專利名稱：：一種結(jié)核病診斷試劑及試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬診斷試劑領(lǐng)域，涉及結(jié)核病診斷試劑及試劑盒，具體涉及含結(jié)核分支桿菌Rvl985c蛋白的診斷試劑及試劑盒。
背景技術(shù)：
：結(jié)核病是當(dāng)今全球面臨的主要公共健康問題之一，它的病原體是結(jié)核分枝桿菌，屬分枝桿菌屬。據(jù)報(bào)道，全世界每年約有800-1000萬(wàn)新發(fā)結(jié)核病例，每年有200-300萬(wàn)人因此而失去生命。結(jié)核病已成為引起成年人死亡的頭號(hào)傳染病。據(jù)WHO報(bào)道，全球三分之一的人口(約20億)已感染了結(jié)核桿菌，如不采取措施，近10年內(nèi)還將有約3億人受結(jié)核桿菌感染。據(jù)第四次全國(guó)流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國(guó)受結(jié)核桿菌感染人數(shù)超過4億，每年有13萬(wàn)人死于結(jié)核病，是全球22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一，結(jié)核病人數(shù)位居世界第二。特異性抗原診斷一直是確認(rèn)病原體感染及評(píng)估感染狀況較為可靠的方法，且有早期診斷價(jià)值，已經(jīng)在HBV、HCV、HIV等疾病的診斷方面獲得了廣泛的應(yīng)用。目前，臨床結(jié)核病診斷廣泛使用皮膚檢測(cè)試劑結(jié)核分枝桿菌純蛋白衍生物(PPD)。然而，結(jié)核分枝桿菌純蛋白衍生物存在與環(huán)境分枝桿菌以及結(jié)核病疫苗即卡介苗(M.bovisBCG)菌株的交叉反應(yīng)，其診斷價(jià)值被削弱。而血清學(xué)檢測(cè)具有快速、特異、簡(jiǎn)便和廉價(jià)等特點(diǎn)，因此，研制出安全簡(jiǎn)便的特異性血清學(xué)診斷試劑極為迫切。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種新型的結(jié)核病診斷試劑，具體涉及含結(jié)核分支桿菌Rvl985c蛋白的診斷試劑。本發(fā)明公開了一種基于血清學(xué)方法的結(jié)核桿菌檢測(cè)抗原Rvl985c蛋白。該來自于卡介苗基因組相對(duì)結(jié)核分枝桿菌缺失的區(qū)域(RD2區(qū))，由結(jié)核分枝桿菌基因Rvl985c所編碼的蛋白。結(jié)核桿菌Rvl985c蛋白包含303個(gè)氨基酸，分子量32.8kDa，等電點(diǎn)pl為9.05。該蛋白具有序列1的氨基酸序列。所述的Rvl985c蛋白可由結(jié)核分枝桿菌或其它少數(shù)幾種分枝桿菌表達(dá)，該抗原感染人體后或經(jīng)結(jié)核桿菌感染后，能被Th細(xì)胞所識(shí)別，刺激合成B細(xì)胞生長(zhǎng)和分化因子。在Rvl985c抗原和B細(xì)胞分化因子的共同作用下B細(xì)胞活化和增值，并最終在淋巴器官的T細(xì)胞區(qū)中分化成為漿細(xì)胞，并產(chǎn)生針對(duì)該抗原的抗體，該抗體能夠特異地與Rvl985c蛋白發(fā)生免疫反應(yīng)。通?？贵w存在于體液或其它介質(zhì)中，包括痰液、血清、尿液、腦髓液、肺泡灌洗液、胸腔積液等?？贵w生物學(xué)實(shí)質(zhì)是一類免疫球蛋白，主要分為IgG，IgM，IgA，IgD，IgE五類，其中具有診斷價(jià)值的主要是IgG和IgM。所述的Rvl985c蛋白能制成診斷試劑用于結(jié)核病的免疫反應(yīng)檢測(cè)。本發(fā)明所涉及的可用于檢測(cè)的免疫反應(yīng)包括凝集實(shí)驗(yàn)，沉淀實(shí)驗(yàn)，免疫熒光實(shí)驗(yàn)，小吞噬實(shí)驗(yàn)，E花環(huán)實(shí)驗(yàn)，ELISA實(shí)驗(yàn)，斑點(diǎn)免疫金滲濾實(shí)驗(yàn)，膠體金免疫層析法等。