專利名稱：：用于診斷溶血性貧血的工具和方法用于診斷溶血性貧血的工具和方法描述本發(fā)明涉及用于診斷溶血性貧血或其素質(zhì)的方法。其還涉及確定化合物是否能夠在受試者中誘導(dǎo)溶血性貧血的方法和鑒定用于治療溶血性貧血的藥物的方法。此外，本發(fā)明涉及包括代謝物的特征值的數(shù)據(jù)集合、包括所述數(shù)據(jù)集合的數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)和用于診斷溶血性貧血的系統(tǒng)和裝置。最后，本發(fā)明涉及一組代謝物或用于測(cè)定其的工具的用途，其用于制備診斷受試者溶血性貧血的診斷裝置或組合。溶血性貧血由不斷增加的紅細(xì)胞(RBC)破壞引起。根據(jù)該破壞的位置，溶血性貧血分為血管內(nèi)溶血性貧血(當(dāng)溶血發(fā)生在血管內(nèi)時(shí))和血管外溶血性貧血(當(dāng)溶血通過主要在脾內(nèi)的吞噬細(xì)胞進(jìn)行時(shí))。溶血性貧血可以是不同因素的結(jié)果，例如遺傳因素或環(huán)境因素。環(huán)境因素可以是例如，與作為環(huán)境污染結(jié)果的毒性化合物接觸。已知誘導(dǎo)溶血的溶血性貧血的化合物是例如芳香胺類、羥胺或?qū)㈩惡退鼈兊柠}。該類型的溶血性貧血被認(rèn)為是血管外類型。血液學(xué)、臨床和組織病理學(xué)參數(shù)目前用于診斷溶血性貧血的毒理學(xué)研究。具體地，預(yù)示著溶血的溶血性貧血的血液學(xué)參數(shù)是:減少的RBC計(jì)數(shù)、減少的血紅蛋白濃度和減少的血細(xì)胞比容值；增加的平均紅細(xì)胞容積(MCV;=大紅細(xì)胞溶血性貧血)；通常減少的平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC;=低色性溶血性貧血(hypochromichemolyticanemia));增力口的網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(在2-3天內(nèi))；異常紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)的存在，例如紅細(xì)胞大小不均、多染性、球形紅細(xì)胞、異形紅細(xì)胞以及晚幼紅細(xì)胞、海因茨小體的發(fā)生；白細(xì)胞計(jì)數(shù)通常增加。來源于臨床化學(xué)的溶血性貧血的參數(shù)是增加的血清膽紅素水平(主要在血管內(nèi)溶血性貧血的8至10小時(shí)中)；增加的血清乳酸脫氫酶(同工酶l)活性；增加的游離血清血紅蛋白和減少的觸珠蛋白水平(主要在血管內(nèi)溶血性貧血中)；增加的促紅細(xì)胞生成素水平；血紅蛋白尿。溶血性貧血的組織病理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)是特征為紅髓增大和增加的紅細(xì)胞吞噬作用的脾重量的增加；髓外血細(xì)胞生成(主要在肝和脾中)；血鐵黃素蛋白沉著癥(肝、脾、腎)；肝巨噬細(xì)胞的活化；骨髓中增加的紅細(xì)胞生成。臨床病理學(xué)參數(shù)中的這些變化作為紅細(xì)胞破壞的結(jié)果發(fā)生。不存在用于診斷溶血的溶血性貧血的唯一標(biāo)記。溶血性貧血期間發(fā)生的許多生物化學(xué)變化是替換械:破壞的紅細(xì)胞(即網(wǎng)織紅細(xì)胞、異常紅細(xì)胞形態(tài)、促紅細(xì)胞生成素)的病毒生理學(xué)反應(yīng)。然而，在使溶血和病理生理學(xué)體征變得明顯的事件之間存在明顯的時(shí)間間隔。此外，溶血病因的顯著效應(yīng)是顯示臨床體征所必需的。用于有效和可靠地確定溶血性貧血，特別是其早期發(fā)作或素質(zhì)的靈敏而且特異性的方法目前還不可獲得，然而卻是受到高度的期待。因此，本發(fā)明根本的技術(shù)問題可看作是提供用于有效和可靠診斷溶血性貧血和/或其素質(zhì)的工具和方法。技術(shù)問題通過權(quán)利要求中表征的和本文下面描述的實(shí)施方案得以解決。因此，本發(fā)明涉及用于診斷溶血性貧血或其素質(zhì)的方法，該方法包括:(a)測(cè)定懷疑患有溶血性貧血或懷疑具有其素質(zhì)的受試者的受試樣品中脫氧胞苷的量；和(b)將步驟(a)中測(cè)定的量與參照相比較，由此將診斷出溶血性貧血或其素質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明所提及的表述"用于診斷的方法"是指基本上由上述步驟組成的或可包括另外步驟的方法。然而，應(yīng)理解的是在優(yōu)選實(shí)施方案中，方法是離體(即不在人或動(dòng)物身體中實(shí)施的)進(jìn)行的方法。本文中所使用的診斷是指評(píng)估受試者患病的概率。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的，這樣的評(píng)估，盡管優(yōu)選是，但通常不是對(duì)于100%的接受診斷的受試者而言都是正確的。然而，所述術(shù)語(yǔ)要求統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著部分的受試者可被鑒定為患有疾病或具有其素質(zhì)。一部分是否是統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的可由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用熟知的統(tǒng)計(jì)評(píng)估工具例如置信區(qū)間的測(cè)定、p-值測(cè)定、Student氏t-檢驗(yàn)、Mann-Whitney檢驗(yàn)等測(cè)定而無需過多實(shí)驗(yàn)。詳細(xì)內(nèi)容見于Dowdy和Wearden，StatisticsforResearch,JohnWiley&Sons,NewYork1983。優(yōu)選置4言區(qū)間為至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%。p-值優(yōu)選為0.2、0.1、0.05。根據(jù)本發(fā)明的診斷包括相關(guān)疾病或其癥狀的監(jiān)測(cè)、發(fā)汪和分類。監(jiān)測(cè)涉及記錄已診斷的疾病，例如，涉及分析疾病的進(jìn)展、特定治療對(duì)疾病進(jìn)展的影響或疾病期間或在疾病的成功治療之后產(chǎn)生的并發(fā)癥。驗(yàn)證涉;O口強(qiáng)或證實(shí)已使用其他指示劑或標(biāo)記進(jìn)行的診斷。分類涉及根據(jù)癥狀的強(qiáng)度或類型而將診斷劃分為不同的種類。術(shù)語(yǔ)"溶血性貧血，，是指特征為減少的紅細(xì)胞量的受試者的病理生理狀況。優(yōu)選，本文中所使用的溶血性貧血可通過血液學(xué)、臨床病理學(xué)和組織病理學(xué)參數(shù)來表征。預(yù)示著溶血性貧血的血液學(xué)參數(shù)是:減少的RBC計(jì)數(shù)、減少的血紅蛋白濃度和減少的血細(xì)胞比容值；增加的平均紅細(xì)胞容積(MCV;=大紅細(xì)胞溶血性貧血)；任選地，減少的平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC;=低色性溶血性貧血)；增加的網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(在2-3天內(nèi))；異常紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)的存在，例如紅細(xì)胞大小不均、多染性、球形紅細(xì)胞、異形紅細(xì)胞以及晚幼紅細(xì)胞、海因茨小體;白細(xì)胞計(jì)數(shù)任選地增加。來源于臨床化學(xué)的溶血性貧血的參數(shù)是增加的血清膽紅素水平(主要在血管內(nèi)溶血性貧血的8至10小時(shí)中)；增加的血清乳酸脫氫酶(同工酶l)活性；增加的游離血清血紅蛋白和減少的觸珠蛋白水平(主要在血管內(nèi)溶血性貧血中)；增加的促紅細(xì)胞生成素水平；血紅蛋白尿。溶血性貧血的組織病理標(biāo)準(zhǔn)是特征為例如紅髓增大和增加的紅細(xì)胞吞噬作用的脾重量的增加；髓外血細(xì)胞生成(主要在肝和脾中)；血鐵黃素蛋白沉著癥(肝、脾、腎)；肝中巨噬細(xì)胞的活化；骨髓中增加的紅細(xì)胞生成。更優(yōu)選，溶血的溶血性貧血是血管外溶血的溶血性貧血。最優(yōu)選，其由芳族胺類、將類或羥胺類以及其鹽引起，或與所述類型的溶血性貧血的生物化學(xué)和生理學(xué)參數(shù)相似。下列表1給出預(yù)示著人貧血癥的血液學(xué)參數(shù)的參考值表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>下列表2中給出預(yù)示著嚙齒類動(dòng)物(例如大鼠)中貧血癥的血液學(xué)參數(shù)的參考值表2:<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>參考文獻(xiàn)Gretener，P.