專利名稱：：抗紅細(xì)胞同種抗體的多重檢測的制作方法抗紅細(xì)胞同種抗體的多重檢測
背景技術(shù)：
：當(dāng)次要血型抗原(如Jk，Rh，Kell,Kidd和Duffy)被引入到敏化的受體時(shí)，能誘發(fā)自身抗體和/或同種抗體，引起自身免疫溶血性貧血、溶血性貧血、新生兒溶血病和溶血性輸血反應(yīng)。先前的輸血或懷有抗原陽性胎兒可導(dǎo)致致敏。這些同種抗體一般通過檢測受體血清、接著在分別的凝集試驗(yàn)中，對照一系列已知表型的紅細(xì)胞(RBC)來才企測和鑒定(例如，抗Jka抗體可以通過確定患者血清是否與Jka+RBC反應(yīng)而不與Jka-RBC反應(yīng)來養(yǎng)定)。通過選擇各種抗原表型的RBC的多種樣品，檢測臨床上重要的同種抗體的存在或缺失是可能的。凝集試驗(yàn)通常在溶液中進(jìn)行，即在試管中進(jìn)行。試管凝集反應(yīng)的數(shù)據(jù)判讀需要熟練的和有經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員，特別是當(dāng)反應(yīng)更弱時(shí)。然而，近年來，例如凝膠形式和涂覆的固相形式的更新的技術(shù)已被開發(fā)。凝膠技術(shù)是以經(jīng)過葡聚糖-丙烯酰胺凝膠時(shí)紅細(xì)胞的可控凝集反應(yīng)原理為基礎(chǔ)的[JuddWJ,SteinerEA，KnaflPC,MastersC.Thegeltest:useintheidentificationofunexpectedantibodiestobloodgroupantigens(凝月交觀'J試在未子貞津牛到的4十對血型抗原的抗體的鑒定中的應(yīng)用).Immunohematology1998;14:59-62]。在微管中充以凝膠、緩沖液和試劑的混合物。在凝膠頂部，加入患者血清與各種已知的紅細(xì)胞的混合物，接著在可控條件下離心凝膠。在陰性反應(yīng)中，細(xì)胞通過凝膠并在微管底部成團(tuán)。相反地，在陽性反應(yīng)中，紅細(xì)胞在凝膠的各種高度被捕獲，最強(qiáng)的反應(yīng)(最大凝集量)使得無法觀察的遷移最小化，大多數(shù)紅細(xì)胞在凝膠微柱的頂部或接近頂部的位置被捕獲。由Immucor公司開發(fā)的固相系統(tǒng)提供了用于固定人紅細(xì)胞的微孔，并被應(yīng)用在用于檢測針對相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原的IgG紅細(xì)胞抗體的固相檢測中[PlappFV,SinorLT,RachelJM等,Asolidphaseantibodyscreen(固相抗體篩選).AmJClinPathol1984;82:179]。這些孔用化學(xué)偶聯(lián)劑涂覆，以便允許將用戶選定的紅細(xì)胞固定到微孔表面。在促進(jìn)抗原-抗體反應(yīng)的條件下，將被涂覆的孔用包括血清、血漿或其他試劑的血液制品孵育。在孵育后，從孔清洗掉未結(jié)合的多余的免疫球蛋白，加入抗IgG涂覆的指示劑紅細(xì)胞。離心使得指示劑紅細(xì)胞與結(jié)合到固定的紅細(xì)胞層的抗體相接觸。在陽性試驗(yàn)的情況下，在指示物紅細(xì)胞和敏化的固定的細(xì)胞之間形成IgG抗IgG復(fù)合物。作為抗體橋接的結(jié)果，指示物細(xì)胞粘附到固定的細(xì)胞作為第二固定層。在沒有可4企測的抗原-抗體相互作用(陰性試驗(yàn))時(shí)，指示物紅細(xì)胞不與固定的細(xì)胞結(jié)合并以壓緊的扣狀物在孔的底部成團(tuán)。質(zhì)膜在真核細(xì)胞的內(nèi)部和外部環(huán)境之間形成界面。因而，包埋在該膜里的蛋白質(zhì)的功能是多樣的，包括細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)識別、細(xì)胞外信號的接收和轉(zhuǎn)導(dǎo)以及傳遞溶質(zhì)和水分子進(jìn)入和離開細(xì)胞。細(xì)胞表面蛋白質(zhì)種群的多樣性經(jīng)常給應(yīng)用提取的膜蛋白或粗細(xì)胞裂解物進(jìn)行的體外斗企測的開發(fā)帶來困難。