專利名稱：：層析用試驗(yàn)工具的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種層析用試驗(yàn)工具。
背景技術(shù)：
：作為用能與被檢目標(biāo)特異結(jié)合的物質(zhì)檢測試樣中被檢目標(biāo)的試驗(yàn)工具有層析用試驗(yàn)工具等。眾所周知，用層析用試驗(yàn)工具檢測血液中的被檢目標(biāo)時，來源于血液紅細(xì)胞的顏色會影響檢測結(jié)果的正確讀取。因此，用含紅細(xì)胞等血細(xì)胞的試樣時，使用一種具有從試樣中分離血細(xì)胞(特別是紅細(xì)胞)的分離膜的層析用試驗(yàn)工具。作為具有分離血細(xì)胞的分離膜的層析用試驗(yàn)工具，已知有以下用具US6008059上記述了一種具有用于除去紅細(xì)胞等細(xì)胞成份的多孔分離矩陣(matrix)的層析用試驗(yàn)工具。據(jù)記載，作為多孔分離矩陣可以使用膜內(nèi)孔隙尺寸漸減的有梯度的非對稱膜。US2003032196上記述一種具有用于除去紅細(xì)胞等細(xì)胞成份的取樣過濾器的層析用試驗(yàn)工具。W09734148上記述了一種具有根據(jù)液體成份展開速度比紅細(xì)胞等細(xì)胞成份快的特性進(jìn)行分離的多孔膜的層析用試驗(yàn)工具。據(jù)記載，在此多孔膜上，紅細(xì)胞不是被從全血中過濾掉，而是由于紅細(xì)胞展開速度慢，從血漿中分離出來。在此，在上述US6008059和US2003032196的層析用試驗(yàn)工具中均使用分離膜來捕捉試樣中紅細(xì)胞等血細(xì)胞成份并讓液體成份通過，以此分離血細(xì)胞成份。這種層析用試驗(yàn)工具當(dāng)血樣添加到分離膜時，血樣中的血細(xì)胞成份會被分離膜捕捉。此時，分離膜可能引起網(wǎng)眼堵塞，出現(xiàn)血液中的液體成份(比如血漿等)通過分離膜花費(fèi)時間的情況。從而帶來檢測費(fèi)時的問題。上述W09734148上記述的層析用試驗(yàn)工具使用的是一種根據(jù)試樣中液體成份展開速度比紅細(xì)胞等血細(xì)胞成份快的特性分離血細(xì)胞成份的分離膜。這種層析用試驗(yàn)工具并非在分離膜上捕捉血細(xì)胞成份。因此，隨著檢測后時間一長，紅細(xì)胞等會從分離膜滲漏出，侵蝕層析載體。從而帶來檢查結(jié)果讀取困難的問題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的范圍只由后附權(quán)利要求書所規(guī)定，在任何程度上都不受這一節(jié)
發(fā)明內(nèi)容的陳述所限。鑒于上述情況本發(fā)，提供一種層析用試驗(yàn)工具可快速檢測，且過多長時間，血液中的紅細(xì)胞等血細(xì)胞都不會侵蝕層析載體。本發(fā)明提供一種用于檢測含有紅細(xì)胞和液體成份的試樣中的被檢目標(biāo)的層析用試驗(yàn)工具，包括-分離所述紅細(xì)胞和所述液體成份的第一血細(xì)胞分離部件，該第一血細(xì)胞分離部件可以使所述液體成份比所述紅細(xì)胞更快地展開；分離所述紅細(xì)胞和所述液體成份的第二血細(xì)胞分離部件，該第二血細(xì)胞分離部件可以捕捉所述紅細(xì)胞并讓所述液體成份通過；以及承載與所述被檢目標(biāo)特異性結(jié)合的捕捉物質(zhì)的層析載體；其中，所述第一血細(xì)胞分離部件、所述第二血細(xì)胞分離部件和所述層析載體從試樣展開方向的上游依次按所述第一血細(xì)胞分離部件、所述第二血細(xì)胞分離部件、所述層析載體的順序配置。所述第一血細(xì)胞分離部件將所述試樣向試樣展開方向分離；所述第二血細(xì)胞分離部件將所述試樣向與試樣展開方向垂直方向分離。所述層析用試驗(yàn)工具，還包括在所述第二血細(xì)胞分離部件的試樣展開方向上游頂端的密封部件，用于防止所述試樣從所述第一血細(xì)胞分離部件進(jìn)入所述第二血細(xì)胞分離部件。所述第二血細(xì)胞分離部件由多孔材料制成，該多孔材料中的細(xì)孔尺寸從該多孔材料上面向下逐漸變小。所述第一血細(xì)胞分離部件在未與所述第二血細(xì)胞分離部件重疊的區(qū)域有加樣區(qū)。所述第一血細(xì)胞分離部件的至少一部分從所述第二血細(xì)胞分離部件的試樣展開方向上游與所述第二血細(xì)胞分離部件重疊，所述第二血細(xì)胞分離部件的至少一部分從所述層析載體的試樣展開方向上游起與所述層析載體重疊。所述第二血細(xì)胞分離部件在試樣展開方向下游有未與所述第一血細(xì)胞分離部件重疊的區(qū)域。所述層析用試驗(yàn)工具，還包括具有與所述被檢目標(biāo)特異性結(jié)合且被標(biāo)記的標(biāo)記物質(zhì)的標(biāo)記保持部件；該標(biāo)記保持部件配置在所述第二血細(xì)胞分離部件和所述層析載體之間。所述標(biāo)記保持部件至少一部分從所述層析載體的試樣展開方向上游與所述層析載體重疊。所述標(biāo)記物質(zhì)用有色粒子標(biāo)記。所述層析用試驗(yàn)工具還包括吸收所述層析載體排出的所述液體成份的吸收部件；其中，該吸收部件配置在所述層析載體試樣展開方向下游。所述層析載體的至少一部分從所述吸收部件的試樣展開方向上游與所述吸收部件重疊。所述層析載體將所述捕捉物質(zhì)承載到判斷部分。