典型診斷用免疫試驗(yàn)是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linkedImmunosorbentAssay,ELISA)，由于大多數(shù)蛋白都可與塑料或聚酯板非特異性結(jié)合，可通過將含抗體的待測(cè)樣品與包被Rvl985c抗原的塑料板相互作用，形成的抗原抗體復(fù)合物與酶聯(lián)的第二抗體進(jìn)行反應(yīng)，洗去未結(jié)合的酶標(biāo)抗體，加入底物后產(chǎn)生帶有顏色的產(chǎn)物，在檢測(cè)儀上測(cè)得增加的光吸收值。本發(fā)明上下文中所述蛋白除了通常所指的一種氨基酸聚合物，還應(yīng)該包括其類似物。所述類似物，是指其特性與所述蛋白相同，包括其同樣可以與抗體特異性地結(jié)合。通常包含一部分蛋白序列，代表性的是所述類似物具有相同的形狀、大小、柔韌性、電子排布等。上述抗原的典型類似物是肽。它可與上述蛋白序列同源。這種同源肽通常具有至少75%的同源性，優(yōu)選至少90%、95%的同源性。其不同一般來自于氨基酸殘基的替換、插入、缺失和修飾，可發(fā)生在序列的N端、C端或其他任何位置上。具有代表性的是類似物可以結(jié)合到相同的抗體分子上，且類似物中處于等價(jià)位置上的氨基酸與原始肽中的那些抗原序列相同或保守。所述的修飾，通常指的是天然的轉(zhuǎn)錄后修飾或人工修飾。修飾可提供化學(xué)部分的改變，包括氨基、乙?；⒘u基、鹵素基團(tuán)和碳水化合物基團(tuán)。具有代表性的是一種是氨基酸側(cè)鏈的修飾，即形成一個(gè)或多個(gè)非天然氨基酸。所述的蛋白和多肽可以通過天然分離獲得，也可以通過人工合成。一種具有代表性的方法是用較長(zhǎng)的融合蛋白制備上述肽段，此融合蛋白包含上述代表性的肽段序列。所述肽也可由多肽經(jīng)過物理或化學(xué)裂解所產(chǎn)生。此外，本說明書中涉及所有氨基酸序列都是從N端到C端的。本發(fā)明的另一重要目的是提供一種快速檢測(cè)結(jié)核感染的方法，主要包括以下步驟a)使用Rvl985c抗原包被96孔板或其他吸附蛋白介質(zhì)；b)采集待測(cè)樣品，通常是受試者的血清，稀釋一定倍數(shù)；c)將稀釋后樣品加入介質(zhì)中與Rvl985c反應(yīng)；d)加入酶聯(lián)或膠體金等染料偶聯(lián)試劑，該試劑能與Rvl985c抗原抗體復(fù)合物特異反應(yīng)。典型的試劑如酶聯(lián)Rvl985c多肽，ProteinA，抗IgG、IgM二抗等；e)直接顯色或加入顯色劑顯色；f)肉眼或儀器讀取顏色的改變，以超過一定域值的顏色改變判定為陽(yáng)性檢測(cè)。具體可參照實(shí)施方案1和2。值得注意的是，該方法至少使用Rvl985c—種抗原用于檢測(cè)相應(yīng)抗體，但不局限于該種抗原。與其他有較高診斷價(jià)值的結(jié)核抗原，如LAM，38kDa，30kDa,16KDa，A60等抗原一起使用，可以提高檢測(cè)的陽(yáng)性檢出率。實(shí)施例1中，聯(lián)合使用LAM和38KDa抗原，可使陽(yáng)性檢測(cè)率從59%提高到75%，同時(shí)檢測(cè)保持很高的特異性。本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種快速檢測(cè)結(jié)核病的診斷試劑盒。它包含上述重組蛋白R(shí)vl985c和Rvl985c抗體的陽(yáng)性對(duì)照試劑，這類試劑可以是含Rvl985c陽(yáng)性抗體的動(dòng)物血清或通過雜交瘤細(xì)胞培育出的Rvl985c單克隆抗體。如待測(cè)者體液中抗體的滴度超過了陽(yáng)性對(duì)照試劑，則判定為陽(yáng)性。本發(fā)明的試劑盒中，除了有重組抗原Rvl985c和其特異性抗體外，還應(yīng)有用于檢測(cè)的各種試劑和器具，包括各種緩沖液、稀釋液、反應(yīng)液和終止液。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，結(jié)核檢測(cè)試劑盒還包括如下試劑和物品1)包被緩沖液(0.05M碳酸鹽緩沖液)，pH9.6:1.59gNa2C03，2.93gNaHC(k2)洗滌液(PBST),pH7.4:8gNaCl，0.2gKCl，0.2gKH2P04，2.9gNa2HP0412H20，0.5mlTween-20，1LH20。