專利名稱：蚯蚓回避毒性測試盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及環(huán)境樣品的生物毒性測試技術(shù)，尤其是一種蚯蚓回避毒性 測試盒。
背景技術(shù)：
蚯蚓是土壤動物區(qū)系的代表類群，在土壤生態(tài)系統(tǒng)中具有重要的作用。從 生態(tài)學(xué)上來看，蚯蚓處于陸地生態(tài)食物鏈的底部，對大部分污染物都具有富集 作用。利用蚯蚓作為土壤環(huán)境的指示生物，可以提供一個保護(hù)整個土壤動物區(qū) 系的安全閥值。以蚯蚓作為指示生物，對農(nóng)藥等可能有害物進(jìn)行毒性篩選，以 評價可疑物對土壤動物的毒性影響，已成為一種國際公認(rèn)的生物學(xué)監(jiān)測方法。 目前，常用的蚯蚓毒性篩選方法有-(1) 蚯蚓急性毒性試驗該方法是將三月齡以上、生殖帶明顯、體長5 6cm，體重350 400mg、 實驗前已在人工土壤中適應(yīng)24小時的健康蚯蚓放入標(biāo)準(zhǔn)人工土壤(組成成分為 石英砂70%，高嶺土20%，苔蘚草碳土10%，以碳酸轉(zhuǎn)調(diào)節(jié)PH為6.0士0.5) 與測試物混合配制的人工土壤中，培養(yǎng)14天后測定蚯蚓的死亡率，計算LCs。。 該方法操作簡單，可以反映測試物對蚯蚓的最大毒性危害，但由于土壤生態(tài)系 統(tǒng)中有害物存在的劑量常常相對較低， 一般達(dá)不到致死劑量，該指標(biāo)往往難于 反映測試物對土壤生物的實際毒性影響。(2) 蚯蚓慢性毒性試驗 該試驗方法與蚯蚓急性毒性試驗相似，但測試物的作用劑量小于急性毒性試驗，培養(yǎng)時間一般為28或56天。測定指標(biāo)主要有蚯蚓體重增長率、蚯蚓產(chǎn) 卵量及蚯蚓卵孵化量等指標(biāo)。該方法雖然能反映測試物在低劑量、長時間作用 下，對蚯蚓的慢性毒害，但試驗時間較長，條件不易控制。上述方法雖然能夠反映有害物質(zhì)對蚯蚓的可能毒性，但測定都未考慮蚯蚓 行為對測試物毒性的影響。自然環(huán)境中，動物對有害物質(zhì)的應(yīng)激機制與植物最 顯著的區(qū)別在于動物能夠借助回避行為來盡可能地降低有害物質(zhì)對自身的危害。蚯蚓長期生活在潮濕的土壤中，表皮的角質(zhì)層較普通陸生生物更薄，而且 還有許多與外界相通的腺孔，對土壤中的某些刺激性污染物非常敏感， 一旦刺 激強度達(dá)到其忍受限度，即出現(xiàn)逃逸或遷移行為以躲避危害。因此，如果不考 慮動物對有害物質(zhì)的回避行為，僅利用蚯蚓急性毒性和慢性毒性試驗來測定和 評價有害物質(zhì)對土壤動物的毒性影響，可能會導(dǎo)致評價結(jié)果與實際影響的偏差。 尤其是當(dāng)有害物誘導(dǎo)蚯蚓出現(xiàn)回避行為的劑量，與誘發(fā)蚯頓急性、慢性毒性的 劑量相差較大時，這種偏差將更加嚴(yán)重。
實用新型內(nèi)容
本實用新型的目的在于提供一種用于蚯蚓回避行為測定的蚯蚓回避毒性測 試盒，它能夠反映蚯蚓對測試物的回避行為，以測定有害物質(zhì)對蚯頓的行為毒 性；對蚯蚓急性、慢性和行為毒性數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合評價，能就測試物對土壤動物 的生態(tài)風(fēng)險進(jìn)行準(zhǔn)確評價。
本實用新型提出的蚯蚓回避毒性測試盒，具有盒體，盒體由位于中間的主 室和圍繞周圍均勻布置且與主室相接的側(cè)室構(gòu)成，盒體上連接一個其上均勻分 布有微孔的盒蓋，每個側(cè)室與主室之間由供蚯蚓自由出入的小門連通，相鄰的 側(cè)室之間由其上有出入孔的塑料片分隔，主室中插接有封閉主室的主室塞。
所述的盒體由主室和八個大小一致的側(cè)室相連而成；每個側(cè)室與主室相接 的下端部分預(yù)留16X12mm的出入小門。
本實用新型結(jié)構(gòu)簡單實用、使用快速安全，降低人為判斷的主觀因素，可 以反映蚯蚓回避行為對測試物毒性的反應(yīng)強度，測定時間僅為兩天，可同時進(jìn) 行多劑量測定，適合于快速、大規(guī)模的毒性篩選和監(jiān)測工作。


圖l是依據(jù)本實用新型提出的蚯蚓回避毒性測試盒的外形示意圖2是圖1中主室塞的示意圖3是圖1中測試盒的盒蓋示意圖4是圖1中測試盒的盒體結(jié)構(gòu)示意具體實施方式