本發(fā)明另提供一種用于檢測含紅細(xì)胞和液體成份的試樣中的被檢目標(biāo)的層析用試驗(yàn)工具，包括由有等于或大于所述紅細(xì)胞大小的細(xì)孔的多孔材料構(gòu)成的第一血細(xì)胞分離部件；由有小于所述紅細(xì)胞大小的細(xì)孔的多孔材料構(gòu)成的第二血細(xì)胞分離部件；及承載與被檢目標(biāo)特異性結(jié)合的捕捉物質(zhì)的層析載體；其中，所述第一血細(xì)胞分離部件、所述第二血細(xì)胞分離部件和所述層析載體從試樣展開方向的上游依次按所述第一血細(xì)胞分離部件、所述第二血細(xì)胞分離部件、所述層析載體的順序配置。所述第一血細(xì)胞分離部件和所述第二血細(xì)胞分離部件為膜狀。所述第二血細(xì)胞分離部件是過濾膜。所述第二血細(xì)胞分離部件的細(xì)孔從上向下逐漸變小。所述層析用試驗(yàn)工具，還包括具有能與所述被檢目標(biāo)特異性結(jié)合且被標(biāo)記的標(biāo)記物質(zhì)的標(biāo)記保持部件；其中，該標(biāo)記保持部件配置于所述第二血細(xì)胞分離部件和所述層析載體之間。本發(fā)明再提供一種運(yùn)用層析用試驗(yàn)工具檢測含紅細(xì)胞和液體成份的試樣中的被檢目標(biāo)的方法，包括以下步驟第一分離步驟，通過比所述紅細(xì)胞更快地展開所述液體成份，分離所述紅細(xì)胞和所述液體成份；第二分離步驟，通過捕捉所述紅細(xì)胞并讓所述液體成份通過，分離所述紅細(xì)胞和所述液體成份；以及捕捉步驟，將所述被檢目標(biāo)捕捉到承載有能與所述被檢目標(biāo)特異性結(jié)合的捕捉物質(zhì)的判斷部分。所述方法，還包括一個步驟，即在所述第二分離步驟之后，用有與所述被檢目標(biāo)特異性結(jié)合且被標(biāo)記的標(biāo)記物質(zhì)的標(biāo)記保持部件形成被檢目標(biāo)和標(biāo)記物質(zhì)的復(fù)合物。[圖l]為本發(fā)明一實(shí)施方式的層析用試驗(yàn)工具結(jié)構(gòu)的截面圖。[圖2]為圖1所示層析用試驗(yàn)工具的變形例的截面圖。[圖3]為本發(fā)明實(shí)施例1的層析用試驗(yàn)工具結(jié)構(gòu)的截面圖。[圖4]為比較例1的層析用試驗(yàn)工具結(jié)構(gòu)的截面圖。[圖5]為本發(fā)明實(shí)施例2的層析用試驗(yàn)工具結(jié)構(gòu)的截面圖。[圖6]為比較例2的層析用試驗(yàn)工具結(jié)構(gòu)的截面圖。[圖7]為向本發(fā)明實(shí)施例1和比較例l的層析用試驗(yàn)工具加樣后隨時間的推移試樣展開情況的照片。[圖8]為向本發(fā)明實(shí)施例2和比較例2的層析用試驗(yàn)工具加試樣后隨時間的推移試樣展開情況的照片。具體實(shí)施例方式下面將參照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案。附圖和以下敘述中所示內(nèi)容均為例示，本發(fā)明的范圍不受附圖及以下敘述中所示內(nèi)容的限制。1.層析用試驗(yàn)工具的結(jié)構(gòu)圖l為本發(fā)明一實(shí)施方式的層析用試驗(yàn)工具(以下也稱試驗(yàn)工具)結(jié)構(gòu)的截面圖。如圖1所示，試驗(yàn)工具l從含血細(xì)胞成份和液體成份的試樣S的展開方向(箭頭A方向)上游依次配置有第一血細(xì)胞分離部件3、第二血細(xì)胞分離部件5和層析載體7。第一血細(xì)胞分離部件3根據(jù)液體成份在第一血細(xì)胞分離部件3的展開速度比血細(xì)胞成份快的原理，分離血細(xì)胞成份和液體成份。第二血細(xì)胞分離部件5用捕捉血細(xì)胞成份且讓液體成份通過的方法分離血細(xì)胞成份和液體成份。層析載體7將能與被檢目標(biāo)特異性結(jié)合的捕捉物質(zhì)承載于判斷區(qū)9。第一血細(xì)胞分離部件3向試樣展開方向分離試樣S。第二血細(xì)胞分離部件5向與試樣展開方向垂直的方向分離試樣S。第一血細(xì)胞分離部件3和第二血細(xì)胞分離部件5部分重疊。第一血細(xì)胞分離部件3在未與第二血細(xì)胞分離部件5重疊的區(qū)域有加樣區(qū)4。一般層析用試驗(yàn)工具當(dāng)加樣于一定區(qū)域(比如圖l的加樣區(qū)4)時，試樣會向檢測結(jié)果顯示部分(比如圖1的判斷區(qū)9)展開(移動)。本說明書中所謂"試樣展開方向"指試樣向檢測結(jié)果顯示部分展開(移動)的方向。第二血細(xì)胞分離部件5的試樣展開方向上游起點(diǎn)處配置有密封部件IO，用于防止試樣S從第一血細(xì)胞分離部件3進(jìn)入第二血細(xì)胞分離部件5。第二血細(xì)胞分離部件5和層析載體7之間配置有標(biāo)記保持部件11。第二血細(xì)胞分離部件5和標(biāo)記保持部件11接觸配置。標(biāo)記保持部件11和層析載體7之間接觸配置。標(biāo)記保持部件ll有與被檢目標(biāo)特異性結(jié)合且被標(biāo)記的標(biāo)記物質(zhì)。層析載體7下游配置有吸收部件13，與層析載體7接觸。上述各部件均貼在由塑料、紙或玻璃等構(gòu)成的基材15上。2.層析用試驗(yàn)工具的使用方法等下面根據(jù)圖l說明試驗(yàn)工具l的使用方法。使用試驗(yàn)工具l可以快速檢查，且檢查后過一段時間，層析載體7也難以被紅細(xì)胞等血細(xì)胞成份侵蝕。以下也對此加以說明。檢査時試驗(yàn)工具l的配置方向無特別限定。