專利名稱：：藥品中殘留溶劑的檢測(cè)方法藥品中殘留溶劑的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥物檢測(cè)領(lǐng)域，具體來說，涉及一種藥物中殘留溶劑的5檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：藥物中的殘留溶劑是指在原料藥、輔料以及制劑生產(chǎn)中使用的，但在工藝過程中未能完全去除的有機(jī)溶劑，如苯、四氯化碳、乙腈等。當(dāng)藥品中所含的殘留溶劑水平高于安全值時(shí)，會(huì)對(duì)人體和環(huán)境產(chǎn)生危害。10人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)(ICH)在1997年7月17日通過了控制藥品中殘留溶劑的指導(dǎo)原則，將藥品生產(chǎn)中常用的69種有機(jī)溶劑按照對(duì)人體和環(huán)境的危害程度分為四類，并規(guī)定了每種溶劑的限值。目前各國(guó)藥典如《歐洲藥典》第5版、《曰本藥局方》第14版、《美國(guó)藥典》第29版和《中國(guó)藥典》2005版均已接受了ICH關(guān)于殘留溶劑的指導(dǎo)原殘留溶劑檢測(cè)的難點(diǎn)在于其在具體的藥物中具有不確定性由于不同的生產(chǎn)企業(yè)可以釆用不同的生產(chǎn)工藝生產(chǎn)相同藥品，而且藥品生產(chǎn)的工藝也在不斷的改進(jìn)，使得藥品中殘留溶劑的種類不斷變化，因此如果僅僅依賴藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定檢測(cè)藥品中的殘留溶劑，容易造成漏檢或20誤檢，如《中國(guó)藥典》2005版中對(duì)藥物鹽酸噻氯匹定僅規(guī)定對(duì)其中的殘留溶劑甲苯進(jìn)行檢測(cè)，而對(duì)該藥物生產(chǎn)工藝中可能混入的其他殘留溶劑無法快速檢測(cè)。所以建立全面快速的篩查系統(tǒng)是殘留溶劑測(cè)定的趨勢(shì)。藥物中殘留溶劑的檢測(cè)常用氣相色譜法(GC)，如《中國(guó)藥典》2005版推薦的檢測(cè)方法為頂空毛細(xì)管氣相色譜法。氣相色譜分析中的定性主25要是依據(jù)保留時(shí)間，這需要和已知的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間進(jìn)行比對(duì)。但是對(duì)于未知峰，很難進(jìn)行定性分析。RebeccaE.Wi加ig等(High-speedanalysisofresidualsolventsbyflow-modulationgaschromatography.Joz簡(jiǎn)"/o/'(7"ww"tograp/)'A1027(2004)75-82)介紹了一種在氣相色譜法中使用串聯(lián)的兩根色譜柱，通過流量控制對(duì)36種殘留溶劑進(jìn)行檢測(cè)的方法，與常用的單色譜柱檢測(cè)5比較，該方法改善了色譜峰的分離度。但是，對(duì)于檢測(cè)樣品中各組分的定性以及對(duì)未知雜質(zhì)峰、共出峰的確定還存在缺陷。
發(fā)明內(nèi)容〖要解決的技術(shù)問題]本發(fā)明的目的是提供一種更加高效、準(zhǔn)確的藥物中殘留溶劑的檢測(cè)10方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是在氣相色譜法中使用多通道并聯(lián)色譜柱系統(tǒng)，對(duì)同一樣品中的殘留溶劑一次性完成定性和定量分析。15具體地說，是在氣相色譜的進(jìn)樣系統(tǒng)后增加一個(gè)雙通道或三通道分流管，每個(gè)通道有獨(dú)立的開關(guān)控制其流通量，分流管后至少并列連接極性相反的兩個(gè)色譜柱。當(dāng)使用雙通道的分流管時(shí)，與之并列連接的是兩根極性相反的色譜柱，優(yōu)選非極性和極性色譜柱。