3)封閉液(0.1%BSA/PBS)，pH7.4:8gNaCl，0.2gKC1，0.2gKH2P04，2.9gNa2HP0,12H20，0.lgBSA(牛血清白蛋白)，1LH20。4)底物緩沖液，0.2MNaH2P04(28.4克/L)25.7ml，0.1M檸檬酸(19.2克/L)24.3ml，加蒸餾水50ml。55)顯色液20ml底物緩沖液，8mg0PD，25ul30%H202。6)終止液(2MH2S04),200ml:21.32mlH2S04，178.68mlH20。7)過氧化物酶標(biāo)記山羊抗人IgG和IgM。8)96孔酶標(biāo)板(NalgeNuncInternational)本發(fā)明提供了特異性和敏感性俱佳的結(jié)核快速檢測(cè)試劑，可對(duì)受試者血液或體液作出是否感染結(jié)核分支桿菌的快速診斷，從免疫膠體金的15分鐘到ELISA的5個(gè)小時(shí)不等。作為診斷試劑用于被臨床證實(shí)的活動(dòng)性結(jié)核時(shí)，單獨(dú)使用Rvl985c抗原檢測(cè)敏感性達(dá)到59%，特異性96%;與其他診斷抗原(如與對(duì)照抗原LAM/38kDa)合并使用使，可進(jìn)一步提高診斷敏感性，達(dá)75%，具有較高臨床應(yīng)用價(jià)值。本發(fā)明的檢測(cè)只需要單份血清樣品，化驗(yàn)簡(jiǎn)單、快速、不需要專業(yè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，成本低廉，當(dāng)天可得到結(jié)果，非常適合廣大鄉(xiāng)鎮(zhèn)農(nóng)村醫(yī)院和戰(zhàn)地條件下的結(jié)核感染檢測(cè)。圖1是1985c抗原ELISA檢測(cè)結(jié)果。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1制備結(jié)核檢測(cè)試劑及試劑盒本發(fā)明的試劑盒中，含有重組抗原Rvl985c和其特異性抗體，還含有用于檢測(cè)的各種試劑和器具，包括各種緩沖液、稀釋液、反應(yīng)液和終止液，具體包括如下試劑和物a1)包被緩沖液(0.05M碳酸鹽緩沖液)，pH9.6:1.59gNa2C03，2.93gNa線.2)洗滌液(PBST)，pH7.4:8gNaCl，0.2gKCl，0.2gKH2P04，2.9gNa異12H20，0.5mlTween-20，1LH20。3)封閉液(0.1%BSA/PBS)，pH7.4:8gNaCl，0.2gKCl，0.2gKH2P04，2.9gNa2HP0412H20,0.lgBSA(牛血清白蛋白)，1LH20。4)底物緩沖液，0.2MNaH2P04(28.4克/L)25.7ml，0.1M檸檬酸(19.2克/L)24.3ml，加蒸餾水50ml。5)顯色液20ml底物緩沖液，8mg0PD，25ul30%HA。6)終止液(2MH2S04),200ml:21.32mlH2S04，178.68mlH20。7)過氧化物酶標(biāo)記山羊抗人IgG和IgM。8)96孑L酶標(biāo)板(NsilgeNuncInternational)實(shí)施例2ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肺結(jié)核檢測(cè)的樣本為血清，采集全血加入2.0mg/ml的EDTA抗凝劑后，離心3000rpm，10min后，收集上清部分。保存時(shí)可以分裝入凍存管存放入-70度冰箱。此實(shí)施例樣本分為兩組肺結(jié)核患者和健康者對(duì)照。肺結(jié)核患者是從2007年5月起在濟(jì)南的山東省肺科醫(yī)院、重慶的肺科醫(yī)院組織招募的。健康對(duì)照者一部分來源于上述醫(yī)院(非結(jié)核病患者或醫(yī)務(wù)人員)，另一部分是2008年4月在復(fù)旦大學(xué)、上海華山醫(yī)院組織招募的非結(jié)核病患者或醫(yī)務(wù)人員。兩組人群的收錄標(biāo)準(zhǔn)如下肺結(jié)核患者臨床痰涂片或結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性，臨床檢査與X射線檢查結(jié)果相符，HIV檢測(cè)陰性。健康者接種過BCG疫苗，無發(fā)熱，近期無結(jié)核病人接觸史的健康人群。