，ReferenceValuesforHanBrl:WIST(SPF)Rats,2003八月版本，Kuz，minskaya，U.A.和Alekhina,S.M.EffectofChlorocampheneontheIsoenzymeSpectrumofLactateDehydrogenaseintheRatSerumandLiver.EnvironmentalHealthPerspectives,13:127—132，1976，GiglioJ.等人，DepressedPlasmaErytrhopoietinlevelsinratswithhemodynamically-mediatedacuterenalfailure,ActaPhysiol.PharmacolLatinoam.40，299-308,19卯，JelkmannW.等人,Dependenceoferythropoietinproductiononbloodoxygenaffinityandhemoglbinconcentrationinrats，BiomedBiochimActa46，S304-308,1987，WangR-Y等人，Effectsofagingonerythropoietinsecretioninfemalerats,MechanismsofAgeingandDevelopment103，81-90,1998。本文中所使用的"素質(zhì)"是指受試者仍未發(fā)生疾病或任何上述疾病癥狀或其他診斷標(biāo)準(zhǔn)，但將在未來在預(yù)先確定的預(yù)后窗口內(nèi)以某種可能性發(fā)生疾病。預(yù)測(cè)窗口(predictivewindow)是其中受試者將按照預(yù)測(cè)的可能性發(fā)生溶血性貧血的間隔。預(yù)測(cè)窗口可以是在通過本發(fā)明的方法分析后受試者的整個(gè)剩余壽命。然而，優(yōu)選，預(yù)測(cè)窗口是在已獲得將通過本發(fā)明的方法分析的樣品后l個(gè)月、6個(gè)月或1、2、3、4、5或10年的間隔。在素質(zhì)的情況下，所述可能性可與溶血性貧血的統(tǒng)計(jì)表現(xiàn)的可能性顯著不同。優(yōu)選，發(fā)生溶血性貧血的可能性是至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少卯％或100%。素質(zhì)的診斷有時(shí)可以指受試者將發(fā)生疾病的可能性的預(yù)后或預(yù)測(cè)。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"脫氧胞苦"優(yōu)選是指具有下式A中公開的化學(xué)結(jié)構(gòu)的代謝物0H(式A)應(yīng)理解在本發(fā)明的方法中，優(yōu)選測(cè)定除了脫氧胞苷之外的代謝物。本文中所使用的代謝物是指特定代謝物的至少一個(gè)分子到至多為所述特定代謝物的許多分子。還應(yīng)理解，一組代謝物是指其中對(duì)于各代謝物可存在至少一個(gè)分子到至多為許多分子的多種化學(xué)上不同的分子。根據(jù)本發(fā)明的代謝物包括所有種類的有機(jī)或無機(jī)化合物(包括由生物材料例如生物體所包含的化合物)。優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明的代謝物是小分子化合物。更優(yōu)選，假設(shè)涉及多種代謝物，所述多種代謝物代表代謝物組，即在特定時(shí)間和特定條件下由生物體、器官、組織或細(xì)胞包含的代謝物的集合。代謝物是小分子化合物，例如代謝途徑的酶的底物、此類途徑的中間體或通過代謝途徑獲得的產(chǎn)物。代謝途徑在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的并且可在物種間可發(fā)生變化。優(yōu)選，所述途徑包括至少檸檬酸循環(huán)、呼吸鏈、光合作用、光呼吸作用、糖酵解、糖異生、磷酸己糖途徑、氧化性磷酸戊糖途徑、脂肪酸的產(chǎn)生和j5-氧化、尿素循環(huán)、氨基酸生物合成途徑、蛋白質(zhì)降解途徑例如蛋白酶體降解(proteasomaldegradation)、氨基酸降解途徑、下列物質(zhì)的生物合成或除解脂質(zhì)、多聚乙酰(包括例如黃酮類化合物和異黃酮類化合物)、類異戊二烯(包括例如辟類、固醇類、類固醇類、類胡蘿卜素類、葉黃素類)、碳水化合物類、苯丙素類(phenylpropanoids)和衍生物、生物堿類(alcaloids)、苯環(huán)型化合物類、吲咮類、吲咮-硫化合物(indole-sulfurcompound)、紫菜械類、花色素類、激素類、維生素類、輔助因子例如輔基類或電子栽體類、木質(zhì)素、硫代葡萄糖酸鹽類、噤呤類、嘧啶類、核苷類、核苷酸類和相關(guān)分子例如tRNA、microRNA(miRNA)或mRNA。因此，小分子化合物代謝物優(yōu)選由下列種類化合物組成醇類、烷烴類、烯烴類、炔烴類、芳香族化合物、酮類、醛類、羧酸類、酯類、胺類、亞胺類、酰胺類、氰化物類、氨基酸類、肽類、硫醇類、硫酯類、磷酸酯類、硫酸酯類、硫醚類、亞砜類、醚類或上述化合物的組合或衍生物。代謝物中的小分子可以是正常細(xì)胞功能、器官功能或動(dòng)物生長(zhǎng)、發(fā)育或健康所需的初級(jí)代謝物。此外，小分子代謝物還包含具有必要的生態(tài)學(xué)功能的次級(jí)代謝物，例如允許生物體適應(yīng)其環(huán)境的代謝物。此外，代謝物不限定于所述初級(jí)和次級(jí)代謝物，其還包括人造小分子化合物。所述人造小分子化合物來源于外源提供的小分子，其為所施用的或由生物體吸收的但非如上定義的初級(jí)或次級(jí)代謝物的小分子。例如，人造小分子化合物可以是通過動(dòng)物的代謝途徑從藥物獲得的代謝物。此外，代謝物還包括肽類、寡肽類、多肽類、寡核苷酸類和多核苷酸類，例如RNA或DNA。更優(yōu)選，代謝物具有50Da(道爾頓)至30，000Da，最優(yōu)選低于30,000Da、低于20，000Da、低于15,000Da、低于10,000Da、低于8,000Da、低于7,000Da、低于6,000Da、低于5,000Da、低于4,000Da、低于3,000Da、低于2,000Da、低于l，000Da、低于500Da、低于300Da、低于200Da、低于100Da的分子量。然而，優(yōu)選，代謝物具有至少50Da的分子量。最優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明的代謝物具有50Da到至多1,500Da的分子量。除了脫氧胞苷以外的通過本發(fā)明的方法測(cè)定的優(yōu)選代謝物是腎上腺皮質(zhì)類固醇類。特別地，預(yù)期才艮據(jù)本發(fā)明將另外測(cè)定至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇。本文中所用的術(shù)語(yǔ)"腎上腺皮質(zhì)類固醇類"優(yōu)選包括18-羥基皮質(zhì)酮、醛固酮、11-脫氧皮質(zhì)醇、皮質(zhì)醇和可的松。如果待檢查的受試者是人，所述至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇優(yōu)選是皮質(zhì)醇。如果檢查的受試者是嚙齒類動(dòng)物，所述至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇優(yōu)選是18-羥基皮質(zhì)酮或11-脫氧皮質(zhì)醇和，更優(yōu)選將測(cè)定兩種腎上腺皮質(zhì)類固醇。如果一起測(cè)定18-羥基皮質(zhì)酮和11-脫氧皮質(zhì)醇，更優(yōu)選考慮通過基于NMR的技術(shù)或基于抗體的技術(shù)例如ELISA或LC-MS/MS來進(jìn)行測(cè)定。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"受試樣品"是指用于通過本發(fā)明的方法診斷溶血性貧血或其素質(zhì)的樣品。所述受試樣品是生物學(xué)樣品。來自生物來源(即生物學(xué)樣品)的樣品通常包括多種代謝物。用于本發(fā)明的方法的優(yōu)選生物學(xué)樣品是來自體液，優(yōu)選血液、血漿、血清、唾液、尿液或腦脊液的樣品，或通過例如活組織檢查從細(xì)胞、組織或器官產(chǎn)生的樣品。更優(yōu)選，樣品是血液、血漿或血清樣品，最優(yōu)選是血漿樣品。生物學(xué)樣品來源于本文中其他地方詳述的受試者。獲得上述不同類型的生物學(xué)樣品的技術(shù)在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的。例如，可通過血液采集獲得血液樣品，而組織或器官樣品將通過例如活組織檢查獲得。優(yōu)選在將上述樣品用于本發(fā)明的方法之前對(duì)它們進(jìn)行預(yù)處理。如在下面更詳細(xì)描述的，所述預(yù)處理可包^#放或分離化合物或除去過多材料或廢物所需要的處理。合適的技術(shù)包括化合物的離心、提取、分級(jí)分離、超濾、蛋白質(zhì)沉淀之后過濾和純化和/或富集。