專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種利腦心膠囊的質(zhì)量控制檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明公開(kāi)一種利腦心膠囊的質(zhì)量控制檢測(cè)方法，屬于醫(yī)藥學(xué)檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
。技術(shù)背景本發(fā)明涉及的"利腦心膠囊"是通過(guò)以下工藝制成的將丹參40g、何首烏(制)30g、枸杞30g、赤芍30g、葛根30g、地龍30g加水煎煮三次，第一次3小時(shí)，第二次2小時(shí)，第三次1小時(shí)，分次濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮成流浸膏狀，低溫干燥，粉碎成細(xì)粉，備用。取川芎30g、紅花20g、郁金3g、澤瀉30g、、酸棗仁(炒)20g、遠(yuǎn)志30g、九節(jié)菖蒲30g、牛膝30g、甘草20g等九味粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，加入干浸膏粉，混勻，裝入膠囊，制成1000粒，即得。膠囊劑，內(nèi)容物為棕黃色的粉末；味苦。功能主治為活血祛瘀，行氣化痰，通絡(luò)止痛。用于氣滯血瘀，痰濁阻絡(luò)，胸痹刺痛、絞痛，固定不移，入夜更甚，心悸不寧，頭暈頭痛，以及冠心病，心肌梗塞，腦動(dòng)脈硬化，腦血栓等見(jiàn)上述證候者。該藥品標(biāo)準(zhǔn)原收載于衛(wèi)生部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥18冊(cè)，原標(biāo)準(zhǔn)中只有何首烏、川芎、赤勺的薄層色譜鑒別，由于原標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法很少，因此，不能保證對(duì)該藥品進(jìn)行全面的檢測(cè)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明公開(kāi)一種利腦心膠囊的質(zhì)量控制檢測(cè)方法，用于利腦心藥物的質(zhì)量控制。本發(fā)明的技術(shù)解決方案如下1)取利腦心膠囊內(nèi)容物3g，加乙醚50ml，浸泡30分鐘，濾過(guò)，棄去乙醚液，藥渣揮干乙醚，加60。/。甲醇50ml，超聲處理(功率250W，頻率25KHz)20分鐘，濾過(guò)，蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml使溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至0.5ml，作為供試品溶液；另取甘草對(duì)照藥材lg，加甲醇20ml，超聲處理(功率250W，頻率25KHz)20分鐘，濾過(guò)，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5^1，分別點(diǎn)于同一以1%氫氧化鈉制備的硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-丙酮(5:2:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。2)取本品內(nèi)容物5g，加甲醇30ml超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5ml使溶解，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次50ml，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取酸棗仁對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ix1，分別點(diǎn)于同一以硅膠G薄層板上，以石油醚(609(TC)-甲酸乙酯-甲酸(16:4:0.4)的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，置105"烘至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。3)檢查應(yīng)符合中國(guó)藥典2005年版一部附錄IL膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定；4)含量測(cè)定照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水(14:86)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm;論板數(shù)按2,3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000;對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)2，3，5，4'-四羥基二苯乙烯-2-01-D-葡萄糖苷適量，加甲醇制成每lml含50昭的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取1.2g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加氯仿50ml，回流提取2小時(shí)，棄去氯仿液，打開(kāi)濾紙筒，藥渣揮開(kāi)溶劑，將藥粉與濾紙一同置于錐形瓶子，精密加入60%甲醇25ml，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率250W，頻率25KHz)30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，加60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10^1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；利腦心膠囊每粒含何首烏以2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-0-3-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計(jì)，不得少于0.10mg。本發(fā)明的積極效果在于在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了甘草的薄層色譜鑒別和何首烏的高效液相色譜法測(cè)定含量。本發(fā)明檢測(cè)方法先進(jìn)，精密度及重現(xiàn)性好，能夠全面的對(duì)該藥品進(jìn)行質(zhì)量控制，保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性均一性。圖1為甘草的薄層色譜鑒別；1、2、3供試品，4甘草藥材，5陰性對(duì)照品圖2為2，3，5,4'—四羥基苯乙烯一2—0—e—D—葡萄糖苷的紫外光譜圖；圖3為對(duì)照品色譜圖；圖4為供試品圖；圖5為線(xiàn)性關(guān)系圖；圖6為陰性對(duì)照品色譜圖；圖7為溶劑色譜圖。具體實(shí)施方式為了便于理解本發(fā)明，特例舉以下實(shí)施例。其作用被理解為是對(duì)本發(fā)明的闡釋而非對(duì)本發(fā)明的任何形式的限制。實(shí)施例l1)取利腦心膠囊內(nèi)容物3g，加乙醚50ml，浸泡30分鐘，濾過(guò)，棄去乙醚液，藥渣揮干乙醚，加60。/。