專利名稱：：對(duì)卷煙中添加的茶多酚穩(wěn)定性的測(cè)試方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及巻煙
技術(shù)領(lǐng)域：
，是一種對(duì)添加到巻煙中的自由基清除劑茶多酚穩(wěn)定性的測(cè)試方法。
背景技術(shù)：
：茶多酚作為一種抗氧化劑，可以有效清除自由基，因此可以將茶多酚添加到巻煙中，降低巻煙煙氣中的自由基起到降低巻煙危害的作用。但因茶多酚自身容易被空氣中的氧氣氧化而變質(zhì)，而煙草產(chǎn)品的存放時(shí)間一般較長，在較長的存放時(shí)間中，巻煙中添加的茶多酚是否會(huì)失去活性，從而失去對(duì)氣相自由基的清除能力？換句話說，添加到巻煙中的茶多酚，經(jīng)過長時(shí)間的存放之后，到達(dá)消費(fèi)者手中時(shí)，它是否還具有標(biāo)稱的抗自由基的能力？這種添加有茶多酚的巻煙的存放時(shí)間限是多少？生產(chǎn)者應(yīng)該對(duì)消費(fèi)者有一個(gè)明明白白的答復(fù)?，F(xiàn)有技術(shù)中對(duì)于茶多酚降害效果的測(cè)試，只能通過逐一觀賦煙氣中有害化學(xué)成分(包括自由基)的含量變化來判斷茶多酚是否因被氧化而失去降害效果。即在添加有茶多酚的巻煙中，測(cè)試煙氣有害化學(xué)成分的含量，與未添加茶多酚的同類巻煙中有害化學(xué)成分含量比對(duì)，得至啲有害化學(xué)成分含量降低率作為初始數(shù)據(jù)；然后每間隔一段時(shí)間，測(cè)試一次該種添加了茶多酚的巻煙煙氣中有害化學(xué)成分含量，與未添加茶多酚的同類巻煙的空白測(cè)試結(jié)果比對(duì)，計(jì)算出其有害成分降低率，該降低率與初始測(cè)試的降低率相比，若有所減小，則說明茶多酚抗氧化性能降低，減害能力減弱。這種方法操作復(fù)雜、難度大，自由基測(cè)試需通過巻煙抽吸、煙氣收集、自由基捕集、電子順磁共振波譜儀測(cè)試，其它有害成分則需要通過巻煙抽吸、煙氣收集、成分提取、純化、色譜分析等步驟進(jìn)行測(cè)試。測(cè)試指標(biāo)多，各個(gè)有害成分須采用不同的測(cè)試分析方法分別測(cè)試。測(cè)試時(shí)間周期長達(dá)3-6個(gè)月。測(cè)試次數(shù)多，需每間隔一段時(shí)間就測(cè)試一次。本發(fā)明人通過研究發(fā)現(xiàn)，一般情況下，環(huán)境溫度每上升10°C，茶多酚氧化反應(yīng)速度加快2-3倍。根據(jù)所發(fā)現(xiàn)的上述規(guī)律，在高于環(huán)境溫度的狀態(tài)下加速茶多酚的氧化反應(yīng)，茶多酚在加速氧化后的抗氧化有效成分的測(cè)試值，即可相當(dāng)于茶多酚在一個(gè)較長時(shí)期的自然狀態(tài)下氧化后的抗氧化有效成分的測(cè)試值。若以常溫25'C為標(biāo)準(zhǔn)，以6(TC為加速氧化的溫度，則經(jīng)3.5個(gè)1(TC升溫為6(TC后，茶多酚的氧化速度增加為常溫時(shí)的215—33'5倍=11.3-46.8倍，'如連續(xù)進(jìn)行18天的測(cè)試，則相當(dāng)于自然存放時(shí)間的18X11.3=203.4天至18X46.8=842.4天的試驗(yàn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的問題是提供一種簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確的測(cè)試方法，通過模擬大氣環(huán)境，提高環(huán)境溫度，加速茶多酚氧化過程，使得能夠在較短的時(shí)間內(nèi)(例如在10-45天內(nèi))，完成對(duì)茶多酚抗氧化有效成分的測(cè)試。'