專利名稱：：一種檢測(cè)單純皰疹病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，更具體地說，涉及一種一企測(cè)單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)：
：?jiǎn)渭儼挐B病毒(HSV)屬于皰滲病毒的一種。該病毒的中心為DNA，外有162個(gè)殼微粒組成衣殼，呈20面體，周圍有含脂質(zhì)的包膜，病毒顆粒大小為150-200nm。根據(jù)血清學(xué)、流行病學(xué)特點(diǎn)，單純皰瘆病毒分為HSV-I和HSV-II兩型。臨床表現(xiàn)以皮膚粘膜單純皰滲病毒感染較常見，尤以唇單純皰滲、生殖器皰滲為代表。原發(fā)感染后，機(jī)體最先出現(xiàn)免疫球蛋白M(IgM),隨后出現(xiàn)免疫球蛋白A(IgA)及免疫球蛋白G(IgG)?？贵w能防止病毒播散，但不能阻止復(fù)發(fā)。檢出特異性IgM陽性或雙份血清特異性IgG抗體效價(jià)上升四倍或四倍以上，可提示HSV近期感染。HSV主要引起皰滲性口腔炎、皰滲性角膜結(jié)膜炎、皰滲性腦膜炎、皰瘆性外陰陰道炎、濕疹性皰滲、新生兒皰滲等。生殖器官以外部位的HSV感染多由HSV-I型引起(占95%),而生殖器官的HSV感染，主要由HSV-II型引起(占78%)。IgM抗體陽性提示近期有HSV感染。IgG抗體陽性(效價(jià)無變化)，說明既往感染過，且有一定免疫力。孕早期感染HSV者可導(dǎo)致流產(chǎn)，妊娠中、晚期感染者，可引起胎兒和新生兒發(fā)病。單純皰疹病毒抗體的檢測(cè)方法主要有放射免疫分析法，熒光免疫分析法和酶聯(lián)免疫分析法等。放射免疫分析雖然高靈敏、高特異，但存在有效期短、具有放射性污染的缺點(diǎn)。熒光免疫分析法雖然特異性強(qiáng)、每丈感性高、速度快，但非特異性染色問題尚未完全解決，結(jié)果判定的客觀性不足，程序也比較復(fù)雜。酶聯(lián)免疫分析雖然靈牽文度高、特異性強(qiáng)，但存在內(nèi)源性酶干擾、底物大部分有毒或?yàn)橹掳┪镔|(zhì)等缺點(diǎn)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay,CLIA)是近十年來在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析，是繼放射免疫分析和酶免疫分析之后發(fā)展起來的一種超高靈敏度的微量測(cè)定技術(shù)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析將抗原與抗體的高特異性免疫反應(yīng)與高靈敏的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合，將化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體，再進(jìn)行免疫結(jié)合反應(yīng)，即可進(jìn)行定性、定量測(cè)定。該方法具有高靈敏度、檢測(cè)范圍寬、操作簡(jiǎn)便快速、標(biāo)記物穩(wěn)定、無污染、儀器簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)。它是放射性免疫分析與普通酶免疫分析理想的取代者，是目前免疫定量分析最理想的方法。用化學(xué)發(fā)光免疫分析方法4企測(cè)單純皰滲病毒I型IgM抗體的原理是，將待測(cè)樣品加入到包被有抗人u鏈單克隆抗體的白色不透明微孔板中，隨后加入中和抗原與待測(cè)樣品中的IgM抗體特異性結(jié)合，再加入酶標(biāo)記的中和抗原特異抗體形成固相抗人ia鏈單克隆抗體-IgM抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，洗滌去除未反應(yīng)的游離成分。然后，加入上述酶的發(fā)光底物液，利用化學(xué)反應(yīng)釋放的自由能激發(fā)中間體發(fā)光，從而檢測(cè)樣品中待測(cè)分子濃度。人免疫球蛋白的重鏈具有抗原特異性，其中IgM的重鏈為ji鏈亞型。特異性IgM抗體的升高可作為近期感染的指標(biāo)，因此IgM抗體的檢出具有很重要的臨床意義?？谷薾鏈單克隆抗體多用于捕獲法檢測(cè)IgM抗體，包被于固相載體上，結(jié)合樣品中的所有IgM。一般采用戊二醛偶聯(lián)法將標(biāo)記酶與抗體偶聯(lián)。通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價(jià)結(jié)合。