專利名稱：：抗角蛋白抗體的檢測(cè)方法及試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及測(cè)量體內(nèi)血液特性的方法，具體是抗角蛋白抗體的檢測(cè)方法及試劑盒
背景技術(shù)：
：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoidarthritis,RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎為特征的慢性全身性自身免疫性疾病?；ぱ壮志梅磸?fù)發(fā)作，可導(dǎo)致關(guān)節(jié)內(nèi)軟骨和骨的破壞，關(guān)節(jié)功能障礙，嚴(yán)重甚至?xí)翚垺Ｑ苎撞∽兝奂叭砀鱾€(gè)器官，故本病又稱為類風(fēng)濕病。目前，臨床上診斷RA主要依靠美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)(ARA)1987年修訂的類風(fēng)濕診斷標(biāo)準(zhǔn)，內(nèi)容包括臨床表現(xiàn)、X線改變、類風(fēng)濕因子(RF)檢測(cè)，而符合ARA標(biāo)準(zhǔn)的病人基本上已是RA的進(jìn)展期或晚期，而早發(fā)現(xiàn)、早確診及早期積極有效的治療能在很大程度上減少骨關(guān)節(jié)受損，延緩病情的進(jìn)展并改善預(yù)后，類風(fēng)濕因子(RF)是ARA診斷標(biāo)準(zhǔn)中唯一的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，其敏感性較高、特異性較差，當(dāng)臨床癥狀不典型時(shí)，很難為早期診斷提供可靠的依據(jù)。RA是我國(guó)常見的風(fēng)濕病，發(fā)病率約為0.3%。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中可出現(xiàn)多種自身抗體，近年來發(fā)現(xiàn)了抗核周因子、抗角蛋白抗體等。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)特異的診斷標(biāo)記一直是研究的熱點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外的研究表明抗角蛋白抗體(AKA)、抗核周因子(APF)和類風(fēng)濕因子(RF)在RA具有診斷意義。IgG型抗角蛋白抗體出現(xiàn)于36%60%的RA患者血清中，特異性高達(dá)95%，隨著AKA檢測(cè)在臨床的廣泛應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)抗角蛋白抗體陽(yáng)性的"健康人"幾乎均發(fā)展成典型的RA患者。1.979年Young等人發(fā)現(xiàn)RA患者血清中有一種能與鼠食管角質(zhì)層反應(yīng)的抗體，對(duì)RA具有特異性，命名為AKA。1989年Vincent等提出應(yīng)將AKA更名為抗角質(zhì)層抗體更為恰當(dāng)。AKA可以在RA患者發(fā)病以前若干年出現(xiàn)，所以具有早期診斷價(jià)值。國(guó)內(nèi)一些單位如北京協(xié)和醫(yī)院參照此方法制作了生物薄片，進(jìn)行抗角蛋白抗體的檢測(cè)來診斷類風(fēng)濕性疾病。目前國(guó)內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室大多采用德國(guó)歐蒙公司的抗角蛋白抗體試劑盒進(jìn)行檢驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)研究。德國(guó)歐蒙公司的抗角蛋白抗體試劑盒，采用間接免疫熒光法進(jìn)行檢測(cè)，抗原來自大鼠食道。其方法為將已稀釋的血清樣本滴加在載片的反應(yīng)區(qū)內(nèi)，第1次溫育時(shí)，血清與反應(yīng)區(qū)上生物薄片中的大鼠食道角質(zhì)層反應(yīng)。