專利名稱：快速檢測可卡因的膠體金試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種利用膠體金免疫分析方法來檢測可卡因(COC)的試紙。
背景技術(shù)：
可卡因(Benzoylecgonine)是古柯葉的主要生物堿，是通過化學(xué)方法從古柯屬的小灌木樹的葉(古柯葉)中提取出來所得。通?？煽ㄒ驗榧儼住⒒野追勰?，極少潮濕，有特殊氣味。偶見無色晶狀可卡因(即可卡因鉆石)。
可卡因有很強的成癮性。通過鼻孔吸會產(chǎn)生一種高度欣快狀態(tài)，持續(xù)20分鐘，會經(jīng)歷一種感覺增強的“高潮”。當這些感覺慢慢消退，出現(xiàn)相應(yīng)的低潮，使吸食者極想重復(fù)使用，恢復(fù)其欣快感，逐漸形成對可卡因的依賴性，即上癮。長期使用，會使人產(chǎn)生嚴重頹廢，不可救藥?？煽ㄒ蚩墒剐穆杉涌欤苁湛s，動脈壓力增大。一定劑量的可卡因能致幻，短期的精神旺盛現(xiàn)象，使人感到精力一時充沛，感覺意識增強?？梢缘窒囸I、困倦和疲勞等人體自然現(xiàn)象。但大劑量使用，可使人產(chǎn)生難以預(yù)想的荒誕行為和可怕舉止，有時甚至可達到只有施以暴力才可釋放其能力的程度。常表現(xiàn)為過分興奮激動，周身顫抖、痙攣，肌肉扭曲、變形，甚至出現(xiàn)顛狂的幻覺病。大劑量使用可卡因能導(dǎo)致中樞神經(jīng)的傳源受阻，甚至可導(dǎo)致窒息。過度使用可卡因能導(dǎo)致人極度痙攣、心力衰竭而死亡。屬國家毒品行列。
對可卡因(COC)的檢測方法如氣相色譜(GC)，氣相色譜/質(zhì)譜(GC/MS)，高效液相色譜(HPLC)等已有報道。高效毛細管電泳是近年來發(fā)展起來的分析方法，它具有分離能力強、分離效率高、分析時間短，所需的樣品及溶劑量小等特點。國外已有利用膠束毛細管電動色譜法等，但是所需的時間較長，因此需要一種快速、方便的檢測方法。
膠體金試紙的原理是利用抗原抗體的特異結(jié)合反應(yīng)和免疫層析技術(shù)，利用特定的顯色反應(yīng)在試紙上準確的顯示測試的結(jié)果，具有靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好，精確度高，操作簡單，檢測快速準確的特點，無須復(fù)雜的設(shè)備。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供了一種利用膠體金免疫分析方法來檢測可卡因(COC)的試紙。
為了達到所述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的在可卡因(COC)檢測試紙底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條可卡因(COC)合成免疫原試驗線和一條抗鼠多克隆抗體控制線，在底板一端端頭為吸水層，另一端端頭為玻璃纖維樣品層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水層和抗可卡因(COC)單抗金標墊相互交疊連接，在抗可卡因(COC)單抗金標墊上壓有玻璃纖維樣品層。
把可卡因(COC)檢測試紙的樣品層放入被檢測尿液中(液面不得超過MAX線)由于毛細管作用樣品將沿著試紙條向吸水層端移動，當移動至抗可卡因(COC)單抗金標墊時，樣品中的可卡因(COC)與抗可卡因(COC)金標探針發(fā)生特異反應(yīng)，當移動至固定有可卡因(COC)合成免疫原試驗線時，由于抗可卡因(COC)單抗金標墊中的抗體會與樣品中可卡因(COC)結(jié)合而失去其與可卡因(COC)合成免疫原結(jié)合位點，因此其膠體金不能滯留于試驗線上；相反，如果樣品中沒有與抗可卡因(COC)單抗金標墊中的抗體結(jié)合的可卡因(COC)，抗可卡因(COC)單抗金標探針就會與試驗線上的可卡因(COC)合成免疫原發(fā)生特異結(jié)合，使膠體金滯留于試驗線上，這就是免疫競爭法原理。所以試驗線的顏色深淺與樣品中可卡因(COC)含量高低成反比。設(shè)定界限值為300ng/ml，出現(xiàn)兩條紅線代表尿樣中COC低于300ng/ml，為陰性；出現(xiàn)一條紅線表示尿樣中COC超過界限值300ng/ml，為陽性。
當移動至抗鼠多克隆抗體控制線時，無論樣品中可卡因(COC)含量多少，金標探針都會與已包被在硝酸纖維素膜上的鼠IgG結(jié)合滯留，使控制線顯示紅色。因此控制線無色帶產(chǎn)生則代表操作有誤(檢測時，樣品液面超過MAX線)或試紙已經(jīng)過期。
在用試紙檢測尿液后，將其試驗線與檢測色標進行比色，按顏色深淺判斷為陽性，可疑或陰性，進而確定所測尿液中可卡因(COC)含量是否超標。用含可卡因(COC)對照品得尿液檢測，設(shè)定界限值300ng/ml。
由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明所提供的檢測可卡因(COC)的試紙及其檢測方法具有這樣的有益效果，即特異性強，靈敏度高，易儲存，無須專門技術(shù)人員操作，不需要儀器設(shè)備，而且結(jié)果易讀。