甲醇50ml，超聲處理(功率250W，頻率25KHz)20分鐘，濾過(guò)，蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml使溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至0.5ml，作為供試品溶液；另取甘草對(duì)照藥材lg，加甲醇20ml，超聲處理(功率250W，頻率25KHz)20分鐘，濾過(guò)，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5^1，分別點(diǎn)于同一以1%氫氧化鈉制備的硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-丙酮(5:2:1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365mn下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見(jiàn)圖1照片2)取本品內(nèi)容物5g，加甲醇30ml超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5ml使溶解，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次50ml，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取酸棗仁對(duì)照藥材lg，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5y1,分別點(diǎn)于同一以硅膠G薄層板上，以石油醚(6090°C)-甲酸乙酯-甲酸(16:4:0.4)的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，置105"C烘至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365mri)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。3)檢查應(yīng)符合中國(guó)藥典2000年版一部附錄IL膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定；4)含量測(cè)定照中國(guó)藥典2000年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水(14:86)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm;論板數(shù)按2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000;對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖苷適量，加甲醇制成每lml含50jig的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取1.2g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加氯仿50ml，回流提取2小時(shí)，棄去氣仿液，打開(kāi)濾紙筒，藥渣揮開(kāi)溶劑，將藥粉與濾紙一同置于錐形瓶子，精密加入60%甲醇25ml，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率250W，頻率25KHz)30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，加60%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各IOW，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；利腦心膠囊每粒含何首烏以2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-0-P-D-葡萄糖苷(C2。H2209)計(jì)，不得少于0.10mg。何首烏以其主要成份2,3,5，4'一四羥基二苯乙烯一2—O—0—D—葡萄糖苷為指標(biāo)，建立了高效液相色譜法測(cè)定其含的方法.該法靈敏，準(zhǔn)確，快捷.1、儀器與試藥Agilent1100series高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器；試劑均為色譜純及分析純；2,3,5,4'—四羥基二苯乙烯一2—0—P—D—葡萄糖苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定析);批號(hào)0844-200003。2、測(cè)定波長(zhǎng)的選擇取2,3,5,4'—四羥基二苯乙烯一2—0—e—D—葡萄糖苷對(duì)照品適量，加50%乙醇制成18(ag/ml的溶液，在200400nm進(jìn)行掃描,在321nm具有最大吸收,參照藥典何首烏項(xiàng)下,選擇320nm作為測(cè)定波長(zhǎng)，見(jiàn)圖2。3、提取溶劑的選擇取本發(fā)明1.2g，兩份，置索氏提取器中，加氯仿50ml,回流2小時(shí)，棄去氯仿，揮干溶劑，將濾紙筒打開(kāi)，將藥粉及濾紙筒一同轉(zhuǎn)入三角燒瓶中，分別精密加入甲醇及60%甲醇25ml，稱(chēng)定重量，超聲處理(250W25KHz)30分鐘，冷卻，再稱(chēng)定重量，加相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果甲醇提取物雜質(zhì)峰較多，60%甲醇提取峰分離效果好，故選擇60%甲醇。4、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜條件色譜柱為T(mén)echsphereC18柱(4.6x250ram，5|i);流動(dòng)相為乙腈-水(14:86);流速為1.Oml/min。根據(jù)上述色譜條件，測(cè)得供試品及對(duì)照品色譜圖，見(jiàn)圖(3)(4)。以2，3，5，4'一四羥基二苯乙烯一2—0—e—D—葡萄糖苷計(jì)算理論塔板數(shù)，N-9530.4(計(jì)算機(jī)給出)。參照中國(guó)藥典2000年版一部何首烏項(xiàng)下，暫定理論板數(shù)以2，3，5,4'—四羥基二苯乙烯一2—0一0—D—葡萄糖苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于5000。5、方法學(xué)考察5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備取2,3,5,4'—四羥基二苯乙烯一2—0—P—D—葡萄糖苷對(duì)照品適量,加60。/。甲醇制成54.2嗎/ml的溶液。精密吸取該溶液2、6、10、15、20|il，分別注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo),對(duì)照品進(jìn)樣量(yg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),得回歸方程為:Y:2878.67742X—0.433213，Y=0.99999。線(xiàn)性范圍為0.10840.5420ug(見(jiàn)圖5)，結(jié)果見(jiàn)表l。表l線(xiàn)性關(guān)系測(cè)定結(jié)果進(jìn)樣量(Pg)0.10840.32520.5420.8130.1084峰面積積分值311.33340930.488891563.191162347.078133114.597905.2空白試驗(yàn)按原處方工藝制成不含何首烏的陰性對(duì)照樣品，按正文所收載的方法測(cè)定，結(jié)果其陰性對(duì)照?qǐng)D譜中，在與2,3，5，4'一四羥基二苯乙烯一2—0—0—D—葡萄糖苷色譜峰相應(yīng)保留時(shí)間處無(wú)干擾峰出現(xiàn)(見(jiàn)圖6、7)。