專利名稱：氯霉素眼用溶液的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于氯霉素眼用溶液的檢測方法，特別屬于含有沒食子酸丙酯的氯 霉素眼用溶液的檢測方法。
技術(shù)背景氯霉素眼用溶液即氯霉素滴眼液，是一種眼部常用的藥品，曾經(jīng)作為0TC 甲類藥品在市場上流通使用，其主要成份為氯霉素、緩沖液、抑菌劑、水，也 有在氯霉素滴眼液中加入玻璃酸鈉、甘油以增強(qiáng)粘度，改善在眼部的保留時間。 《中國藥典》2005年版二部中第778頁公開了氯霉素滴眼液的檢測方法，檢測 項目包括性狀項、鑒別項、檢查項、含量測定項、類別項、規(guī)格項、貯藏項， 在檢査項中包括PH值項、有關(guān)物質(zhì)項、其它項的檢測，在鑒別項中所提供的兩 種鑒別方法均為主藥氯霉素的鑒別方法，方法1為顏色反應(yīng)，方法2為高效液 相色譜法。藥品通常的有效期或保質(zhì)期為2年，而氯霉素滴眼液的有效期只能達(dá)到8 一12個月，這是由于氯霉素滴眼液中氯霉素容易分解成氯霉素二醇物、對硝基 苯甲醛，氯霉素二醇物及對硝基苯甲醛對眼睛有較強(qiáng)的刺激性，影響患者的使 用。通過研究發(fā)現(xiàn)，通過對氯霉素滴眼液中物質(zhì)成份進(jìn)行調(diào)整，可以使氯霉素 滴眼液的有效期提高至2年以上，這些物質(zhì)成份直接影響氯霉素滴眼液的有效 期，對氯霉素滴眼液的質(zhì)量起著重要作用，有些物質(zhì)成份還有一定的輔助治療 作用，但目前中國藥典所記載的氯霉素滴眼液的檢測方法中對這些物質(zhì)沒有進(jìn) 行鑒別或者含量測定，存在著一定的缺陷。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供完整的氯霉素眼用溶液的檢測方法。 本發(fā)明解決技術(shù)問題的技術(shù)方案為氯霉素眼用溶液的檢測方法，包括中國藥典中氯霉素滴眼液所有檢測項目，在鑒別項中，增加了沒食子酸丙酯的鑒別方法。所述的沒食子酸丙酯的鑒別方法為包括預(yù)處理步驟，顏色反應(yīng)鑒別步驟 所述的預(yù)處理步驟為取氯霉素滴眼液，加入混合菌種，在30 — 35'C保溫攪拌不小于30分鐘，過濾沉淀，即可，氯霉素滴眼液與混合菌種體積比為100: 0. 5-5?；旌暇N可以選擇性針對氯霉素滴眼液中氯霉素產(chǎn)生黃色沉淀，而不影響 氯霉素滴眼液中其它的物質(zhì)成份。所述的混合菌種為多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa) CGMCC 1.794、粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens) CGMCC 1.203、大腸埃希氏菌 (Escherichia coli)CGMCC 1. 1246、其擴(kuò)大培養(yǎng)液混合的體積比為6-10: 1-10: 4-8。所述的顏色反應(yīng)步驟為取氯霉素滴眼液濾清液l一5毫升，加入1一2毫 升90-100g/L的乙酸銨溶液，再加入1一5滴的顯色劑，應(yīng)顯紫色。所述的顯色劑為將0. 01克7水合硫酸亞鐵及0. 5克4水合酒石酸鉀鈉用水 稀釋至100毫升即可，臨用前現(xiàn)配。由于沒食子酸丙酯在氯霉素滴眼液中的重量濃度為0. 03%左右，為了更好的 對氯霉素滴眼液中沒食子酸丙酯的用量進(jìn)行控制，還可利用紫外分光光度法， 高效液相色譜法測定沒食子酸丙酯的含量。所述的紫外分光光度法為取經(jīng)過預(yù)處理步驟處理過的氯霉素滴眼液濾清 液10 — 15毫升，加入顯色劑l毫升，用水稀釋到25毫升，搖均，按照紫外一 可見分光光度法(中國藥典附錄IV A)，在540mn的波長處測定吸收度；另取沒食子酸丙酯對照品適量，加水溶解，配制不同的濃度，加入顯色劑l毫升，用水稀釋到25毫升，搖均，測量不同濃度的對照品在540nm的波長處 的吸收度，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，以樣品的吸收度與標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸收度進(jìn)行對比，從 而得出樣品中沒食子酸丙酯的濃度。