圖1為可卡因(COC)檢測試紙的主視結(jié)構(gòu)圖。
圖2為可卡因(COC)檢測試紙的俯視剖視結(jié)構(gòu)圖。
圖3為可卡因(COC)檢測試紙應(yīng)用于測試時顯示為陽性結(jié)果圖。
圖4為可卡因(COC)檢測試紙應(yīng)用于測試時顯示為陰性結(jié)果圖。
具體實施方式
1.應(yīng)用活化脂法，將半抗原可卡因(COC)結(jié)合牛血清白蛋白(BSA)制備可卡因(COC)合成免疫原。
2.抗可卡因(COC)單克隆抗體的制備。
(1)將制備的可卡因(COC)合成免疫原免疫小鼠。
(2)提取小鼠腹水，分離純化以得到抗可卡因(COC)單克隆抗體。
3.膠體金的制備及與抗可卡因(COC)單克隆抗體的結(jié)合。
(1)10％氯化金(0.5ml)+10％檸檬酸三鈉(0.75ml)+去離子水(500ml)→膠體金。
(2)膠體金500ml+0.1M磷酸緩沖液pH7.4(50ml)+抗可卡因(COC)單克隆抗體→抗可卡因(COC)單抗膠體金。
(3)抗可卡因(COC)單抗膠體金+吸水紙→金標記抗體吸附吸水紙上備用。
4.選擇硝酸纖維素膜做為底物覆著處，利用毛細管原理使膠體金朝向底物處移動。
5.特種制膜機制膜機器特制，利用電腦控制傳動速度，保證每單位膜上包被的抗體量相等。
控制線選用羊抗鼠IgG，濃度2-10mg/ml試驗線選用可卡因(COC)合成免疫原，濃度2-10mg/ml6.組合(1)塑料條+薄膜+膠體金墊(2)切條7.使用方法(1)除去外包裝，取出試劑條。將試劑條插入尿樣中，尿液界面物超過紙條上的“Max”線。如為試劑盒，則將尿液滴入樣品孔中。
(2)15秒后取出試紙條或繼續(xù)插在尿液中，5分鐘時觀察結(jié)果；如為試劑盒，則在5分鐘后直接在觀察孔中觀察結(jié)果。
(3)結(jié)果判斷僅在控制區(qū)出現(xiàn)一條紅色線為陽性如在檢測區(qū)及控制區(qū)出現(xiàn)兩條紅色線，則為陰性。控制區(qū)未出現(xiàn)紅色線，表面試紙無效。
8.注意事項(1)僅供定性篩檢。
(2)稀釋及不潔凈的尿樣或操作不當，均可產(chǎn)生錯誤結(jié)果。
(3)密封保存，在有效期12個月內(nèi)使用。
權(quán)利要求1.一種快速檢測可卡因的膠體金試紙，其特征在于是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纖維素膜(2)、可卡因單抗金標墊(5)、玻璃纖維樣品吸液層(6)組成；底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條試驗線(4)和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線(3)，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標墊上壓有樣品吸液層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測可卡因的膠體金試紙，其特征在于控制線是由羊抗鼠多克隆抗體包被制成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測可卡因的膠體金試紙，其特征在于試驗線是由可卡因合成免疫原包被制成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速檢測可卡因的膠體金試紙，其特征在于金標墊是由可卡因單克隆抗體作為膠體金標記。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試紙條，其特征在于吸水紙用雙層吸水紙。
專利摘要本發(fā)明涉及種快速檢測可卡因的膠體金試紙，屬于膠體金免疫檢測領(lǐng)域。試紙是由底板、吸水板、硝酸纖維素膜、單抗金標墊、玻璃纖維樣品吸液層組成，是一種用于檢測可卡因(COC)的試紙。底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有可卡因(COC)合成免疫原試驗線和一條多克隆抗體控制線，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標墊上壓有樣品吸液層，通過膠體金免疫競爭方法制成試紙。其原理是利用抗原抗體的特異結(jié)合反應(yīng)和免疫層析技術(shù)，在試紙上出現(xiàn)特定的顯色結(jié)果。具有靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好，精確度高，操作簡單，檢測快速準確的特點，無須復(fù)雜的設(shè)備。
文檔編號G01N33/544GK2935155SQ20062000431
公開日2007年8月15日 申請日期2006年2月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月22日
發(fā)明者萬志靜, 萬志強 申請人:萬華普曼生物工程有限公司