20所述的非極性色譜柱可以選擇但不限于固定相為聚氧硅烷或聚二甲基硅烷的色譜柱，如美國(guó)Supelco公司生產(chǎn)的SPB-1型非極性色譜柱。所述的極性色譜柱可以選擇但不限于固定相為聚乙二醇的色譜柱，如美國(guó)安捷倫科技有限公司生產(chǎn)的HP-innowax型極性氣相色譜柱；對(duì)本發(fā)明而言，當(dāng)并列的色譜柱極性相差較大時(shí)，色譜系統(tǒng)對(duì)混合殘留溶劑的分25離效果越好。當(dāng)使用三通道的分流管時(shí)，與之并列連接的除了上述極性相反的色譜柱外，還有質(zhì)譜分析系統(tǒng)，質(zhì)譜分析系統(tǒng)與氣相色譜構(gòu)成了并列運(yùn)作的分析系統(tǒng)，這對(duì)藥物分析領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言是常規(guī)的技術(shù)，對(duì)本發(fā)明而言是為了通過測(cè)定化合物的分子量以進(jìn)一步保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。本發(fā)明對(duì)具體的色譜分析系統(tǒng)沒有特殊要求，如安捷倫科技公司生產(chǎn)的6100系列四級(jí)桿質(zhì)譜儀，熱電公司生產(chǎn)的TSQQuantumAccess四5極桿質(zhì)譜儀等。本發(fā)明中所述的分流管可以是玻璃管、不銹鋼管等現(xiàn)有色譜儀器中可以使用的材質(zhì)的制備的分流管，對(duì)其形狀、大小等沒有特別限制，可以根據(jù)不同型號(hào)的儀器進(jìn)行選擇。本發(fā)明中所述的多通道分流管可以可拆卸的方式在氣相色譜中應(yīng)io用。也可以將其固定在氣相色譜儀或氣質(zhì)聯(lián)用儀器中，此時(shí)通過控制每個(gè)通道的開關(guān)來選擇不同的檢測(cè)系統(tǒng)，可以是單色譜柱、雙色譜柱或氣相和質(zhì)譜并用的方式。當(dāng)藥物中含有的殘留溶劑種類較多時(shí)，在常規(guī)的氣相色譜檢測(cè)中，不同的有機(jī)溶劑在一根色譜柱上的保留時(shí)間可能會(huì)相同或相近，這給殘15留溶劑的定性及定量分析都帶來了困難。在本發(fā)明的檢測(cè)方法中，將極性色譜柱與非極性色譜柱的并聯(lián)使用，首先保證了進(jìn)樣樣品和進(jìn)樣條件的一致性，并使得在一根色譜柱上保留時(shí)間相同或是相近的有機(jī)溶劑在極性相反的色譜柱上的保留時(shí)間相差較大。這樣通過兩根色譜柱的檢查，結(jié)合相關(guān)物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)，結(jié)果可以20在沒有標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照的情況下進(jìn)行定性分析即初步確定殘留溶劑的種類，從而避免了對(duì)未知峰進(jìn)行盲目篩選，同時(shí)能夠排除在頂空進(jìn)樣過程中藥品本身降解產(chǎn)物的干擾。當(dāng)測(cè)量過程中出現(xiàn)ICH規(guī)定的一類溶劑和未知色譜峰需要進(jìn)一步確定時(shí)，可以使用與色譜柱系統(tǒng)并聯(lián)的質(zhì)譜分析系統(tǒng)同時(shí)檢測(cè)，綜合所得25結(jié)果進(jìn)行確定。在本發(fā)明中，將極性相反的色譜系統(tǒng)得到的相對(duì)保留時(shí)間分別作為橫縱坐標(biāo)，繪制各種溶劑保留時(shí)間的平面點(diǎn)圖，結(jié)果發(fā)現(xiàn)沒有完全重合的兩個(gè)點(diǎn)，說明本發(fā)明提供的藥物中殘留溶劑的檢測(cè)方法中并聯(lián)多通道色譜柱系統(tǒng)對(duì)混合溶劑的分離效果很好。