專利名稱：：一種血清總鐵結(jié)合力的自動(dòng)分析法及液體穩(wěn)定試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及血清總鐵結(jié)合力的自動(dòng)分析法及其液體穩(wěn)定試劑，可廣泛應(yīng)用在醫(yī)學(xué)及生物化學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
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背景技術(shù)：
：血清總鐵結(jié)合力(TIBC)的測(cè)定是常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目。眾多臨床資料表明，缺鐵性貧血、急性肝炎等疾病可導(dǎo)致血清總鐵結(jié)合力降低，而肝硬變、腎病、尿毒癥和血色沉著癥等疾病可導(dǎo)致血清總鐵結(jié)合力增高。測(cè)定血清TIBC的含量，對(duì)相關(guān)疾病的確診、治療效果的觀察具有重要的臨床價(jià)值。目前，臨床測(cè)定血清TIBC主要采用經(jīng)輕質(zhì)碳酸鎂吸附的原子吸收法和各種絡(luò)合光度法。原子吸收法為測(cè)定TIBC的推薦方法，但該法不僅需專用昂貴儀器，而且需沉淀、離心，檢測(cè)成本高，操作步驟繁，臨床實(shí)際難以普及；用絡(luò)合光度法測(cè)定TIBC操作雖相對(duì)簡(jiǎn)便，但該法同樣需沉淀、離心，無法應(yīng)用于生化自動(dòng)分析儀。本發(fā)明的目的是為了解決上述技術(shù)的不足，通過轉(zhuǎn)鐵蛋白在堿性條件下可吸附鐵離子、在酸性條件下可釋放鐵離子性質(zhì)的運(yùn)用，向臨床提供一種無需沉淀、離心、可直接應(yīng)用于全自動(dòng)生化分析儀、且對(duì)自動(dòng)生化分析的管道無污染的自動(dòng)化測(cè)定技術(shù)及其相應(yīng)的液體穩(wěn)定試劑。該測(cè)定試劑置2—8'C保存可至少可穩(wěn)定6個(gè)月,提供的方法和試劑可以應(yīng)用于目前廣泛使用的臨床生化自動(dòng)分析儀，從而達(dá)到大規(guī)模測(cè)定樣本的要求。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種總鐵結(jié)合力的自動(dòng)分析法及液體穩(wěn)定試劑，用于血清總鐵結(jié)合力的測(cè)定。該測(cè)定體系主要是通過在堿性溶液中，轉(zhuǎn)鐵蛋白被游離鐵離子飽和，當(dāng)測(cè)定體系的pH值轉(zhuǎn)變至酸性時(shí)，與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的鐵離子從轉(zhuǎn)鐵蛋白中釋放出來并與鉻天青B發(fā)生靈敏的顯色反應(yīng)，此時(shí)測(cè)定體系的吸光度上升，其吸光度的上升值與樣本中總鐵結(jié)合力含量成正比，在自動(dòng)生化分析儀上以兩點(diǎn)終點(diǎn)法的測(cè)量模式實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中總鐵結(jié)合力含量的測(cè)定。為了達(dá)到理想的檢測(cè)效果與足夠的穩(wěn)定性，本發(fā)明提供的兩點(diǎn)終點(diǎn)法轉(zhuǎn)鐵結(jié)合力自動(dòng)化檢測(cè)試劑，特別可以分為A、B二個(gè)組份。兩個(gè)組份的具體成份組成可表述如下。<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>為了提高上述測(cè)定試劑的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，消除測(cè)定結(jié)果受外界的多種干擾，所述的兩點(diǎn)終點(diǎn)法測(cè)定試劑中緩沖液可以為GOOD'S系列緩沖液、甘氨酸緩沖液、Tris-HCl緩沖液、檸檬酸一檸檬酸三鈉緩沖液、鄰苯二甲酸氫鉀一鹽酸緩沖液、HAc—NaAc緩沖液；表面活性劑可以為SDS、Tween20、Tween80、Brij35、Brij98、乳化劑OP、TritonX—100等非離子型表面活性劑其中的一種；去干擾劑可以是硫脲、氨基硫脲；還原劑可以是鹽酸羥胺、抗壞血酸；防腐劑可以是NaN3、PC系列防腐劑；鐵解離劑可以是尿素、鹽酸胍、異氰鹽酸胍。具體實(shí)施方式實(shí)施例血清轉(zhuǎn)鐵蛋白兩點(diǎn)終點(diǎn)法測(cè)定試劑，A組份中緩沖液特別優(yōu)選Tris-HCl緩沖液，B組份中緩沖液特別優(yōu)選醋酸一醋酸鈉緩沖液；A組份中特別優(yōu)選的表面活性劑是TritonX—100，B組份中特別優(yōu)選的表面活性劑是Tween80;去干擾劑優(yōu)選為硫脲;還原劑優(yōu)選為鹽酸羥胺；防腐劑優(yōu)選為NaN3;鐵解離劑優(yōu)選為鹽酸胍。在上述試劑組成中，Tween80、TritonX—100可使測(cè)定體系在測(cè)量過程中保持清亮，避免由于蛋白質(zhì)的渾濁而引起測(cè)量體系吸光度的異常升高，硫脲用于消除血清銅的干擾，鹽酸羥胺用于將F^+還原為Fe2、NaN3用于抑制微生物的生長(zhǎng)，鹽酸胍用于將鐵離子從血清轉(zhuǎn)鐵蛋白中裂解開來。