試驗(yàn)工具l既可平放狀態(tài)使用，也可豎立狀態(tài)使用。下面以平放狀態(tài)下使用試驗(yàn)工具l為例進(jìn)行說明。(1)試樣S的添加首先向第一血細(xì)胞分離部件3的加樣區(qū)4添加含血細(xì)胞成份和液體成份的試樣S。此時，不知道試樣S中是否含被檢目標(biāo)。以下假設(shè)試樣S中含有被檢目標(biāo)進(jìn)行說明。試樣S只要是含血細(xì)胞成份和液體成份的標(biāo)本，無論是血液本身、還是稀釋在展開溶劑等中的血液、還是經(jīng)過從血液中除去部分成份等前處理的標(biāo)本均可。血細(xì)胞成份由紅細(xì)胞等血細(xì)胞構(gòu)成。液體成份當(dāng)試樣S為血液中添加展開溶劑的試樣時由血漿和展開溶劑構(gòu)成。加樣區(qū)4是在試驗(yàn)工具1添加試樣的部分。所謂加樣區(qū)4指使用說明書、試驗(yàn)工具l本身或裝試驗(yàn)工具l的容器等上指定為可添加試樣部位的部位。加樣區(qū)4最好設(shè)置在盡可能遠(yuǎn)離第二血細(xì)胞分離部件5的位置。特別是加樣區(qū)4最好設(shè)置在試驗(yàn)工具1上游起點(diǎn)。比如，第一血細(xì)胞分離部件3和第二血細(xì)胞分離部件5未重疊的區(qū)域等。這樣，通過將加樣區(qū)4設(shè)置在盡可能遠(yuǎn)離第二血細(xì)胞分離部件5的位置，可以拉長試樣S在第一血細(xì)胞分離部件3中移動的距離。從而使含在試樣s中的血細(xì)胞成份和液體成份的分離更適當(dāng)。另外，分離距離的長度對于試樣量來說過長，也可能使到達(dá)第二血細(xì)胞分離部件的液體成份量達(dá)不到檢測被檢目標(biāo)所需要的量。因此，分離距離的長度應(yīng)根據(jù)試樣量適當(dāng)選擇。添加到加樣區(qū)4的試樣S滲入第一血細(xì)胞分離部件3中，因毛管現(xiàn)象而依次沿第一血細(xì)胞分離部件3、第二血細(xì)胞分離部件5、標(biāo)記保持部件ll、層析載體7和吸收部件13移動。因此，這些部件可以使用能利用無紡布或多孔材料等的毛管現(xiàn)象使試樣S展開的材料。'(2)用第一血細(xì)胞分離部件進(jìn)行的分離試樣S中的液體成份和血細(xì)胞成份在第一血細(xì)胞分離部件3內(nèi)因展開速度不同而分離。即，試樣S中的液體成份最先從第一血細(xì)胞分離部件3排出。試樣S中的血細(xì)胞成份比液體成份后從第一血細(xì)胞分離部件3排出。最先排出的液體成份中可能含有若干血細(xì)胞成份，但不會對本實(shí)施方式的作用效果產(chǎn)生很大影響。因此，以最先排出的液體成份中實(shí)際上不含血細(xì)胞成份為例進(jìn)行說明。第一血細(xì)胞分離部件3的結(jié)構(gòu)無特別限定，只要能根據(jù)液體成份在第一血細(xì)胞分離部件3內(nèi)展開速度比血細(xì)胞成份快的原理分離血細(xì)胞成份和液體成份即可。作為使液體成份的展開速度比血細(xì)胞成份加快的因素，比如可以通過血細(xì)胞成份與第一血細(xì)胞分離部件3產(chǎn)生某種相互作用(靜電的相互作用、立體的相互作用)使血細(xì)胞成份在第一血細(xì)胞分離部件3的展開速度放緩。作為一例，當(dāng)?shù)谝谎?xì)胞分離部件3為多孔材料、其孔隙和血細(xì)胞差不多或略大一點(diǎn)點(diǎn)時，液體成份可以順暢地從孔隙移過，而血細(xì)胞成份卻不能順暢地從孔隙移過，因此，血細(xì)胞成份在第一血細(xì)胞分離部件3的展開速度變慢，而液體成份的展開速度比血細(xì)胞成份加快。血液中所含血細(xì)胞因種類不同而大小各異。因此，試樣s中可能含有各種各樣大小不同的血細(xì)胞成份。比如，當(dāng)試樣S是由人的血液制備而成時，試樣S中所含血細(xì)胞及其大小如下白細(xì)胞中淋巴細(xì)胞為615iim，單核細(xì)胞為1218pm，中性細(xì)胞為1012pm，嗜堿性細(xì)胞為1015)im，嗜酸性細(xì)胞為1015pm，紅細(xì)胞為78pm，血小板為l4pm。象這樣試樣S中可能含有的血小板等較小血細(xì)胞成份比紅細(xì)胞等較大血細(xì)胞成份在第一血細(xì)胞分離部件3中的展開速度可能更快，有時，有可能展開速度與液體成份基本上相同。然而，大小比紅細(xì)胞等血細(xì)胞成份小的血細(xì)胞成份對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響的可能性很低，因此，即使它在第一血細(xì)胞分離部件3中的展開速度快，也不會給本實(shí)施方式的作用效果造成很大影響。第一血細(xì)胞分離部件3可以使用紙色譜法和薄層色譜法中使用的膜。比如，可以使用硝化纖維素、尼龍(比如導(dǎo)入了可以用羧基和烷基置換的氨基的修飾尼龍)、聚偏氟乙烯(PVDF)、醋酸纖維等各種材料的膜。具體而言，可以使用MF1(橫向流動，Whatman公司)、LF1(橫向流動，Whatman公司)、FUSION5(Whatman公司)等市場銷售品，也可以使用W09734148上記述的部件。第一血細(xì)胞分離部件3最好為膜狀。第一血細(xì)胞分離部件3最好向試樣展開方向移動試樣S，并向試樣展開方向分離試樣S。這是因?yàn)橐子谑乖嚇覵在第一血細(xì)胞分離部件3的移動距離(分離距離)拉長。不過，第一血細(xì)胞分離部件3的結(jié)構(gòu)和用第一血細(xì)胞分離部件3進(jìn)行試樣分離的方向無特別限定。