紅細(xì)胞膜是包含膜雙層、包埋的蛋白質(zhì)和糖蛋白的陣列以及已知對外部環(huán)境敏感的細(xì)胞骨架蛋白網(wǎng)絡(luò)的復(fù)合層的復(fù)雜結(jié)構(gòu)[Steck,T丄.Theorganizationofproteinsinthehumanredbloodcellmembrane(人紅細(xì)胞膜中的蛋白的組織).J.CellBiol.Vol.62(1974)1-19;Byers，T丄.和Branton,D.Visualizationoftheproteinassociationsintheerythrocytemembraneskeleton(在紅細(xì)胞膜骨架中的蛋白結(jié)合的顯色).Proc.Natl.Acad.Sci.USAvol.82(1985)6153-6157;Seeman,P"Cheng,D.和lies,G.H.Structureofmembraneholesinosmoticandsaponinhemolysis(滲透性溶血和皂香溶血中的膜孔的結(jié)構(gòu)).J.Cell.Biol.vol.56(1973)519-527]。使用編碼完整的細(xì)胞作為探針提供了用于篩選結(jié)合到細(xì)胞表面受體的配體的有吸引力的替代方法，并且提供了適合高通量技術(shù)的微型化和多重化平臺的開發(fā)。紅細(xì)胞內(nèi)包嚢溶質(zhì)作為給藥和藥物尋靶的方法已被廣泛地研究。[IhlerG.M.，Glew,R.H.和Schnure,F.W.Enzymeloadingoferythrocytes(紅纟田胞的酶負(fù)載).PANSvol.70(1973)2663-2666;DeLoach,J.R.,Harris,R丄.和Ihler,G.M.Anerythrocyteencapsulatordialyzerusedinpreparinglargequantitiesoferythrocyteghostsandencapsulationofpesticideinerythrocyteghosts(用于制備大量紅細(xì)胞血影的紅細(xì)胞包嚢透析劑以及紅細(xì)胞血影中包嚢殺蟲劑).AnalyticalBiochemistryvol.102(1980)220-227;Baker,R.REntryofferritinintohumanredcellsduringhypotonichaemolysis(低滲溶血過禾呈中纟失蛋白進(jìn)入人紅細(xì)胞).Naturevol.215(1967)424-425;Marsden,N,V.B.和Ostling，S.G.Accumulationofdextraninhumanredcellsafterhaemolysis(溶血后人紅細(xì)胞中的葡聚糖的積累).Naturevol.184(1959)723-724]。在本方法中利用了這一事實(shí)，即溫和的滲透性溶血誘發(fā)紅細(xì)胞的膜孔隙率的改變，該改變允許與蛋白質(zhì)尺寸大體相同的探針以及小溶質(zhì)分配到紅細(xì)胞內(nèi)部。通過在溶血后適當(dāng)?shù)夭倏v離子強(qiáng)度(等滲條件的恢復(fù))，孔被重新封閉，將被分配的溶質(zhì)永久的捕獲在紅細(xì)胞內(nèi)(也就是紅細(xì)胞血影)。清洗重封的血影除去多余的外部介質(zhì)的溶質(zhì)。應(yīng)用本方法載入熒光標(biāo)記的葡聚糖得到熒光紅細(xì)胞血影，這在文獻(xiàn)中已被報(bào)導(dǎo)了[Doberstein,S.K.等，F(xiàn)luorescenterythrocyteghostsasstandardsforquantitativeflowcytometry(焚光纟工纟田月包血影用作定量流式細(xì)胞術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品).Cytometryvol.20(1995)14-18]。然而，在試驗(yàn)中使用重封血影細(xì)胞要求細(xì)胞表面蛋白質(zhì)及其取向不受血影的制備和溶質(zhì)載入過程的影響。