如果樣本是陽(yáng)性，特異性IgG抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合。加入抗lgG抗體熒光標(biāo)記物，第2次溫育時(shí)，抗lgG抗體熒光標(biāo)記物、類風(fēng)濕患者抗角蛋白抗體、大鼠角質(zhì)層抗原相結(jié)合，然后在熒光顯微鏡下觀察特異性的熒光模型，如果抗"類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎角蛋白"(絲集蛋白)抗體與大鼠食道組織切片反應(yīng)，將會(huì)圍繞角質(zhì)層細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)的線狀熒光。'熒光模型與陽(yáng)性對(duì)照基本一致。但是采用德國(guó)歐蒙公司的抗角蛋白抗體試劑盒僅能檢測(cè)到IgG型抗角蛋白抗體，而lgG型抗角蛋白抗體僅占全部抗體的8596左右，因此還有15%左右的IgA和IgM型抗角蛋白抗體患者會(huì)被漏診，而且此種方法熒光強(qiáng)度弱，非特異熒光強(qiáng)，有可能造成漏檢。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明為了解決已知技術(shù)中抗角蛋白抗體試劑盒存在漏診、漏檢的缺陷，而提供一種準(zhǔn)確性高，補(bǔ)體來源廣泛的抗角蛋白抗體的檢測(cè)方法及試劑盒。本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是一種抗角蛋白抗體檢測(cè)方法，檢測(cè)時(shí)向反應(yīng)區(qū)內(nèi)加經(jīng)過稀釋的血清，經(jīng)孵育、漂洗、甩干，加入補(bǔ)體后經(jīng)孵育、漂洗、甩干，再加入抗補(bǔ)體抗體熒光標(biāo)記物，經(jīng)孵育、漂洗、去掉水滴，緩沖甘油封片，然后熒光顯微鏡下觀察，以角質(zhì)層出現(xiàn)典型規(guī)則的線狀或板層狀熒光為陽(yáng)性。所述的補(bǔ)體、抗補(bǔ)體抗體均來自哺乳動(dòng)物，也可以采用人重組基因方法制作的補(bǔ)體。所述的抗補(bǔ)體抗體為抗C3c抗體本發(fā)明檢測(cè)抗角蛋白抗體的試劑盒，為六面體形狀，由盒蓋與盒底組成，在盒底內(nèi)靠近長(zhǎng)邊的任意一條邊設(shè)置有放置試劑瓶的瓶架；瓶架上設(shè)有多個(gè)放置試劑瓶的孔；盒底的中間設(shè)有一個(gè)將盒底分成放置試劑與放置載片兩部分的擋片。上述試劑包括陰性對(duì)照血清、陽(yáng)性對(duì)照血清、濃縮磷酸緩沖液、補(bǔ)體和抗補(bǔ)體抗體熒光標(biāo)記物的應(yīng)用液，其中補(bǔ)體為粉狀。所述載片上形成有三個(gè)以上的反應(yīng)區(qū)，每個(gè)反應(yīng)區(qū)包被一個(gè)大鼠食管制作的生物薄片作為抗原。本發(fā)明采用在生物薄片上加入血清、補(bǔ)體與標(biāo)記熒光素的抗補(bǔ)體抗體，可顯著提高檢測(cè)效果。補(bǔ)體(complement,C)是存在于正常人和動(dòng)物血清與組織液中的一組經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)。早在19世紀(jì)末Bordet即證實(shí)，新鮮血液中含有一種不耐熱的成分，可輔助和補(bǔ)充特異性抗原抗體反應(yīng)，介導(dǎo)免疫溶菌、溶血作用，故稱為補(bǔ)體。目前已知補(bǔ)體是由30余種可溶性蛋白、膜結(jié)合性蛋白和補(bǔ)體受體組成的多分子系統(tǒng)，故稱為補(bǔ)體系統(tǒng)(complementsystem)。補(bǔ)體系統(tǒng)的各成分以無活性的前體存在于血漿中，需要時(shí)，在激活物如抗原-抗體復(fù)合物的作用下，依次被激活。RA患者血液中的特異性lgG、lgA和lgM等抗體與抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物。