比如第一血細(xì)胞分離部件3也可以是塊狀，也可以向與試樣展開方向垂直的方向分離試樣S。從第一血細(xì)胞分離部件3排出的液體成份經(jīng)過第一血細(xì)胞分離部件3與第二血細(xì)胞分離部件5的接觸部位移動到第二血細(xì)胞分離部件5。雖然在本實(shí)施方式中第一血細(xì)胞分離部件3和第二血細(xì)胞分離部件5直接接觸，但也可以在第一血細(xì)胞分離部件3和第二血細(xì)胞分離部件5之間設(shè)置其他不妨礙試樣S從第一血細(xì)胞分離部件3移動到第二血細(xì)胞分離部件5的部件。試樣S從第一血細(xì)胞分離部件3移到第二血細(xì)胞分離部件5，既可以從試樣展開方向也可以從與試樣展開方向垂直的方向進(jìn)入。在本實(shí)施方式中，第二血細(xì)胞分離部件5為向與試樣展開方向垂直的方向分離試樣S，因此，試樣S最好從與試樣展開方向垂直的方向進(jìn)入第二血細(xì)胞分離部件5。因此，第二血細(xì)胞分離部件5的試樣展開方向上游起點(diǎn)處設(shè)有密封部件IO，以防止試樣S從第一血細(xì)胞分離部件3進(jìn)入第二血細(xì)胞分離部件5。以此，可以防止試樣S順試樣展開方向進(jìn)入第二血細(xì)胞分離部件5。密封部件10只要可以防止試樣S進(jìn)入，對其結(jié)構(gòu)和材料均無特別限定。作為密封部件使用的部件具體而言可以使用ARcare系列(Adhesives公司)等市場銷售產(chǎn)品。密封部件10也可如圖2所示省略。(3)用第二血細(xì)胞分離部件5進(jìn)行的分離移動到第二血細(xì)胞分離部件5的液體成份在第二血細(xì)胞分離部件5中向與試樣展開方向垂直的方向移動。第二血細(xì)胞分離部件5通過捕捉血細(xì)胞成份、讓液體成份通過來分離試樣S中的液體成份和血細(xì)胞成份。即，紅細(xì)胞等血細(xì)胞成份被第二血細(xì)胞分離部件5捕捉，而液體成份則不被捕捉從第二血細(xì)胞分離部件5排出。在本實(shí)施方式中，液體成份先通過第二血細(xì)胞分離部件5。因此，不會發(fā)生在液體成份通過前，血細(xì)胞成份堵塞第二血細(xì)胞分離部件5的情況，液體成份可以順利地通過。因此，用本實(shí)施方式可以快速進(jìn)行檢查。試樣S中的血細(xì)胞成份比液體成份晚從第一血細(xì)胞分離部件3排出，晚到達(dá)第二血細(xì)胞分離部件5。第二血細(xì)胞分離部件5捕捉住紅細(xì)胞等血細(xì)胞成份不讓通過，因此，時間過后也不會出現(xiàn)紅細(xì)胞等血細(xì)胞成份侵蝕層析載體的情況。因此，時間過后也不會有檢査結(jié)果讀取困難的情況發(fā)生。雖然此時第二血細(xì)胞分離部件5可能會引起堵塞，但液體成份己經(jīng)通過第二血細(xì)胞分離部件5，不會影響檢查時間。第二血細(xì)胞分離部件5的結(jié)構(gòu)并無特別限定，至少是以捕捉紅細(xì)胞并讓液體成份通過的方式分離紅細(xì)胞等血細(xì)胞成份和液體成份即可。作為一例，第二血細(xì)胞分離部件5由孔隙小于待捕捉的血細(xì)胞(比如紅細(xì)胞)的多孔材料構(gòu)成。在這種情況下，作為捕捉對象的血細(xì)胞無法通過細(xì)孔，被第二血細(xì)胞分離部件5捕捉。多孔材料中的孔隙大小也可以從該多孔材料上面向下逐漸變小。這樣，該多孔材料上面孔隙較大，試樣易于擴(kuò)散，試樣在充分?jǐn)U散的狀態(tài)下到達(dá)該多孔材料下面較小的細(xì)孔，血細(xì)胞成份被細(xì)孔捕捉，因此，具有分離效率高的長處。如上所述，試樣S中含有各種大小不一的血細(xì)胞成份。試樣S中略小于紅細(xì)胞等血細(xì)胞成份的血細(xì)胞成份有可能在第二血細(xì)胞分離部件5中未被捕捉與液體成份一起通過。但是，略小于紅細(xì)胞等血細(xì)胞成份的血細(xì)胞成份影響檢測結(jié)果的可能性很小。因此，較小血細(xì)胞成份即使與液體成份一起通過第二血細(xì)胞分離部件5，也不會對本實(shí)施方式的作用效果產(chǎn)生多大影響。因此，這種情況也視為"捕捉血細(xì)胞成份'。'紅細(xì)胞等血細(xì)胞大小因動物種類而各異。比如與人的紅細(xì)胞大小相比，狗的紅細(xì)胞大小約為80%，貓的紅細(xì)胞大小約為50%。因此，比如將待捕捉目標(biāo)定為紅細(xì)胞時，第二血細(xì)胞分離部件5可根據(jù)作為試樣使用的血液的動物種類的紅細(xì)胞大小適當(dāng)選擇孔隙的大小。第二血細(xì)胞分離部件5可以使用市場上出售的過濾膜。作為市場銷售的過濾膜，比如有BTSSP100、BTSSP200、BTSSP3OO(VerticalFlowType,PALL公司)等。此外，第二血細(xì)胞分離部件5還可以使用US6008059上記述的不對稱膜和US2003032196上記述的取樣過濾器。比如，可以用疏水性聚和物和親水性聚和物組合而成的材料(US5240862，US5076925)制作不對稱膜和取樣過濾器。在此，作為疏水性聚和物有聚砜、聚醚砜、聚酰亞胺和聚醚亞胺。作為親水性聚和物有聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚乙烯醇、聚醋酸乙烯酯和聚乙二醇。第二血細(xì)胞分離部件5最好為膜狀。第二血細(xì)胞分離部件5最好向與試樣展開方向垂直的方向移動試樣S，并向與試樣展開方向垂直的方向分離試樣S。