HIV檢測(cè)陰性。表1是樣本統(tǒng)計(jì)資料。表l肺結(jié)核病人(p)健康對(duì)照(H)人數(shù)14668所在城市重慶(126)濟(jì)南(20)上海(31)濟(jì)南(37)年齡分布15752062檢測(cè)步驟(1)包被Rvl985c抗原溶解于包被緩沖液中(5ug/ml);100ul/孔;4。C過夜(2)洗板洗漆液300ul/孔，3min，洗3次；(3)封閉封閉液，300ul/孔，37°C孵育lh;(4)洗板洗滌液300ul/孔，3min，洗3次；(5)加血清按IgG1:500，IgMl:100稀釋后的待測(cè)血清,100ul/孔，3TC孵育lh;7(6)洗板洗漆液300ul/孔，3min，洗5次；(7)加酶標(biāo)二抗新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(1:10000)100ul/孔，37°C孵育lh;(8)洗板洗滌液300ul/孔，3min，洗5次；(9)顯色新鮮配置的顯色液，100ul/孔，37°C5-10min(10)終止2MH2S04，50ul/孔;(11)測(cè)定酶標(biāo)儀調(diào)至492nm，以第一個(gè)空白PBS對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值。統(tǒng)計(jì)和判定以健康對(duì)照者血清標(biāo)本的平均OD值加上2倍標(biāo)準(zhǔn)方差(standarddeviationSD)作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，若病人血清標(biāo)本OD值大于此標(biāo)準(zhǔn)，即判斷為陽(yáng)性，反之則為陰性。利用SPSS(StatisticsPackageforSocialScience)對(duì)結(jié)核病人和健康對(duì)照者兩組之間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用非配對(duì)分組t-檢驗(yàn)(ind印endentgroupt-test)進(jìn)行組別間差別的顯著性測(cè)定，若P〈0.05，為樣品間存在顯著性差異；若P〈0.01，為樣品間存在極顯著性差異。PathozymeMycoG對(duì)照實(shí)驗(yàn)-所述的PathozymeMycoG是英國(guó)OmegaDiagnostics公司生產(chǎn)的檢測(cè)人血清中由于分枝桿菌感染而產(chǎn)生IgG抗體的試劑。MycoG應(yīng)用有較高診斷價(jià)值的LAM和38KDa抗原，其檢測(cè)特異性極高，敏感性較好，已被國(guó)際上部分機(jī)構(gòu)和醫(yī)院所采用。按照標(biāo)準(zhǔn)說明書操作流程，對(duì)上述結(jié)核病人和健康對(duì)照者214例樣本進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，Rvl985c在肺結(jié)核病人中的血清IgG敏感性為49%(71/146人)，特異性為97%(2/68人)，對(duì)病人和健康對(duì)照的陽(yáng)性檢出率進(jìn)行t檢驗(yàn)，t〈0.001，有極顯著差異；Rvl985c在肺結(jié)核病人中的血清IgM敏感性為20%(29/145人)，特異性為97%(2/68人)，對(duì)病人和健康對(duì)照的陽(yáng)性檢出率進(jìn)行t檢驗(yàn)，t=0.001，表明肺結(jié)核病人與健康人群Rvl985c抗體IgG和IgM水平均有顯著性差異，即結(jié)核病人顯著高于健康人。聯(lián)合IgG和IgM考慮，本方法檢測(cè)結(jié)核病人的敏感性為59%(85/145人)，特異性為96%(3/68人)。對(duì)照方法PathozymeMycoG檢測(cè)的敏感性為35%(51/146人)，特異性為98.5%(1/68人)。與對(duì)照方法相比，本方法具有更高的檢測(cè)敏感性，能多檢出14%的陽(yáng)性患者，同時(shí)特異性與對(duì)照方法相當(dāng)，都大于95%。