所述的高效液相色譜法為取經(jīng)過預(yù)處理步驟處理過的氯霉素滴眼液濾清 液適量，用無水甲醇稀釋成每毫升溶液中含有沒食子酸丙酯18-22 u g的溶液， 注入高效液相色儀，記錄色譜圖，色譜條件為以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填 充劑的色譜柱；流動相為體積比為l一2: 98 — 99的乙酸、甲醇，檢測波長280nm;另取沒食子酸丙酯對照品適量，用無水甲醇稀釋成每毫升溶液中含有沒食 子酸丙酯18-22ug的溶液，同法測量，以外標(biāo)法計算氯霉素滴眼液中沒食子酸 丙酯的含量。當(dāng)使用高效液相色譜法測量氯霉素滴眼液的含量后，還可在鑒別項中增加 高效液相色譜鑒別方法，具體為在含量測定項下的沒食子酸丙酯測定中，氯 霉素滴眼液中的沒食子酸丙酯的保留時間應(yīng)與沒食子酸丙酯對照品的保留時間 一致。申請人認(rèn)為沒食子酸丙酯作為抗氧化劑，具有很強(qiáng)的清除溶液中自由基的 作用，通過對氯霉素滴眼液中自由基的消除，能夠使氯霉素滴眼液有效期達(dá)到2 年以上，因此在中國藥典的鑒別項中增加沒食子酸丙酯的鑒別方法，能夠更加 有效的提高中國藥典中氯霉素滴眼液檢測的完整性。由于在氯霉素滴眼液中增加了沒食子酸丙酯能夠提高氯霉素滴眼液的穩(wěn)定 性，故可以將中國藥典中氯霉素的標(biāo)示量規(guī)定為85 — 115%，而不是現(xiàn)行規(guī)定的 標(biāo)示量大于85%即為合格產(chǎn)品，從而避免部分生產(chǎn)廠家采用多加主藥氯霉素的形 式使氯霉素滴眼液在8 — 12個月的有效期內(nèi)標(biāo)示量達(dá)標(biāo)，但導(dǎo)致氯霉素滴眼液 的副作用加大。由于藥品的有效期目前采取備案制度，不同廠家的相同產(chǎn)品的有效期經(jīng)常 不一致，從而使消費者產(chǎn)生困惑，為此，在中國藥典的氯霉素滴眼液的檢測項中增加有效期項，并將有效期定為2年。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，將氯霉素滴眼液中對有效期有影響的沒食子酸丙 酯檢測出來，從而使氯霉素滴眼液的有效期能夠達(dá)到2年以上，有利于氯霉素 滴眼液的檢測標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一，便于廠家的生產(chǎn)、銷售，以及消費者使用。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做詳細(xì)的說明。所述的氯霉素滴眼液的樣品通過以下方法進(jìn)行制備。取氯霉素2.5克，硼酸1.5克，硼砂0.5克，氯化鈉6.5克，沒食子酸丙 酯0. 3克，用水加到1000毫升即可。所述的沒食子酸丙酯對照品從中檢所購買。 實施例l:a) 預(yù)處理步驟 混合菌種的制備取多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa) CGMCC 1.794、粘質(zhì)沙雷氏 菌(Serratia marcescens)'CGMCC 1.203、大腸埃希氏菌(Escherichia coli) CGMCC 1. 1246、其擴(kuò)大培養(yǎng)液混合的體積比為6: 1: 4。(每毫升液體中含有2 XK)7個活性菌體以上)。將混合菌種按照體積比1: 50用水稀釋，將稀釋好的混合菌種按照氯霉素 滴眼液樣品體積的ly。(V/V)加入，在30—35。C保溫攪拌30分鐘，過濾黃色沉淀， 即可。b) 顏色反應(yīng)鑒別步驟取氯霉素滴眼液濾清液1毫升，加入l毫升100g/L 的乙酸銨溶液，再加入l滴顯色劑，溶液顯紫色；所述的顯色劑為將0. 01克7水合硫酸亞鐵及0. 5克4水合酒石酸鉀鈉用水 稀釋至100毫升即可，臨用前現(xiàn)配。實施例2:a) 預(yù)處理步驟 混合菌種的制備取多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa) CGMCC 1.794、粘質(zhì)沙雷氏 菌(Serratia marcescens) CGMCC 1.203、大腸士矣希氏菌(Escherichia coli) CGMCC 1. 