一般捕捉血細(xì)胞成份讓液體成份通過來分離液體成份和血細(xì)胞成份時，分離面積大一些為好。向與試樣展開方向垂直的方向分離試樣S的第二血細(xì)胞分離部件5易于擴(kuò)大分離面積。但是，第二血細(xì)胞分離部件5的結(jié)構(gòu)和用第二血細(xì)胞分離部件5分離試樣的方向無特別限定。比如第二血細(xì)胞分離部件5也可以是塊狀，也可向試樣展開方向分離試樣s。如果分離面積對于試樣量來說過大，也可能到達(dá)層析載體7的液體成份數(shù)量無法滿足檢出被檢目標(biāo)所需要的量。因此，分離面積要根據(jù)試樣S的量適當(dāng)選擇。當(dāng)?shù)诙?xì)胞分離部件5向試樣展開方向的垂直方向分離試樣S時，最好第一血細(xì)胞分離部件3的至少一部分從第二血細(xì)胞分離部件5試樣展開方向上游起與第二血細(xì)胞分離部件5重疊。第二血細(xì)胞分離部件5的至少一部分最好從層析載體7的試樣展開方向上游與層析載體7重疊配置。這種配置可以在第二血細(xì)胞分離部件5上面以更寬的面積接受從第一血細(xì)胞分離部件3排出的試樣S。還可以在第二血細(xì)胞分離部件5下面以更廣的面積向?qū)游鲚d體7排出試樣S。如果第二血細(xì)胞分離部件5的試樣展開方向下游末端與上述第一血細(xì)胞分離部件3重疊，則從第一血細(xì)胞分離部件3排出的試樣S有可能不通過第二血細(xì)胞分離部件5而直接到達(dá)層析載體7。因此，第二血細(xì)胞分離部件5最好在其試樣展開方向下游有一未與第一血細(xì)胞分離部件3重疊的區(qū)域。從第二血細(xì)胞分離部件5排出的液體成份通過第二血細(xì)胞分離部件5與標(biāo)記保持部件11的接觸部分移動到標(biāo)記保持部件11。在本實(shí)施方式中，第二血細(xì)胞分離部件5和標(biāo)記保持部件11接觸，但第二血細(xì)胞分離部件5和標(biāo)記保持部件11之間也可以設(shè)置不妨礙試樣S從第二血細(xì)胞分離部件5向標(biāo)記保持部件ll移動的其他部件。(4)復(fù)合物的生成移動到標(biāo)記保持部件ll的液體成份因毛管現(xiàn)象而在標(biāo)記保持部件ll中移動。標(biāo)記保持部件ll有能與被檢目標(biāo)特異性結(jié)合且被標(biāo)記的標(biāo)記物質(zhì)。因此，當(dāng)液體成份中含有被檢目標(biāo)時，被檢目標(biāo)與標(biāo)記物質(zhì)特異性結(jié)合生成復(fù)合物。生成的復(fù)合物與液體成份一起移動到層析載體7。未形成復(fù)合物狀態(tài)(即分離狀態(tài))的被檢目標(biāo)和標(biāo)記物質(zhì)也隨液體成份一起移動到層析載體7。對于被檢目標(biāo)種類無特別限定，只要是含在人等血液中且不會被第二血細(xì)胞分離部件5過濾掉的物質(zhì)均可。舉例來說，作為被檢目標(biāo)有抗原、抗體、激素、生長激素受體、凝集素、凝集素結(jié)合型糖質(zhì)、藥物或其代謝物、藥物受體、核酸及其片段、變異體和組合等。具體而言，作為被檢目標(biāo)可以是細(xì)菌、原生生物和真菌等細(xì)胞、病毒、蛋白質(zhì)、多糖類等，如除上述流感病毒外，還有副流感病毒、RS病毒、肺炎支原體、輪狀病毒、杯狀病毒、冠狀病毒、腺病毒、腸道病毒、皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、重癥急性呼吸器癥候群病原病毒、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、三日瘧原蟲、其他消化器官疾病、中樞神經(jīng)疾病、出血熱等各種疾病的病原體、這些病原體的代謝物、癌胚抗原和CyFRA等腫瘤標(biāo)記物、激素等。使用狗血時，作為被檢目標(biāo)還有絲蟲抗原。用貓血時，作為被檢目標(biāo)還有貓白血病病毒、貓免疫缺陷病毒及其抗體等。標(biāo)記物質(zhì)只要能與上述被檢目標(biāo)特異性結(jié)合即可。作為被檢目標(biāo)和標(biāo)記物質(zhì)的特異性結(jié)合，比如可以是抗原抗體互相反應(yīng)的結(jié)合及配體受體結(jié)合等基于生物學(xué)親和性的結(jié)合。標(biāo)記物質(zhì)可以用各種方法標(biāo)記。標(biāo)記物質(zhì)比如可以用有色粒子標(biāo)記。此時，可目測確認(rèn)檢査結(jié)果。有色粒子比如有染色的膠乳粒子、金等金屬膠體等。標(biāo)記保持部件ll可以使用玻璃纖維、纖維素纖維等各種材料的東西。標(biāo)記保持部件ll也可省略。此時，標(biāo)記物質(zhì)可預(yù)先添加到試樣S中，或保存在第一或第二血細(xì)胞分離部件3、5等其他部件中。標(biāo)記保持部件ll排出的液體成份通過標(biāo)記保持部件ll與層析載體7的接觸部分移動到層析載體7。在本實(shí)施方式中，標(biāo)記保持部件11與層析載體7直接接觸，也可以在標(biāo)記保持部件ll與層析載體7之間設(shè)置不妨礙試樣S從標(biāo)記保持部件11移動到層析載體7的其他部件。(5)檢查結(jié)果的判斷移動到層析載體7的液體成份因毛管現(xiàn)象在層析載體7中移動。層析載體7將與被檢目標(biāo)特異性結(jié)合的捕捉物質(zhì)承載至判斷區(qū)9。當(dāng)液體成份到達(dá)判斷區(qū)9時，液體成份中的被檢目標(biāo)與捕捉物質(zhì)特異性結(jié)合。