(cè)定CK活性很高的試樣的CK活性時(shí)，由于保存過(guò)程中試劑中的SH化合物已經(jīng)變質(zhì)，無(wú)法充分地活化含在試樣中的CK，從而導(dǎo)致有時(shí)無(wú)法準(zhǔn)確地測(cè)定。
通過(guò)讓CyDTA和SH化合物在CK活性測(cè)定用試劑中共存，可以控制試劑在長(zhǎng)期保存過(guò)程中SH基變質(zhì)。CyDTA還可以控制試劑本身吸光度的升高。而且，含有CyDTA的CK活性測(cè)定用試劑即使測(cè)定CK活性很高的試樣，也可以控制SH化合物的變質(zhì)，故能準(zhǔn)確地測(cè)定CK活性。
最好在CK活性測(cè)定用試劑中加入鎂離子。在試劑中添加鎂鹽，即可使試劑含有鎂離子。作為鎂鹽可以使用醋酸鎂、硫酸鎂、氯化鎂等。
也可以在試劑中添加有防腐劑和表面活性作用的化合物。作為防腐劑，比如可以使用疊氮化鈉等。有表面活性作用的化合物可使用非離子型表面活性劑、陽(yáng)離子型表面活性劑、兩性離子表面活性劑和白朊等，具體地說(shuō)，可以使用三通類(Union Carbide Chemicals andPlastics Co.的注冊(cè)商標(biāo))、乳液類(花王(株)的注冊(cè)商標(biāo))、牛血清白蛋白(BSA)等等。
試樣中有時(shí)會(huì)含有腺嘌呤脫氨酶。腺嘌呤脫氨酶特別是多含在溶血試樣中，給CK的活性測(cè)定帶來(lái)負(fù)面影響。為了避免這種負(fù)面影響，最好在試劑中添加阻止腺嘌呤脫氨酶作用的抑制劑。對(duì)抑制劑種類并無(wú)特定，只要是抑制腺嘌呤脫氨酶作用的東西即可，比如可以用腺苷一磷酸(AMP)和P1 P5二腺苷-5’-五氯乙烷酸(AP5A)等。
用雙動(dòng)法測(cè)定活性也可以避免腺嘌呤脫氨酶的負(fù)面影響。所謂雙動(dòng)法就是先測(cè)定腺嘌呤脫氨酶的活性，然后添加磷酸肌酸，讓CK進(jìn)行酶反應(yīng)，再測(cè)定試樣中的激酶的活性(CK活性和腺嘌呤脫氨酶活性之和)。這些測(cè)定結(jié)果的差即為CK的活性值。
(實(shí)施例1)將下列物質(zhì)溶解到蒸餾水中，使之達(dá)到如下濃度。
咪唑 125mM醋酸鎂12.5mMADP 2.5mMAMP 6.25mMAP5A 12.5μM葡萄糖25mMNADP 2.5mM硫代丙三醇44mMG6PDH 1875U/L乙糖激酶 3750U/L另，溶液的pH調(diào)整為6.6。
在上述溶液中添加CyDTA，配制出CyDTA濃度不同的三種CK活性測(cè)定用試劑。這些試劑的CyDTA濃度分別為1mM、2mM及4mM。對(duì)這些試劑以37℃施加5天的溫度負(fù)荷，試劑中的SH基的殘留量即定量完畢。
CK活性測(cè)定用試劑由上述試劑(第一試劑)和含有磷酸肌酸的試劑(第二試劑)組成，但本實(shí)施例中因?qū)ι鲜鲈噭┦┘訙囟蓉?fù)荷，以評(píng)價(jià)硫代丙三醇的穩(wěn)定性，故不使用第二試劑。
SH基的定量是用DTNB5，5′-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(5，5’-dithiobis(2-nitrobenzoic acid))做的。在試劑中添加DTNB，如果有SH化合物，則相當(dāng)于SH化合物所含SH基的量的二硫化物鍵斷裂，產(chǎn)生5-巰基-2-硝基苯(甲)酸。5-巰基-2-硝基苯(甲)酸一產(chǎn)生，則波長(zhǎng)412nm處的吸光度升高，測(cè)定之以定量試劑中的SH基。
