專利名稱：一種檢測香菇中甲醛含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食品安全檢測領(lǐng)域，特別是涉及一種檢測香菇內(nèi)生甲醛含量的 方法。
背景技術(shù)：
甲醛為較高毒的物質(zhì)，已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織確定為致癌和致畸物質(zhì)，是公 認(rèn)的變態(tài)反應(yīng)源，也是潛在的強致突變物之一。大量文獻(xiàn)記載，甲醛對人體健 康的影響在嗅覺異常、刺激、過敏、肺功能異常、肝功能異常和免疫功能異常 等方面。發(fā)生甲醛急性經(jīng)口中毒后可直接損傷人的口腔、咽喉、食道和胃黏膜， 同時產(chǎn)生中毒反應(yīng)，輕者頭暈、咳嗽、嘔吐、上腹疼痛，重者出現(xiàn)昏迷、休克、 肺水腫、肝腎功能障礙，導(dǎo)致出血、腎衰竭和呼吸衰弱而死亡。長期接觸低濃 度甲醛，可引起神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和肝臟的損害，出現(xiàn)頭昏(痛)、 乏力、嗜睡、食欲減退、視力下降等中毒癥狀。
大量調(diào)査研究發(fā)現(xiàn)，許多食品中含有甲醛。香菇中甲醛主要是作為形成香 菇特征風(fēng)味的酶學(xué)途徑的副產(chǎn)物產(chǎn)生的。香燕中的甲醛含量是衡量香燕質(zhì)量的 一項重要指標(biāo)。
大量有關(guān)甲醛的動力學(xué)變化研究表明，在進(jìn)行香菇甲醛含量的檢測過程中，
香菇勻漿液在37T:下保溫時，甲醛含量快速上升；2h 2.5h甲醛的形成速率趨 于平緩；2.5h后勻漿液中甲醛含量達(dá)到穩(wěn)定。4t下保溫的香菇勻漿液樣品，其 甲醛含量的變化隨著時間的延長也有增加，但增幅不大。這是因為香菇子實體 在被破碎后，在適宜甲醛代謝相關(guān)酶(Y-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶和半胱氨酰亞砜裂解酶) 表現(xiàn)活力的溫度下，酶活力增加，發(fā)生的酶促反應(yīng)使甲醛大量代謝產(chǎn)生。因此，
在香菇樣品的前處理過程中，若不對酶活力加以控制，將對最終的檢測結(jié)果產(chǎn) 生很大的影響。
現(xiàn)有技術(shù)中檢測香菇中甲醛含量的方法主要有分光光度比色法、高效液相
色譜(HPLC)法。
分光光度比色法通過蒸餾將甲醛從香菇樣品中提取后，用乙酰丙酮試劑將 甲醛衍生反應(yīng)生成黃色的化合物，使用分光光度計于414nm下測定相應(yīng)的吸收 值，定量檢測樣品中提取得到的甲醛含量。
HPLC法通過蒸餾從香菇樣品中提取甲醛，用DNPH (2,4-二硝基苯肼)將 甲醛衍生成在紫外區(qū)有特征強吸收的腙類化合物，將這一衍生產(chǎn)物用HPLC進(jìn) 行分離，于355nm通道的紫外檢測器檢測，根據(jù)所得的色譜圖以目標(biāo)峰峰面積 來對甲醛進(jìn)行定量。
上述方法均未考慮到香菇樣品在粉碎及前處理過程中香燕中的內(nèi)生甲醛在 酶的作用下大量產(chǎn)生的影響，造成檢測值往往高于實際含量。
因此，找到一種準(zhǔn)確的檢測方法，是有效地控制香菇及其制品甲醛含量在 安全范圍的前提，是關(guān)系到廣大消費者身體健康且迫切需要解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為了解決現(xiàn)有檢測技術(shù)的不足，提供了一種能夠準(zhǔn)確檢測香燕中甲 醛含量的方法，可真實地反映香菇中甲醛的含量，適用于鮮菇樣品或干菇制品 中甲醛的檢測。