此外，為了以適合用于化合物分析的形式或濃度提供化合物，進(jìn)行其他預(yù)處理。例如，如果氣相色譜聯(lián)合質(zhì)譜法用于本發(fā)明的方法，需要在進(jìn)行所述氣相色語(yǔ)之前衍生化該化合域技術(shù)人員來說是熟知的。之前描述的經(jīng)預(yù)處理的樣品也由本發(fā)明使用的術(shù)語(yǔ)"樣品"所包括。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"受試者"涉及動(dòng)物，優(yōu)選涉及哺乳動(dòng)物例如小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、倉(cāng)鼠、豬、綿羊、狗、貓、馬、猴或牛以及還優(yōu)選涉及人。更優(yōu)選，受試者是嚙齒目動(dòng)物，最優(yōu)選大鼠。可使用本發(fā)明方法診斷的其他動(dòng)物是魚類、鳥類或爬行類動(dòng)物。優(yōu)選，所述受試者正接觸或者已經(jīng)接觸懷疑能夠誘導(dǎo)溶血性貧血的化合物。已經(jīng)與懷疑誘導(dǎo)溶血性貧血的化合物接觸的受試者可以是例如用于就例如化合物的毒性進(jìn)行篩選測(cè)定的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，例如大鼠。懷疑已與能夠誘導(dǎo)溶血性貧血的化合物接觸的受試者可以是就選擇合適的療法而待診斷的受試者。優(yōu)選，本文中所使用的能夠誘導(dǎo)溶血性貧血的化合物是指芳族胺類或羥胺類。本文中使用的術(shù)語(yǔ)"測(cè)定量"是指測(cè)定由本文中提及的樣品包含的上述代謝物的至少一種特征性質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明的特征性質(zhì)是表征代謝物的物理和/或化學(xué)性質(zhì)包括生物化學(xué)性質(zhì)的特征。此類性質(zhì)包括例如，分子量、粘性、密度、電荷、自旋、光學(xué)活性、顏色、熒光、化學(xué)發(fā)光、元素組成、化學(xué)結(jié)構(gòu)、與其他化合物反應(yīng)的能力、在生物學(xué)讀出系統(tǒng)中引起反應(yīng)的能力(例如，報(bào)告基因的誘導(dǎo))等。所述性質(zhì)的值可用作特征性質(zhì)和可由本領(lǐng)域內(nèi)熟知的技術(shù)來測(cè)定。此外，特征性質(zhì)可以是通過標(biāo)準(zhǔn)運(yùn)算例如算術(shù)計(jì)算(例如乘法、除法或?qū)?shù)運(yùn)算)從代謝物的物理和/或化學(xué)性質(zhì)的值產(chǎn)生的任何特征。最優(yōu)選，至少一個(gè)特征性質(zhì)允許測(cè)定和/或化學(xué)鑒定所述至少一個(gè)代謝物及其量。因此，特征值優(yōu)選也包括涉及從其產(chǎn)生特征值的代謝物豐度的信息。例如，代謝物的特征值可以是質(zhì)語(yǔ)中的峰值。這樣的峰值包含代謝物的特征信息，即質(zhì)荷比(m/z)信息以及與樣品中所述代謝物的豐度(即其量)相關(guān)的強(qiáng)度值。如之前所描述的，可以優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明定量或半定量地測(cè)定受試樣品包含的上述代謝物。關(guān)于定量測(cè)定，基于就本文上面提及的特征性質(zhì)的測(cè)定值可測(cè)定代謝物的絕對(duì)量或精確量或可測(cè)定代謝物的相對(duì)量?？稍诓荒芑虿粫?huì)測(cè)定代謝物的精確量的情況下測(cè)定相對(duì)量。在所述情況中，可測(cè)定其中代謝物存在的量與以第二樣品包含的所述代謝物的第二量相比是增大了還是減少了。因此定量分析代謝物還包括有時(shí)稱為代謝物的半定量分析的分析。此外，本發(fā)明的方法中所使用的測(cè)定優(yōu)選包括在之前提及的分析步驟之前使用化合物分離步驟。優(yōu)選，所述化合物分離步驟產(chǎn)生由樣品包含的代謝物的時(shí)間分辨分離。因此，優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明使用的用于分離的合適技術(shù)包括所有色鐠分離技術(shù)，例如液相色譜(LC)、高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)、薄層色譜、大小排阻或親和色譜。這些技術(shù)對(duì)于本領(lǐng)域內(nèi)技選，LC和/或GC是本發(fā)明方法期望的色傳技術(shù)。用于代謝物此類測(cè)定的合適裝置在本領(lǐng)域中是熟知的。優(yōu)選使用質(zhì)譜，特別是氣相色語(yǔ)質(zhì)傳聯(lián)用(GC-MS)、液相色譜法質(zhì)譜法(LC-MS)、直接輸注質(zhì)譜法或傅里葉變換離子回旋共振質(zhì)語(yǔ)(FT-ICR-MS)、毛細(xì)管電泳質(zhì)語(yǔ)法(CE-MS)、高效液相色譜聯(lián)合質(zhì)譜法(HPLC-MS)、四極質(zhì)譜法、任何連續(xù)聯(lián)合質(zhì)譜法，例如MS-MS或MS-MS-MS、電感耦合等離子體質(zhì)語(yǔ)法(ICP-MS)、熱解質(zhì)譜法(Py-MS)、離子遷移率質(zhì)i普法或飛行時(shí)間質(zhì)鐠法(TOF)。最優(yōu)選，如下面詳細(xì)所述4吏用LC-MS和/或GC-MS。所述才支術(shù)7>開于例如Nissen，JournalofChromatographyA，703，1995:37-57，US4,540,884或US5,397,894,其公開內(nèi)容通過引用合并入本文。作為備選技術(shù)或除了質(zhì)i普技術(shù)以外可將下列技術(shù)用于化合物的測(cè)定核磁共振(NMR)、磁共振成像(MRI)、傅里葉變換紅外分析(FT-IR)、紫外線(UV)光譜法、折光率(RI)、熒光檢測(cè)、放射性化學(xué)檢測(cè)、電化學(xué)檢測(cè)、光散射(LS)、分散式拉曼光譜術(shù)或火焰電離檢測(cè)(FID)。這些技術(shù)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是熟知的且可使用而無需另外的實(shí)驗(yàn)。本發(fā)明的方法優(yōu)選可通過自動(dòng)化技術(shù)輔助。例如，可通過機(jī)器人自動(dòng)進(jìn)行樣品處理或預(yù)處理。優(yōu)選通過合適的計(jì)算機(jī)程序和數(shù)據(jù)庫(kù)輔助數(shù)據(jù)處理和比較。之前在本文中所述的自動(dòng)化允許在高通量方法中使用本發(fā)明的方法。此外，代謝物還可通過特定的化學(xué)或生物學(xué)測(cè)定法來測(cè)定。所述測(cè)定法包括允許特異性檢測(cè)樣品中至少一種代謝物的方法。優(yōu)選，所述方法能夠特異性識(shí)別代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu)或能夠基于其與其他化合物反應(yīng)的能力或其在生物學(xué)讀出系統(tǒng)中引起反應(yīng)(例如，報(bào)告基因的誘導(dǎo))的能力特異性鑒定代謝物。能夠特異性識(shí)別代謝物化學(xué)結(jié)構(gòu)的工具優(yōu)選是抗體或與化學(xué)結(jié)構(gòu)特異性相互作用的其他蛋白質(zhì)，例如受體或酶。例如，特異性抗體可將代謝物用作抗原通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法來獲得。本文中提及的抗體包括多克隆和單克隆抗體以及其能夠結(jié)合抗原或半抗原的片段，例如Fv、Fab和F(ab)2片段。本發(fā)明還包括人源化雜合體抗體，其中將展示期望的抗原特異性的非人供體抗體的M酸序列與人受體抗體的序列組合。此外，包括單鏈抗體。供體序列通?？砂w的至少結(jié)合抗原的氨基酸殘基，但同樣也可包含供體抗體的其他結(jié)構(gòu)性和/或功能性相關(guān)氨基酸殘基?？赏ㄟ^本領(lǐng)域內(nèi)熟知的幾種方法制備此類雜合體。能夠特異性識(shí)別代謝物的合適蛋白質(zhì)優(yōu)選是參與所述代謝物的代謝轉(zhuǎn)化的酶。所述酶可以使用代謝物作為底物或可以將底物轉(zhuǎn)化成代謝物。此外，所述抗體可以用作產(chǎn)生特異性識(shí)別代謝物的寡肽的基礎(chǔ)。這些寡肽將例如包括用于所述代謝物的酶的結(jié)合結(jié)構(gòu)域或口袋。基于合適的抗體和/或酶的測(cè)定法可以是RIA(》丈射免疫測(cè)定法)、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法)、夾心酶免疫檢測(cè)、電化學(xué)發(fā)光夾心免疫測(cè)定法(ECLIA)、解離增強(qiáng)鑭系熒光免疫分析(dissociation-enhancedlanthanidefluoroimmunoassay,DELFIA)或固相免疫檢測(cè)。