(比較例1～6)比較例1中，給在-80℃保存過(guò)的上述試劑的SH基做了定量。在此，沒(méi)有添加螯合劑，也沒(méi)有施加溫度負(fù)荷。
比較例2中，除不添加螯合劑外，其他與實(shí)施例1一樣對(duì)殘留硫代丙三醇的SH基進(jìn)行了定量。
比較例3中，除在上述成份添加了二亞乙基三胺五醋酸(DTPA)而非環(huán)己二胺四醋酸(CyDTA)，以配制DTPA濃度不同的三種試劑以外，其他與實(shí)施例1相同，對(duì)殘留硫代丙三醇的SH基進(jìn)行了定量。試劑的DTPA濃度分別為1mM、2mM和4mM。
比較例4中，除添加乙二醇乙二胺四醋酸(GEDTA)而非CyDTA，以配制GEDTA濃度不同的三種試劑外，其他與實(shí)施例1相同，對(duì)殘留硫代丙三醇的SH基進(jìn)行了定量。試劑的GEDTA濃度分別為1mM、2mM和4mM。
比較例5中，除添加乙二胺四醋酸(EDTA)而非CyDTA，以配制EDTA濃度不同的三種試劑外，其他與實(shí)施例1相同，對(duì)殘留硫代丙三醇的SH基進(jìn)行了定量。試劑的EDTA濃度分別為1mM、2mM和4mM。
比較例6中，除添加乙二胺四乙酸醇(EDTA-OH)而非CyDTA，以配制EDTA-OH濃度不同的三種試劑外，其他與實(shí)施例1相同，對(duì)殘留硫代丙三醇的SH基進(jìn)行了定量。試劑的EDTA-OH濃度分別為1mM、2mM和4mM。
比較例7中，除添加乙二胺雙乙酸(EDDA)而非CyDTA，以配制EDDA濃度不同的三種試劑外，其他與實(shí)施例1相同，對(duì)殘留硫代丙三醇的SH基進(jìn)行了定量。試劑的EDDA濃度分別為1mM、2mM和4mM。
實(shí)施例1和比較例1～7的測(cè)定結(jié)果如下表1所示。在表1中，硫代丙三醇的殘余量用百分率表示。這些值是相對(duì)于比較例1的測(cè)定結(jié)果的數(shù)值。
表1

從實(shí)施例1和比較例2～7的測(cè)定結(jié)果可以看出，含有CyDTA的試劑(實(shí)施例1)和含有DTPA的試劑(比較例3)比不含螯合劑的試劑和含有其他螯合劑的試劑其施加溫度負(fù)荷后的SH基的殘留量多，即在上述試劑中添加DTPA或CyDTA可以提高硫代丙三醇的保存穩(wěn)定性。
(實(shí)施例2)將下列物質(zhì)溶解在蒸餾水中，使其濃度如下，配制CK活性測(cè)定用試劑的第一試劑和第二試劑，用這些試劑測(cè)定初期吸光度。
<第一試劑>pH 6.6咪唑 125mM醋酸鎂 12.5mMADP 2.5mMAMP 6.25mMAP5A 12.5μM葡萄糖 30mMNADP 2.5mM
NAC 44mMG6PDH1875U/L乙糖激酶 3750U/LCyDTA2mM<第二試劑>pH 9.0磷酸肌酸 150mM用日立7170S型自動(dòng)分析儀將180μl第一試劑、45μl第二試劑和不含CK的生理鹽水試樣5.6μl混合，測(cè)定在波長(zhǎng)340nm處的吸光度。
分別用在4℃下保存1周的第一試劑、在4℃下保存2周的第一試劑、在4℃下保存3周的第一試劑和在4℃下保存4周的第一試劑用上述同樣方法測(cè)定初期吸光度。
(比較例8～13)在上述第一試劑的成份中不是添加了CyDTA，而是添加其他種類的螯合劑，測(cè)定初期吸光度。
比較例8除添加2mM二亞乙基三胺五醋酸(DTPA)取代CyDTA外，其他與實(shí)施例2相同，測(cè)定初期吸光度。
比較例9除添加2mM乙二醇乙二胺四醋酸(GEDTA)取代CyDTA外，其他與實(shí)施例2相同，測(cè)定初期吸光度。
比較例10除添加2mM EDTA取代CyDTA外，其他與實(shí)施例1相同，測(cè)定初期吸光度。