1246、其擴(kuò)大培養(yǎng)液混合的體積比為1: 1: 0.8。(每毫升液體中含有 2X1()7個活性菌體以上)。將混合菌種按照體積比1: 50用水稀釋，將稀釋好的混合菌種按照氯霉素 滴眼液樣品體積的296(V/V)加入，在30 — 35°。保溫攪拌30分鐘，過濾黃色沉淀， 即可。b) 紫外分光光度法取經(jīng)過預(yù)處理步驟處理過的氯霉素滴眼液濾清液10毫 升，加入顯色劑1毫升，用水稀釋到25毫升，搖均，按照紫外—可見分光光 度法(中國藥典附錄IV A)，在540nm的波長處測定吸收度；另取沒食子酸丙酯對照品適量，加水溶解，配制成0.01%、 0.02%、 0.03%、 0.04%、 0.05%的濃度，加入顯色劑1毫升，用水稀釋到25毫升，搖均，測量 不同濃度的對照品在540nm的波長處的吸收度，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，以樣品的吸收 度與標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸收度進(jìn)行對比，從而得出樣品中沒食子酸丙酯的濃度。實施例3:a)預(yù)處理步驟混合菌種的制備-取多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa) CGMCC 1.794、粘質(zhì)沙雷氏 菌(Serratia marcescens) CGMCC 1.203、大腸埃希氏菌(Escherichia coli)CGMCC 1. 1246、其擴(kuò)大培養(yǎng)液混合的體積比為6: 5: 4。(每毫升液體中含有2 X107個活性菌體以上)。將混合菌種按照體積比1: 50用水稀釋，將稀釋好的混合菌種按照氯霉素 滴眼液樣品體積的3y。(V/V)加入，在30—35T:保溫攪拌30分鐘，過濾黃色沉淀， 即可。b)高效液相色譜法測定含量取經(jīng)過預(yù)處理步驟處理過的氯霉素滴眼液濾 清液適量，用無水甲醇稀釋成每毫升溶液中含有沒食子酸丙酯20 ug的溶液，注入高效液相色儀，記錄色譜圖，色譜條件為以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填 充劑的色譜柱；流動相為體積比為1.5: 98.5的乙酸、甲醇，檢測波長280nm;另取沒食子酸丙酯對照品適量，用無水甲醇稀釋成每毫升溶液中含有沒食 子酸丙酯20yg的溶液，同法測量，以外標(biāo)法計算氯霉素滴眼液中沒食子酸丙 酯的含量。上面結(jié)合實施例對本發(fā)明進(jìn)行了示例性描述，顯然本發(fā)明具體實現(xiàn)并不受 上述方式的限制，只要采用了本發(fā)明的方法構(gòu)思和技術(shù)方案進(jìn)行的各種非實質(zhì) 性的改進(jìn)，或未經(jīng)改進(jìn)將本發(fā)明的構(gòu)思和技術(shù)方案直接應(yīng)用于其它場合的，均 在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1、氯霉素眼用溶液的檢測方法，包括中國藥典中氯霉素滴眼液所有檢測項目，其特征在于在鑒別項中，增加了沒食子酸丙酯的鑒別方法。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯霉素眼用溶液的檢測方法，其特征在于所述 的沒食子酸丙酯的鑒別方法包括預(yù)處理步驟，顏色反應(yīng)鑒別步驟所述的預(yù)處理步驟為取氯霉素滴眼液，加入混合菌種，在30 — 35。C保溫 攪拌不小于30分鐘，過濾沉淀，即可，氯霉素滴眼液與混合菌種體積比為100: 0. 5-5;所述的混合菌種為多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa) CGMCC 1.794、粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens) CGMCC 1.203、大腸埃希氏菌 (Escherichia coli)CGMCC 1. 