本發(fā)明的技術(shù)方案是一種對(duì)巻煙中添加的茶多酚穩(wěn)定性的測(cè)試方法，其特征在于所述的測(cè)試方法依以下的步驟進(jìn)行(1)、將需要測(cè)試的添加有茶多酚的煙支用常規(guī)煙盒包裝以模擬巻煙成品的自然儲(chǔ)存方式，將上述包裝的巻煙放置到恒溫烘箱中，并保持恒溫烘箱處于40-6(TC的恒溫狀態(tài)；(2)、從上述煙支放入烘箱開始計(jì)時(shí)，并進(jìn)行第一次測(cè)試，測(cè)試時(shí)隨機(jī)取30支煙分為三組，進(jìn)行三個(gè)平行測(cè)試，測(cè)試方法為將煙支中添加有茶多酚的部分破碎后放入甲醇水溶液中進(jìn)行浸提，用高效液相色譜法對(duì)所得至鵬魏溶液中的茶多酚有效成分含量逮行迴試;(3)、每隔2-3天從恒溫烘箱中隨機(jī)取出30支煙進(jìn)行測(cè)試，連續(xù)進(jìn)行5-15*測(cè)試；(4)、將上述測(cè)試結(jié)果用現(xiàn)有技術(shù)的數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得出茶多酚有效成分含量的減低率，并依此估算出本批巻煙存放的時(shí)間限。步驟(2)中所述的茶多酚有效成分是指茶多酚中的6種兒茶素成分，它們是表沒食子兒茶素EGC、兒茶素DL-C、表沒食子兒茶素沒食子酸酯EGCG、表兒茶素EC、沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG、表兒茶素沒食子酸酯ECG。步驟(2)中所述的放入甲醇水溶液中進(jìn)行浸提的操作是將巻煙中添加有茶多酚的部分破碎后投入500ml錐形瓶A中，加入300ml60%的甲醇水溶液，置于40-6(TC恒溫環(huán)境中保持10min后，用超聲波震蕩5min，過濾，將濾液保留至錐形瓶B中，濾渣返回錐形瓶A中；再將200ml6(F。的甲醇水溶液加入錐形瓶A中，置于40-6(TC恒溫環(huán)境中保持10min后，用超聲波震蕩5min，過濾，將濾液合并到錐形瓶B中；.步驟(2)中所述的用高效液相色譜法對(duì)所得到的浸提液中的茶多酚有效成分含量進(jìn)行測(cè)試，其方法是將上述錐形瓶B中合并的浸提液進(jìn)樣10-30uL，采用外標(biāo)法測(cè)定茶多酚中的6種兒茶素有效成分及咖啡因含量，每個(gè)試樣在高效液相色譜上的測(cè)試時(shí)間是40分鐘。采用外標(biāo)法測(cè)定茶多酚中的6種兒茶素有效成分及咖啡因含量時(shí)，6禾"L茶素有效成分的含量和咖啡因的含量均以其色譜吸收峰峰面積表示，以6種兒茶素總的峰面積與咖啡因的峰面積的比值變化來表示茶多酚含量的變化率a所述的恒溫烘箱是帶有通風(fēng)功能的恒溫烘箱。本發(fā)明的測(cè)試方法無需特殊、專用設(shè)備，樣品前處理簡(jiǎn)單；測(cè)試時(shí)間短，只需10-45天；測(cè)試指標(biāo)少，只測(cè)試茶多酚的抗氧化有效成分一即6種兒茶素；測(cè)試過程簡(jiǎn)單，6種兒茶素成分采用同一種檢測(cè)方法，測(cè)試數(shù)據(jù)一次取得。附圖1是測(cè)試數(shù)據(jù)的趨勢(shì)預(yù)測(cè)圖。具體實(shí)施例方式下面對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式及其它有關(guān)技術(shù)問題作進(jìn)一步詳細(xì)的描述。本發(fā)明的領(lǐng)賦方法通過加速巻煙中茶多酚的氧化，在較短的時(shí)間周期內(nèi)，實(shí)現(xiàn)對(duì)茶多酚抗氧化有效成分含量的檢測(cè)，從檢測(cè)結(jié)果中得到茶多酚有效成分變化率，用來判斷茶多酚抗氧化能力的變化和清除自由基能力的變化，可作為茶多酚長期穩(wěn)定性評(píng)價(jià)的一種客觀數(shù)據(jù)。本發(fā)明采用高效液相色譜法對(duì)茶多酚中的有效成分6種兒茶素的含量進(jìn)行檢測(cè)。由于在實(shí)際測(cè)試過程中，其各成份的含量不能準(zhǔn)確定量，因此，為了準(zhǔn)確起見，實(shí)驗(yàn)中各單體的含量均以其色譜吸收峰峰面積表示；又因茶多酚中的咖啡因的化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，不容易受到氧化，因此以咖啡因的含量作為內(nèi)標(biāo)(確立為1)，然后測(cè)定6種兒茶素的總量。