加入補(bǔ)體后其參與免疫反應(yīng)，補(bǔ)體在代謝過程中產(chǎn)生C3C，此時(shí)加入抗C3c抗體熒光標(biāo)記物，形成抗原-抗體-抗C3。抗體熒光素標(biāo)記物。該復(fù)合物與大鼠食管結(jié)合，其它物質(zhì)漂洗時(shí)被洗脫。熒光顯微鏡下能觀察到典型的板層狀特異性熒光。該實(shí)驗(yàn)主要特點(diǎn)在于檢測(cè)范圍包含有與角蛋白發(fā)生反應(yīng)的所有免役球蛋白(如G、A、M、E、D)，一個(gè)抗原抗體反應(yīng)簇可以結(jié)合2個(gè)或2個(gè)以上的補(bǔ)體成份，增加了熒光標(biāo)記抗體的結(jié)合數(shù)量，從而使熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。本方法在使用中直接在熒光顯微鏡下觀察即可。當(dāng)間隔時(shí)間長(zhǎng)，不能馬上看結(jié)果時(shí)，可用緩沖甘油封片，以保持反應(yīng)結(jié)果的正確性。本發(fā)明補(bǔ)體參與的是免疫復(fù)合物型抗體的檢測(cè)方法，使抗原-抗體-補(bǔ)體與熒光素的結(jié)合點(diǎn)多且牢固，熒光強(qiáng)度增大，提高了分辨率和靈敏度。能夠同時(shí)檢測(cè)lgG、lgA、lgM等型抗角蛋白抗體，減少漏診、漏檢率，為臨床提供更為準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。本發(fā)明的方法在靈敏度、特異性、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值等指標(biāo)方面均高于現(xiàn)有的方法，因此本方法在診斷類風(fēng)濕性疾病方面有更好的診斷價(jià)值。本發(fā)明的試劑盒為一次性使用，內(nèi)有蓋片、帶生物簿片的載片、補(bǔ)體和抗補(bǔ)體抗體及其他檢測(cè)所需要的試劑。另外附有使用說明書，方便檢測(cè)人員使用。圖1是現(xiàn)有方法檢測(cè)AKA為陰性的熒光圖2是現(xiàn)有方法檢測(cè)AKA為陽(yáng)性的熒光圖3是現(xiàn)有方法檢測(cè)AKA為陰性的熒光圖4是用本發(fā)明方法檢測(cè)AKA為陽(yáng)性的熒光圖5是同一標(biāo)本現(xiàn)有方法檢測(cè)AKA為陰性的熒光圖6是同一標(biāo)本本發(fā)明方法檢測(cè)AKA為陽(yáng)性的熒光圖7是本發(fā)明試劑盒的示意圖8是本發(fā)明載片的示意圖。.具體實(shí)施例方式實(shí)施例1抗角蛋白抗體的檢測(cè)方法檢測(cè)時(shí)在生物薄片反應(yīng)區(qū)內(nèi)加1:10的待測(cè)稀釋血清2541，濕盒內(nèi)37'C孵育30分鐘，PBS漂洗，甩干，加入補(bǔ)體25Ma，濕盒內(nèi)37°C孵育30分鐘，PBS漂洗，甩干，再加入標(biāo)記熒光素的抗C3c抗體25W，37°〇孵育30分鐘，PBS漂洗，甩干，緩沖甘油封片。如果直接檢測(cè)則不用封片。將載片放在熒光顯微鏡下觀察，以角質(zhì)層出現(xiàn)典型規(guī)則的線狀或板層狀熒光為陽(yáng)性。為了更好地理解本發(fā)明，下面通過臨床檢測(cè)時(shí)用兩種檢測(cè)方法得出的結(jié)果來進(jìn)一步說明本發(fā)明在檢測(cè)抗角蛋白抗體方面的積極效果所選用的病例為2007年1月至2008年2月在我院風(fēng)濕科門診或住院的RA患者58例，男性18例，女性40例，年齡6080歲，平均69歲，病程4個(gè)月至.5.7年，平均2.6年。62例非類風(fēng)濕對(duì)照者，年齡6182歲，平均67.8歲。全部符合1987年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)類風(fēng)濕分會(huì)分類標(biāo)準(zhǔn)。AKA檢測(cè)方法l.