結(jié)果，被檢目標(biāo)在判斷區(qū)9被捕捉。當(dāng)標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合到被在判斷區(qū)9捕捉到的被檢目標(biāo)時，標(biāo)記物質(zhì)上的標(biāo)記顯現(xiàn)在判斷區(qū)9。比如，當(dāng)標(biāo)記物質(zhì)用有色粒子標(biāo)記時，該粒子顏色出現(xiàn)在判斷區(qū)9，可以確認(rèn)試樣S中存在被檢目標(biāo)。有可能以二種方式結(jié)合一種是被檢目標(biāo)與標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合后再與捕捉物質(zhì)結(jié)合，另一種是被檢目標(biāo)與捕捉物質(zhì)結(jié)合后再與標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合。捕捉物質(zhì)只要是能與被檢目標(biāo)特異性結(jié)合的物質(zhì)即可。作為此被檢目標(biāo)與捕捉物質(zhì)的特異性結(jié)合，比如可以有抗原抗體互相反應(yīng)的結(jié)合及配體受體結(jié)合等基于生物學(xué)親和性的結(jié)合。例如當(dāng)被檢目標(biāo)為抗原時，可以用與抗原相對的抗體作為標(biāo)記物質(zhì)和捕捉物質(zhì)。此時，作為標(biāo)記物質(zhì)使用的抗體和作為捕捉物質(zhì)使用的抗體最好分別識別抗原不同的部位(抗原決定基)。例如當(dāng)被檢目標(biāo)為抗體時，可以用與抗體相對的抗原作為捕捉物質(zhì)，可以用能與抗體特異性結(jié)合的物質(zhì)(抗體)作為標(biāo)記物質(zhì)。通過判斷區(qū)9的液體成份從層析載體7排出，被吸收部件13吸收。通過吸收部件13吸收液體成份，促進(jìn)液體成份的移動。吸收部件13也可以省略。此時，比如也可以通過延長層析載體7等辦法來促進(jìn)液體成份移動。層析載體7可以使用硝化纖維素、尼龍(比如導(dǎo)入了可以用羧基和烷基置換的氨基的修飾尼龍)、聚偏氟乙烯(PVDF)、醋酸纖維等各種材料。吸收部件13可以使用纖維素和玻璃纖維等各種材料的制品。根據(jù)檢查時的情況，有時將試樣S添加到試驗(yàn)工具1的加樣區(qū)4后，需要將試驗(yàn)工具l靜放一會兒后，再確認(rèn)檢查結(jié)果。在這種情況下，可能會擔(dān)心比液體成份晚從第一血細(xì)胞分離部件排出的血細(xì)胞成份會到達(dá)判斷區(qū)9，從而影響判斷區(qū)9的判斷結(jié)果。比如，擔(dān)心紅細(xì)胞到達(dá)判斷區(qū)9，使判斷區(qū)9變紅，從而難以分辨作為被檢目標(biāo)檢測結(jié)果出現(xiàn)在判斷區(qū)9的顏色。然而，以本實(shí)施方式，從第一血細(xì)胞分離部件排出的MM成份被第二血Wfi分離部件5捕捉，血細(xì)胞成份不會到達(dá)判斷區(qū)9，檢查后放置一段時間，判斷區(qū)9也不會受到血細(xì)胞成份的影響。舉例1.實(shí)施例l的試驗(yàn)工具的制作如圖3所示，制作實(shí)施例l的試驗(yàn)工具。部件的規(guī)格如表l所示。部件之間的重疊見圖3。在實(shí)施例l的試驗(yàn)工具中，保護(hù)膜17與第一血細(xì)胞分離部件3的重疊很少，因此，添加的試樣的展開速度比較快。刺實(shí)施例1的試驗(yàn)工具的結(jié)構(gòu)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>2.比較例l的試驗(yàn)工具的制作下面如圖4所示制作比較例1的試驗(yàn)工具。比較例l的試驗(yàn)工具除沒有設(shè)第二血細(xì)胞分離部件5和密封部件10外，其余結(jié)構(gòu)均與實(shí)施例l的試驗(yàn)工具相同。部件的規(guī)格如表2。部件之間的重疊如圖4所示。[表2]<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>3.實(shí)施例2的試驗(yàn)工具的制作如圖5所示，制作實(shí)施例2的試驗(yàn)工具。實(shí)施例2的試驗(yàn)工具類似實(shí)施例l的試驗(yàn)工具，但是保護(hù)膜17長、保護(hù)膜17與第一血細(xì)胞分離部件3的重疊多這二點(diǎn)與實(shí)施例1不同。因此，實(shí)施例2的試驗(yàn)工具所加試樣的展開速度比較慢。4.比較例2的試驗(yàn)工具的制作如圖6所示，制作比較例2的試驗(yàn)工具。比較例2的試驗(yàn)工具類似比較例l的試驗(yàn)工具，但是保護(hù)膜17長、保護(hù)膜17與第一血細(xì)胞分離部件3的重疊多這二點(diǎn)與比較例1不同。另外，比較例2的試驗(yàn)工具比實(shí)施例2的試驗(yàn)工具少了第二血細(xì)胞分離部件5和密封部件10。5.效果確認(rèn)試驗(yàn)下面用以下方法進(jìn)行試驗(yàn)，來證明本發(fā)明的效果。5—1.實(shí)施例l的試驗(yàn)工具與比較例l的試驗(yàn)工具比較在實(shí)施例l的試驗(yàn)工具和比較例1的試驗(yàn)工具的加樣區(qū)4分別添加全血100pL并展開，觀察并測定隨著時間推移血細(xì)胞滲漏長度。