特別地，使用離子強(qiáng)度低的緩沖液或不含鎂離子的緩沖液可能導(dǎo)致分子成分的解聚和膜的內(nèi)翻外折疊，使得產(chǎn)物不能用于當(dāng)前目的。另一個熒光編碼細(xì)胞的方法包括使用可透過膜的親脂染料[Tanaka,Y.禾口Schroit,A.J.Insertionoffluorescentphosphatidylserineintheplasmamembraneofredbloodcells(在紅細(xì)胞的質(zhì)膜中植入熒光磷脂酰絲氨酸).J.Biol.Chem.vol.258(1983)11335-11343;Tokumasu,R和Dvorak,J.Developmentandapplicationofquantumdotsforimmunochemistryofhumanerythrocytes(量子點(diǎn)在人紅細(xì)胞免疫化學(xué)中的開發(fā)及其應(yīng)用).JournalofMicroscopy,vol.211(2003)256-261]以及將反應(yīng)性染料不可逆地共價(jià)連接到細(xì)月包表面[Donald,M.M.等，RBC，slabeledattwobiotindensitiespermitsimultaneousandrepeatedmeasurementsofcirculatingRBCvolume(用兩個密度的生物素標(biāo)記紅細(xì)胞允許同時(shí)測定和重復(fù)測定循環(huán)紅細(xì)胞容積).Transfusion,vol44(2004)431-437;Suzuki,T.和Dale,G.L.Biotinylatederythrocytes:In-vivosurvivalandinvitrorecovery(生物素化紅細(xì)胞體內(nèi)存活和體外回收).Blood,vol.70(1987)791-795]。如果存在任何數(shù)據(jù)的話，那么關(guān)于共價(jià)連接對配體-受體相互作用的影響的報(bào)導(dǎo)很少[Cowley,H.等,Biotinylationmodifiesredcellantigens(生物素化改性紅細(xì)胞抗原).Transfusion，vol.39(1999)163-168]。另外，使用表面編碼方法很難構(gòu)造大量獨(dú)特的密碼，除非，使用一些染料產(chǎn)生許多不同的顏色，編碼反應(yīng)可以被精密地調(diào)節(jié)，或者使用具有不同指紋光語的大的染料庫。因此，人們期望一種能夠只使用少量染料顏色，不需要嚴(yán)格監(jiān)控反應(yīng)的編碼方法。在使用編碼的血影細(xì)胞和二次抗體來顯示樣品中抗體與所述血影的結(jié)合的多重4僉測形式中，血影細(xì)胞的陣列的解碼可以通過例如用流式細(xì)胞儀來實(shí)現(xiàn)[Wagner,F.F.和Flegel,W.A.Principlesandapplicationsofredbloodcellflowcytometry(紅細(xì)月包流式細(xì)月包4義的原理和應(yīng)用).TransfusionMedicineandHemothempyvol.25(1998);Roback,J.D.，Barclay,S.和Hillyer,C.D.AnautomatableplatformforaccurateImmunohematologytestingbyflowcytometry(用于使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行精確免疫血液學(xué)試驗(yàn)的自動化平臺).TransfusionVol.43(2003)918;Roback,J.D.,Barclay,S.和Hillyer,C.D.Improvedmethodforfluorescecytometricimmunohematologytesting(熒光纟田胞免疫血液學(xué)試驗(yàn)的改進(jìn)方法).TransfUsionvol.44(2004)187;Sharon,R.和Fibach,E.QuantitativeflowcytometricAnalysisofABORedCellAntigens(ABO紅細(xì)胞抗原的定量流式細(xì)胞術(shù)分析).Cytometryvol.12(1991)545-549;Arndt,P.A.和Garratty,G.Flowcytofluorometricanalysisinredbloodcellimmunology(紅細(xì)胞免疫學(xué)中的流式細(xì)胞焚光4企測分析).TransfusionMedicineandHemothempyvol.31(2004)]。其它允許原位解碼且伴隨高通量的優(yōu)勢的解碼方法也是人們所期望的。