抗IgG熒光法，按歐蒙公司檢測(cè)方法；2.本發(fā)明的檢測(cè)方法。分別采用此兩種方法檢測(cè)58例類風(fēng)濕患者和62例非類風(fēng)濕對(duì)照者抗角蛋白抗體，并將兩種方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。判定標(biāo)準(zhǔn)以角質(zhì)層出現(xiàn)典型規(guī)則的線狀或板層狀熒光為陽(yáng)性。具體結(jié)果見表1及表2。表l用兩種方法檢測(cè)RA組、非RA組統(tǒng)計(jì)學(xué)比較表。_RA組(r^58)非RA組(『62)曰標(biāo)_陽(yáng)性例數(shù)陽(yáng)性率(%)陽(yáng)性例數(shù)陽(yáng)性率(%)抗IgG熒光法^^!1^^T"抗補(bǔ)體熒光法_^_^_^_~經(jīng)卡方檢驗(yàn)，在RA組兩種方法比較有顯著性差異，經(jīng)t檢驗(yàn)代0.05;在非RA組兩種方法比較無顯著性差異，/M).05。_表2兩種方法檢測(cè)結(jié)果比較(％)_<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>通過表1、表2可看本發(fā)明的測(cè)試方法在靈敏度，特異性，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值均高于已有方法，本發(fā)明采用抗補(bǔ)體熒光標(biāo)記物的檢測(cè)方法高于抗IgG型熒光標(biāo)記物檢測(cè)方法，具有很高的診斷價(jià)值，可以作為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的早期診斷。同時(shí)通過觀察熒光顯微鏡下抗角蛋白抗體熒光可看出已有技術(shù)與本發(fā)明之間的區(qū)別。下面是各種情況的熒光圖。圖1是現(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)AKA為陰性的熒光圖，熒光僅出現(xiàn)在粘膜層，故AKA檢測(cè)為陰性。圖2是現(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)AKA為陽(yáng)性的熒光圖，熒光出現(xiàn)在粘膜下層，故AKA檢測(cè)為陽(yáng)性。圖3是本發(fā)明檢測(cè)AKA為陰性的熒光圖，粘膜下層無特異性熒光，故AKA檢測(cè)為陰性。圖4是本發(fā)明檢測(cè)AKA為陽(yáng)性的熒光圖，在粘膜下層有指紋樣熒光，故AKA檢測(cè)為陽(yáng)性。圖5、圖6為分別用已有技術(shù)與本發(fā)明檢測(cè)同一標(biāo)本的熒光圖。圖5是用現(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)抗角蛋白抗體，粘膜層只有非特異熒光，故AKA檢測(cè)為陰性。圖6是用本發(fā)明檢測(cè)抗角蛋白抗體，粘膜下層有指紋樣熒光，故AKA檢測(cè)為陽(yáng)性。同一標(biāo)本不同檢測(cè)方法，得出不同結(jié)果，可以看出本發(fā)明在檢測(cè)準(zhǔn)確率方面有很大提高。實(shí)施例2試劑盒一.盒體本發(fā)明的試劑盒為一次性使用。盒體1為由紙板制作的六面體形狀，由盒底5與盒蓋2組成。盒底與盒蓋連為一體。盒底5內(nèi)在盒底5與盒蓋2相連的長(zhǎng)邊處設(shè)置有瓶架3，瓶架上設(shè)有7個(gè)孔4，可放置裝有各種試劑的瓶子10。在盒底5中間有一從瓶架3延伸至另一條長(zhǎng)邊，將盒底5分為兩部分的擋片7，其中一部分放置緩沖劑及蓋片，另一部分放置帶有包裝袋6的載片13及說明書(未圖示)。盒體的長(zhǎng)、寬、高與所裝物品的外形相匹配。二.試劑盒配備的物品在本發(fā)明試劑盒的瓶架3上放置有1瓶1100W抗C3c抗體熒光標(biāo)記物(熒光素/蛋白比為2.90)應(yīng)用液、2瓶各100Pg的補(bǔ)體、各0.5ml的陰性和陽(yáng)性對(duì)照血清各1瓶、4ml吐溫20及1000W緩沖甘油各1瓶。