待標(biāo)記的抗體用戊二醛偶聯(lián)法與堿性磷酸酶偶聯(lián)，對(duì)磷酸緩沖液(PBS)充分透析，加入等體積甘油，-20。C以下保存?zhèn)溆?。一^:采用方陣法確定中和抗原和酶標(biāo)抗體的濃度。待確定濃度的組分按方陣以不同稀釋度加入到固相包被載體中，根據(jù)相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度(RLU)選擇適宜的濃度。試劑盒試劑中，常用的防腐劑有proclin300、NaN3、硫柳汞等?，F(xiàn)有市場(chǎng)上檢測(cè)單純皰滲病毒I型IgM抗體的試劑盒多為酶聯(lián)免疫分析試劑盒，反應(yīng)終止液為硫酸，具有腐蝕性，同時(shí)還存在內(nèi)源性酶干擾、底物大部分有毒或?yàn)橹掳┪镔|(zhì)的缺點(diǎn)，吸光度的檢測(cè)也易受到劃痕等多種外在因素的影響。
發(fā)明內(nèi)容為了克服酶聯(lián)免疫分析受多種外在因素干擾、檢測(cè)靈敏度低，底物大部分有毒的不足，本發(fā)明提供了一種檢測(cè)單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒，包含陰性、陽性對(duì)照品，抗人M鏈單克隆抗體包被的固相載體，中和抗原，酶標(biāo)記的單純皰滲病毒I型抗體，化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液。其中，所述的酶為石威性磷酸酶，所述的化學(xué)發(fā)光底物液含有1,2-二氧乙烷類書亍生物。使用該試劑盒檢測(cè)單純皰滲病毒I型IgM抗體，操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，特異性好，與其他檢測(cè)方法檢驗(yàn)結(jié)果相符合。在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)所述化學(xué)發(fā)光底物液含有(金剛烷)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-曱氧基_4—(3'-磷酰氧基)苯基-l、2-二氧乙烷(AMPPD)、3-(2'-(5"-氯)螺旋金剛烷)_4-曱氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯-1,2-二氧雜環(huán)丁烷(CSPD)或3-(2'-(5"-氯)螺旋金剛烷)-4-曱氧基-4-(3"-磷酰氧基-5"-氯)苯-l,2-二氧雜環(huán)丁烷(CDP-Star)。0.15-0.25mol/L16%(w/v)0.4%(w/v)0.1%(v/v或w/v1.5~4.0%(v/v)，在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)所述化學(xué)發(fā)光底物液含有Tris-HCl緩沖液NaClKC1防腐劑AMPPD、CSPD或CDP-Star其pH為7.0~7.5在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)所述化學(xué)發(fā)光底物液含有Tris-HCl緩沖液0.15~0.25mol/LNaCl16%(w/v)KC10.4%(w/v)防腐劑0.1%(v/v或w/\AMPPD1.5~4%(v/v)，其pH為7.0~7.5在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明優(yōu)選優(yōu)選方案為所述化學(xué)發(fā)光底物液含有Tris-HC1NaClKC1proclin300(SUPELCO^>司生產(chǎn))AMPPD0.2mol/L16%(w/v)0.4%(w/v)0.1%(v/v)2%(v/v)，其pH為7.2在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進(jìn)所述的濃縮洗滌液含有NaCl16%(w/v)Tween-201%(v/v)Tris-HCl緩沖液0.2mol/L,其pH為7.0~7.5本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)單純皰瘆病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備方法，包括以下步驟A、陰性、陽性對(duì)照品的制備陰性對(duì)照品HSV-IIgM陰性人血清，56°C1小時(shí)滅活，除菌過濾，2-8。C保存。陽性對(duì)照品已確定的高滴度HSV-IIgM陽性人血清，56。C1小時(shí)滅活后，用含10%(v/v)新生牛血清，0.1%(v/v)防腐劑，pH7.2的0.02mol/LTris-HCl緩沖液稀釋，稀釋比例為1:150，2-8。