專利名稱：：一種新的西曲依醇(紅杉醇)含量測定方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種儀器分析方法，其具體涉及一種用高效液相色譜蒸發(fā)光散射法測定西曲依醇的含量。
背景技術：
：西曲依醇(又名紅杉醇，sequoyitol)(如圖1)最初由紅豆杉中提取而得，具有降糖效果。但其沒有紫外吸收，因此增加了檢測難度。曾有報道[梁敬鈺，CN1488344A]用柱前衍生化法測定其含量，該方法比較復雜，操作步驟比較繁瑣，并且無法判斷衍生化是否完全和是否得到均一物質，因此，檢測的準確度難以得到保證。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是克服現有的檢測方法繁雜的缺點，提供一種靈敏度適宜，方便檢測西曲依醇含量的高效液相色譜蒸發(fā)光散射測定法。本發(fā)明的目的可以通過以下措施達到色譜條件中固定相用硅膠基質的氨丙基為填充劑；流動相采用甲醇-水或乙腈-水；檢測器采用蒸發(fā)光散射檢測器。其中流動相體系采用甲醇或乙腈與水體積比為95:565:35，流速為0.5~2,mL/min，柱溫為1555'C;其中高效液相色譜蒸發(fā)光散射測定時，蒸發(fā)光散射中漂移管溫度為257(TC，霧化氣體流速為0.5~3L/min。通過研究建立了優(yōu)化的檢測方法，優(yōu)選的指標包括1、其色譜條件中固定相用硅膠基質的氨丙基為填充劑；流動相采用甲醇-水或乙腈-水；檢測器采用蒸發(fā)光散射檢測器。2、流動相體系采用甲醇-水或乙腈-水，體積比為95:5-65:35;其中甲醇與水體積比最優(yōu)比例為75:25，乙腈與水體積比最優(yōu)比例為80:20。3、流動相的流速為0.52mL/min，柱溫為15~55°C;其中最佳流速為lmL/min，柱溫為30°C。4、蒸發(fā)光散射檢測器中，漂移管溫度為257(TC，霧化氣體流速為0.5~3L/min;其中最優(yōu)溫度為4(TC，霧化氣體最佳流速為1L/min。有關本檢測方法的詳細描述，請見以下實驗實例實例一檢測方法的優(yōu)化1.流動相的選擇與優(yōu)化西曲依醇為多羥基環(huán)醇類化合物，有較好的水溶性，因此考察了甲醇或乙腈與水為流動相。結果見表l:表l流動相的選擇編號流動相比例主峰出峰時間(min)分離度理論板數1乙腈-水(90:io)7.5986.81867092乙腈-水(75:25)12.9734.732176253乙腈-水(80:20)10.64810.21114707結果表明當條件l、2、3時主峰都能得到較好的分離，但條件3所用時間相對較少，l的時間最少，但是噪音有點大，主峰有點平頭，故選擇條件3作為分析條件。2.柱溫的選擇將柱溫箱溫度分別設定為30°C、35°C、40'C，結果表明溫度對主峰的出峰時間、峰面積影響很小，由于溫度越高，對色譜柱損害越大，故測定時選擇30。C。實例二新的檢測方法的確認1.標準曲線的制備精密稱取西曲依醇對照品適量于25ml量瓶中，加水7.5ml，搖勻；再加乙腈至刻度，搖勻，得供試品溶液。另取對照品25mg，同法配制對照品溶液。分別量取2)nl、5^1、10^1、15^1、20W、40pl注入液相色譜儀，記錄蒸發(fā)光散射儀檢測的譜圖，以進樣量的對數值(x)為橫坐標，以峰面積的對數值(y)為縱坐標，繪制標準曲線，得到線性方程為y二1.2119x+20.594(y=0.9996)。圖譜見附圖27，數據見表2:表2標準曲線試驗數據<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由以上結果可以看出當進樣量在2.0pg40pg之間時，進樣量對數值與峰面積對數值有良好的線性關系，表明新方法可靠。2.精密度試驗取上述對照品溶液，連續(xù)進樣6次，以峰面積計算RSD，試驗結果如表3:表3精密度試驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>連續(xù)進樣6次的RSD為2.83X，表明儀器的精密度良好，方法可靠。3.穩(wěn)定性稱取西曲依醇樣品適量，按上述方法配制成樣品溶液，每隔一定時<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>從以上結果可以看出24h內樣品峰面積的RSD為2.19%，表明樣品溶液放置24h后仍然穩(wěn)定，因此新方法可以有效進行檢測。4.