以圖7試劑盒示意圖為例，盒底左部分放置有兩瓶50ml濃縮的磷酸鹽緩沖劑9及裝有八片蓋片(未圖示)的小紙盒8。右部分放置有8張帶有包裝袋6的載片13及說明書(未圖示)。本發(fā)明試劑中的補(bǔ)體、抗C3C抗體是采用兔的血液分離出的補(bǔ)體及抗C3C抗體，二者均采用不透光的瓶子包裝，避光保存，禁止反復(fù)凍溶使用。補(bǔ)體為固體粉末，應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)溶。本發(fā)明的補(bǔ)體、抗C3C抗體還可采用其他哺乳動(dòng)物的補(bǔ)體、抗C3c抗體，如羊、鼠等，也可采用人重組基因方法制作的補(bǔ)體。本發(fā)明載片13的材質(zhì)為聚苯乙烯，其尺寸與一般載片相似。其一面涂有聚賴氨酸涂層，載片帶有涂層的一面，排列著五個(gè)向載片13內(nèi)部凹陷形成的容積的凹槽反應(yīng)區(qū)12。每個(gè)凹槽反應(yīng)區(qū)12都包被一個(gè)大鼠食管冰凍切片的生物薄片11，載片13外部包有一層不透光的包裝袋6。蓋片的尺寸為62mmX23mm，每個(gè)外部包有包裝袋，其八片裝在--個(gè)小紙盒8內(nèi)，放在磷酸鹽緩沖液瓶子的右邊。本發(fā)明試劑盒中的吐溫20、抗補(bǔ)體抗體熒光標(biāo)記物，補(bǔ)體、濃縮的磷酸鹽緩沖劑、緩沖甘油、類風(fēng)濕陰性血清和陽(yáng)性血清都有市售，載片、蓋片、包裝袋通過外加工得到。本發(fā)明不限于實(shí)施例，比如試劑盒盒體也可采用其他材料制作如塑料；盒底盒蓋也可分別設(shè)置；裝試劑部分的盒底也可設(shè)置襯墊，濃縮緩沖液瓶子可放置在襯墊的凹陷處。載片的材質(zhì)也可采用其他材料制作。載片上反應(yīng)區(qū)形狀也可采用圓形或其他形狀。同時(shí)反應(yīng)區(qū)的數(shù)量不限于五個(gè)。三.生物薄片的制作方法1.材料6周齡Wistar雄性大鼠由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所提供。2.操作方法(l)取6周齡雄性Wistar大鼠食管中下1/3段作為抗原，取新鮮標(biāo)本橫切面進(jìn)行冰凍，將冰凍的標(biāo)本置冰凍切片機(jī)一20°C中做冰凍切片，厚4um5um，制成抗原生物薄片，直接包被在載片的反應(yīng)區(qū)內(nèi)，然后裝入包裝袋，密封。一70匸時(shí)可保存2年，在-].O"C時(shí)可保存1年，在4'C可保存3-5個(gè)月。本發(fā)明的試劑盒應(yīng)密閉避光保存。實(shí)施例3試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟準(zhǔn)備從試劑盒中取出載片，恒溫到室溫。稀釋先將50ml的濃縮磷酸鹽緩沖液加蒸餾水稀釋至1L，稀釋液磷酸鹽含量為10.2g，pH=7.2。將2ml吐溫20加入到稀釋好的磷酸鹽緩沖液(PBS-Tween20)中，攪拌均勻。用PBS-Tween20按1:10的比例稀釋待測(cè)的血清(陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清不需稀釋)，使用前要混勻。將lOOPg粉狀補(bǔ)體用50微升蒸餾水復(fù)溶成補(bǔ)體應(yīng)用液。加樣滴加25ul稀釋后的血清至載片的反應(yīng)區(qū)中，避免產(chǎn)生氣泡。第一次溫育將載片覆有生物薄片的一面朝上，反應(yīng)區(qū)蓋上蓋片，反應(yīng)立即開始。確保標(biāo)本與生物薄片接觸，室溫溫育30分鐘。清洗用磷酸鹽緩沖液流水沖洗載片1次，然后將其浸入裝有磷酸鹽緩沖液的小杯中浸洗至少l分鐘，取出甩干。加補(bǔ)體在待測(cè)的反應(yīng)區(qū)中滴加25ul補(bǔ)體，濕盒內(nèi)37。C孵育30分鐘，PBS漂洗方法同上。再加入抗C3c抗體熒光標(biāo)記物25ul，37。C孵育30分鐘，PBS漂洗方法同上。如不能馬上看結(jié)果，需要進(jìn)行下面步驟。