C保存。B、酶標(biāo)記的單純皰滲病毒I型抗體的制備酶標(biāo)記的單純皰滲病毒I型抗體的制備單純皰滲病毒I型抗體用戊二醛偶聯(lián)法與堿性磷酸酶偶聯(lián)，對(duì)0.01mol/L磷酸鹽緩沖液充分透析，加入等體積甘油，-20。C以下保存?zhèn)溆?；將酶?biāo)抗體用酶標(biāo)記物用含0.1mol/LTris-HCl緩沖液、0.5%(w/v)牛血清白蛋白(BSA)、0.1%(v/v)proclin300、pH7.2~7.6的稀釋液稀釋，釆用方陣法選擇酶標(biāo)抗體的稀釋度為1:4000-1:6000。C、中和抗原的制備采用方陣法選擇中和抗原的稀釋度為1:2000-1:4000。稀釋液采用上述B步驟中的稀釋液配方。D、抗人p鏈單克隆抗體包被的固相載體的制備將抗人p鏈單克隆抗體加入到含0.015mol/L無水石灰酸鈉、0.035mol/L石友酸氫鈉、pH9.2~9.8的包被液中至2昭/mL,加入微孔板各孔中，每孔110(iL，4。C放置24小時(shí)；甩掉包被液，每孔分別加入含0.01mol/L磷酸鹽緩沖液、P/。(w/v)牛血清白蛋白(BSA)、0.1%(v/v)proclin300、pH7.0~7.5的封閉液300|iL，室溫放置3小時(shí)，甩掉封閉液，拍干，室溫除濕干燥24小時(shí)，封袋，置28。C保存；E、化學(xué)發(fā)光底物液的制備化學(xué)發(fā)光底物液含有Tris-HC1NaClKC1防腐劑AMPPD、CSPD或CDP-Star其pH為7.0—7.5;F、濃縮洗滌液的制備濃縮洗滌液含有NaClTween-20Tris-HCl緩沖液其pH為7.0—7.5該方法便于生產(chǎn)、易于監(jiān)控生產(chǎn)過程，保證了批次間的穩(wěn)定性c0.15-0.25mol/L16%(w/v)0.4%(w/v)0.1%(v/v或w/v:1.5~4.0%(v/v)，16%(w/v)1%(v/v)0.2mol/L,在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明的優(yōu)選方案為:所述化學(xué)發(fā)光底物液含有Tris畫HC1NaClKC1防腐劑AMPPD其pH為7.2。0.2mol/L16%(w/v)0.4%(w/v)0.1%2%(v/v)具體實(shí)施例方式以下所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備陰性對(duì)照品HSV-1IgM陰性人血清56°C1小時(shí)滅活，除菌過濾，2-8XM呆存。陽性對(duì)照品已確定的高滴度HSV-IgM陽性人血清，56°C1小時(shí)滅活后，用含10%(v/v)新生牛血清，0.1%(v/v)proclin300,pH7.2的0.02mol/LTris-HCl緩沖液稀釋制成陽性對(duì)照品，稀釋比例為1:150,2-8。C保存。酶標(biāo)記的單純皰滲病毒I型抗體的制備單純皰滲病毒I型抗體用戊二醛偶聯(lián)法與堿性磷酸酶偶聯(lián)，對(duì)0.01mol/L磷酸鹽緩沖液充分透析，加入等體積甘油，-20。C以下保存?zhèn)溆?。稱取Tris12.120g,牛血清白蛋白(BSA)5g,proclin300lmL，用雙蒸水定容至1000mL，用HC1調(diào)節(jié)pH至7.2~7.6,配制稀釋液。將酶標(biāo)抗體用酶標(biāo)記物稀釋液稀釋，采用方陣法選擇酶標(biāo)抗體的稀釋度為1:4000。中和抗原的制備釆用方陣法選擇中和抗原的稀釋度為1:2000。稀釋液使用上一步驟中的稀釋液。抗人ju鏈單克隆抗體包被的固相載體的制備稱取無水碳酸鈉0.795g,碳酸氫鈉1.47g，溶解于雙蒸水并定容到500mL,混勻后，調(diào)整pH至9.6,加入抗人(j鏈單克隆抗體至2(xg/mL混勻，然后加入微孔板各孔中，每孔110pL，4。C放置24h。甩掉包被液，取NaH2PO4.2H2O0.2g,Na2HP04'12H202.9g，BSA10g,proclin300lmL,用雙蒸水定容至1000mL，pH值為7.07.5,配制成封閉液。每孔分別加入封閉液300pL,室溫放置3小時(shí)。甩掉封閉液，在吸水紙上拍干。室溫除濕干燥24小時(shí)。立即進(jìn)行封袋，貼簽后置2~8'C保存?；瘜W(xué)發(fā)光底物液的制備。采用如下配方0.2mol/LTris-HC1緩沖液，16%(w/v)NaCl,0.4%(w/v)KC1，0.1%(v/v)proclin300(SUPELCO公司生產(chǎn))，2%(v/v)馬PPD。取Tris24g,NaCl160g,KC14g,proclin300lmL,AMPPD20mL,加入雙蒸水溶解后，定容至1000mL,用HC1調(diào)節(jié)pH至7.2。