此外，還可基于其與其他化合物反應(yīng)的能力(即通過特定的化學(xué)反應(yīng))而鑒定代謝物。此外，由于代謝物在生物學(xué)讀出系統(tǒng)中引起反應(yīng)，可在樣品中測(cè)定其。生物反應(yīng)應(yīng)當(dāng)檢測(cè)為表示由樣品包含的代謝物的存在和/或量的讀出值。生物反應(yīng)可以是例如基因表達(dá)的誘導(dǎo)或細(xì)胞或生物體的表型反應(yīng)。此外，取決于用于測(cè)定代謝物量的技術(shù)，通過測(cè)定技術(shù)來測(cè)定的分析物可在其化學(xué)性質(zhì)方面與樣品中發(fā)現(xiàn)的代謝物不同。此類分析物包括通過用于樣品的預(yù)處理方法或通過這樣的測(cè)定技術(shù)產(chǎn)生的代謝物的衍生物。然而應(yīng)理解，定性或定量測(cè)定的代謝物的所述衍生物(即其為分析物)代表代謝物。關(guān)于上面提及的脫氧胞苷，如果基于質(zhì)鐠的技術(shù)，更優(yōu)選本文中描述的LC-MS和/或GC-MS用作測(cè)定技術(shù)，胞嘧咬和/或ribal(1，4-去7片-2-脫氧-D-赤式-戊-l-enitol)是適合的分析物。因此，為了診斷溶血性貧血或其素質(zhì)，胞嘧淀和/或ribal的量可以優(yōu)選作為脫氧胞苷的替代物而測(cè)定并且可將其與合適的參照相比較，由此，如本文中所提及的將診斷出溶血性貧血或其素質(zhì)。如果在用嘧啶中2。/。的0-曱基羥胺鹽酸鹽和然后N-甲基-N-三曱基曱硅烷基三氟乙酰胺衍生后于70eV應(yīng)用電子碰撞質(zhì)語(yǔ)的GC/MS分析進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，已發(fā)現(xiàn)胞嘧啶和/或ribal(本文下面也稱為"MetID407")為大鼠血漿樣品的分析物。通過下列特征標(biāo)稱質(zhì)量(相對(duì)比):170(100+/畫20%)、169(卯+/-20%)、155(64+/-20%)、103(34+/-20%)、127(18+/-20%)來鑒定Ribal。胞嘧啶和ribal的化學(xué)結(jié)構(gòu)在本領(lǐng)域域內(nèi)是熟知的；參見例如，Smarl991，Biochemistry30:7908-7912。術(shù)語(yǔ)"參照"是指可與溶血性貧血或其素質(zhì)關(guān)聯(lián)的代謝物的特征性質(zhì)的值。優(yōu)選從這樣的樣品獲得此類參照結(jié)果，所述樣品來源于(i)已與芳族胺類、肟類或羥胺類接觸的受試者或(ii)患有血管外溶血性貧血或具有其素質(zhì)的受試者?？赏ㄟ^各局部或全身性施用方式使受試者與芳族胺類、肟類或羥胺類接觸，只要該芳族胺類、肟類或羥胺類是生物可利用的。如上文中所描述的，參照結(jié)果可測(cè)定為代謝物的量。備選地，然而也是優(yōu)選的，參照結(jié)果可從來源于(i)未與芳族胺類、肟類或羥胺類接觸的受試者或(ii)已知未患有血管外溶血性貧血或不具有其素質(zhì)的受試者，即對(duì)于溶血性貧血和同樣更優(yōu)選其他疾病是健康的受試者的樣品獲得。此外，參照也優(yōu)選地可以是經(jīng)計(jì)算的參照，最優(yōu)選，從個(gè)體的群體(包括待調(diào)查的受試者)產(chǎn)生的代謝物的相對(duì)或絕對(duì)量的平均值或中位數(shù)。然而，應(yīng)理解待調(diào)查以測(cè)定經(jīng)計(jì)算的參照的受試者群優(yōu)選由表觀健康的(例如未治療的)的受試者組成或包括大到足以在統(tǒng)計(jì)學(xué)上抗因檢測(cè)受試者存在于所述群體中而引起的顯著的平均值或中位數(shù)的變化的眾多表觀健康的受試者。可如本文中其他地方所指出的測(cè)量所述群體中個(gè)體代謝物的絕對(duì)或相對(duì)量。計(jì)算合適的參照值，優(yōu)選平均值或中位數(shù)的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的。之前提及的受試者群體將包括多個(gè)受試者，優(yōu)選至少5、10、50、100、l，OOO或10,000個(gè)受試者。應(yīng)理解，通過本發(fā)明方法^^斷的受試者和所述多個(gè)受試者的受試者是相同的物種。更優(yōu)選，參照結(jié)果即代謝物的至少一個(gè)特征性質(zhì)的值將存儲(chǔ)于合適的數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)例如數(shù)據(jù)庫(kù)中，從而可用于將來的診斷。這也允許有效地診斷疾病的素質(zhì)，因?yàn)橐坏┐_認(rèn)(在將來)從其獲得相應(yīng)的參照樣品的受試者(的確)發(fā)生溶血性貧血之后，可在數(shù)據(jù)庫(kù)中鑒定到合適的參照結(jié)果。術(shù)語(yǔ)"比較"是指評(píng)估本文上面詳細(xì)描述的測(cè)定結(jié)果(即代謝物的定性或定量測(cè)定結(jié)果)是否與參照結(jié)果相同或相似或與其不同。如果參照結(jié)果獲自來源于(i)已與芳族胺類、肟類或羥胺類接觸的受試者或(ii)患有血管外溶血性貧血或具有其素質(zhì)的受試者的樣品，可基于從受試樣品獲得的試驗(yàn)結(jié)果與上述參照結(jié)果之間的同一性或相似性的程度，即基于與上述代謝物相比的相同或相似的定性或定量組成來診斷溶血性貧血或素質(zhì)。在定量測(cè)定的情況下，如果特征性質(zhì)的值和強(qiáng)度值是相同的，則受試樣品的結(jié)果和參照結(jié)果是相同的。如果特征性質(zhì)的值相同但強(qiáng)度值不同，那么所述結(jié)果是相似的。這樣的差異優(yōu)選是不顯著的并且特征在于強(qiáng)度值在參照值的至少第1到99百分位數(shù)、第5到95百分位數(shù)、第10到卯百分位數(shù)、第20到80百分位數(shù)、第30到70百分位數(shù)、第40到60百分位數(shù)的區(qū)間內(nèi)，參照值的第50、60、70、80、90或95的百分位數(shù)。如果從(i)未與芳族胺類、肟類或羥胺類接觸的受試者或(ii)已知未患有血管外溶血性貧血或不具有其素質(zhì)的受試者獲得參照結(jié)果，可基于從受試樣品獲得的試驗(yàn)結(jié)果和上述參照結(jié)果之間的差異，即與上述代謝物相比定性或定量組成的差異來診斷溶血性貧血或素質(zhì)。如果使用上面詳述的經(jīng)計(jì)算的參照，應(yīng)用相同的診斷。差異可以是代謝物絕對(duì)量或相對(duì)量的增加(有時(shí)稱為代謝物的上調(diào)；也參見實(shí)施例)或代謝物所述量的減少或缺少可檢測(cè)量的代謝物(有時(shí)稱為代謝物的下調(diào)；也參見實(shí)施例)。優(yōu)選，相對(duì)或絕對(duì)量的差異是顯著的，即在參照值第45到第55百分位數(shù)、第40到60百分位數(shù)、第30到70百分位數(shù)、第20到80百分位數(shù)、第10到卯百分位數(shù)、第5到95百分位數(shù)、第1到99百分位數(shù)區(qū)間之外。特別地，與從(i)未與芳族胺類、將類或羥胺類接觸的受試者或(ii)已知未患有血管外溶血性貧血或不具有其素質(zhì)的受試者獲得的參照或經(jīng)計(jì)算的參照相比，脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal量的增加預(yù)示著溶血性貧血。此外，如果已另外測(cè)定所述至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇(例如皮質(zhì)醇、醛固酮、可的松、18-羥基皮質(zhì)酮或ll-脫氧皮質(zhì)醇)，與所述參照相比至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇量的減少預(yù)示著溶血性貧血。關(guān)于本說明書中提及的特定代謝物，在下列表3和下面的實(shí)施例中顯示了相對(duì)量的變化(即"倍數(shù)"變化)的優(yōu)選值或變化的類型(即導(dǎo)致更高或更低的相對(duì)和/或絕對(duì)量的"上"或"下"調(diào))。如果在所W中指出給定的代謝物在受試者中"上調(diào)"，那么相對(duì)和/或絕對(duì)量將增加，如果其"下調(diào)"，那么代謝物的相對(duì)量和/或絕對(duì)量將減少。此外，"倍數(shù)"變化表示增加或減少的程度，例如，2倍增加是指與參照相比代謝物的量是2倍。表3:<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>**:其中分析物胞嘧啶和ribal代表代謝物脫氧胞苷優(yōu)選通過自動(dòng)化技術(shù)輔助比較。例如，可使用包括用于兩個(gè)不同數(shù)據(jù)集(例如包括特征性質(zhì)的值的數(shù)據(jù)集)比較的算法的合適計(jì)算機(jī)程序。此類計(jì)算機(jī)程序和算法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的。