封片在反應(yīng)區(qū)上滴加磷酸甘油約25ul，將蓋片蓋在生物薄片反應(yīng)區(qū)上，其后30分鐘內(nèi)可保持檢測(cè)結(jié)果正確。結(jié)果判斷以在熒光顯微鏡下觀察到角質(zhì)層出現(xiàn)典型規(guī)則的線狀或板層狀熒光為陽(yáng)性。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果有疑問時(shí)，用陰性和陽(yáng)性對(duì)照血清進(jìn)行參照對(duì)比檢測(cè)。權(quán)利要求1.一種抗角蛋白抗體的檢測(cè)方法，其特征在于檢測(cè)時(shí)向反應(yīng)區(qū)內(nèi)加經(jīng)過稀釋的血清，經(jīng)孵育、漂洗、甩干，加入補(bǔ)體后經(jīng)孵育、漂洗、甩干，再加入抗補(bǔ)體抗體熒光標(biāo)記物，經(jīng)孵育、漂洗、去掉水滴，緩沖甘油封片，然后熒光顯微鏡下觀察，以角質(zhì)層出現(xiàn)典型規(guī)則的線狀或板層狀熒光為陽(yáng)性。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗角蛋白抗體的檢測(cè)方法，其特征在于補(bǔ)體、抗補(bǔ)體抗體均來自哺乳動(dòng)物，也可以采用人重組基因方法制作的補(bǔ)體。3.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗角蛋白抗體的檢測(cè)方法，其特征在于抗補(bǔ)體抗體為抗C3C抗體4.一種檢測(cè)抗角蛋白抗體的試劑盒，為六面體形狀，由盒蓋與盒底組成，其特征在于盒底內(nèi)在靠近長(zhǎng)邊的任意一條邊設(shè)置有放置試劑瓶的瓶架；瓶架上設(shè)有多個(gè)放置試劑瓶的孔；盒底的中間設(shè)有一個(gè)將盒底分成放置試劑與放置載片兩部分的擋片。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于上述試劑包括陰性對(duì)照血清、陽(yáng)性對(duì)照血清、濃縮磷酸緩沖液、補(bǔ)體和抗補(bǔ)體抗體熒光標(biāo)記物的應(yīng)用液、吐溫20,其中補(bǔ)體為粉狀。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)抗角蛋白抗體的試劑盒，其特征在于載片上形成有三個(gè)以上的反應(yīng)區(qū)，每個(gè)反應(yīng)區(qū)包被一個(gè)大鼠食管制作的生物薄片作為抗原。全文摘要本發(fā)明公開了一種抗角蛋白抗體檢測(cè)方法及試劑盒，屬于測(cè)量體內(nèi)血液特性的方法。本發(fā)明的方法為取大鼠食管制成生物薄片作為抗原，包被在載片的反應(yīng)區(qū)內(nèi)；向反應(yīng)區(qū)內(nèi)加待測(cè)血清，經(jīng)孵育、漂洗、甩干后，加入補(bǔ)體，經(jīng)孵育、漂洗、甩干，再加入抗補(bǔ)體抗體熒光標(biāo)記物，經(jīng)孵育、漂洗、甩干后，在熒光顯微鏡下觀察，以角質(zhì)層出現(xiàn)典型規(guī)則的線狀或板層狀熒光為陽(yáng)性。本發(fā)明的試劑盒內(nèi)裝有檢測(cè)用的陰性對(duì)照血清、陽(yáng)性對(duì)照血清、濃縮磷酸緩沖液、補(bǔ)體和抗補(bǔ)體抗體熒光標(biāo)記物應(yīng)用液等試劑及蓋片、帶有生物薄片的載片。本發(fā)明的方法在靈敏度、特異性、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值等指標(biāo)均高于現(xiàn)有的方法，因此本方法在診斷類風(fēng)濕性疾病方面有更好的診斷價(jià)值。文檔編號(hào)G01N33/53GK101320042SQ20081005345公開日2008年12月10日申請(qǐng)日期2008年6月6日優(yōu)先權(quán)日2008年6月6日發(fā)明者李立和,王高生申請(qǐng)人:天津市寶坻區(qū)人民醫(yī)院