在本發(fā)明中，為了進(jìn)一步提高檢測(cè)的效率，優(yōu)選在測(cè)量藥物中殘留溶劑前建立所有殘留溶劑的數(shù)據(jù)庫，該數(shù)據(jù)庫包含ICH所指定的殘留溶劑定性和定量方面的參數(shù)，即氣相色譜中常用的相對(duì)保留時(shí)間和定量線5性方程，再將樣品測(cè)定的結(jié)果與數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù)比較，對(duì)藥物中多種殘留可以快速地進(jìn)行定性和定量分析。所述數(shù)據(jù)庫的建立包括以下步驟(1)、將ICH規(guī)定的69種殘留溶劑的標(biāo)準(zhǔn)品按照規(guī)定的限度，分別配制成對(duì)照品溶液；io(2)使用并聯(lián)的極性和非極性色譜柱系統(tǒng)對(duì)殘留溶劑進(jìn)行檢測(cè)，記錄每根色譜柱上各組分的相對(duì)保留時(shí)間；(3)將步驟(1)所述的各殘留溶劑的對(duì)照品溶液以儀器檢出限為底限濃度，用水逐倍稀釋成5-6個(gè)不同的濃度，測(cè)量不同濃度的同一溶劑的色譜峰面積，建立各種溶劑的定量線性方程；15(4)將步驟(2)和(3)中的相對(duì)保留時(shí)間及定量線性方程與每種溶劑建立關(guān)聯(lián)，建立數(shù)據(jù)庫。在上述數(shù)據(jù)庫的基礎(chǔ)上，在與建立數(shù)據(jù)庫所用相同的色譜條件下對(duì)待測(cè)藥物中的殘留溶劑進(jìn)行檢測(cè)，參考數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù)對(duì)其進(jìn)行定性和定量分析。20使用本發(fā)明的方法對(duì)藥物中殘留溶劑進(jìn)行定量分析時(shí)，可以同時(shí)得到殘留溶劑在兩根色譜柱上的線性方程，同時(shí)計(jì)算出殘留溶劑的含量，二者應(yīng)該基本一致。如果結(jié)果相差較大，說明在含量較大的色譜柱上有共出峰干擾，應(yīng)該以含量較小者為準(zhǔn)，這樣可以有效的排除共出峰的干擾。又因?yàn)闅埩羧軇z測(cè)本身為限度試驗(yàn)，只要?dú)埩袅啃∮谙薅染头?5規(guī)定的，當(dāng)殘留溶劑的含量在限度附近時(shí)，需要通過標(biāo)準(zhǔn)加入法準(zhǔn)確定量，通過線性方程計(jì)算出來的含量值可以為標(biāo)準(zhǔn)加入法配制的對(duì)照溶液濃度提供參考，而避免大量試驗(yàn)摸索濃度。[有益效果〗本發(fā)明提供的藥物中殘留溶劑檢測(cè)方法中，同一樣品在一次實(shí)驗(yàn)中可以同時(shí)得到兩組數(shù)據(jù)，大大節(jié)省了定性篩選的試驗(yàn)時(shí)間，并可以在定量分析中有效的排除共出峰的干擾，避免大量試驗(yàn)摸索濃度。5針對(duì)殘留溶劑檢測(cè)的不確定性建立的殘留溶劑數(shù)據(jù)庫可以快速全面地對(duì)藥品中的殘留溶劑進(jìn)行篩選，不局限于具體品種，是通用型數(shù)據(jù)庫。另外，本發(fā)明的檢測(cè)方法易于推廣，可以在實(shí)驗(yàn)室中對(duì)儀器進(jìn)行簡(jiǎn)單的組裝，也可以在儀器生產(chǎn)時(shí)進(jìn)行一體化的配置。io圖1為雙通道并聯(lián)色譜柱系統(tǒng)模式圖2為不同殘留溶劑在兩個(gè)色譜系統(tǒng)上的相對(duì)保留時(shí)間在平面中形成的點(diǎn)圖，其中橫坐標(biāo)為溶劑在非極性色譜柱上的相對(duì)保留時(shí)間，縱坐標(biāo)為溶劑在極性色譜柱上的相對(duì)保留時(shí)間。具體實(shí)施方式15通過下面給出的本發(fā)明具體實(shí)施例可以進(jìn)一步清楚地理解本發(fā)明，但這些實(shí)施例不是對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。