如與對(duì)照抗原LAM/38kDa一同使用，可進(jìn)一步提高檢測(cè)敏感性，達(dá)到75%(109/146)，同時(shí)特異性仍然保持較高94%(4/68)。表2是抗原Rvl985c抗原在結(jié)核患者中的檢測(cè)結(jié)果。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例3膠體金標(biāo)記檢測(cè)1.取0.01%HAuC14水溶液lOOml，加入1%枸櫞酸三鈉水溶液2ml，加熱煮沸15min30min，直至顏色變紅且不變。2.將Rvl985c抗原與制備好的膠金以1:2比例混合，加入終濃度為1%的BSA作為穩(wěn)定劑，加入終濃度為0.1%的疊氮鈉作為防腐劑。3.于硝酸纖維膜上加入Rvl985c抗原10ul，放置過夜。4.第二天加入封閉液(iy。BSA溶液)5min5.加入稀釋后待測(cè)血清，可采用1:10稀釋6.PBS洗一遍后加入上述標(biāo)記好膠體金抗原7.反應(yīng)5-15分鐘后判讀結(jié)果，經(jīng)肉眼觀察，如有紅色條帶即判定為陽(yáng)性，否則為陰性。結(jié)果顯示，15分鐘可判定結(jié)果，作為診斷試劑用于被臨床證實(shí)的活動(dòng)性結(jié)核時(shí)，單獨(dú)使用Rvl985c抗原檢測(cè)敏感性達(dá)到59%，特異性96%;與其他診斷抗原(如與對(duì)照抗原LAM/38kDa)合并使用使，可進(jìn)一步提高診斷敏感性，達(dá)75%。由結(jié)核分枝桿菌基因Rv1985c所編碼的蛋白序列表SEQUENCELISTING<110〉復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院，復(fù)旦大學(xué)<120〉一種結(jié)核病診斷試劑及試劑盒<130〉11<160〉1<170〉Patentlnversion3.1<210>1<211〉303<212〉PRT<213>結(jié)核桿菌<400〉1MetValAspProGinLeuAspGlyProGinLeuAlaAlaLeuAlaAla151015ValValGluLeuGlySerPheAspAlaAlaAlaGluArgLeuHisVal202530ThrProSerAlaValSerGinArglieLysSerLeuGluGinGinVal354045GlyGinValLeuValValArgGluLysProCysArgAlaThrThrAla505560GlylieProLeuLeuArgLeuAlaAlaGinThrAlaLeuLeuGluSer65707580GluAlaLeuAlaGluMetGlyGlyAsnAlaSerLeuLysArgThrArg859095lieThrlieAlaValAsnAlaAspSerMetAlaThrTrpPheSerAla100105110ValPheAspGlyLeuGlyAspValLeuLeuAspValArglieGluAsp115120125GinAspHisSerAlaArgLeuLeuArgGluGlyValAlaMetGlyAla130135140ValThrThrGluArgAsnProValProGlyCysArgValHisProLeu145150155160GlyGluMetArgTyrLeuProValAlaSerArgProPheValGinArg16517017510由結(jié)核分枝桿菌基因Rv1985c所編碼的蛋白序列表HisLeuSerAspGlyPheThrAlaAlaAlaAlaAlaLysAlaProSer180185190LeuAlaTrpAsnArgAspAspGlyLeuGinAspMetLeuValArgLys195200205AlaPheArgArgAlalieThrArgProThrHisPheValProThrThr210215220GluGlyPheThrAlaAlaAlaArgAlaGlyLeuGlyTrpGlyMetPhe225230235240ProGluLysLeuAlaAlaSerProLeuAlaAspGlySerPheValArg245250255ValCysAsplieHisLeuAspValProLeuTyrTrpGinCysTrpLys260265270LeuAspSerProlielieAlaArglieThrAspThrValArgAlaAla275280285AlaSerGlyLeuTyrArgGlyGinGinArgArgArgArgProGly290295300li權(quán)利要求1、一種結(jié)核病診斷試劑，其特征在于含有序列1的結(jié)核桿菌Rv1985c蛋白抗原，及所述的Rv1985c所代表的蛋白或其類似物。