重復性稱取西曲依醇樣品6份，按前文所述液相色譜蒸發(fā)光散射方法以標準曲線計算含量，圖譜見附圖813，結果如表5:表5重復性試驗數據編號稱樣量(mg)峰面積含量(％)平均含量(％)RSD(。XO19.40427045865.6129.82424706462.54349.248.834226860398105766.1565.8965》02.888.23373146367.0168.90419042668.22結果顯示6次測定的RSD為2.88，表明本方法重復性良好。5.回收率試驗取西曲依醇樣品約25mg，精密稱定，共9份，分別加入適量對照品，按樣品制備方法得到供試品溶液。分別進樣20pl，記錄峰面積，用標準曲線方程計算其含量，由此得到其回收率，結果見表6:表6回收率試驗數據已知含量加入量(mg)測的總量回收率(％)平均回收率RSD(%)(%)16.3218.9935.35108100.215.9418.8163334.375799816.5418.9982635.0546297.4317.2116.5834433.1543196.1217.8415.9794933.1121695.5696.511.8116.5616.1747731細6495.2116.3312.2685227.9878395.0416.7612.7783629.0440296.115.9312.6132827.9024294.9實例三采用新檢測方法對樣品進行含量測定實驗條件高效液相色譜儀(島津SPD-10A)、色譜柱(NUCLEOSIL00-5NH2,4.6X250醒，5pm，柱溫3(TC)、蒸發(fā)光散射檢測器(漂移管溫度40°(〕)，霧化氣體(氮氣，流速1L/min)、流動相(乙腈-水體積比75:25，使用前經0.45pm微孔濾膜過濾并脫氣30mins)、進樣體積:2(Hi1。測定法取本品約50mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加水2.5ml.，搖勻，加乙腈到刻度。另取對照品50mg，同法配置對照品溶液，分別緊密吸取20ml進入色譜儀，以外標法計算即得。按上訴測定方法操作，精密稱取西曲依醇原料適量，分別進樣，圖譜見附圖14~15，測定結果如下表表7含量測定試驗數據樣品稱樣量峰面積含量(％)平均含量(％)06090123.40411211341316604121886.564.00通過上述種種研究表明用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定待測物中西曲依醇的含量，快速簡便，選擇性好，精密度高，從而本發(fā)明適用于西曲依醇的含量測定。圖l是西曲依醇結構圖圖2~7是紅杉醇線性色譜圖圖8~13是紅杉醇重復性色譜圖圖14~15是紅杉醇含量測定圖。權利要求1、一種西曲依醇的高效液相色譜蒸發(fā)光散射測定法，其特征在于其色譜條件中固定相用硅膠基質的氨丙基為填充劑；流動相采用甲醇-水或乙腈-水；檢測器采用蒸發(fā)光散射檢測器。2、根據權利要求1所述的西曲依醇的高效液相色譜蒸發(fā)光散射測定法，其特征在于流動相體系采用甲醇-水或乙腈-水，體積比為95:565:35;其中甲醇與水體積比最優(yōu)比例為75:25，乙腈與水體積比最優(yōu)比例為80:20。3、根據權利要求1所述的西曲依醇的高效液相色譜蒸發(fā)光散射測定法，其特征在于與流動相的流速為0.5~2mL/min,柱溫為15~55°C;其中最佳流速為lmL/min，柱溫為3CTC。4、根據權利要求1所述的西曲依醇的高效液相色譜蒸發(fā)光散射測定法，其特征在于蒸發(fā)光散射檢測器中，漂移管溫度為25~70°C，霧化氣體流速為0.5~3L/min;其中最優(yōu)溫度為4(TC，霧化氣體最佳流速為1L/min。全文摘要本發(fā)明公開了一種利用高效液相色譜蒸發(fā)光散射測定西曲依醇含量的方法，其色譜條件中固定相用以硅膠為基質的氨丙基；流動相采用甲醇-水或乙腈-水；檢測器采用蒸發(fā)光散射檢測器。本發(fā)明采用高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測技術，靈敏度適宜、專屬性強，可以很好地測定西曲依醇的含量，同時比原有柱前衍生化法測定含量的技術實施起來簡便許多。文檔編號G01N30/50GK101592633SQ20081002834公開日2009年12月2日申請日期2008年5月28日優(yōu)先權日2008年5月28日發(fā)明者孫明杰,霆王,王艷麗,鄧桂興申請人:廣州威爾曼新藥開發(fā)中心有限公司