實(shí)施例1殘留溶劑數(shù)據(jù)庫的建立儀器和軟件TraceGCUltra(熱電公司)；頂空系統(tǒng)(熱電公司)；各部件連接20示意圖見圖1。數(shù)據(jù)分析軟件為Xcalibur數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(熱電公司)；色譜柱SPB-1型非極性色譜柱(30mx0.32mmxlum,Supelco公司)，HP-innowax型極性色譜柱(30mx0.32mmx0.5um，安捷倫公司)色譜條件程序升溫40°C保持8min，然后以8°C/min的速度升至120°C并保25持10min;進(jìn)樣口溫度200°C;恒定流速4.0ml/min;載氣氦氣；分流比5:1;檢測(cè)器溫度250°C;頂空溫度70°C;頂空時(shí)間20min。試劑所用試劑購(gòu)自Aldrich公司、Fluka公司和北京化學(xué)試劑公司，所有溶劑的純度都高于98.0%。步驟(1)將表1所示的52種有機(jī)殘留溶劑根據(jù)ICH的規(guī)定的限量濃度，將每種有機(jī)殘留溶劑的標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)過精確稱重后溶解于50ml水中，記為對(duì)5照品溶液，以色譜系統(tǒng)的檢出限為最低濃度(以色譜圖上信噪比S/N-3為檢出限)，將對(duì)照品溶液逐步稀釋為5個(gè)不同的濃度，并使其濃度可以覆蓋通常情況下藥品殘留溶劑的濃度范圍；(2)在上述給定的色譜條件下，以甲烷測(cè)定死時(shí)間，分別測(cè)定每種溶劑在兩個(gè)色譜系統(tǒng)上的保留時(shí)間；以丁酮作為參比溶劑，計(jì)算每種溶io劑的調(diào)整相對(duì)保留時(shí)間；所得結(jié)果見表1，其中TR(min)為保留時(shí)間，RRT為相對(duì)保留時(shí)間。將每一種溶劑在兩個(gè)系統(tǒng)上的相對(duì)保留時(shí)間繪制成平面中的一個(gè)點(diǎn)，由圖2可知這52種溶劑在平面中構(gòu)成的點(diǎn)沒有完全重合的，即體現(xiàn)了本發(fā)明檢測(cè)方法對(duì)混合溶劑的分離度很好。(3)將各種溶劑的溶液取5個(gè)濃度點(diǎn)，計(jì)算其色譜峰面積，進(jìn)行線15性回歸，計(jì)算線性方程和線性范圍。所得結(jié)果見表2-l和2-2。表1各溶劑的保留時(shí)間和相對(duì)保留時(shí)間<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表2-l非極性色譜系統(tǒng)中各溶劑的含量線性方程<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表2-2極性色譜系統(tǒng)中各溶劑的含量線性方程<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例2阿莫西林鈉克拉維酸鉀(5:1)中殘留溶劑的測(cè)定供試品溶液的制備精密稱定阿莫西林鈉克拉維酸鉀(韓國(guó)京保藥品株式會(huì)社，批號(hào)D900400)(5:1)0.2384g,置20ml頂空瓶中，精密5加入2.0ml水，密封瓶口。丁酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備稱取丁酮10mg,置100ml容量瓶中，加水至刻度，量取2ml，置20ml頂空瓶中，密封瓶口。頂空條件和色譜條件同實(shí)施例1，分別測(cè)定丁酮的保留時(shí)間和供試品溶液中揮發(fā)性組分的保留時(shí)間，并計(jì)算色譜峰面積，然后和實(shí)施例1io所得的數(shù)據(jù)庫相比較。測(cè)量結(jié)果見表3-l和3-2,含量計(jì)算結(jié)果見表4-l和4-2,實(shí)際含量測(cè)定結(jié)果見表5。