其結(jié)果如表3和圖7所示。圖7是顯示實(shí)施例1和比較例1的試驗(yàn)工具在每個時間段試樣的展開狀況的照片。圖7的照片中用箭頭表示標(biāo)記保持部件ll的試樣展開方向下游末端。此箭頭右邊部分的長度即為血細(xì)胞滲漏的長度。將血細(xì)胞滲漏的長度在層析載體7中標(biāo)記保持部件11和吸收部件13均未重疊的部分的長度中所占比例作為占有率表示如表3。刺<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>根據(jù)表3得知，實(shí)施例1的試驗(yàn)工具經(jīng)過20分鐘也完全沒有血細(xì)胞滲漏，而比較例1的試驗(yàn)工具則在經(jīng)過30秒時就已經(jīng)發(fā)生滲漏，在經(jīng)過15分鐘時己經(jīng)到達(dá)判斷區(qū)9，并染色判斷區(qū)9，使檢查結(jié)果難以判斷。由此證實(shí)，使用本發(fā)明實(shí)施例的試驗(yàn)工具，檢查后過一段時間血液中的血細(xì)胞也不會侵蝕層析載體7。5—2.實(shí)施例2的試驗(yàn)工具與比較例2的試驗(yàn)工具比較在實(shí)施例2的試驗(yàn)工具和比較例2的試驗(yàn)工具的加樣區(qū)4分別添加全血100pL并展開，觀察并測定隨著時間推移血細(xì)胞滲漏長度。其結(jié)果如表4和圖8所示。圖8是顯示實(shí)施例2和比較例2的試驗(yàn)工具在每個時間段試樣的展開狀況的照片。圖8的照片中用箭頭表示標(biāo)記保持部件ll的試樣展開方向下游末端。此箭頭右邊部分的長度即為血細(xì)胞滲漏的長度。將血細(xì)胞滲漏長度在層析載體7中標(biāo)記保持部件H和吸收部件13均未重疊的部分的長度中所占比例作為占有率表示如表4。[表4]<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>根據(jù)表4得知，實(shí)施例2的試驗(yàn)工具經(jīng)過30分鐘也完全沒有血細(xì)胞滲漏，而比較例2的試驗(yàn)工具則在經(jīng)過30分鐘時就己經(jīng)發(fā)生滲漏。實(shí)施例2的試驗(yàn)工具和比較例2的試驗(yàn)工具與實(shí)施例1的試驗(yàn)工具和比較例l的試驗(yàn)工具比較，試樣展開速度慢，但實(shí)驗(yàn)證明，盡管如此，使用本發(fā)明實(shí)施例的試驗(yàn)工具，檢查后過一段時間血液中的血細(xì)胞也不會侵蝕層析載體7。前述的詳細(xì)說明及附圖是通過文字解釋和圖示來進(jìn)行的，其目的不在于限定權(quán)利要求的保護(hù)范圍。本說明書中的具體實(shí)施方式的各個變種對于普通技術(shù)人員來說顯而易見，并處于權(quán)利要求及其等同技術(shù)的保護(hù)范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.一種用于檢測含有紅細(xì)胞和液體成份的試樣中的被檢目標(biāo)的層析用試驗(yàn)工具，包括分離所述紅細(xì)胞和所述液體成份的第一血細(xì)胞分離部件，該第一血細(xì)胞分離部件可以使所述液體成份比所述紅細(xì)胞更快地展開；分離所述紅細(xì)胞和所述液體成份的第二血細(xì)胞分離部件，該第二血細(xì)胞分離部件可以捕捉所述紅細(xì)胞并讓所述液體成份通過；以及承載與所述被檢目標(biāo)特異性結(jié)合的捕捉物質(zhì)的層析載體；其中，所述第一血細(xì)胞分離部件、所述第二血細(xì)胞分離部件和所述層析載體從試樣展開方向的上游依次按所述第一血細(xì)胞分離部件、所述第二血細(xì)胞分離部件、所述層析載體的順序配置。2.如權(quán)利要求l所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于所述第一血細(xì)胞分離部件將所述試樣向試樣展開方向分離；所述第二血細(xì)胞分離部件將所述試樣向與試樣展開方向垂直方向分離。3.如權(quán)利要求2所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于還包括在所述第二血細(xì)胞分離部件的試樣展開方向上游頂端的密封部件，用于防止所述試樣從所述第一血細(xì)胞分離部件進(jìn)入所述第二血細(xì)胞分離部件。4.如權(quán)利要求l-3中任一所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于所述第二血細(xì)胞分離部件由多孔材料制成，該多孔材料中的細(xì)孔尺寸從該多孔材料上面向下逐漸變小。5.如權(quán)利要求l-3中任一所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于所述第一血細(xì)胞分離部件在未與所述第二血細(xì)胞分離部件重疊的區(qū)域有加樣區(qū)。6.如權(quán)利要求l-3中任一所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于所述第一血細(xì)胞分離部件的至少一部分從所述第二血細(xì)胞分離部件的試樣展開方向上游與所述第二血細(xì)胞分離部件重疊，所述第二血細(xì)胞分離部件的至少一部分從所述層析載體的試樣展開方向上游起與所述層析載體重疊。7.