專利名稱：：一種利用銀魚體內(nèi)多種微量元素判別不同產(chǎn)地的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種不同產(chǎn)地銀魚體內(nèi)多種微量元素的判別方法，能較為系統(tǒng)而快速地建立不同水域產(chǎn)銀魚體內(nèi)多種微量元素的積累特性及其地理環(huán)境特征；利用這些特性和特征可以較有效地快速判別來(lái)自于不同產(chǎn)地的銀魚資源群體等內(nèi)容，屬于生物監(jiān)測(cè)環(huán)境
技術(shù)領(lǐng)域：
。技術(shù)背景隨著生活水平的提高，消費(fèi)者對(duì)名特優(yōu)新水產(chǎn)品的需求急劇增加。由于這些水產(chǎn)品生物質(zhì)量往往與其生活和詞養(yǎng)的地理、水環(huán)境等自然因素相關(guān)。特別是同種水產(chǎn)品生物，來(lái)自于不同產(chǎn)地的產(chǎn)品自然其質(zhì)量不同，所受環(huán)境污染的脅迫程度也不同。更重要的是，來(lái)自于原產(chǎn)地品種的市場(chǎng)價(jià)值(如知名度、質(zhì)量、附加值)一般遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于同類其它產(chǎn)品。因，，市場(chǎng)上冒用知名品種的名稱、產(chǎn)地或混入類似品種的現(xiàn)象頻頻發(fā)生；然i，由于目視和遺傳學(xué)方法無(wú)法區(qū)別這些現(xiàn)象，更缺乏快速判別品種、產(chǎn)地的技術(shù)，致使原水產(chǎn)品生產(chǎn)單位利益受損，消費(fèi)者的權(quán)益受到侵害的情況經(jīng)常發(fā)生。這己成為現(xiàn)代漁業(yè)發(fā)展的一個(gè)急需解決的難題。近些年來(lái)，利用電感耦合等離子質(zhì)譜儀(ICP-MS)精密分析儀器已可以較為快速地測(cè)定生物組織中所積累的十?dāng)?shù)到幾十種微量元素。因此，盡快開展相關(guān)研究，并利用這些精密分析技術(shù)于我國(guó)的漁業(yè)科技方面將有可能產(chǎn)生新的突破性進(jìn)展。本發(fā)明所涉及的利用電感耦合等離子質(zhì)譜儀(ICP-MS)測(cè)定不同產(chǎn)地銀魚中多種微量元素的濃度及其高低分布類型，并將這些濃度及類型值歸納出產(chǎn)地的微量元素地理"指紋"特征，并利用這些特征來(lái)進(jìn)行原產(chǎn)地判別技術(shù)，將對(duì)我國(guó)水產(chǎn)品的產(chǎn)地保護(hù)和認(rèn)證、優(yōu)化漁業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)和提高附加值、促進(jìn)水產(chǎn)品質(zhì)量的不斷提高、保護(hù)相關(guān)生產(chǎn)單位和消費(fèi)者的利益等均具有重要的意義。銀魚是太湖的主要經(jīng)濟(jì)魚類，位列"太湖三白"之首，其中以大銀魚(/^otosa^a/7x力j^2ocra/^M)等經(jīng)濟(jì)價(jià)值最高。由于過(guò)去的捕撈強(qiáng)度太大和湖區(qū)水質(zhì)污染的加劇等原因，目前太湖銀魚的資源受到了很大的破壞，不得不通過(guò)政府規(guī)定禁漁期來(lái)保護(hù)。由于太湖所產(chǎn)銀魚肉嫩味鮮，久負(fù)盛名，不僅深得國(guó)內(nèi)消費(fèi)者的青睞，也是太湖出口創(chuàng)匯水產(chǎn)品中的拳頭產(chǎn)品。影響微量元素在魚類體內(nèi)富積的關(guān)鍵因素是其在水體和地質(zhì)環(huán)境中的背景值。這些背景值的差異將導(dǎo)致采自不同地點(diǎn)的銀魚體內(nèi)，來(lái)自其生境的十?dāng)?shù)到幾十種微量元素濃度高低和分布類型(即"指紋")各異。這就為區(qū)別其原產(chǎn)地提供了可能。