發(fā)明內(nèi)容公開的是檢測和表征RBC同種抗體的方法，該方法的基礎(chǔ)為產(chǎn)生熒光編碼的具有已知的抗原呈遞的紅細(xì)胞或紅細(xì)胞血影，以及將其用于檢測血液/血清/血漿樣品中抗體的存在，優(yōu)選地使用熒光三明治型的免疫檢測。首先產(chǎn)生熒光RBC或RBC血影的多種群，其中每個種群代表一個與焚光標(biāo)記或編碼唯一地締合的特定的表型。在陽性反應(yīng)情況下，樣品中的同種抗體與編碼的細(xì)胞上的同源抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物。隨后進(jìn)行清洗以除去未結(jié)合的免疫球蛋白，引入與細(xì)胞上捕獲的同種抗體結(jié)合的熒光二次試劑(具有與編碼染料不同的光i普特征)。通過將該結(jié)合與編碼熒光相關(guān)聯(lián)，熒光二次試劑產(chǎn)生的檢測信號可以與特定的細(xì)胞/血影相關(guān)聯(lián)，由此鑒定在這些細(xì)胞上呈遞的抗原以及同源同種抗體。編碼的細(xì)胞的解碼可以使用熒光顯微鏡和2-D圖像分析原位完成，在其中將解碼圖像與分析圖像進(jìn)行比較和相關(guān)聯(lián)(見，如美國專利申請序列號No.09/448,420中被允許的)。附圖的簡要說明圖1是紅細(xì)胞分離和血影細(xì)胞制備的流程圖。圖2是示例性試驗(yàn)方案的流程圖，其中在結(jié)合之后，表面顯示二次抗體的磁珠被用來捕獲陣列中的反應(yīng)性的血影來解碼。圖3是使用血影和二次檢測抗體以三明治的檢測形式來檢測血清中的反應(yīng)性抗體的試驗(yàn)方案的流程圖。具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例概述了編碼的血影細(xì)胞的制備過程以及使用編碼的血影細(xì)胞進(jìn)行檢測的過程。所述過程允許只用一些染料來編碼，不需要嚴(yán)密監(jiān)控反應(yīng)，而且得到的血影在正確的取向呈遞抗原，以便當(dāng)其被用在熒光型免疫4企測中時(shí)4t測樣品中的抗體。該檢測結(jié)果的原位解碼的實(shí)施例也被包括。制備編碼的血影細(xì)胞過程中，優(yōu)選的緩沖液條件(pH接近中性，對于緩沖液有大約等滲的離子強(qiáng)度，鎂離子的濃度在0.1到2mM)幫助保留細(xì)胞表面蛋白質(zhì)的反應(yīng)性和自然取向，并且防止這些蛋白質(zhì)被反轉(zhuǎn)以致于變得難以4妄近。示例性的方法在下面的實(shí)施例I中^L闡明。實(shí)施例1紅細(xì)胞的分離和標(biāo)記的血影細(xì)胞的制備紅細(xì)胞的清洗-貯存緩沖液氯化鈉=4.383g磷酸一鈉=0.345g六水氯化4美=0.203g苯曱基石黃酰氯=0.0435g，溶于500ml蒸餾水。紅細(xì)胞裂解緩沖液石粦酸一鈉=0.69g六水氯化4美=0.203g苯曱基磺酰氯=0.0435g，溶于500ml蒸餾水。紅細(xì)胞封閉溶液氯化鈉=6g,溶于50ml蒸餾水。試驗(yàn)方案i)取1ml貯存緩沖液放入2ml離心管中ii)加入1滴刺手指得到的新鮮血液(25ul),溫和地翻轉(zhuǎn)混合iii)在600-1000g離心2分鐘，除去上清液。加入1.5ml貯存緩沖液，溫和地重懸浮RBC小團(tuán)且重復(fù)離心。丟棄上清液，重復(fù)2次。iv)在貯存緩沖液中配制所期望的熒光溶質(zhì)(或溶質(zhì)混合物)的濃度且將200ul此溶液加入到紅細(xì)胞小團(tuán)。在室溫下孵育5分鐘。v)向(iv)中的溶液中加入1.5mlRBC裂解緩沖液，通過翻轉(zhuǎn)快速混合，在室溫下孵育30svi)向(v)中加入250ulRBC封閉溶液并且翻轉(zhuǎn)混合。