以6種JL茶素總的峰面積與咖啡因的峰面積的比值來確定茶多酚隨時(shí)間變化受到空氣氧化的影響。第隔2-3天進(jìn)行一次測(cè)試，連續(xù)進(jìn)行5-15次測(cè)試。下面是一個(gè)實(shí)施例的結(jié)果，在本申請(qǐng)人的商品名為"紅金龍"的巻煙濾嘴捧(此例中添加有茶多酚的部分是濾嘴棒，如果茶多酚是添加在巻煙部分，則采用巻煙部分來進(jìn)行測(cè)試)中添加有茶多酚，釆用本發(fā)明的測(cè)試方法對(duì)該批產(chǎn)品煙支中的茶多酚的兒茶素含量進(jìn)行檢測(cè)，此時(shí)，將濾嘴棒部分破碎后進(jìn)行浸提，烘箱溫度為6(TC，每隔兩天測(cè)試一次，共進(jìn)行8次測(cè)試，得到如下測(cè)試結(jié)果。表l巻煙中兒茶素含量與咖啡因隨時(shí)間的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>本實(shí)施例中，本發(fā)明人采用EXCEL軟件對(duì)上表的測(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行一元線性擬合后，得到測(cè)試數(shù)據(jù)的趨勢(shì)預(yù)測(cè)圖，如附圖1所示。從表1和附圖1中可以看出，對(duì)以上測(cè)試結(jié)果進(jìn)行線性擬合后，兒茶素與咖啡因的比例隨著時(shí)間的延長呈現(xiàn)一種極其緩慢下降的趨勢(shì)。線性模擬的公式為■Y=A+B*X其中Y為六種兒茶素/咖啡因的峰面積比值X為茶多酚保存天數(shù)八=2.173為圖中趨勢(shì)線的截距B=_0.0033為圖中趨勢(shì)線的斜率若以茶多酚氧化半衰期來計(jì)算，氧化掉茶多酚中6種兒茶素的50%所需要的時(shí)間就是2.183X50^二2.173-0.0033XX，故X=328天。由此測(cè)試數(shù)據(jù)可以判斷在常溫(25'C)的保存條件下巻煙當(dāng)中的茶多酚具有較好的穩(wěn)定性，在現(xiàn)有的自然保存條件下，本批添加有茶多酚的商品名為"紅金龍"的巻煙至少可保存一年。本發(fā)明所使用的儀器、試劑及測(cè)試條件如下儀器美國VarianProsar230型高效液相色譜儀(配紫外檢測(cè)器)、TL101助溫箱、手動(dòng)進(jìn)樣器、Varian化學(xué)工作站。對(duì)照品表沒食子兒茶素(EGC)、兒茶素(DL-C)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、表兒茶素(EC)、沒食子兒茶素沒食子酸酯(GCG)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)，均蟲農(nóng)業(yè)部iM^督撿測(cè)中心提供；咖啡因由中國藥品生物制品檢定所提供。試劑乙腈(色譜純)；冰醋酸(色譜純)；水為玻璃重蒸水。色譜條件色i普禾主HypersilBDS(410咖X150腿，5ym);流動(dòng)相A相為乙腈22。/。冰醋酸(2:100)，B相為乙腈22。/o冰醋酸(30:70)，梯度洗脫，30min內(nèi)完成;流速lmL/min;柱溫36°C;檢測(cè)波長280nm。通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以由曲線上查出對(duì)應(yīng)組分的含量(或濃度)。權(quán)利要求1、一種對(duì)卷煙中添加的茶多酚穩(wěn)定性的測(cè)試方法，其特征在于所述的測(cè)試方法依以下的步驟進(jìn)行(1)、將需要測(cè)試的添加有茶多酚的煙支用常規(guī)煙盒包裝以模擬卷煙成品的自然儲(chǔ)存方式，將上述包裝的卷煙放置到恒溫烘箱中，并保持恒溫烘箱處于40-60℃的恒溫狀態(tài)；(2)、從上述煙支放入烘箱開始計(jì)時(shí)，并進(jìn)行第一次測(cè)試，測(cè)試時(shí)隨機(jī)取30支煙分為三組，進(jìn)行三個(gè)平行測(cè)試，測(cè)試方法為將煙支中添加有茶多酚的部分破碎后放入甲醇水溶液中進(jìn)行浸提，用高效液相色譜法對(duì)所得到的浸提溶液中的茶多酚有效成分含量進(jìn)行測(cè)試；(3)、每隔2-3天從恒溫烘箱中隨機(jī)取出30支煙進(jìn)行測(cè)試，連續(xù)進(jìn)行5-15次測(cè)試；(4)、將上述測(cè)試結(jié)果用現(xiàn)有技術(shù)的數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得出茶多酚有效成分含量的減低率，并依此估算出本批卷煙存放的時(shí)間限。