因此，如果能利用微量元素的環(huán)境"指紋"開發(fā)出一種快速鑒別太湖和非太湖水域、太湖內(nèi)不同區(qū)域原產(chǎn)銀魚的方法，無(wú)疑將為保護(hù)太湖銀魚，提高其附加值、加強(qiáng)其衛(wèi)生質(zhì)量的管理，提供給消費(fèi)者最優(yōu)質(zhì)水產(chǎn)品等提供保障和服務(wù)。近些年來(lái)，利用電感耦合等離子質(zhì)譜儀(ICP-MS)精密分析儀器已可以較為快速地測(cè)定生物組織中所積累的十?dāng)?shù)到幾十種微量元素。因此，盡快開展相關(guān)研究，并利用這些精密分析技術(shù)于我國(guó)的漁業(yè)科技方面將有可能產(chǎn)生新的突破性進(jìn)展。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服上述不足之處，從而提供一種不同產(chǎn)地銀魚體內(nèi)多種微量元素的判別方法，利用電感耦合等離子質(zhì)譜儀測(cè)定不同產(chǎn)地銀魚中多種微量元素的濃度及其高低分布類型，并將這些濃度及類型值歸納出產(chǎn)地的微量元素地理"指紋"特征，并利用這些特征來(lái)進(jìn)行原產(chǎn)地判別；該方法所取得的結(jié)果穩(wěn)定性好，可重復(fù)性高、系統(tǒng)誤差小，可判別性強(qiáng)，不僅克服了目視、遺傳學(xué)等方法無(wú)法判別的局限，而且顯示出了其快速的優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明的主要解決方案是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明一種不同產(chǎn)地銀魚體內(nèi)多種微量元素的判別方法，采用以下工藝步驟1、捕撈不同水域的銀魚，立刻放入清潔的塑料自封袋中并在04。C保存，在此溫度條件下盡快運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室保存；'2、銀魚樣本前處理方法(1)、野外采集并運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室保存采集的銀魚個(gè)體整體標(biāo)本轉(zhuǎn)移于-18-20°(3冰箱內(nèi)保存，待用；(2)、取出銀魚標(biāo)本解凍后用純水沖洗610遍，于60100'C的干燥箱中烘2325h至恒重；將銀魚干樣研磨成粉末，置于干燥器(室溫)中待用；(3)、取0.050.15g銀魚干樣，放入過(guò)的特氟綸(Teflon)分解容器中，4加入1.02.0ml高純硝酸，并在室溫下酸解612小時(shí)，高純硝酸濃度6364%;(4)、用微波爐在230w的條件下消解35次，每次59min，再用純水定容至2030ml為待測(cè)溶液；純水出水的水質(zhì)為電阻率18.2MQ.cm;3、采用電感耦合等離子質(zhì)譜儀測(cè)定待測(cè)溶液中微量元素的濃度值，并計(jì)算出銀魚干樣中的相應(yīng)濃度值；將待測(cè)溶液導(dǎo)入電感耦合等離子質(zhì)譜儀進(jìn)行濃度測(cè)定；用鍺、錒和銦為測(cè)定時(shí)的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)測(cè)定待測(cè)溶液中的鈉、鎂、鉀、鈣、錳、鐵、鈷、銅、鋅、砷和硒濃度；用判別線形函數(shù)值區(qū)別兩水域大銀魚。所述的電感耦合等離子質(zhì)譜儀測(cè)定時(shí)所設(shè)定的狀態(tài)氦氣模式(氦氣流速為4.5mL/min)，等離子氣、載氣和補(bǔ)氣流速分別為15、0.8、0.26L/min。所述的微量元素為鈉、鎂、鉀、鈣、錳、鐵、鈷、銅、鋅、砷和硒。所述的微量元素污染物的含量及鈉、鎂、鉀、鈣、錳、鐵、鈷、銅、鋅、砷和硒濃度值見附表。根據(jù)測(cè)定后微量元素的濃度值，建立判別函數(shù)方程，通過(guò)求解判別函數(shù)值(力，可以判別銀魚屬于那個(gè)水域。