本實用新型由主室塞l、盒蓋2和盒體3組成，材料為不透光的聚四氟乙烯塑 料。封閉主室的主室塞l為可插入主室的塞子；盒蓋2為均勻分布lXlmm微孔的遮光蓋板，以保證測試期間蚯蚓既能透氣，又防止蚯弼l逃逸；盒體3為主室和八 個大小一致的側(cè)室相連組成，每個側(cè)室與主室相接的下端部分預(yù)留16X 12mm的 出入小門3.2，使主室中的蚯蚓能夠自由進(jìn)入側(cè)室；相鄰的側(cè)室以留有16X6mm 出入孔的塑料片3. l進(jìn)行分隔，以保證蚯蚓能夠在各側(cè)室中自由遷移。
具體實施方法為1)、將測試物與標(biāo)準(zhǔn)人工土壤混合配制成人工土壤，分 別放入測試盒的側(cè)室，以形成土壤染毒梯度，放置時應(yīng)注意各側(cè)室間應(yīng)預(yù)留一 個側(cè)室作為對照側(cè)室；2)、將不含測試物的標(biāo)準(zhǔn)土壤分別放入預(yù)留下的對照側(cè) 室中；3).將已在標(biāo)準(zhǔn)人工土壤中適應(yīng)24小時的健康蚯蟲引放入蚯弼l回避毒性測 試盒的主室，待蚯蟲引全部進(jìn)入側(cè)室后，將主室塞插入主室，以保證蚯頓只能在 各側(cè)室間遷移；4)、 48小時后觀察并記錄各側(cè)室中蚯頓的數(shù)量，完成測試過程。
蚯蚓具有不喜群居的習(xí)性，蚯蚓在測試盒各側(cè)室中的分布主要受密度制約， 當(dāng)側(cè)室中蚯蚓的密度過大時，蚯蚓就會遷入密度較小的側(cè)室。由于各側(cè)室的空 間基本一致，蚯蚓在各側(cè)室中的密度制約也應(yīng)相近，因此，當(dāng)測試盒中側(cè)室的 土壤中不含誘發(fā)蚯蚓回避行為的物質(zhì)時，蚯蚓在各側(cè)室中的分布率不會出現(xiàn)顯 著區(qū)別。但當(dāng)測試盒中各側(cè)室的土壤含有誘發(fā)蚯蚓回避行為的物質(zhì)并形成染毒 梯度后，蚯蚓在各側(cè)室中的分布除了受到密度制約，還受到蚯蚓回避行為的制 約，如側(cè)室中染毒土壤的污染物刺激強度達(dá)到其忍受限度，蚯蚓將出現(xiàn)逃逸行 為以躲避危害。在各側(cè)室中密度制約相近的條件下，蚯蚓在各側(cè)室中的分布將 主要受污染物刺激強度的制約，其分布率將決定于蚯蚓回避行為的強度。通過 測定蚯蚓在測試側(cè)室與對照側(cè)室中的分布率，進(jìn)行統(tǒng)計分析，可測出誘發(fā)蚯蚓 回避行為的測試物濃度。
權(quán)利要求1、蚯蚓回避毒性測試盒，具有盒體，其特征在于盒體(3)由位于中間的主室和圍繞周圍均勻布置且與主室相接的側(cè)室構(gòu)成，盒體上連接一個其上均勻分布有微孔的盒蓋(2)，每個側(cè)室與主室之間由供蚯蚓自由出入的小門(3.2)連通，相鄰的側(cè)室之間由其上有出入孔(3.1)的塑料片分隔，主室中插接有封閉主室的主室塞(1)。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蚯蚓回避毒性測試盒，其特征在于盒體由主室和八個大小一致的側(cè)室相連而成。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的蚯蚓回避毒性測試盒，其特征在于每個側(cè)室與主室相接的下端部分預(yù)留16X12mm的出入小門(3.2)。
專利摘要一種蚯蚓回避毒性測試盒，具有盒體，盒體(3)由位于中間的主室和圍繞周圍均勻布置且與主室相接的側(cè)室構(gòu)成，盒體上連接一個其上均勻分布有微孔的盒蓋(2)，每個側(cè)室與主室之間由供蚯蚓自由出入的小門(3.2)連通，相鄰的側(cè)室之間由其上有出入孔(3.1)的塑料片分隔，主室中插接有封閉主室的主室塞(1)；本實用新型結(jié)構(gòu)簡單實用、使用快速安全，降低人為判斷的主觀因素，可以反映蚯蚓回避行為對測試物毒性的反應(yīng)強度，測定時間僅為兩天，可同時進(jìn)行多劑量測定，適合于快速、大規(guī)模的毒性篩選和監(jiān)測工作。
文檔編號G01N33/00GK201083730SQ20072010503
公開日2008年7月9日 申請日期2007年9月24日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月24日
發(fā)明者惠 付, 周世萍, 李任波, 段昌群, 陳玉惠 申請人:西南林學(xué)院