比較例11除添加2mM乙二胺四乙酸醇(EDTA-OH)取代CyDTA外，其他與實(shí)施例1相同，測(cè)定初期吸光度。
比較例12除添加2mM乙二胺雙乙酸(EDDA)取代CyDTA外，其他與實(shí)施例1相同，測(cè)定初期吸光度。
比較例13除添加2mM腈三醋酸(NTA)取代CyDTA外，其他與實(shí)施例1相同，測(cè)定初期吸光度。
實(shí)施例2和比較例8～13的測(cè)定結(jié)果如下表2所示。表2中的值是將測(cè)定的吸光度增大10000倍后的值，而且，上升率一欄中用百分率表示保存4周后的初期吸光度比剛配制完的試劑的初期吸光度升高了多少。表2

從實(shí)施例2和比較例8～13的測(cè)定結(jié)果可以看出，添加了CyDTA的試劑(實(shí)施例2)、添加EDTA的試劑(比較例10)和添加EDTA-OH的試劑(比較例11)比含有其他螯合劑的試劑經(jīng)長(zhǎng)期保存后的初期吸光度的上升率低，即CyDTA、EDTA和EDTA-OH可以控制試劑本身吸光度的升高。
(實(shí)施例3)用在實(shí)施例2中配制的第一試劑和第二試劑測(cè)定含約2000U/l CK的試樣的CK活性。
用日立7170S型自動(dòng)分析儀將180μl第一試劑、45μl第二試劑和5.6μl試樣混合，測(cè)定340nm處的吸光度，計(jì)算出試樣中所含CK的活性值。
分別用在4℃下保存了2周的第一試劑和在4℃下保存了4周的第一試劑象上述一樣，計(jì)算出CK的活性值。
(比較例14～19)比較例14，除使用比較例8中配制的第一試劑外，其他與實(shí)施例3一樣，計(jì)算出CK的活性值。
比較例15，除使用比較例9中配制的第一試劑外，其他與實(shí)施例3相同，計(jì)算出CK的活性值。
比較例16，除使用比較例10中配制的第一試劑外，其他與實(shí)施例3相同，計(jì)算出CK的活性值。
比較例17，除使用比較例11中配制的第一試劑外，其他與實(shí)施例3相同，計(jì)算出CK的活性值。
比較例18，除使用比較例12中配制的第一試劑外，其他與實(shí)施例3相同，計(jì)算出CK的活性值。
比較例19，除使用比較例13中配制的第一試劑外，其他與實(shí)施例3相同，計(jì)算出CK的活性值。
實(shí)施例3和比較例14～19的測(cè)定結(jié)果如表3所示。下降率一欄中用百分率顯示了保存4周后的試劑的CK活性值比剛配制完的值下降多少。
表3

從實(shí)施例3和比較例14～19的測(cè)定結(jié)果可以看出，添加CyDTA的試劑(實(shí)施例3)和添加DTPA的試劑(比較例14)比含有其他螯合劑的試劑保存4周后的測(cè)定值的下降率很小，即使用添加了CyDTA或DTPA的試劑，即使長(zhǎng)期保存也可以準(zhǔn)確測(cè)定CK活性。
從實(shí)施例1、2、3和比較例1～18可以知道，含有CyDTA的試劑在SH化合物保存穩(wěn)定性方面具有優(yōu)越性；即使長(zhǎng)期保存，試劑自身的吸光度也不會(huì)大幅度升高；而且用這種試劑，即使是CK活性值很高的試樣也能準(zhǔn)確測(cè)定其活性。
權(quán)利要求
1.一種肌酸激酶(creatine kinase)活性測(cè)定用試劑，其特征在于含有環(huán)己二胺四醋酸和含SH基的化合物。