本發(fā)明與巳有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明選用太湖和洪澤湖產(chǎn)大銀魚作為判別對(duì)象，采樣方便，前處理方法比較簡(jiǎn)單，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化的前處理方法獲得大銀魚待測(cè)溶液后，可以運(yùn)用大型精密分析儀器電感耦合等離子質(zhì)譜儀(美國(guó)Agilent7500ce型)，快速而精確地同時(shí)測(cè)定指示其中多種微量元素濃度，可較為快速地了解不同產(chǎn)地銀魚的微量元素濃度的高低"指紋"、組分特點(diǎn)、地理特征并建立基于上述數(shù)據(jù)而建立的不同產(chǎn)地銀魚的判別公式。該方法所取得的結(jié)果穩(wěn)定性好，可重復(fù)性高、系統(tǒng)誤差小，可判別性強(qiáng)，不僅克服了目視、遺傳學(xué)等方法無(wú)法判別的局限，而且顯示出了其快速的優(yōu)勢(shì)。本發(fā)明的可靠性和精度用國(guó)家貽貝標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW08571，中國(guó)科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心和國(guó)家海洋局第二海洋研究所)來(lái)確認(rèn)。證明分析方法可靠，精度良好。利用鈉、鎂、鉀、鈣、錳、鐵、鈷、銅、鋅、砷和硒的濃度水平和高低分布"指紋"以及差異，有效地區(qū)別了分別產(chǎn)自太湖和洪澤湖大銀魚群體，并建立了兩地域大銀魚的特有的微量元素地理"指紋"庫(kù)和判別函數(shù)方程。具體實(shí)施方式下面本發(fā)明將結(jié)合實(shí)施例作進(jìn)一步描述實(shí)施例一本發(fā)明一種不同產(chǎn)地銀魚體內(nèi)多種微量元素的判別方法，采用以下工藝步驟太湖大銀魚樣本(9條)于2007年5月間采自貢湖水域。洪澤湖大銀魚樣本(IO條)'于2007年9月間采自老子山水域。兩個(gè)區(qū)域大銀魚樣本均在04'C條件下保存。樣本先測(cè)量體長(zhǎng)、體重等生物學(xué)數(shù)據(jù)。然后于-2(TC冰箱內(nèi)保存隨用。解凍后用超純水(美國(guó)密理博公司，Milliprore-Simplicity個(gè)人型超純水系統(tǒng)，出水電阻率18.2MQ.cm)水沖洗6遍，于80°C的干燥箱中烘24h至恒重；將大銀魚干樣研磨成粉末均一化(即制成粉末狀大銀魚干樣)，置于干燥器(室溫)中待用(可隨用)。精稱0.05g粉末狀大銀魚干樣，放入過(guò)的特氟綸(Tefl。n)分解容器中(曰本SANAI公司)，加入1.5ml高純硝酸(金屬-氧化物-半導(dǎo)體專用高純級(jí)，即MOS級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，并在室溫下酸解6小時(shí)，高純硝酸濃度為63.02%;用微波爐230w狀態(tài)下消解3次，每次7min，再用超純水(美國(guó)密理博公司，Milliprore-Simplicity個(gè)人型超純水系統(tǒng)，出水電阻率18.2MQ.cm)定容至20ml為待測(cè)溶液；采用電感耦合等離子質(zhì)譜儀(美國(guó)安捷倫公司，AgilentICP-MS7500ce型)測(cè)定指示大銀魚干樣中微量元素污染物等的含量和檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)效果。在氦氣(純度99.999%)模式下，將待測(cè)溶液導(dǎo)入電感耦合等離子質(zhì)譜儀(燃?xì)鈿鍤獾募兌?9.999%)進(jìn)行濃度測(cè)定。測(cè)定時(shí)儀器所設(shè)定的狀態(tài)氦氣模式(氦氣流速為4.5mL/min)，等離子氣、載氣和補(bǔ)氣流速分別為15、0.8、0.26L/min;用鍺、錒和銦為測(cè)定時(shí)的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)測(cè)定待測(cè)溶液中鈉、鎂、鉀、鈣、錳、鐵、鈷、銅、鋅、砷和硒的濃度。