濃縮洗滌液的制備。采用如下配方0.2mol/LTris-HC1緩沖液，1%(v/v)Tween-20，16%(w/v)NaCl。耳又Tris24g，NaCl160g,Tween-2010mL,用去離子水定容至1000mL，用HCl調(diào)節(jié)pH至7.0-7.5。使用時(shí)用蒸餾水稀釋20倍。實(shí)施例2單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備化學(xué)發(fā)光底物液的制備。采用如下配方0.25mol/LTris-HC1緩沖液，16%(w/v)NaCl,0.4%(w/v)KC1，0.1%(v/v)proclin300，1.6%(v/v)CSPD。取Tris30g，NaCl160g，KC14g，proclin300lmL，CSPD16mL,加入雙蒸水溶解后，定容至1000mL，用HC1調(diào)節(jié)pH至7.4。酶標(biāo)記的單純皰滲病毒I型抗體的制備將酶標(biāo)抗體用酶標(biāo)記物稀釋液稀釋，采用方陣法選擇酶標(biāo)抗體的稀釋度為1:6000。中和抗原的制備采用方陣法選擇中和抗原的稀釋度為1:4000。其余與實(shí)施例1相同。實(shí)施例3單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備化學(xué)發(fā)光底物液的制備。采用如下配方0.15mol/LTris-HCl緩沖液，16%(w/v)NaCl,0.4%(w/v)KCl,0.1%(v/v)NaN3,3,2%(v/v)CPD-Star。取Trisl8g，NaCl160g,KC14g，NaN3lmL,CPD-Star32mL,加入雙蒸水溶解后，定容至lOOOmL,用HC1調(diào)節(jié)pH至7.0~7.5。其余與實(shí)施例1相同。實(shí)施例4單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備化學(xué)發(fā)光底物液的制備。采用如下配方0.15mol/LTris-HC1緩沖液，16%(w/v)NaCl,0.4%(w/v)KCl,0.1%(v/v)NaN3,4.0%(v/v)AMPPD。取Trisl8g,NaCl160g，KC14g,NaN3lmL，AMPPD40mL，加入雙蒸水溶解后，定容至lOOOmL,用HC1調(diào)節(jié)pH至7.0~7.5。其余與實(shí)施例1相同。實(shí)施例5單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備化學(xué)發(fā)光底物液的制備。采用如下配方0.15mol/LTris-HCl緩沖液，16%(w/v)NaCl,0.4%(w/v)KC1,0.1%(v/v)proclin300(SUPELCO公司生產(chǎn))，1.5%(v/v)AMPPD。取Tris18g,NaCl160g，KC14g,proclin300lmL,AMPPD15mL，加入雙蒸水溶解后，定容至1000mL，用HCl調(diào)節(jié)pH至7.0-7.5。其余與實(shí)施例1相同。實(shí)施例6單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒的使用方法。自4。C冰箱中取出實(shí)施例1所制單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒，室溫平衡15分鐘；將待測(cè)樣本用生理鹽水1:100稀釋；設(shè)空白1孔，陰性對(duì)照2孔，陽性對(duì)照2孔，除空白孔外各孔加稀釋后的陰性對(duì)照品、陽性對(duì)照品或樣本50(iL，用微量震蕩器充分振蕩混勻，37。C溫育30分鐘；甩去反應(yīng)液，每孔加滿20倍稀釋后的洗滌液，洗板5次，最后在干凈的吸水紙上扣干；除空白孔外各孔加酶標(biāo)抗體和中和抗原各50pL,用微量震蕩器充分振蕩混勻，37。C溫育30分鐘；甩去反應(yīng)液，每孔加滿20倍稀釋后的洗滌液，洗板5次，最后在干凈的吸水紙上扣干；各孔加入化學(xué)發(fā)光底物液50|iL,用微量震蕩器充分振蕩混合均勻，室溫(20~25°C)避光反應(yīng)30分鐘；在化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x上依序測(cè)量各孔的發(fā)光強(qiáng)度(RLU)，測(cè)量時(shí)間1秒/孔；結(jié)果判定樣品的RLU>2.1x陰性對(duì)照品RLU值平均值，判斷為陽性，否則為陰性。