如權(quán)利要求6所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于所述第二血細(xì)胞分離部件在試樣展開方向下游有未與所述第一血細(xì)胞分離部件重疊的區(qū)域。8.如權(quán)利要求l-3中任一所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于還包括具有與所述被檢目標(biāo)特異性結(jié)合且被標(biāo)記的標(biāo)記物質(zhì)的標(biāo)記保持部件；該標(biāo)記保持部件配置在所述第二血細(xì)胞分離部件和所述層析載體之間。9.如權(quán)利要求8所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于所述標(biāo)記保持部件至少一部分從所述層析載體的試樣展開方向上游與所述層析載體重疊。10.權(quán)利要求8所述層析用試驗(yàn)工具，其特征在于所述標(biāo)記物質(zhì)用有色粒子標(biāo)記。11.如權(quán)利要求i-3中任一所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于還包括吸收所述層析載體排出的所述液體成份的吸收部件；其中，該吸收部件配置在所述層析載體試樣展開方向下游。12.如權(quán)利要求11所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于所述層析載體的至少一部分從所述吸收部件的試樣展開方向上游與所述吸收部件重疊。13.如權(quán)利要求l-3中任一所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于所述層析載體將所述捕捉物質(zhì)承載到判斷部分。14.一種用于檢測含紅細(xì)胞和液體成份的試樣中的被檢目標(biāo)的層析用試驗(yàn)工具，包括-由有等于或大于所述紅細(xì)胞大小的細(xì)孔的多孔材料構(gòu)成的第一血細(xì)胞分離部件；由有小于所述紅細(xì)胞大小的細(xì)孔的多孔材料構(gòu)成的第二血細(xì)胞分離部件；及承載與被檢目標(biāo)特異性結(jié)合的捕捉物質(zhì)的層析載體；其中，所述第一血細(xì)胞分離部件、所述第二血細(xì)胞分離部件和所述層析載體從試樣展開方向的上游依次按所述第一血細(xì)胞分離部件、所述第二血細(xì)胞分離部件、所述層析載體的順序配置。15.如權(quán)利要求14所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于所述第一血細(xì)胞分離部件和所述第二血細(xì)胞分離部件為膜狀。16.如權(quán)利要求14或15所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于所述第二血細(xì)胞分離部件是過濾膜。17.如權(quán)利要求14或15所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于所述第二血細(xì)胞分離部件的細(xì)孔從上向下逐漸變小。18.如權(quán)利要求14或15所述的層析用試驗(yàn)工具，其特征在于還包括具有能與所述被檢目標(biāo)特異性結(jié)合且被標(biāo)記的標(biāo)記物質(zhì)的標(biāo)記保持部件；其中，該標(biāo)記保持部件配置于所述第二血細(xì)胞分離部件和所述層析載體之間。19.一種運(yùn)用層析用試驗(yàn)工具檢測含紅細(xì)胞和液體成份的試樣中的被檢目標(biāo)的方法，包括以下步驟第一分離步驟，通過比所述紅細(xì)胞更快地展開所述液體成份，分離所述紅細(xì)胞和所述液體成份；第二分離步驟，通過捕捉所述紅細(xì)胞并讓所述液體成份通過，分離所述紅細(xì)胞和所述液體成份；以及捕捉步驟，將所述被檢目標(biāo)捕捉到承載有能與所述被檢目標(biāo)特異性結(jié)合的捕捉物質(zhì)的判斷部分。20.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于還包括一個步驟，即在所述第二分離步驟之后，用有與所述被檢目標(biāo)特異性結(jié)合且被標(biāo)記的標(biāo)記物質(zhì)的標(biāo)記保持部件形成被檢目標(biāo)和標(biāo)記物質(zhì)的復(fù)合物。全文摘要本發(fā)明提供一種可快速檢查并過一段時間血管中的血細(xì)胞也不會侵蝕層析載體的層析用試驗(yàn)工具。該試驗(yàn)工具從含血細(xì)胞成份和液體成份的試樣展開方向的上游依次配置有第一血細(xì)胞分離部件、第二血細(xì)胞分離部件和層析載體。第一血細(xì)胞分離部件根據(jù)其可以上述液體成份在第一血細(xì)胞分離部件中的展開速度比上述血細(xì)胞成份更快的結(jié)構(gòu)原理，分離上述血細(xì)胞成份和上述液體成份；第二血細(xì)胞分離部件根據(jù)其可以捕捉上述血細(xì)胞成份并讓上述液體成份通過的結(jié)構(gòu)原理，分離上述血細(xì)胞成份和上述液體成份；上述層析載體承載可與被檢目標(biāo)特異性結(jié)合的捕捉物質(zhì)。文檔編號G01N33/48GK101275942SQ20081008489公開日2008年10月1日申請日期2008年3月28日優(yōu)先權(quán)日2007年3月30日發(fā)明者堀坂加奈子,真鍋智子申請人:希森美康株式會社