本研究方法的可靠性和精度用國(guó)家貽貝標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW08571,中國(guó)科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心和國(guó)家海洋局第二海洋研究所)來(lái)確認(rèn)。有效測(cè)得太湖和洪澤湖大銀魚樣本中鈉、鎂、鉀、鈣、錳、鐵、鈷、銅、鋅、砷和硒的水平(見附表l)。兩水域大銀魚上述元素濃度高低分布"指紋"有顯著的地理差異。根據(jù)這些地理差異特征，建立了兩水域大銀魚種群的微量元素"指紋"的判別線形函數(shù)(Z=0.1922CW"0.0511C地-0.0502CK畫0.0084Cor8.2816C她+4.3868C/re+5.1713Cc。+286.7640CCir4.4873Cz+2W.7772C^-28.7044C&，Z:判別函數(shù)值，>0為太湖大銀魚，<0為洪澤湖大銀魚；Cw。，CMg，G，Cc。，C她，CFe，Cc。，Cc，Cz"，Ca，分別表示元素鈉、鎂、鉀、鈣、錳、鐵、鈷、銅、鋅、砷和硒的千重濃度值)。上述函數(shù)區(qū)別兩水域大銀魚的準(zhǔn)確率達(dá)100%。這些利用本發(fā)明所獲得數(shù)據(jù)可以較客觀地區(qū)別不同產(chǎn)地的大銀魚，判別效果良好。實(shí)施例二本發(fā)明一種不同產(chǎn)地銀魚體內(nèi)多種微量元素的判別方法，采用以下工藝步驟太湖大銀魚樣本(9條)于2007年5月間采自貢湖水域。洪澤湖大銀魚樣本(IO條)于2007年7月間采自老子山水域。樣本先測(cè)量體長(zhǎng)、體重等生物學(xué)數(shù)據(jù)。然后于-18x:冰箱內(nèi)保存隨用。解凍后用超純水(美國(guó)密理博公司，Milliprore-Simplicity個(gè)人型超純水系統(tǒng)，出水電阻率18.2MQ.cm)水沖洗8遍，于7(TC的干燥箱中烘23h至恒重；將大銀魚干樣研磨成粉末均一化(即制成粉末狀大銀魚干樣)，置于干燥器(室溫)中待用(可隨用)。精稱0.lg銀魚干樣，放入過(guò)的特氟綸(Teflon)分解容器中(日本SANAI公司)，加入1.2ml高純硝酸(金屬-氧化物-半導(dǎo)體專用高純級(jí)，即MOS級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，濃度63.02%)，并在室溫下酸解9小時(shí)。用微波爐230w狀態(tài)下消解4次，每次7min，再用超純水(美國(guó)密理博公司，Milliprore-Simplicity個(gè)人型超純水系統(tǒng)，出水電阻率18.2MQ.cm)定容至25ml為待測(cè)溶液；采用實(shí)施例一中電感耦合等離子質(zhì)譜儀(美國(guó)安捷倫公司，AgilentICP-MS7500ce型)有效測(cè)得太湖和洪澤湖大銀魚樣本中鈉、鎂、鉀、鈣、錳、鐵、鈷、銅、鋅、砷和硒的水平(附表)。兩水域大銀魚上述元素濃度高低分布"指紋"有顯著的地理差異。根據(jù)這些地理差異特征，建立了兩水域大銀魚種群的微量元素"指紋"的判別函數(shù)，判別準(zhǔn)確率達(dá)100%。同樣證明了利用本發(fā)明所獲得數(shù)據(jù)可以較客觀地區(qū)別不同產(chǎn)地的大銀魚，判別效果良好。實(shí)施例三本發(fā)明一種不同產(chǎn)地銀魚體內(nèi)多種微量元素的判別方法，釆用以下工藝步驟太湖大銀魚樣本(9條)于2007年5月間采自貢湖水域。洪澤湖大銀魚樣本(IO條)于2007年7月間采自老子山水域。樣本先測(cè)量體長(zhǎng)、體重等生物學(xué)數(shù)據(jù)。然后于-2(TC冰箱內(nèi)保存隨用。解凍后用超純水(美國(guó)密理博公司，Milliprore-Simplicity個(gè)人型超純水系統(tǒng)，出水電阻率18.2MQ.cm)水沖洗9遍，于90°C的干燥箱中烘25h至恒重；將大銀魚干樣研磨成粉末均一化(即制成粉末狀大銀魚干樣)，置于干燥器(室溫)中待用(可隨用)。精稱O.15g大銀魚干樣，放入過(guò)的特氟綸(Teflon)分解容器中(日本SANAI公司)，加入1.5ml高純硝酸(金屬-氧化物-半導(dǎo)體專用高純級(jí)，即M0S級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，濃度63.02%)，并在室溫下酸解12小時(shí)。