本發(fā)明方法包括下列步驟
a.樣品處理
把鮮香菇置于4'C預(yù)冷30分鐘，在冰水浴中破碎勻漿，用冰水稀釋燕漿， 經(jīng)分散機分散置于冰水浴中；
或把干香菇粉碎，使其細(xì)度達(dá)200目以上，加冰水混合搖勻；
b.滅酶經(jīng)處理的香菇樣品置于10(TC沸水浴中，放置5分鐘；
C.破壁滅酶處理后的樣品置于冰水浴中冷卻，用超聲破碎細(xì)胞壁，4。C放 置12小時；
d. 對漿料離心，取上清夜；對上清夜進(jìn)行HPLC分離、測定；
e. 根據(jù)色譜圖中甲醛吸收峰面積計算得出香菇樣品中的甲醛含量。
本發(fā)明方法的樣品前處理過程均在冰水浴環(huán)境下進(jìn)行，可避免勻漿過程產(chǎn) 生的熱量使勻漿液溫度升高引起Y -谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶和半胱氨酰亞砜裂解酶表現(xiàn)高 活性，而催化產(chǎn)生甲醛，尤其是在香菇子實體細(xì)胞被超聲破碎之后，如不控制 勻漿液溫度，甲醛將在短時間內(nèi)大量產(chǎn)生。將待測樣品在作滅酶處理前保持低 溫，可有效地控制相關(guān)酶活性，避免因酶催化作用而產(chǎn)生甲醛使檢測結(jié)果失真 的情況發(fā)生。
酶遇熱易失活。將經(jīng)過前處理的香菇勻漿液在IO(TC沸水浴中放置5 min, 可保證酶的活力完全喪失。
經(jīng)滅酶處理的樣品應(yīng)立即置于冰水浴中冷卻。因香燕勻漿液經(jīng)過高溫滅酶 處理后，整體都處于高溫狀態(tài)，此時甲醛也處于高的飽和蒸汽壓狀態(tài)，應(yīng)立即 降溫收斂，防止甲醛揮發(fā)損失。
冷卻后的樣品用超聲儀滿功率(100W)超聲30min，破碎香菇子實體細(xì)胞， 甲醛分子即從細(xì)胞組織中溶出，并溶于浸提水中。將超聲處理后的樣品于4"C下 放置過夜，使甲醛更完全地溶出擴散到周圍水環(huán)境中。
將放置12小時后的樣品離心取上清液，進(jìn)行常規(guī)HPLC分離和檢測-往上 清液中加入0.5ml 0.05%的DNPH乙腈溶液衍生劑，于60。C水浴中衍生反應(yīng) 15min。將衍生后的反應(yīng)液冷卻，過膜。HPLC色譜條件
進(jìn)樣量20pL;
流動相乙腈水=60 : 40;
流速lml mirf1; 檢測波長355nm。
本方法將香菇樣品的整個前處理過程控制在低溫環(huán)境中進(jìn)行，可有效地抑 制相關(guān)酶活性，避免因酶催化作用而產(chǎn)生甲醛；將樣品在沸水浴中高溫滅酶能 使酶的活力完全喪失，使香菇子實體細(xì)胞的破碎過程和甲醛檢測過程不再受到 酶的影響；結(jié)合使用HPLC分離甲醛和紫外檢測器檢測，能夠準(zhǔn)確測定香菇中 甲醛含量，可真實地反映香菇甲醛含量，適用于鮮香菇樣品或干香菇制品中甲 醛的檢測。
具體實施例方式
實施例l
稱取500g鮮香菇樣品，4"C預(yù)冷30min后放入勻漿機中，在冰水浴環(huán)境下 勻漿。秤取5g勻漿液加入到盛有50ml預(yù)冷水的具塞三角瓶中，用分散機進(jìn)行 分散后放置于冰水中。
將分散后的鮮菇勻漿液在10(TC沸水浴中高溫滅酶5min，取出用冰水降溫 冷卻。
將滅酶、冷卻后的勻漿液用超聲儀滿功率(100W)超聲30min，取出于4
"C下放置12小時。