2、按權(quán)利要求1所述的結(jié)核病診斷試劑，其特征在于所述的結(jié)核桿菌Rvl985c蛋白包含303個(gè)氨基酸，分子量32.8kDa，等電點(diǎn)pl為9.05。3、按權(quán)利要求1所述的結(jié)核病診斷試劑，其特征在于所述的結(jié)核桿菌Rvl985c蛋白作為抗原由結(jié)核分枝桿菌或其它分枝桿菌表達(dá)，經(jīng)抗原或結(jié)核桿菌感染人體后，使B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)抗體，該抗體與所述的Rvl985c蛋白抗原特異結(jié)合。4、按權(quán)利要求1所述的結(jié)核病診斷試劑，其特征在于所述的抗體通過抗原抗體免疫反應(yīng)被檢測(cè)。5、按權(quán)利要求4所述的結(jié)核病診斷試劑，其特征在于所述的抗原抗體免疫反應(yīng)包括定量或定性的沉淀實(shí)驗(yàn)，免疫熒光實(shí)驗(yàn)，小吞噬實(shí)驗(yàn)，E花環(huán)實(shí)驗(yàn)，ELISA實(shí)驗(yàn)，斑點(diǎn)免疫金滲濾實(shí)驗(yàn)和膠體金免疫層析法實(shí)驗(yàn)。6、一種快速檢測(cè)結(jié)核感染的方法，其特征在于，通過抗原抗體免疫反應(yīng)檢測(cè)至少包含如權(quán)利要求3所述抗體水平的高低來診斷結(jié)核病感染情況，包括以下步驟1)使用Rvl985c抗原包被96孔板或其他吸附蛋白介質(zhì)；2)采集待測(cè)樣品，通常是受試者的血清，稀釋一定倍數(shù)；3)將稀釋后樣品加入介質(zhì)中與Rvl985c反應(yīng)；4)加入酶聯(lián)或膠體金染料偶聯(lián)試劑，該試劑能與Rvl985c抗原抗體復(fù)合物特異反應(yīng)；5)直接顯色或加入顯色劑顯色；6)肉眼或儀器讀取顏色的改變，以超過一定域值的顏色改變判定為陽(yáng)性檢測(cè)。7、按權(quán)利要求6所述的快速檢測(cè)結(jié)核感染的方法，其特征在于所屬步驟4的試劑選自酶聯(lián)Rvl985c多肽，ProteinA，抗IgG或IgM二抗。8、一種快速檢測(cè)結(jié)核病的試劑盒，其特征在于包含如權(quán)利要求1所述的抗原所述試劑盒通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)。全文摘要本發(fā)明屬診斷試劑領(lǐng)域，涉及含結(jié)核分支桿菌Rv1985c蛋白的診斷試劑及試劑盒。本發(fā)明可對(duì)受試者血液或體液作出是否感染結(jié)核分支桿菌的快速診斷，從免疫膠體金的15分鐘到ELISA的5個(gè)小時(shí)不等。作為診斷試劑用于被臨床證實(shí)的活動(dòng)性結(jié)核時(shí)，單獨(dú)使用Rv1985c抗原檢測(cè)敏感性達(dá)到59％，特異性96％；與其他診斷抗原(如與對(duì)照抗原LAM/38kDa)合并使用使，可進(jìn)一步提高診斷敏感性，達(dá)75％，具有較高臨床應(yīng)用價(jià)值。本發(fā)明的檢測(cè)只需要單份血清樣品，化驗(yàn)簡(jiǎn)單、快速、不需要專業(yè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，成本低廉，當(dāng)天可得到結(jié)果，非常適合廣大鄉(xiāng)鎮(zhèn)農(nóng)村醫(yī)院和戰(zhàn)地條件下的結(jié)核感染檢測(cè)。文檔編號(hào)G01N33/68GK101661044SQ200810042130公開日2010年3月3日申請(qǐng)日期2008年8月27日優(yōu)先權(quán)日2008年8月27日發(fā)明者舒張,穎張,張文宏,森王,王洪海,蘇曉迪,邵凌云,陳嘉臻申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院;復(fù)旦大學(xué)