雖然如上，但還可手工進(jìn)行比較。用于代謝物測(cè)定的上述方法可在裝置中實(shí)施。本文中所使用的裝置將包括至少上述工具。此外，裝置優(yōu)選還包括用于代謝物經(jīng)檢測(cè)的特征性質(zhì)且也優(yōu)選經(jīng)測(cè)定的信號(hào)強(qiáng)度的比較和評(píng)估的工具。裝置的工具優(yōu)選相互有效連接。如何以有效方式連接工具將取決于裝置所包括工具的類型。例如，當(dāng)使用用于自動(dòng)地定性或定量測(cè)定代謝物的工具時(shí)，通過所述自動(dòng)操作工具獲得的數(shù)據(jù)可通過例如計(jì)算機(jī)程序處理以幫助診斷。優(yōu)選在該情況下工具包含在單個(gè)裝置中。所述裝置因此可包括用于代謝物的分析單元和用于處理所獲得數(shù)據(jù)以進(jìn)行診斷的計(jì)算機(jī)單元。備選地，當(dāng)工具例如測(cè)試條用于測(cè)定代謝物時(shí)，用于診斷的工具可包括對(duì)照條或表，其將測(cè)定的結(jié)果數(shù)據(jù)劃分為上述已知伴隨溶血性貧血或預(yù)示著健康受試者的結(jié)果數(shù)據(jù)。優(yōu)選裝置是可使用而無需?？婆R床醫(yī)師的特殊知識(shí)的裝置，例如只需要裝栽樣品的測(cè)試條或電子裝置。備選地，用于測(cè)定代謝物的方法可以落實(shí)到包含若干裝置的系統(tǒng)中，優(yōu)選地所述裝置彼此間有效連接。特別地，必須以允許進(jìn)行如上詳述的本發(fā)明方法的方式連接工具。因此，本文中所使用的有效連接優(yōu)選指功能性連接。取決于待用于本發(fā)明的系統(tǒng)的工具，所述工具通過允許數(shù)據(jù)在所述工具之間傳送的方式(例如玻璃纖維電纜和用于高通量數(shù)據(jù)傳送的其他線纜)將每一個(gè)工具與另一個(gè)工具連接來進(jìn)行功能性連接。然而，本發(fā)明也考慮工具之間的無線數(shù)據(jù)傳送，例如通過LAN(包括無線LAN、W-LAN)。優(yōu)選系統(tǒng)包括用于測(cè)定代謝物的工具。本文中所使用的測(cè)定代謝物的工具包括用于分離代謝物的工具(例如色譜裝置)和用于代謝物測(cè)定的工具(例如質(zhì)譜裝置)。合適的裝置已在上面進(jìn)行了詳細(xì)描述。本發(fā)明系統(tǒng)中使用的用于化合物分離的優(yōu)選工具包括色鐠裝置，更優(yōu)選用于液相色譜、HPLC和/或氣相色i普的裝置。用于化合物測(cè)定的優(yōu)選裝置包括質(zhì)譜裝置，更優(yōu)選GC-MS、LC-MS、直接輸注質(zhì)譜裝置、FT-ICR-MS、CE-MS、HPLC-MS、四極質(zhì)譜裝置、連續(xù)聯(lián)合質(zhì)譜裝置(包括MS-MS或MS-MS-MS)、ICP-MS、Py-MS或TOF。分離和測(cè)定工具優(yōu)選相互聯(lián)合。最優(yōu)選，LC-MS和/或GC-MS用于在本說明書的其他部分詳細(xì)描述的本發(fā)明的系統(tǒng)中。進(jìn)一步包括的是用于比較和/或分析從代謝物測(cè)定的工具所獲得結(jié)果的工具。用于比較和/或分析結(jié)果的工具可包括至少一個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)和執(zhí)行用于結(jié)果比較的計(jì)算機(jī)程序。上述系統(tǒng)和裝置的優(yōu)選實(shí)施方案也在下面進(jìn)行了詳細(xì)描述。有利地，在本發(fā)明基本的研究中發(fā)現(xiàn)，脫氧胞苷的量用作溶血性貧血，特別是用作由芳族胺類、肟類和羥胺類誘導(dǎo)的溶血性貧血的生物標(biāo)記。除了上述代謝物外，可測(cè)定至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇，由此將更大的改善方法的特異性和精確性。就這些特定的代謝物而言，代謝物組的定量和/定性組成的變化預(yù)示著溶血性貧血或其素質(zhì)。目前用于診斷溶血性貧血的功于本發(fā)明，溶血性貧血可得到更有效和可靠的診斷一一甚至在疾病的病狀變得明顯之前。此外，基于上述發(fā)現(xiàn)，篩選懷疑能夠誘導(dǎo)溶血性貧血的化合物已成為可能，例如在毒理學(xué)評(píng)估中進(jìn)行。此外，所述發(fā)現(xiàn)是用于治療溶血性貧血藥物的篩選測(cè)定法的基礎(chǔ)。因此，本發(fā)明還涉及測(cè)定化合物是否能夠在受試者中誘導(dǎo)溶血性貧血的方法，該方法包括(a)測(cè)定已與懷疑能夠誘導(dǎo)溶血性貧血的化合物接觸的受試者的樣品中脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal的量；和(b)將步驟(a)中測(cè)定的量與參照比較，由此測(cè)定化合物誘導(dǎo)溶血性貧血的能力。此外，本發(fā)明還包括鑒定用于治療溶血性貧血的物質(zhì)的方法，該方法包括步驟(a)測(cè)定已與用于治療溶血性貧血的候選物質(zhì)接觸的患有溶血性貧血受試者的樣品中脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal的量；和(b)將步驟(a)中測(cè)定的量與參照比較，由此鑒定所述物質(zhì)。上面對(duì)術(shù)語(yǔ)的所有定義和解釋加上必要的變更除了在下面另外指出用于上述方法和下面進(jìn)一步描述的所有其他實(shí)施方案。具體地，在鑒定用于治療溶血性貧血的物質(zhì)的方法的情況下，所述參照優(yōu)選來源于(i)已與芳族胺類、肟類或羥胺類接觸的受試者或(ii)患有血管外溶血性貧血的受試者。更優(yōu)選，在受試者樣品和參照中代謝物的不同量預(yù)示著對(duì)治療溶血性貧血有用的物質(zhì)。具體地，與參照相比，脫氧胞苷(或其分析物胞嘧啶和/或ribal)量的減少是用于治療溶血性貧血的藥物的指示。此外，如果已另外測(cè)定所述至少一種糖皮質(zhì)激素(例如皮質(zhì)醇、可的松、醛固酮、18-羥基皮質(zhì)酮或ll-脫氧皮質(zhì)醇)，與所述參照相比至少一種糖皮質(zhì)激素量的增加預(yù)示著對(duì)治療溶血性貧血有用的物質(zhì)。備選地，所述參照優(yōu)選地可來源于(i)未與芳族胺類、肟類或羥胺類接觸的受試者或(ii)已知未患有血管外溶血性貧血或其素質(zhì)的受試者或可以是受試者群體中代謝物的經(jīng)計(jì)算的參照。如果使用這樣的參照，受試樣品和參照中代謝物的相同或相似量預(yù)示著對(duì)治療溶血性貧血有用的物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)"用于治療溶血性貧血的物質(zhì)"是指可直接千擾在溶血性貧血期間誘導(dǎo)的溶血性級(jí)聯(lián)反應(yīng)(hemolyticcascade)的化合物。因此，可抑制溶血酶的活性。備選地，預(yù)期物質(zhì)可通過例如調(diào)節(jié)溶血酶或溶血性貧血期間溶血所需的其他因子的表達(dá)而間接影響溶血性級(jí)聯(lián)反應(yīng)。本文上面提及的物質(zhì)可起拮抗作用，即通過抵消溶血酶或其他因子的效應(yīng)來起作用。有待通過本發(fā)明方法篩選的物質(zhì)可以是有4幾和無機(jī)化學(xué)物質(zhì)，例如小分子、多核苷酸、寡核苷酸、肽、包括抗體或其他人造或生物聚合物的多肽。優(yōu)選，所述物質(zhì)適合作為藥物或前體藥物或用于藥物或前體藥物開發(fā)的前導(dǎo)物質(zhì)(leadsubstance)。應(yīng)理解，如果本發(fā)明的方法將用于鑒定治療溶血性貧血的藥物或用于化合物的毒理學(xué)評(píng)估(即確定化合物是否能夠誘導(dǎo)溶血性貧血)，那么出于統(tǒng)計(jì)學(xué)的原因可調(diào)查多個(gè)受試者的受試樣品。優(yōu)選，這樣的受試者群體中的代謝物組應(yīng)當(dāng)盡可能相同以避免例如由除了待調(diào)查的化合物之外的因子引起的差異。用于所述方法的受試者優(yōu)選是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，例如嚙齒類動(dòng)物，更優(yōu)選大鼠。還應(yīng)理解，優(yōu)選應(yīng)當(dāng)在完成本發(fā)明的方法后處死所述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。受試或參照動(dòng)物組的所有受試者應(yīng)當(dāng)維持在相同的條件下以避免任何不同的環(huán)境影響。用于具有大體相同代謝物組的大鼠的優(yōu)選條件可通過匯適應(yīng)的時(shí)間而提供，所述居住條件是(i)恒溫，(ii)恒濕，(iii)動(dòng)物群體的動(dòng)物的物理隔離，(iv)自由采食，其中喂飼的食物基本上不含化學(xué)或微生物污染物，(v)自由飲用液體，其中飲用的液體基本上不含化學(xué)或微生物污染物，(vi)恒定的光照時(shí)間，和在所述時(shí)間后提供動(dòng)物群體。