1246、其擴(kuò)大培養(yǎng)液混合的體積比為6-10: 1-10: 4-8;所述的顏色反應(yīng)步驟為取氯霉素滴眼液濾清液l一5毫升，加入1一2毫 升90-100g/L的乙酸銨溶液，再加入1一5滴的顯色劑，應(yīng)顯紫色。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯霉素眼用溶液的檢測方法，其特征在于在含 量測定項中，增加沒食子酸丙酯含量的測定方法。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的氯霉素眼用溶液的檢測方法，其特征在于所述的沒食子酸丙酯含量的測定方法為紫外分光光度法、高效液相色譜法。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的氯霉素眼用溶液的檢測方法，其特征在于所述的沒食子酸丙酯含量的測定方法為紫外分光光度法，具體為取經(jīng)過預(yù)處理步 驟處理過的氯霉素滴眼液濾清液10 — 15毫升，加入顯色劑1毫升，用水稀釋 到25毫升，搖均，按照紫外一可見分光光度法(中國藥典附錄IV A)，在 540nm的波長處測定吸收度；另取沒食子酸丙酯對照品適量，加水溶解，配制不同的濃度，加入顯色劑1毫升，用水稀釋到25毫升，搖均，測量不同濃度的對照品在540nm的波長處 的吸收度，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，以樣品的吸收度與標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸收度進(jìn)行對比，從 而得出樣品中沒食子酸丙酯的濃度。
6、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的氯霉素眼用溶液的檢測方法，其特征在于所述 的沒食子酸丙酯含量的測定方法為高效液相色譜，具體為取經(jīng)過預(yù)處理步驟 處理過的氯霉素滴眼液濾清液適量，用無水甲醇稀釋成每毫升溶液中含有沒食 子酸丙酯18-22 ug的溶液，注入高效液相色儀，記錄色譜圖，色譜條件為以 十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；流動相為體積比為1一2: 98—99的 乙酸、甲醇，檢測波長280nm;另取沒食子酸丙酯對照品適量，用無水甲醇稀釋成每毫升溶液中含有沒食 子酸丙酯18-22 ug的溶液，同法測量，以外標(biāo)法計算氯霉素滴眼液中沒食子酸 丙酯的含量。
7、 根據(jù)權(quán)利要求6所述的氯霉素眼用溶液的檢測方法，其特征在于在鑒 別項中增加高效液相色譜鑒別方法，具體為在含量測定項下的沒食子酸丙酯測定中，氯霉素滴眼液中的沒食子酸丙酯的保留時間應(yīng)與沒食子酸丙酯對照品 的保留時間一致。
8、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯霉素眼用溶液的檢測方法，其特征在于所述的氯霉素的標(biāo)示量為85 — 115%。
9、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氯霉素眼用溶液的檢測方法，其特征在于在中國藥典的氯霉素滴眼液的檢測項目中增加有效期項，并將有效期定為2年。
全文摘要
本發(fā)明公開了氯霉素眼用溶液的檢測方法，包括中國藥典中氯霉素滴眼液所有檢測項目，在鑒別項中，增加了沒食子酸丙酯的鑒別方法。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，將氯霉素滴眼液中對有效期有影響的沒食子酸丙酯檢測出來，從而使氯霉素滴眼液的有效期能夠達(dá)到2年以上，有利于氯霉素滴眼液的檢測標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一，便于廠家的生產(chǎn)、銷售，以及消費者使用。
文檔編號G01N33/15GK101216473SQ20081001919
公開日2008年7月9日 申請日期2008年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月16日
發(fā)明者南 方 申請人:南 方