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)巻煙中添加的茶多酚穩(wěn)定性的測(cè)試方法，其特征在于步驟(2)中所述的茶多酚有效成分是指茶多酚中的6種兒茶素成分，它們是表沒食子兒茶素EGC、兒茶素DL-C、表沒食子兒茶素沒食子酸酯EGCG、表兒茶素EC、沒食子兒茶素沒食子酸酯GCG、表兒茶素沒食子酸酯ECG。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)巻煙中添加的茶多酚穩(wěn)定性的測(cè)試方法，其特征在于步驟(2)中所述的放入甲醇水溶液中進(jìn)行浸提的操作是將巻煙中添加有茶多酚的部分破碎后投入500ml錐形瓶A中，加入300ml60%的甲醇水溶液，置于40-60。C恒溫環(huán)境中保持lOmin后，用超聲波震蕩5min.，過濾，將濾液保留至錐形瓶B中，濾渣返回錐形瓶A中；再將200ml60G/。的甲醇水溶液加入錐形瓶A中，置于40-60。C恒溫環(huán)境中保持10min后，用超聲波震蕩5min，過濾，將濾液合并到錐形瓶B中。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)巻煙中添加的茶多酚穩(wěn)定性的領(lǐng)ij試方法，其特征在于步驟(2)中所述的用高效液相色譜法對(duì)所得到的浸提液中的茶多酚有效成分含量進(jìn)行測(cè)試，其方法是將上述錐形瓶B中合并的浸提液進(jìn)樣10-30pL，采用外標(biāo)法測(cè)定茶多酚中的6種兒茶素有效成分及咖啡因含量，每個(gè)試樣在高效液相色譜上的測(cè)試時(shí)間是40分鐘。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的對(duì)巻煙中添加的茶多酚穩(wěn)定性的測(cè)試方法，其特征在于采用外標(biāo)法測(cè)定茶多酚中的6種兒茶素有效成分及咖啡因含量時(shí)，6種兒茶素有效成分的含量和咖啡因的含量均以其色譜吸收峰峰面積表示，以6種兒茶素總的峰面積與咖啡因的峰面積的比值變化來表示茶多酚含量的變化率。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的對(duì)巻煙中添加的茶多酚穩(wěn)定性的測(cè)試方法，其特征在于所述的恒溫烘箱是帶有通風(fēng)功能的恒溫烘箱。全文摘要本發(fā)明公開了一種對(duì)卷煙中添加的茶多酚穩(wěn)定性的測(cè)試方法，涉及卷煙
技術(shù)領(lǐng)域：
。測(cè)試方法依以下的步驟依次進(jìn)行(1)將需要測(cè)試卷煙放置到恒溫烘箱中，并保持恒溫狀態(tài)；(2)測(cè)試方法為將添加有茶多酚的部分破碎后放入甲醇水溶液中浸提，用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)試；(3)每隔2-3天從恒溫烘箱中取出30支進(jìn)行測(cè)試，連續(xù)進(jìn)行5-10次；(4)依據(jù)測(cè)試結(jié)果，與本批卷煙存放前測(cè)試的原始數(shù)據(jù)比對(duì)，得出茶多酚有效成分含量的減低率，并依此估算出本批卷煙存放的時(shí)間限。本發(fā)明的測(cè)試方法樣品前處理簡(jiǎn)單、測(cè)試時(shí)間短，測(cè)試指標(biāo)少，測(cè)試過程簡(jiǎn)單。文檔編號(hào)G01N30/06GK101285798SQ200710051868公開日2008年10月15日申請(qǐng)日期2007年4月13日優(yōu)先權(quán)日2007年4月13日發(fā)明者劉劍峰,宋旭艷,羅誠浩,敏魏,龍黃申請(qǐng)人:武漢煙草(集團(tuán))有限公司