如上所提及的匯集是指從任何來源選擇動(dòng)物以建立將接受本發(fā)明方法的動(dòng)物群體。因此，所述動(dòng)物可以是相同母親動(dòng)物的后代或不同母親動(dòng)物的后代。如果一個(gè)母親動(dòng)物的單一后代用作來源，那么整個(gè)后代可用于匯集動(dòng)物群體或可以使用經(jīng)選擇的后代動(dòng)物。就動(dòng)物的年齡進(jìn)行本文中所使用的匯集，即群體的所有個(gè)體應(yīng)當(dāng)具有基本上相同的年齡，如下面詳細(xì)描述的。然而，可考慮其他特征。此外，例如體重、大小、性別、總體表現(xiàn)(例如僅可選擇表觀健康的動(dòng)物)?；旧夏挲g相同是指具有相當(dāng)?shù)陌l(fā)育狀態(tài)的動(dòng)物，例如，動(dòng)物可以是胚胎、幼年或成年動(dòng)物。用于本發(fā)明方法的動(dòng)物的優(yōu)選年齡是青春期階段，優(yōu)選青春期早期的年齡。在實(shí)驗(yàn)開始時(shí)動(dòng)物群體的動(dòng)物優(yōu)選具有X士l天的年齡范圍，其中X是動(dòng)物群體的期望年齡。換句話說，群體給定動(dòng)物的年齡應(yīng)當(dāng)比動(dòng)物群體的平均年齡最多大1天或小1天。最優(yōu)選，群體所有動(dòng)物的年齡是X?？赏ㄟ^匯集一胎生下的后代動(dòng)物(即同窩出生仔)或匯集來自同一天的不同胎生下的動(dòng)物而提供這樣的動(dòng)物。如果使用胚胎，應(yīng)理解基本上相同的年齡涉及它們的發(fā)育階段。來自不同物種的胚胎的發(fā)育階段通過本領(lǐng)域內(nèi)熟知的技術(shù)來確定。它們可以例如基于受精的時(shí)間點(diǎn)來計(jì)算。此外，個(gè)體胚胎可根據(jù)已知的形態(tài)學(xué)特征來劃分發(fā)育階段。此外如果使用胚胎，還應(yīng)理解懷有所述胚胎的懷孕母親應(yīng)當(dāng)維持在本文中提及的條件下，如果本發(fā)明方法使用例如大鼠或小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，優(yōu)選動(dòng)物年齡為X土1天，其中X是出生后1至3個(gè)月。最優(yōu)選，X是出生后64天。對(duì)于狗，優(yōu)選年齡(X)應(yīng)當(dāng)為6個(gè)月。根據(jù)本發(fā)明的方法所使用的維持，是指用于動(dòng)物群體的動(dòng)物上的特定居住、飼養(yǎng)、飲水和環(huán)境條件。優(yōu)選將動(dòng)物維持在化學(xué)品監(jiān)測(cè)OECD規(guī)范，第407號(hào)(OECDGuidelinefortheTestingofChemicalsNo:407)中所示的條件下。此外，特定的條件描述如下。i)在相同的恒溫下飼養(yǎng)動(dòng)物群體的所有動(dòng)物。應(yīng)當(dāng)細(xì)心地選擇進(jìn)行本發(fā)明方法的溫度，所述溫度不使動(dòng)物產(chǎn)生應(yīng)激。優(yōu)選，溫度應(yīng)當(dāng)是20-24±30C，更優(yōu)選22士3oC，最優(yōu)選22、23或24^C。ii)此外，在相同的恒定濕度下飼養(yǎng)動(dòng)物群體的所有動(dòng)物。濕度應(yīng)當(dāng)是至少30%，但應(yīng)當(dāng)不超過70%。然而，在罕見的例外情況下(例如在清掃居室或籠子的過程中)濕度可以甚至超過70%。優(yōu)選，濕度為50-60%。已發(fā)現(xiàn)動(dòng)物群體的動(dòng)物的物理隔離對(duì)于本發(fā)明方法也是很重要的。因此，動(dòng)物群體的各動(dòng)物必須維持在分離的空間例如分離的籠中。iv)動(dòng)物群體的動(dòng)物自由取食。使用的食物必須基本上不含有化學(xué)或微生物污染物。在Fed.Reg.第44巻，No.91，1979年5月9日，第27354頁(yè)中規(guī)定了應(yīng)用的標(biāo)準(zhǔn)。最優(yōu)選，微生物污染物例如細(xì)菌低于5xl()S個(gè)細(xì)胞/克食物。這些食物可從瑞士ProvimiKlibaSA購(gòu)買，如GroundKliba小鼠/大鼠飼料"GLP"食品。v)動(dòng)物群體的動(dòng)物自由飲用液體。優(yōu)選，所述液體是水。然而也可使用基于水的其他液體。此類液體可包括例如動(dòng)物所需的營(yíng)養(yǎng)物、維生素或礦物質(zhì)。如果水用作飲用液體，7jc應(yīng)當(dāng)不含有化學(xué)和微生物污染物，如歐洲飲用水管理(EuropeanDrinkingWaterDirective)98/83/EG中規(guī)定的。vi)最后，動(dòng)物群體的每一個(gè)動(dòng)物必須接受相同恒定的光照時(shí)間。恒定的光照優(yōu)選通itA工照明(具有太陽(yáng)色i普)來獲得。光照時(shí)間是12小時(shí)光照然后進(jìn)行12小時(shí)黑暗。然后再開始光照期。因此，優(yōu)選光照期是12小時(shí)光照，例如從6:00至18:00點(diǎn)，和12小時(shí)黑暗，例如從18:00至6:00點(diǎn)?？赏ㄟ^使用針對(duì)裝有物理隔離的動(dòng)物籠子的共同貯存空間來將上述居住條件用于動(dòng)物。所述共同貯存空間可以是動(dòng)物室或動(dòng)物房。在相同房間24中維持群體的所有動(dòng)物，恒定的濕度、溫度和光照期可通過調(diào)節(jié)整個(gè)房間或房屋的這些參數(shù)來容易地獲得。優(yōu)選通過自動(dòng)化技術(shù)來進(jìn)行這些參數(shù)的調(diào)節(jié)，不斷地監(jiān)測(cè)所述參數(shù)。應(yīng)理解在足以適應(yīng)環(huán)境的第一時(shí)期下，必須將動(dòng)物群體的動(dòng)物維持在上述特定居住條件下一段允許動(dòng)物的代謝活動(dòng)同步化的時(shí)期，以便使動(dòng)物適應(yīng)并且具有大體上相同的代謝物組。具體地，所述第一時(shí)期應(yīng)當(dāng)足夠長(zhǎng)以使群體的所有個(gè)體能夠采擬目同的生理節(jié)律、食物消化節(jié)律或靜止/活動(dòng)期。此外，第一時(shí)期應(yīng)當(dāng)允許每一個(gè)動(dòng)物調(diào)整其生物化學(xué)和生理參數(shù)以響應(yīng)使用的環(huán)境條件，例如濕度和溫度。優(yōu)選，所述第一時(shí)期長(zhǎng)度為5至10天，更優(yōu)選6至8天，和最優(yōu)選7天。此外，本發(fā)明還涉及包括代謝物脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal的特征值的數(shù)據(jù)集合。.更優(yōu)選，數(shù)據(jù)集合包括本文其他地方詳述的至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇的特征值。術(shù)語(yǔ)"數(shù)據(jù)集合"是指可以通過物理上和/或邏輯上分組在一起的數(shù)據(jù)的集合。因此，可在單個(gè)數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)中或在物理分離的彼此有效連接的數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)中落實(shí)數(shù)據(jù)集合。優(yōu)選，通過數(shù)據(jù)庫(kù)的方式落實(shí)數(shù)據(jù)集合。因此，本文中所使用的數(shù)據(jù)庫(kù)包括在合適的存儲(chǔ)介質(zhì)上的數(shù)據(jù)集合。此外，數(shù)據(jù)庫(kù)優(yōu)選進(jìn)一步包括數(shù)據(jù)庫(kù)管理系統(tǒng)。數(shù)據(jù)庫(kù)管理系統(tǒng)優(yōu)選是基于網(wǎng)絡(luò)的分級(jí)的或面對(duì)對(duì)象數(shù)據(jù)庫(kù)管理系統(tǒng)。此外，數(shù)據(jù)庫(kù)可以是聯(lián)合的或集成的數(shù)據(jù)庫(kù)。更優(yōu)選，數(shù)據(jù)庫(kù)將以分布式(聯(lián)合式)系統(tǒng)例如Client-Server-系統(tǒng)的形式執(zhí)行。更優(yōu)選，這樣構(gòu)建數(shù)據(jù)庫(kù)以允許搜索算法將試驗(yàn)數(shù)據(jù)集與數(shù)據(jù)集合包括的數(shù)據(jù)集進(jìn)行比較。具體地，通過使用算法可以搜索數(shù)據(jù)庫(kù)(例如查詢搜索)得到指示溶血性貧血或其素質(zhì)的相似或相同數(shù)據(jù)組。因此，如果在數(shù)據(jù)集合中鑒定到相同或相似數(shù)據(jù)集，那么所述試驗(yàn)數(shù)據(jù)集與溶血性貧血或其素質(zhì)相關(guān)聯(lián)。