5.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液(批號(hào)070201)，分別在0、7、11、16小時(shí)依正文收載方法測(cè)定,按2，3,5，4'一四羥基二苯乙烯一2—0—P—D葡萄糖苷峰面積計(jì)，結(jié)果未發(fā)生明顯改變，見(jiàn)表2<表2穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果時(shí)間071116峰面積積分值1348.623661313.120971337.886721336.14758又二1333.9447RSD=1.12%5.4重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一供試品(批號(hào)011115)五份，依法獨(dú)立測(cè)定5次，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。表3重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)號(hào)2，3，5，4'一四羥基二苯乙烯一2—0—e—D—葡萄糖昔含^(mg/粒)123450.250.260.260.260.26X=0,26RSD=1,6%5.5精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液(批號(hào)070201),連續(xù)進(jìn)樣5次,則定結(jié)果見(jiàn)表4。表4精密度試驗(yàn)結(jié)果序號(hào)12345峰面積積1360.588261346.832891337.886721313.120971348.62366分值^=1341.4105RSD二l.32%5.6回收率試驗(yàn)取經(jīng)同法測(cè)定的已知含量的樣品(批號(hào)070201，含量0.958mg/g)五份，每份0.65g,精密稱(chēng)定，精密加入2，3，5，4'一四羥基二苯乙烯一2—0—P—D—葡萄糖苷適量,依正文方法測(cè)定,計(jì)算回收率,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5。表5回收率試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>6、樣品含量測(cè)定及限度的確定根據(jù)正文所述條件及方法，測(cè)定七批樣品，結(jié)果見(jiàn)下表。表6樣品測(cè)定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>參照中國(guó)藥典2005年版一部何首烏含量測(cè)定項(xiàng)下的規(guī)定，暫定制何首烏含2,3，5，4'—四羥基苯乙烯一2—O—0—D—葡萄糖苷(C2。H2209)不得少于0.80%。且制何首烏在方中為水煎煮入藥，暫定每粒含何首烏以2，3,5，4'一四羥二苯乙烯一2—0—P—D—葡萄糖苷((:2()112209)計(jì),不得少于60Ug。權(quán)利要求1.一種利腦心膠囊的質(zhì)量控制檢測(cè)方法，包括以下步驟1)取利腦心膠囊內(nèi)容物3g，加乙醚50ml，浸泡30分鐘，濾過(guò)，棄去乙醚液，藥渣揮干乙醚，加60％甲醇50ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml使溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至0.5ml，作為供試品溶液；另取甘草對(duì)照藥材1g，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以1％氫氧化鈉制備的硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-丙酮(5∶2∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；2)取利腦心膠囊內(nèi)容物5g，加甲醇30ml超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5ml使溶解，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次50ml，分取正丁醇液，置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取酸棗仁對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(16∶4∶0.4)的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1％香草醛硫酸溶液，置105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；3)檢查應(yīng)符合中國(guó)藥典2005年版一部附錄IL膠囊劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定；4)含量測(cè)定照中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水(14∶86)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm；論板數(shù)按2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000；對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷適量，加甲醇制成每1ml含50μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取1.2g，精密稱(chēng)定，置索氏提取器中，加氯仿50ml，回流提取2小時(shí)，棄去氯仿液，打開(kāi)濾紙筒，藥渣揮開(kāi)溶劑，將藥粉與濾紙一同置于錐形瓶子，精密加入60％甲醇25ml，稱(chēng)定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，加60％甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；利腦心膠囊每粒含何首烏以2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C20H22O9)計(jì)，不得少于0.10mg。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)一種利腦心膠囊的質(zhì)量控制檢測(cè)方法，在原檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了甘草的薄層色譜鑒別和何首烏的高效液相色譜法測(cè)定含量。本發(fā)明檢測(cè)方法先進(jìn)，精密度及重現(xiàn)性好，能夠全面的對(duì)該藥品進(jìn)行質(zhì)量控制，保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性均一性。文檔編號(hào)G01N30/90GK101269203SQ20081005068公開(kāi)日2008年9月24日申請(qǐng)日期2008年5月7日優(yōu)先權(quán)日2008年5月7日發(fā)明者于江波,偉李,王永彬,解鈞秀,許加勝,郭淑芹申請(qǐng)人:吉林敖東延邊藥業(yè)股份有限公司