vii)在~16,000-20,000g離心3分鐘，丟棄上清液。在1,5ml貯存緩沖液中重懸浮血影細(xì)胞小團(tuán)且重復(fù)離心-再分散循環(huán)3次。viii)將顆粒在lml含有0.13g/L疊氮鈉的最終貯存緩沖液中重懸浮且在使用前一直在2-4。C儲存。血影細(xì)胞可穩(wěn)定的儲存一個月以上。圖1(a)示出所述過程的流程圖。圖1(b)示出尺寸分布，圖1(c)示出使用上述過程編碼的血影細(xì)胞熒光圖。實(shí)施例2:產(chǎn)生編碼的血影細(xì)胞的庫TAMRA標(biāo)記的分子量為3000的葡聚糖(標(biāo)記密度為1mol/mol)從MolecularProbes公司獲得，F(xiàn)ITC標(biāo)記的分子量為4000的葡聚糖(標(biāo)記密度為0.05mol/rnol-0.5/mol/mol)從Sigma-Aldrich公司獲得。使用貝i存緩沖液為每個葡聚糖配制濃度為10mg/ml、2mg/ml、0.4mg/ml、0.08mg/ml和0.016mg/ml的五種不同的母液。使用實(shí)施例1中的配方來制備10個不同的編碼的血影細(xì)胞的種群。這些血影細(xì)胞通過使用流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)來表征其熒光性。分別使用TAMRA和FITC葡聚糖的1:1(v/v)的混合物來產(chǎn)生帶有兩種編碼染料的編碼的血影細(xì)胞。實(shí)施例3:產(chǎn)生磁響應(yīng)的編碼的血影細(xì)胞的庫編碼的血影細(xì)胞可以通過本領(lǐng)域已知的磁性細(xì)胞表面標(biāo)記方法得到不茲性。一些司出售用于》茲性標(biāo)記和分離目標(biāo)細(xì)胞的試劑盒(www.miltenyibiotec.com,www.immunicon.com,www.dvnalbiotech.com)。磁性標(biāo)記的全血細(xì)胞也有商品可獲得(www.diagast.com)。一個特別的所期望的方法利用了抗人IgG涂覆的納米磁珠作標(biāo)記，該納米磁珠在由樣品得到的抗體的結(jié)合之后可被加入，如圖2所概述的。實(shí)施例4:編碼的血影細(xì)胞的解碼方法上面所概述的方法產(chǎn)生了明亮的、光穩(wěn)定的、易于復(fù)合的用熒光編碼的血影。因此，成功的解碼策略包括能夠從混合的細(xì)胞種群中鑒別出單個細(xì)胞種群的任何平臺，該平臺包括如流體細(xì)胞術(shù)的已被常規(guī)地用于表征紅細(xì)胞的常規(guī)連續(xù)探詢(serialinterrogation)技術(shù)?？蛇x地，與2-D圖像分析偶4關(guān)的熒光顯樣i鏡^皮稱作READTM,見美國專利號No.6,797,524;也可見美國專利號No.6,387,707的"ArrayCytometry(陣列細(xì)胞計(jì)量術(shù))"，這兩篇專利共同通過引用被并入]可以被用來解碼。產(chǎn)生細(xì)胞的2-D陣列的各種方法已#^艮導(dǎo)，其包括允許預(yù)制的方法，例如在功能化的基質(zhì)上布點(diǎn)[AlbrechtD.R.等,Photo-andelectropatterningofhydrogel-encapsulatedlivingcellarrays(#1水凝膠包嚢的活細(xì)胞陣列的光和電圖案).LabChipvol.5(2005)111-118;Soen，Y.等，Detectionandcharacterizationofcellularimmuneresponsesusingpeptide-MHCmicroarrays(應(yīng)用肽-MHC孩i陣列4企測和表4正細(xì)胞免疫應(yīng)答).PLOSBiologyvol.1(2003)429-438;Kato,K.等，Immobilizedcultureofnonadherentcellsonanoleylpoly(ethyleneglycol)ether-modifiedsurface(油烯基聚乙二醇醚改性的表面上的非貼壁細(xì)胞的固定化培養(yǎng)).Biotechniquesvol.35(2003)1014-1021],以及在成像纖維上截留[Biran,I.