因此，基于從受試者獲得的試驗(yàn)數(shù)據(jù)集從數(shù)據(jù)集合獲得的信息可用于診斷溶血性貧血或其素質(zhì)。本發(fā)明也涉及包括上述本發(fā)明的數(shù)據(jù)集合的數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)"包括基于單個(gè)物理實(shí)體例如CD、CD-ROM、硬盤、光學(xué)存儲(chǔ)介質(zhì)或磁盤的數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)。此外，所述術(shù)語(yǔ)還包括由物理分離的實(shí)體組成的數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)，所述實(shí)體相互之間以提供上述數(shù)據(jù)集合的方式，優(yōu)選以進(jìn)行查詢搜索的合適方式有效連接。本發(fā)明還涉及系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括(a)用于比較樣品代謝物的特征值的工具，其有效連接到(b)如上定義的數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)"系統(tǒng)"涉及相互之間有效連接的不同工具。所述工具可以在單個(gè)裝置中行使功能或可在物理分離的相互之間有效連接的裝置中行使功能。用于比較代謝物特征值的工具優(yōu)選基于用于上述比較的算法而進(jìn)行運(yùn)作。數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)優(yōu)選包括上述數(shù)據(jù)集合或數(shù)據(jù)庫(kù)，其中各存儲(chǔ)的數(shù)據(jù)集預(yù)示著溶血性貧血或其素質(zhì)。因此，本發(fā)明的系統(tǒng)允許鑒定試驗(yàn)數(shù)據(jù)集是否包括在存儲(chǔ)于數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)的數(shù)據(jù)集合中。因此，本發(fā)明的系統(tǒng)可用作診斷溶血性貧血或其素質(zhì)的診斷工具。在系統(tǒng)的優(yōu)選實(shí)施方案中，包括用于測(cè)定樣品代謝物的特征值的工具。術(shù)語(yǔ)"用于測(cè)定代謝物特征值的工具"優(yōu)選涉及用于代謝物測(cè)定的上述裝置，例如質(zhì)譜裝置、NMR裝置或用于進(jìn)行代謝物化學(xué)或生物學(xué)測(cè)定的裝置。本發(fā)明還包括診斷組合，包含脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal或用于測(cè)定其的工具。在所述診斷組合的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述組合還包括至少一種本說明書中其他地方詳述的腎上腺皮質(zhì)類固醇。此外，本發(fā)明還包括診斷裝置，所述裝置包括(a)用于測(cè)定脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal特征值的工具；和(b)基于由(a)的工具測(cè)定的特征值用于診斷溶血性貧血或其素質(zhì)的工具。更優(yōu)選，裝置還包括用于測(cè)定至少一種本文中其他地方詳述的腎上腺皮質(zhì)類固醇特征值的工具。術(shù)語(yǔ)"診斷工具，，優(yōu)選涉及本說明書其他地方詳細(xì)說明的診斷裝置、系統(tǒng)或生物學(xué)或化學(xué)測(cè)定。表述"用于測(cè)定特征值的工具"指能夠特異性識(shí)別代謝物的裝置或試劑。合適的裝置可以是光鐠測(cè)定裝置例如質(zhì)傳、NMR裝置或用于進(jìn)行代謝物化學(xué)或生物學(xué)測(cè)定的裝置。合適的試劑可以是特異性檢測(cè)代謝物的化合物。本文中所使用的檢測(cè)可以是兩步法，即化合物可首先與待檢測(cè)代謝物特異性結(jié)合，其后產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)，例如熒光信號(hào)、化學(xué)發(fā)光信號(hào)、放射性信號(hào)等。對(duì)于可檢測(cè)信號(hào)的產(chǎn)生，可能需要其他化合物，其都包括在術(shù)語(yǔ)"用于檢測(cè)一組代謝物特征值的工具"中。與代謝物特異性結(jié)合的化合物詳細(xì)地描述于本說明書中其他地方，優(yōu)選，包括酶、抗體、配體、受體或與代it物特異性結(jié)合的其他生物分子或化學(xué)物質(zhì)。最后，本發(fā)明涉及脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal或用于測(cè)定其的工具在生產(chǎn)用于診斷受試者溶血性貧血的診斷裝置或組合中的用途。在所述用途的優(yōu)選實(shí)施方案中，除了脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal以外，使用至少一種本文中其他地方詳述的腎上腺皮質(zhì)類固醇。上面提及的所有參考文獻(xiàn)以其全部公開內(nèi)容和上面描述中明確提及的它們的特定公開內(nèi)容通過引用合并入本文。下列實(shí)施例只用于舉例說明本發(fā)明的目的。無論如何，它們不應(yīng)當(dāng)解釋為以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例苯胺i秀導(dǎo)型溶血性貧血的生物標(biāo)記用強(qiáng)飼法以10和100mg/kg體重劑量每天一次對(duì)成組大鼠(雄性和雌性大鼠各5只)給藥苯胺，進(jìn)行28天。將另外的組(雄性和雌性動(dòng)物各5只)用作對(duì)照。在開始處理期之前，使得當(dāng)使用時(shí)62至64天齡的動(dòng)物適應(yīng)居住和環(huán)境條件，進(jìn)行7天。將動(dòng)物群體的所有動(dòng)物維持在相同的恒定溫度(20-24±3。C)和相同的恒定濕度(30-70%)下。動(dòng)物群體的每一只動(dòng)物維持在物理隔離的籠中。動(dòng)物群體的動(dòng)物自由取食。使用的食物基本上不含化學(xué)或微生物污染物。動(dòng)物也自由地飲用水。因此，水不含化學(xué)和微生物污染物，如歐洲飲用水管理98/83/EG中所規(guī)定的。光照期是12小時(shí)光照，然后進(jìn)行12小時(shí)黑暗(從6:00至18:00點(diǎn)的12小時(shí)光照，和從18:00至6:00點(diǎn)的12小時(shí)黑暗)。在第7、14和28天早晨，從禁食麻醉的動(dòng)物的眶后靜脈叢采集血液。從每一只動(dòng)物釆集lml血液，使用EDTA作為抗凝血?jiǎng)?。?duì)樣品進(jìn)行離心以產(chǎn)生血漿。使用氮?dú)飧采w所有血漿樣品，然后于-80。C下貯存直至分析。對(duì)于基于質(zhì)譜的代謝物譜分析，提取血漿樣品，獲得極性和非極性部分。對(duì)于GC-MS分析，在酸性條件下水解非極性部分以產(chǎn)生脂肪酸曱酉旨。在分析前使用曱硅烷基化劑進(jìn)一步衍生兩種部分。在LC-MS分析中，在合適的溶劑混合物中重構(gòu)兩種部分。通過梯度洗脫在反相分離柱上進(jìn)行HPLC。對(duì)于質(zhì)譜檢測(cè)，使用metanomics專有技術(shù)，所述技術(shù)允許進(jìn)行與完全篩選分析平行的靶和高靈敏性MRM(多反應(yīng)監(jiān)測(cè))語(yǔ)分析。方法產(chǎn)生用于半定量分析的215種獨(dú)特的分析物，其中大約80種已知的，大約135種是未知的。此外，產(chǎn)生樣品指紋的數(shù)百種其他分析物包括在本方法中。在全面分析確認(rèn)步驟后，針對(duì)來自庫(kù)樣品的數(shù)據(jù)對(duì)每一種分析物的數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。在整個(gè)過程中平行檢測(cè)這些樣品以解釋方法的可變性。特別針對(duì)性別、劑量組和代謝物，處理組的值的顯著性通過^f吏用Student氏t檢驗(yàn)將處理組的平均值與各自未處理對(duì)照組的平均值進(jìn)行比較而測(cè)定。將標(biāo)準(zhǔn)化的處理組的值和它們的顯著性加入數(shù)據(jù)庫(kù)以進(jìn)行進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)學(xué)和數(shù)據(jù)挖掘處理。在用苯胺處理大鼠后預(yù)示著溶血性貧血的血漿代謝物組的變化示于下表中表4:在使用強(qiáng)飼法以100mg/kg體重/天的劑量用苯胺處理雄性和雌性大鼠28天后觀察到的預(yù)示著溶血性貧血的血漿代謝物組的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>*:對(duì)于pS0.05統(tǒng)計(jì)學(xué)上是顯著的(Student氏t-檢驗(yàn))權(quán)利要求1.