表3-lSPB-l色譜系統(tǒng)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注甲烷的保留時(shí)間為2.285min丁酮的保留時(shí)間為6.330min根據(jù)表3-l和3-2的結(jié)果，初步確定在兩個(gè)色譜柱系統(tǒng)上同時(shí)出現(xiàn)的色譜峰是樣品中可能存在的殘留溶劑丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、異丙醇。其中丙酮、乙酸乙酯和異丙醇在廠家提供的生產(chǎn)工藝中提到的，但是乙酸甲酯是工藝中沒有的。進(jìn)一步使用我們已經(jīng)建立的數(shù)據(jù)庫對(duì)其進(jìn)行了確證，GC-FTIR(氣相-傅立葉紅外聯(lián)用)和GC-MS(氣相-質(zhì)譜聯(lián)用)給出的結(jié)果進(jìn)一步證明了雙柱初步定性的準(zhǔn)確性。經(jīng)與廠家聯(lián)系，廠家承認(rèn)在生產(chǎn)過程中使用了乙酸甲酯。表4-lSPB-1色譜柱初歩定量計(jì)算結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表4-2Innowax色譜柱初步定量計(jì)算結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表5使用常規(guī)測(cè)定方法測(cè)量結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>上述常規(guī)測(cè)定方法為分別使用對(duì)照品和供試品通過外標(biāo)法進(jìn)行定通過比較本發(fā)明的測(cè)量方法得到的定量結(jié)果和準(zhǔn)確定量的結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，采用本發(fā)明的測(cè)量方法中建立的方程得到的初步定量結(jié)果可以比15較準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)殘留溶劑在樣品中的含量，預(yù)測(cè)結(jié)果與實(shí)際測(cè)定的含量在一個(gè)數(shù)量級(jí)上。實(shí)施例3克拉維酸鉀微晶纖維素(1:l)中殘留溶劑的測(cè)定所用儀器及色譜條件同實(shí)施例1。供試品溶液的制備精密稱定克拉維酸鉀微晶纖維素(1:1)().2139g，(韓國(guó)京保藥品株式會(huì)社，批號(hào)D900400)置20ml頂空瓶中，精密加5入2.0ml水，密封瓶口。丁酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備稱取丁酮10mg,置100ml容量瓶中，加水至刻度，量取2ml，置20ml頂空瓶中，密封瓶口。頂空條件和色譜條件同實(shí)施例2，分別測(cè)定丁酮的保留時(shí)間和供試品溶液中揮發(fā)性組分的保留時(shí)間，用甲垸測(cè)定死時(shí)間。測(cè)定結(jié)果見表5-1和io5-2。表5-lSPB-l色譜系統(tǒng)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注甲烷的保留fr卜間為1.617min,丁酮的保留時(shí)間為3.645min。表5-2Innowax色譜系統(tǒng)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注甲烷的保留時(shí)間為2.258min,丁酮的保留時(shí)間為6.275min。15可以看出在SPB-1柱上保留時(shí)間為1.878min的色譜峰，僅靠單柱的保留時(shí)間來比較判斷為甲醇，但是通過雙柱定性發(fā)現(xiàn)這個(gè)大的色譜峰并沒有在極性柱innowax甲醇的相應(yīng)位置上出峰，而是在3.037min出峰，因此判斷這個(gè)色譜峰并非殘留溶劑，可能是藥品在頂空條件的降解產(chǎn)物。