2.權(quán)利要求1描述的試劑，其特征是所述含SH基的化合物是選自N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)、N-鳥(niǎo)苷-L-半胱氨酸、半胱胺、二硫蘇糖醇(DTT)、半胱氨酸、谷胱甘肽、巰基琥珀酸、硫葡萄糖、二硫赤蘚糖醇、巰基醋酸、2-巰基乙醇、溴2-氨乙基異硫糖醛(aminoethyl isothiouronium)、2-巰基乙烷磺酸及硫代丙三醇中的至少一種。
3.權(quán)利要求1描述的試劑，其特征是還含有葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)、二磷酸吡啶核苷酸(NAD)或磷酸煙酰胺腺苷二核苷酸(NADP)、乙糖激酶或葡萄糖激酶、葡萄糖、腺苷二磷酸(ADP)及磷酸肌酸中的至少一種化合物。
4.權(quán)利要求2描述的試劑，其特征是還含有葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)、二磷酸吡啶核苷酸(NAD)或磷酸煙酰胺腺苷二核苷酸(NADP)、乙糖激酶或葡萄糖激酶、葡萄糖、腺苷二磷酸(ADP)及磷酸肌酸中的至少一種化合物。
5.權(quán)利要求1描述的試劑，其特征是還含有葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)、二磷酸吡啶核苷酸(NAD)或磷酸煙酰胺腺苷二核苷酸(NADP)、乙糖激酶或葡萄糖激酶、葡萄糖、腺苷二磷酸(ADP)及磷酸肌酸。
6.權(quán)利要求2描述的試劑，其特征是還含有葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)、二磷酸吡啶核苷酸(NAD)或磷酸煙酰胺腺苷二核苷酸(NADP)、乙糖激酶或葡萄糖激酶、葡萄糖、腺苷二磷酸(ADP)及磷酸肌酸。
7.權(quán)利要求1至6中描述的試劑，其特征在于含有與肌酸激酶M型亞組特異締合的抗體。
8.一種套裝肌酸激酶活性測(cè)定用試劑，其特征在于包括二種試劑，其分別是含有環(huán)己二胺四醋酸(CyDTA)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)、二磷酸吡啶核苷酸(NAD)或磷酸煙酰胺腺苷二核苷酸(NADP)、乙糖激酶或葡萄糖激酶、葡萄糖及腺苷二磷酸(ADP)的第一試劑和含有磷酸肌酸的第二試劑。
9.一種穩(wěn)定含SH基化合物的方法，即一種含SH基化合物的穩(wěn)定法，其特征在于使環(huán)己二胺四醋酸與含SH基化合物共存于同一試劑中。
10.一種配制含第一試劑和第二試劑的套裝肌酸激酶活性測(cè)定用試劑的方法，即套裝肌酸激酶活性測(cè)定用試劑的配制法，其特征在于該試劑的配制步驟如下，a)將環(huán)己二胺四醋酸、含SH基的化合物以及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PDH)、二磷酸吡啶核苷酸(NAD)或磷酸煙酰胺腺苷二核苷酸(NADP)、乙糖激酶或葡萄糖激酶、葡萄糖及腺苷二磷酸(ADP)溶解在溶液中配制第一試劑；b)將磷酸肌酸溶解在溶液中配制第二試劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了含有環(huán)己二胺四醋酸(以下稱CyDTA)和SH化合物的CK活性測(cè)定用試劑以及SH化合物的穩(wěn)定方法。其特征是讓CyDTA與SH化合物共存于試劑中。
文檔編號(hào)G01N33/50GK1904062SQ20061009927
公開(kāi)日2007年1月31日 申請(qǐng)日期2006年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月25日
發(fā)明者酒井康裕 申請(qǐng)人:希森美康株式會(huì)社