用于診斷溶血性貧血或其素質(zhì)的方法，其包括(a)測(cè)定懷疑患有溶血性貧血或具有其素質(zhì)的受試者的受試樣品中脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal的量；和(b)將步驟(a)中測(cè)定的量與參照相比較，由此將診斷出溶血性貧血或其素質(zhì)。2.權(quán)利要求l的方法，其中已使所述受試者與懷疑能夠誘導(dǎo)溶血性貧血的化合物接觸。3.確定化合物是否能夠在受試者中誘導(dǎo)溶血性貧血的方法，其包括(a)測(cè)定已與懷疑能夠誘導(dǎo)溶血性貧血的化合物接觸的受試者其樣品中脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal的量；和(b)將步驟(a)中測(cè)定的量與參照相比較，由此測(cè)定該化合物誘導(dǎo)溶血性貧血的能力。4.權(quán)利要求2或3的方法，其中所述化合物是芳族胺類、肟類或羥胺類。5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中所述參照來源于(i)已與芳族胺類、肟類或羥胺類接觸的受試者或(ii)患有血管外溶血性貧血的受試者。6.權(quán)利要求5的方法，其中受試樣品和參照中脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal的相同或相似量是溶血性貧血或其素質(zhì)的指示。7.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中所述參照來源于(i)未與芳族胺類、肟類或羥胺類接觸的受試者或(ii)已知不患有血管外溶血性貧血或其素質(zhì)的受試者。8.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中所述參照是關(guān)于受試者群體的脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal的經(jīng)計(jì)算的參照。9.權(quán)利要求7或8的方法，其中與參照相比受試樣品中不同量的脫氧胞苷或其分析物胞嘧咬和/或ribal是溶血性貧血或其素質(zhì)的指示。10.權(quán)利要求7至9中任一項(xiàng)的方法，其中與參照相比脫氧胞普或其分析物胞嘧啶和/或ribal量的增加是溶血性貧血的指示。11.權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的方法，其中所述方法還包括測(cè)定至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇。12.權(quán)利要求ll的方法，其中與參照相比所述至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇量的減少是溶血性貧血的指示。13.鑒定用于治療溶血性貧血的物質(zhì)的方法，其包括步驟(a)測(cè)定已與用于治療溶血性貧血的候選物質(zhì)接觸的患有溶血性貧血的受試者其樣品中脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和ribal的量；和(b)將步驟(a)中測(cè)定的量與參照相比，由此將鑒定出藥物。14.權(quán)利要求13的方法，其中所述參照來源于(i)已與芳族胺類、肟類或羥胺類接觸的受試者或(ii)患有血管外溶血性貧血的受試者。15.權(quán)利要求14的方法，其中在受試樣品與參照中不同量的脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal是物質(zhì)用于治療溶血性貧血的指示。16.權(quán)利要求13至15中任一項(xiàng)的方法，其中與參照相比脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal量的減少是物質(zhì)用于治療溶血性貧血的指示。17.權(quán)利要求13至16中任一項(xiàng)的方法，其中所述方法還包括測(cè)定至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇。18.權(quán)利要求17的方法，其中與參照相比所述至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇量的增加是物質(zhì)用于治療溶血性貧血的指示。19.權(quán)利要求13的方法，其中所述參照來源于(i)未與芳族胺類、肟類或羥胺類接觸的受試者或(ii)已知未患有血管外溶血性貧血或其素質(zhì)的受試者。20.權(quán)利要求13的方法，其中所述參照是關(guān)于受試者群體中脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal的經(jīng)計(jì)算的參照。21.權(quán)利要求21或20的方法，其中受試樣品和參照中脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal的相同或相似量是物質(zhì)用于治療溶血性貧血的指示。22.權(quán)利要求1至21中任一項(xiàng)的方法，其中所述溶血性貧血是血管外溶血性貧血。23.權(quán)利要求22的方法，其中所述血管外溶血性貧血是由芳族胺類、肟類或羥胺誘導(dǎo)的。24.權(quán)利要求1至23中任一項(xiàng)的方法，其中所述成組的代謝物的測(cè)定包括質(zhì)"i普法(MS)。25.權(quán)利要求24的方法，其中所述質(zhì)i脊法是液相色語(yǔ)(LC)-MS或氣相色譜(GC)-MS。26.權(quán)利要求1至25中任一項(xiàng)的方法，其中所述樣品是所述受試者體液的才羊品。27.權(quán)利要求26的方法，其中所述體液是血液。28.權(quán)利要求1至27中任一項(xiàng)的方法，其中所述受試者是哺乳動(dòng)物。29.包括脫氡胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal的特征值的數(shù)據(jù)集合。30.權(quán)利要求29的數(shù)據(jù)集合，其還包括至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇的特征值。31.包括權(quán)利要求29或30的數(shù)據(jù)集合的數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)。32.—種系統(tǒng)，其包括(a)用于比較樣品代謝物的特征值的工具，其有效連接至(b)權(quán)利要求31的數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)。33.權(quán)利要求32的系統(tǒng)，還包括用于測(cè)定樣品代謝物的特征值的工具。34.診斷組合，包括脫氧胞苷或其分析物胞嘧咬和/或ribal或用于測(cè)定其的工具。35.權(quán)利要求34的診斷組合，其中所述組合還包括至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇或用于測(cè)定其的工具。36.—種診斷裝置，其包括(a)用于測(cè)定脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal的特征值的工具；和(b)基于通過(a)的工具所測(cè)定的特征值用于診斷溶血性貧血或其素質(zhì)的工具。37.權(quán)利要求36的診斷裝置，其中所述裝置還包括用于測(cè)定至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇的工具。38.脫氧胞苷或其分析物胞嘧啶和/或ribal或用于測(cè)定其的工具在制備用于診斷受試者溶血性貧血的診斷裝置或組合中的用途。39.權(quán)利要求38的用途，其中將進(jìn)一步使用至少一種腎上腺皮質(zhì)類固醇或用于測(cè)定其的工具。全文摘要本發(fā)明涉及用于診斷溶血性貧血或其素質(zhì)的方法。其還涉及測(cè)定化合物是否能夠在受試者中誘導(dǎo)溶血性貧血的方法和涉及鑒定用于治療溶血性貧血的藥物的方法。此外，本發(fā)明還涉及包括代謝物特征值的數(shù)據(jù)集合、包括所述數(shù)據(jù)集合的數(shù)據(jù)存儲(chǔ)介質(zhì)以及用于診斷溶血性貧血的系統(tǒng)和裝置。最后，本發(fā)明涉及一組代謝物或用于測(cè)定其的工具在制備用于診斷受試者溶血性貧血的診斷裝置或組合中的用途。文檔編號(hào)G01N33/53GK101529249SQ200780039935公開日2009年9月9日申請(qǐng)日期2007年6月4日優(yōu)先權(quán)日2006年8月30日發(fā)明者A·普奧考汀,B·范拉文茲韋,E·法比安,E·萊博爾德,G·科埃略巴勒莫庫(kù)尼亞,J·C·威爾莫,M·M·赫羅爾德,R·洛塞,T·B·沃克,V·施特勞斯,W·梅勒特申請(qǐng)人:梅坦諾米克斯有限公司