實(shí)施例7采用實(shí)施例1中所制備單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒按實(shí)施例6所述方法對(duì)同一份陽性標(biāo)本，進(jìn)行3次重復(fù)測(cè)定，每次10孔，計(jì)算發(fā)光強(qiáng)度RLU變異系數(shù)，數(shù)據(jù)如下<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>結(jié)果可見，CV。/。均小于10%，說明本發(fā)明的試劑盒精密性良好，符合要求。實(shí)施例8采用實(shí)施例2中所制備單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒按實(shí)施例6所述方法與酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程公司生產(chǎn))同時(shí)檢測(cè)HSV-IIgM陽性樣本47例，陰性樣本33例，比較二者檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>由表2可知，本發(fā)明的試劑盒與單純皰滲病毒I型IgM酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的結(jié)果完全一致。實(shí)施例9將一份高滴度的陽性樣本按1:50、1:100、1:200、1:400、1:800的比例稀釋，采用實(shí)施例4中所制備單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒按實(shí)施例6所述方法與酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程公司生產(chǎn))同時(shí)檢測(cè)，比較二者的靈敏度。結(jié)果如下表3兩種試劑盒檢測(cè)結(jié)果對(duì)照表稀釋比例本發(fā)明試劑盒酶聯(lián)試劑盒1:50++1:100++1:200++1:400++1:800——由上表可知，當(dāng)高滴度陽性樣本1:50-1:400稀釋時(shí)，兩種試劑盒均可檢測(cè)為陽性，當(dāng)高滴度陽性樣本1:800稀釋時(shí)，兩種試劑盒^r測(cè)結(jié)果都為陰性。說明本發(fā)明的試劑盒與酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒靈敏度相當(dāng)。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.一種檢測(cè)單純皰疹病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒，包含陰性、陽性對(duì)照品，抗人μ鏈單克隆抗體包被的固相載體，中和抗原，酶標(biāo)記的單純皰疹病毒I型抗體，化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液，其特征在于，所述的酶為堿性磷酸酶，所述的化學(xué)發(fā)光底物液含有1，2-二氧乙烷類衍生物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于，所述的化學(xué)發(fā)光底物液含有(金剛烷)-l,2-二氧乙烷、3-(2'-螺旋金剛烷)-4-曱氧基-4-(3'-磷酰氧基)苯基-1、2-二氧乙烷(AMPPD)、3-(2'-(5"-氯)螺旋金剛烷)-4-曱氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯-l，2-二氧雜環(huán)丁烷(CSPD)或3-(2'-(5"-氯)螺旋金剛烷)-4-曱氧基—4-(3"-磷酰氧基-5"-氯)苯-l,2-二氧雜環(huán)丁烷(CDP-Star)。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于，所述的化學(xué)發(fā)光底物液含有Tris-HCl緩沖液0.15~0.25mol/LNaCl16%(w/v)KC10.4%(w/v)防腐劑0.1%(v/v或w/v)AMPPD、CSPD或CDP-Star1.5~4.0%(v/v),其pH為7.0~7.5。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于，所述的化學(xué)發(fā)光底物液含有Tris-HCl緩沖液0.15~0.25mol/LNaCl16%(w/v)KC10.4%(w/v)防腐劑0.1%(v/v或w/v)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其pH為7.0~7.5。