將放置12小時的樣品取出，6000rpm離心5min。吸取lml上清液于具塞比 色管中，加入0.5ml0.05。/。的DNPH乙腈溶液衍生劑，于6(TC水浴中衍生反應(yīng) 15min，流水冷卻，過膜，進(jìn)樣HPLC分離和檢測。
HPLC色譜條件
進(jìn)樣量20nL;
流動相乙腈水=60 : 40;
流速lml min-1;
檢測波長355nm。
根據(jù)色譜圖中甲醛吸收峰面積計算得出該鮮香菇樣品中的甲醛含量為
2.68mg/kg。
對照實驗采用傳統(tǒng)的方法(即通過蒸餾從香恭樣品中提取甲醛，進(jìn)行HPLC 分離、測定)對相同鮮香菇樣品進(jìn)行檢測，測定甲醛含量為23.06mg/kg。
說明使用本發(fā)明的方法，由于消除了樣品處理過程中相關(guān)酶的影響，得到 的測定結(jié)果明顯低于對照方法，更接近樣品中的甲醛實際含量。
實施例2:
稱取50g干香菇樣品，用粉碎機粉碎至200目。秤取5g干菇粉加入到盛有
50ml預(yù)冷水的具塞三角瓶中，搖勻。
將搖勻后的樣品在IO(TC沸水浴中高溫滅酶5min，取出用冰水降溫冷卻。 將滅酶、冷卻后的勻漿液用超聲儀滿功率(100W)超聲30min，取出于4
t:下放置12小時。
將放置12小時后的樣品取出，6000rpm離心5min。吸取lml上清液于具塞 比色管中，加入0.5ml0.05。/。的DNPH乙腈溶液衍生劑，于6(TC水浴中衍生反應(yīng) 15min，流水冷卻，過膜，進(jìn)樣HPLC分離和檢測。
H
PLC色譜條件
進(jìn)樣量20pL;流動相乙腈水=60 : 40;
流速lml mirf1; 檢測波長355nm。 根據(jù)色譜圖中甲醛吸收峰面積計算得出該干香菇樣品中的甲醛含量為: 384.55mg/kg。
權(quán)利要求
1、一種檢測香菇中甲醛含量的方法，其特征在于包括下列步驟a.樣品處理把鮮香菇置于4℃預(yù)冷30分鐘，在冰水浴中破碎勻漿，用冰水稀釋菇漿，經(jīng)分散機分散置于冰水浴中；或把干香菇粉碎，使其細(xì)度達(dá)200目以上，加冰水混合搖勻；b.滅酶經(jīng)處理的香菇樣品置于100℃沸水浴中，放置5分鐘；c.破壁滅酶處理后的樣品置于冰水浴中冷卻，用超聲破碎細(xì)胞壁，4℃放置12小時；d.對漿料離心，取上清夜；對上清夜進(jìn)行HPLC分離、測定；e.根據(jù)色譜圖中甲醛吸收峰面積計算得出香菇樣品中的甲醛含量。
2、 如權(quán)利要求l所述檢測香菇中甲醛含量的方法，其特征在于步驟c中用超聲 儀以功率100W超聲30分鐘。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種檢測香菇中甲醛含量的方法，適用于鮮香菇樣品或干香菇制品中甲醛的檢測。本發(fā)明方法包括下列步驟在冰水浴中對樣品進(jìn)行處理、100℃沸水浴中高溫滅酶、超聲破碎子實體細(xì)胞、HPLC分離、測定甲醛含量。本方法將香菇樣品的整個前處理過程控制在低溫環(huán)境中進(jìn)行，可有效地抑制相關(guān)酶活性，避免因酶催化作用而產(chǎn)生甲醛；將樣品在沸水浴中高溫滅酶能使酶的活力完全喪失，使香菇子實體細(xì)胞的破碎過程和甲醛檢測過程不再受到酶的影響；結(jié)合使用HPLC分離甲醛和紫外檢測器檢測，能夠準(zhǔn)確檢測出香菇中的甲醛含量。
文檔編號G01N30/02GK101196496SQ20071016477
公開日2008年6月11日 申請日期2007年12月17日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月17日
發(fā)明者勵建榮, 胡子豪 申請人:浙江工商大學(xué)