和Walt,D.R.Opticalimagingfiber-basedsinglelivecellarrays:Ahigh-densitycellassayplatform(基于光學(xué)成像纖維的單個活細(xì)胞陣列高密度細(xì)月包才企測平臺).AnalyticalChemistryvol.74(2002)3046-3054]。另外還有動態(tài)的或?qū)崟r(shí)的陣列裝配方法，例如》茲法細(xì)月包選拷，[Tibbe,A.G.J.等，Cellanalysissystembasedonimmunomagneticcellselectionandalignmentfollowedbyimmunofluorescentanalysisusingcompactdisktechnologies(基于免疫磁法細(xì)胞選擇和比對的細(xì)胞分析系統(tǒng)及隨后的應(yīng)用光盤才支術(shù)的免疫熒光分析).Cytometryvol.43(2001)31-37]、孩i流體通道[Shelby,J.R等，Amicrofluidicmodelforsingle-cellcapillaryobstructionbyPlasmodiumfalciparum-infectederythrocytes(凈皮惡性癡原蟲感染的紅細(xì)月包引起的單細(xì)胞毛細(xì)管梗阻的微流體模型).Proc.Nat.Acad.Sci.vol.100(2003)14618-14622]和AC電泳[美國專利號No.6,387,707;Minerick，A.R.Manipulatingandcharacterizationofredbloodcellswithalternatingcurrentfieldinmicrodevices(在孩i裝置中用交流電場搮:縱和表征紅細(xì)胞).Electrophoresisvol.24(2003)3703-3717]。實(shí)施例5:4吏用全血紅細(xì)胞的免疫檢測圖3示出使用全血或RBC血影進(jìn)行免疫檢測的過程流。在本例中，清洗過的全血RBC(表型Fy(a+，b-)，(K-,k+))分別與單克隆的鼠抗Fya和單克隆的鼠抗K(都是由NewYorkBloodCenter(紐約血液中心)的Dr.MarionReed實(shí)驗(yàn)室贈送)反應(yīng)。在這兩種情況下，Cy5標(biāo)記的羊抗小鼠多克隆抗體(JacksonImmunoresearch,WestGrove,PA)凈支用作二次焚光檢測抗體。如所期望的，在抗Fya的情況下看到特定的信號，而在抗K抗體的情況下則沒看到特定信號(結(jié)果沒有示出)。實(shí)施例6:使用編碼的血影的免疫檢測免疫檢測使用由清洗過的全血RBC(表型(M+，N-))制備的血影細(xì)月包和單克隆鼠抗M和抗N抗體(USBiological,Swampscott,MA)4姿如實(shí)施例5中所概述的方法來進(jìn)行。與抗M反應(yīng)產(chǎn)生預(yù)期的熒光信號，而如預(yù)期的，與抗N反應(yīng)在背景上沒有產(chǎn)生任何可檢測的信號。圖7示出使用抗M抗體的免疫檢測完成后的RBC血影的圖像。實(shí)施例7:使用全血紅細(xì)胞和同種血清(allosera)的免疫檢測4吏用已知表型的試劑RBC(0.8%，SurgiscreenOrthoClinicalDiagnostics:Inc.,NJ)和試劑血清(OrthoClinicalDiagnostics,Inc.,NJ)進(jìn)行一系列的免疫檢測。在所有情況下，PE標(biāo)記的羊抗人抗體(JacksonImmunoresearch,WestGrove,PA)(按1:100被稀釋)被用作焚光二次檢測抗體?？贵w陰性的AB血型血清被用作陰性對照。檢測結(jié)果在下面表I中示出。熒光免疫檢測的結(jié)果與已報(bào)導(dǎo)的表型(抗革蘭氏antigmm)相符合。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>應(yīng)該了解，這里的術(shù)語、表達(dá)方式和實(shí)施例僅僅是示例性的而不限制本發(fā)明，因此本發(fā)明的范圍只被后面的權(quán)利要求所限制，且包括與所要求的主題元素相等同的所有內(nèi)容。