待測(cè)樣品中只含有丙酮和異丙醇兩種殘留溶劑。因此，通過數(shù)據(jù)庫的應(yīng)用，在定性和定量同時(shí)還可以有效地排除共出峰的干擾，以免造成誤判。其定量結(jié)果見表6-l和6-2。表6-lSPB-1色譜系統(tǒng)定量計(jì)算結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>分別使用對(duì)照品和供試品通過外標(biāo)法進(jìn)行定量檢測(cè)，測(cè)得丙酮含量為0.004%,異丙醇含量為0.09%。權(quán)利要求1.一種使用氣相色譜檢測(cè)藥物中殘留溶劑的方法，其特征在于在氣相色譜的進(jìn)樣系統(tǒng)后增加一個(gè)雙通道或三通道分流管，每個(gè)通道有獨(dú)立的開關(guān)控制其流通量，分流管后至少并列連接極性相反的兩個(gè)色譜柱。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于當(dāng)所述分流管是雙通道的，其后并列連接極性和非極性的色譜柱。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述分流管是三通道的，其后并列連接非極性、極性的色譜柱和質(zhì)譜分析系統(tǒng)。4、根據(jù)權(quán)利要求-3任一所述的方法，其特征在于所述非極性色譜柱是固定相為聚氧硅烷的色譜柱，所述極性色譜柱是固定相為聚乙二醇的色譜柱。5、根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的方法，其特征在于將殘留溶劑標(biāo)準(zhǔn)品的相對(duì)保留時(shí)間和定量線性方程建立數(shù)據(jù)庫，作為待觀'j樣品的定性和定量分析的參考。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述數(shù)據(jù)庫的建立包括以下步驟(1)、將ICH規(guī)定的69種殘留溶劑的標(biāo)準(zhǔn)品按照其規(guī)定的限度，分別配制成對(duì)照品溶液；(2)使用并聯(lián)的非極性和極性色譜柱系統(tǒng)對(duì)殘留溶劑進(jìn)行檢測(cè)，記錄每根色譜柱上各組分的相對(duì)保留時(shí)間；(3)將步驟(1)所述的各殘留溶劑的對(duì)照品溶液以儀器檢出限為底限濃度，用水稀釋成5-6個(gè)不同的濃度，根據(jù)不同濃度的同一溶劑的色譜峰面積，建立各種溶劑的定量線性方程；(4)將步驟(2)和(3)中的相對(duì)保留時(shí)間和定量線性方程與每種溶劑建立關(guān)聯(lián)，建立數(shù)據(jù)庫。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于對(duì)待測(cè)藥物中ICH規(guī)定的一類溶劑和未知色譜峰通過質(zhì)譜分析系統(tǒng)進(jìn)一步確定。全文摘要本發(fā)明提供了一種在氣相色譜法中使用多通道并聯(lián)色譜柱系統(tǒng)對(duì)藥物中殘留溶劑進(jìn)行定性和定量檢測(cè)的方法，該方法是在氣相色譜的進(jìn)樣系統(tǒng)之后、色譜柱之前增加一個(gè)雙通道或三通道的分流管，其后并列連接極性相反的色譜柱，還可以連接質(zhì)譜分析系統(tǒng)，每個(gè)通道有單獨(dú)的開關(guān)控制其流通與否。根據(jù)對(duì)所有通道內(nèi)樣品的檢測(cè)結(jié)果比較和分析，本發(fā)明的方法可以對(duì)同一樣品一次性完成定性和定量分析，并且更加高效和準(zhǔn)確。文檔編號(hào)G01N30/46GK101206206SQ20061016771公開日2008年6月25日申請(qǐng)日期2006年12月19日優(yōu)先權(quán)日2006年12月19日發(fā)明者穎劉,尹利輝,胡昌勤,許明哲申請(qǐng)人:中國(guó)藥品生物制品檢定所