A組份:pH8.4Tris-HCl緩沖液80mmol/L鉻天青B160Pmol/L碳酸氫鈉120mmol/LTritonX—100lOml/L硫脲1Ommol/L鹽酸羥胺2g/L防腐劑0.6g/LB組份pH3.5HAc—NaAc緩沖液150mmol/LTween8015ml/L鹽酸胍30g/L在實(shí)施例的試劑用于測(cè)定樣本時(shí)，采用的測(cè)定方法為兩點(diǎn)終點(diǎn)法，溫度為37"C，R1:樣本:R2為200:15:50，測(cè)定主/副波長(zhǎng)為600/800nm，Rl加入樣本或標(biāo)準(zhǔn)后在測(cè)定溫度孵育300秒后讀取第1點(diǎn)吸光度，然后加入R2繼續(xù)孵育300秒后讀取第2點(diǎn)吸光度。用本法和《臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第二版)所推薦的碳酸鎂吸附法同時(shí)測(cè)定了20例總鐵結(jié)合力標(biāo)本。表1為本實(shí)施例測(cè)定值與碳酸鎂吸附法測(cè)定值對(duì)照表，本實(shí)施例和原子吸收法的相關(guān)系數(shù)r為0.9973,兩者顯示了極好的相關(guān)性。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>上述實(shí)施例試劑的配制方法僅用于說明本發(fā)明的原理和其應(yīng)用，但本發(fā)明絕不局限于上述例舉的應(yīng)用范圍。權(quán)利要求1.一種血清總鐵結(jié)合力的自動(dòng)分析法及試劑，其特征在堿性緩沖液中，轉(zhuǎn)鐵蛋白被游離鐵離子飽和，當(dāng)測(cè)定體系的pH值轉(zhuǎn)變至酸性時(shí)，與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的鐵離子從轉(zhuǎn)鐵蛋白中釋放出來并與鉻天青B發(fā)生靈敏的顯色反應(yīng)，此時(shí)測(cè)定體系的吸光度上升，其吸光度的上升值與樣本中總鐵結(jié)合力含量成正比，在自動(dòng)生化分析儀上以兩點(diǎn)終點(diǎn)法的測(cè)量模式實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中總鐵結(jié)合力含量的測(cè)定。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的血清總鐵結(jié)合力的自動(dòng)分析法及試劑，其特征在于測(cè)定體系為緩沖液、鉻天青B、碳酸氫鈉、表面活性劑、去干擾劑、還原劑、防腐齊lj、鐵解離齊lj的么且合。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的血清總鐵結(jié)合力的自動(dòng)分析法及試劑，其特征在于所述測(cè)定體系試劑比例為A組份pH8.4緩沖液鉻天青B碳酸氫鈉表面活性劑去干擾劑還原劑防腐劑B組份pH3.5緩沖液表面活性劑鐵解離劑50—150mmol/L120—180umol/L50—300mmol/L5—30ml/L5—15mmol/L0.5—5g/L0.1—2g/L50—200mmol/L5—30ml/L10—50g/L4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的血清總鐵結(jié)合力的自動(dòng)分析法及試劑，其特征在于A組份中優(yōu)選的表面活性劑為TritonX—-100、B組份中優(yōu)選的表面活性劑為Tween80。5、根據(jù)權(quán)利要求3所述的血清總鐵結(jié)合力的自動(dòng)分析法及試劑，其特征在于去干擾劑優(yōu)選為硫脲。6、根據(jù)權(quán)利要求3所述的血清總鐵結(jié)合力的自動(dòng)分析法及試劑，其特征在于還原劑優(yōu)選為鹽酸羥胺。7、根據(jù)權(quán)利要求3所述的血清總鐵結(jié)合力的自動(dòng)分析法及試劑，其特征在于鐵解離劑優(yōu)選為鹽酸胍。全文摘要本發(fā)明涉及一種血清總鐵結(jié)合力的自動(dòng)分析法及液體穩(wěn)定試劑，可廣泛應(yīng)用在醫(yī)學(xué)及生物化學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
。其特點(diǎn)是在堿性緩沖液中，轉(zhuǎn)鐵蛋白被游離鐵離子飽和，當(dāng)測(cè)定體系的pH值轉(zhuǎn)變至酸性時(shí)，與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合的鐵離子從轉(zhuǎn)鐵蛋白中釋放出來并與鉻天青B發(fā)生靈敏的顯色反應(yīng)，此時(shí)測(cè)定體系的吸光度上升，其吸光度的上升值與樣本中總鐵結(jié)合力含量成正比，在自動(dòng)生化分析儀上以兩點(diǎn)終點(diǎn)法的測(cè)量模式實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中，總鐵結(jié)合力含量的測(cè)定。采用本法制備的液體型測(cè)定試劑穩(wěn)定、方便、抗干擾能力強(qiáng)，對(duì)自動(dòng)生化分析儀管道無污染，特別適合進(jìn)行血清總鐵結(jié)合力的批量自動(dòng)化檢測(cè)。文檔編號(hào)G01N21/77GK101226152SQ20071000082公開日2008年7月23日申請(qǐng)日期2007年1月16日優(yōu)先權(quán)日2007年1月16日發(fā)明者連國(guó)軍申請(qǐng)人:溫州醫(yī)學(xué)院