權(quán)利要求1.一種檢測樣品中同種抗體的方法，包括產(chǎn)生一組不同編碼的紅細(xì)胞或紅細(xì)胞血影，其中不同編碼的細(xì)胞或血影在細(xì)胞膜表面上表達(dá)至少一種抗原，所述抗原不被所述組中其它細(xì)胞或血影表達(dá)；在允許樣品中存在的抗體結(jié)合到所述細(xì)胞膜表面上的所述抗原的條件下暴露所述組于血清、血液或血漿的樣品；以及應(yīng)用靶向所述被結(jié)合的抗體的被標(biāo)記的二次抗體檢測結(jié)合。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其進(jìn)一步包括在結(jié)合之后清洗掉多余的未結(jié)合的樣品的步驟。3.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述編碼是用熒光染料。4.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述二次抗體用熒光染料標(biāo)記。5.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述二次抗體是單克隆的。6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述斥企測步驟使用流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)進(jìn)行或通過顯像所述編碼的細(xì)胞或血影的陣列、顯像所述被結(jié)合的二次抗體以及將所述被結(jié)合的二次抗體的位置與陣列圖像相關(guān)聯(lián)以確定所述組中哪些細(xì)胞或血影與所述樣品中的抗體反應(yīng)來進(jìn)行。7.—種制備編碼的血影細(xì)胞的方法，其包括/人全血分離紅細(xì)胞；用染料溶液孵育所述紅細(xì)胞以編碼紅細(xì)胞表面上的抗原；在裂解液中用裂解液裂解所述紅細(xì)胞；在重封閉溶液中用重封閉溶液重封閉所述裂解的紅細(xì)胞；以及從所述重封閉溶液中分離所述重封閉紅細(xì)胞血影。8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述分離通過離心法進(jìn)行。9.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述裂解液包括如下成分溶于500ml蒸鎦水中的0.69g磷酸一鈉、0.203g六水氯化4美和0.0435g苯曱基磺酰氯。10.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述重封閉溶液包括溶于50ml蒸餾水的6g氯化鈉。11.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述染料溶液是pH值接近中性、大約等滲的離子強(qiáng)度和鎂離子濃度為0.1-2mM的緩沖液。12.如權(quán)利要求7所述的方法，其中所述染料是熒光的。13.如權(quán)利要求7所述的方法，其進(jìn)一步包括在溶液中儲存血影的步驟，所述溶液包括溶于500ml蒸餾水中的4.383g氯化鈉、0.345g磷酸一鈉、0.203g六水氯化鎂和0.0435g苯曱基磺酰氯。14.由權(quán)利要求7到13任一項(xiàng)所述的方法制備的編碼的血影。全文摘要公開了在樣品中檢測抗體的方法，其中抗體靶向由紅細(xì)胞或紅細(xì)胞血影表達(dá)的抗原。本方法不是檢測特定抗原抗體對之間的結(jié)合情況(如傳統(tǒng)的基于凝集作用的試驗(yàn))，而是允許多重檢測針對血型抗原的臨床上重要的同種免疫抗體。特別地，本方法包括產(chǎn)生熒光編碼的具有已知的抗原呈遞的紅細(xì)胞或紅細(xì)胞血影，以及在熒光三明治型的免疫檢測中將其用于檢測血清/血漿中抗體的存在。檢測結(jié)果可使用基于成像技術(shù)的流式細(xì)胞或熒光顯微鏡來讀取。文檔編號G01N33/53GK101365946SQ200780001919公開日2009年2月11日申請日期2007年1月4日優(yōu)先權(quán)日2006年1月6日發(fā)明者蘇堪塔·本納吉申請人:佰爾瑞溶液有限公司