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于，所述的化學(xué)發(fā)光底物液含有Tris-HC1緩沖液0.20mol/LNaCl16%(w/v)KC10.4%(w/v)proclin3000.1%(v/v)AMPPD2%(v/v)，其pH為7.2。6.根據(jù)權(quán)利要求l-5之任意一項(xiàng)所述的化學(xué)發(fā)光試劑盒，其特征在于，其中的濃縮洗滌液含有NaCl16%(w/v)Tween-201%(v/v)Tris-HCl緩沖液0.2mol/L，其pH為7.0—7.5。7.檢測(cè)單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟A、陰性、陽性對(duì)照品的制備陰性對(duì)照品，HSV-IIgM陰性人血清56€l小時(shí)滅活，除菌過濾，冷凍保存；陽性對(duì)照品，已確定的高滴度HSV-IIgM陽性人血清，56。C1小時(shí)滅活后，用含10%(v/v)新生牛血清，0.1%(v/v)防腐劑，pH7.2的0.02mol/LTris-HCl緩沖液稀釋，稀釋比例為1:150，冷凍保存；B、酶標(biāo)記的單純皰滲病毒I型抗體的制備單純皰滲病毒I型抗體用戊二醛偶聯(lián)法與堿性磷酸酶偶聯(lián)，對(duì)0.01mol/LpH7.4的磷酸鹽緩沖液充分透析，加入等體積甘油，-20。C以下保存?zhèn)溆茫粚⒚笜?biāo)抗體用酶標(biāo)記物用含0.1mol/LTris-HCl緩沖液、0.5%(w/v)牛血清白蛋白(BSA)、0.1%(v/v)proclin300、pH7.2~7.6的稀釋液稀釋，采用方陣法選4奪酶標(biāo)抗體的稀釋度為1:4000-1:6000;C、中和抗原的制備采用方陣法選擇中和抗原的稀釋度為1:2000-1:4000，稀釋液采用上述B步驟中的稀釋液；D、抗人p鏈單克隆抗體包被的固相載體的制備將抗人ia鏈單克隆抗體加入到含0.015mol/L無水碳酸鈉、0.035mol/L碳酸氫鈉、pH9.2~9.8的包被液中至2嗎/mL，加入微孔板各孔中，每孔IIOjiL,4。C放置24小時(shí)；甩掉包被液，每孔分別加入含0.01mol/L磷酸鹽緩沖液、1。/。(w/v)牛血清白蛋白(BSA)、0.1%(v/v)proclin300、pH7.0~7.5的封閉液300fxL，室溫放置3小時(shí)，甩掉封閉液，拍干，室溫除濕干燥24小時(shí)，封袋，置28。C保存；E、化學(xué)發(fā)光底物液的制備化學(xué)發(fā)光底物液含有Tris-HC1緩沖液NaClKC1防腐劑AMPPD、CSPD或CDP-Star其pH為7.0—7.5;F、濃縮洗滌液的制備濃縮洗滌液含有NaCl16%(w/v)Tween-201%(v/v)Tris-HCl緩沖液0.2mol/L，0.15-0.25mol/L16%(w/v)0.4%(w/v)0.1%(v/v或w/v)1.5~4.0%(v/v)，其pH為7.0—7.5。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)單純皰滲病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備方法，其特征在于，所述的化學(xué)發(fā)光底物液含有Tris-HC1緩沖液0.2mol/LNaCl16%(w/v)KC10.4%(w/v)防腐劑0.1%(v/v或w/v)AMPPD2%(v/v)，其pH為7.0—7.5。全文摘要本發(fā)明公開了一種檢測(cè)單純皰疹病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒，包括陰性、陽性對(duì)照品，抗人μ鏈單克隆抗體包被的固相載體，中和抗原，酶標(biāo)記的單純皰疹病毒I型抗體，化學(xué)發(fā)光底物液和濃縮洗滌液。其中，所述的酶為堿性磷酸酶，所述的化學(xué)發(fā)光底物液含有1，2-二氧乙烷類衍生物。使用本發(fā)明試劑盒檢測(cè)單純皰疹病毒I型IgM抗體，操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，特異性好，與其他檢測(cè)方法檢驗(yàn)結(jié)果相符合。本發(fā)明還公開了一種檢測(cè)單純皰疹病毒I型IgM抗體的化學(xué)發(fā)光試劑盒的制備方法。文檔編號(hào)G01N33/571GK101377507SQ20081010574公開日2009年3月4日申請(qǐng)日期2008年4月30日優(yōu)先權(quán)日2008年4月30日發(fā)明者于尚永,唐寶軍,宋勝利,應(yīng)希堂,胡國(guó)茂,蔣冰飛,鄭金來申請(qǐng)人:北京科美東雅生物技術(shù)有限公司