用微波爐230w狀態(tài)下消解5次，每次9min，再用超純水(美國(guó)密理博公司，Milliprore-Simplicity個(gè)人型超純水系統(tǒng)，出水電阻率18.2MQ.cm)定容至30ml為待測(cè)溶液；采用實(shí)施例一中電感耦合等離子質(zhì)譜儀(美國(guó)安捷倫公司，AgilentICP-MS7500ce型)有效測(cè)得太湖和洪澤湖大銀魚樣本中鈉、鎂、鉀、鈣、錳、鐵、鈷、銅、鋅、砷和硒的水平(附表)。兩水域大銀魚上述元素濃度高低分布"指紋"有顯著的地理差異。根據(jù)這些地理差異特征，建立了兩水域大銀魚種群的微量元素"指紋"的判別函數(shù)，判別準(zhǔn)確率達(dá)100%。同樣證明了利用本發(fā)明所獲得數(shù)據(jù)可以較客觀地區(qū)別不同產(chǎn)地的大銀魚，判別效果良好。<table>tableseeoriginaldocumentpage0</column></row><table>權(quán)利要求1.一種不同產(chǎn)地銀魚體內(nèi)多種微量元素的判別方法，其特征是采用以下工藝步驟(1)、捕撈不同水域的銀魚，放入清潔的塑料自封袋中并在0～4℃保存為銀魚標(biāo)本；(2)、銀魚標(biāo)本前處理(a)、將保存的銀魚標(biāo)本轉(zhuǎn)移于-18～-20℃冰箱內(nèi)保存，待用；(b)、取出銀魚標(biāo)本解凍后用水沖洗6～10遍，于60～100℃的干燥箱中烘23～25h至恒重銀魚干樣；將恒重的銀魚干樣研磨成粉末，置于干燥器中待用；(c)、取0.05～0.15g銀魚干樣，放入過(guò)的特氟綸分解容器中，加入1.0～2.0ml高純硝酸，并在室溫下酸解6～12小時(shí)，高純硝酸濃度為63～64％；(d)、用微波爐消解3～5次，每次5～9min，再用純水定容至20～30ml為待測(cè)溶液；純水出水的水質(zhì)為電阻率18.2MΩ.cm；(3)、采用電感耦合等離子質(zhì)譜儀測(cè)定待測(cè)溶液中微量元素的濃度值，并計(jì)算出銀魚干樣中的相應(yīng)濃度值；將待測(cè)溶液導(dǎo)入電感耦合等離子質(zhì)譜儀進(jìn)行濃度測(cè)定；同時(shí)測(cè)定待測(cè)溶液中的鈉、鎂、鉀、鈣、錳、鐵、鈷、銅、鋅、砷和硒濃度值；用判別線形函數(shù)值區(qū)別兩水域銀魚。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種不同產(chǎn)地銀魚體內(nèi)多種微量元素的判別方法，其特征在于所述的微量元素為鈉、鎂、鉀、鈣、錳、鐵、鈷、銅、鋅、石申禾口石西。全文摘要本發(fā)明涉及一種不同產(chǎn)地銀魚體內(nèi)多種微量元素的判別方法，特征是將銀魚標(biāo)本轉(zhuǎn)移于冰箱內(nèi)保存；銀魚標(biāo)本解凍后用水沖洗，于干燥箱中烘至恒重；將大銀魚干樣研磨成粉末置于干燥器中待用；取大銀魚干樣，放入酸洗過(guò)的特氟綸分解容器中，加入高純硝酸，并在室溫下預(yù)備酸解；用微波爐消解，再用超純水定容至待測(cè)溶液；將待測(cè)溶液導(dǎo)入電感耦合等離子質(zhì)譜儀進(jìn)行濃度測(cè)定；測(cè)定大銀魚干樣中11種微量元素的濃度；并建立線形判別函數(shù)方程；通過(guò)計(jì)算出的判別函數(shù)值可以有效區(qū)別不同水域產(chǎn)的大銀魚。本發(fā)明所取得的結(jié)果穩(wěn)定性好，可重復(fù)性高、系統(tǒng)誤差小，可判別性強(qiáng)，不僅克服了目視、遺傳學(xué)等方法無(wú)法判別的局限，而且顯示出了其快速的優(yōu)勢(shì)。文檔編號(hào)G01N1/34GK101275956SQ20081002553公開日2008年10月1日申請(qǐng)日期2008年4月29日優(yōu)先權(quán)日2008年4月29日發(fā)明者劉洪波,健楊申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心