專利名稱：：鹽酸金剛烷胺含量的高效液相色譜蒸發(fā)光散射測定法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及測定鹽酸金剛烷胺含覽的方法，特別是髙效液相色譜蒸發(fā)光散射測定含量的相關(guān)技術(shù)。
背景技術(shù)：
：鹽酸金剛垸胺化學名稱為三環(huán)[3.3.3.l"]癸烷-1-胺鹽酸鹽。其結(jié)構(gòu)式為分子式C8H9N02分子量151.16理化性質(zhì)為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無臭，味苦；在水或乙醇中易溶，在二氯甲烷中溶解。鹽酸金剛烷胺具有抗感冒A型病毒作用，一直作為抗病毒藥用于亞洲流感病毒的預防和感染治療。在長期的臨床使用中，不僅對其抗流感病毒的療效給予肯定，而且發(fā)現(xiàn)了一些新用途，如改善帕金森病癥狀等。目前國內(nèi)市場上的金剛烷胺品種是口服單方鹽酸金剛烷胺，和復方感冒藥，復方中與對乙酰氨基酚、咖啡因等組方。2005年版藥典二部中規(guī)定其含量測定方法采用非水溶液滴定法，文獻報道有采用酸性染料比色法測定其含量，但這些方法都不具有專一性，專屬性不強，特別是測定復方制劑中鹽酸金剛烷胺的含量時，其余成分很容易影響測定結(jié)果的準確性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明就是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，采用高效液相色譜法來進行鹽酸金剛垸胺含量測定方法；高效液相色譜法最常用的檢測器為紫外檢測器，但鹽酸金剛烷胺的結(jié)構(gòu)為二環(huán)癸烷-1-胺鹽酸鹽,分子結(jié)構(gòu)無共軛雙鍵，因而在紫外區(qū)無吸收?？紤]采用蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)，ELSD是質(zhì)量檢測器，ELSD檢測的是不揮發(fā)的溶質(zhì)顆粒，因而其響應值與被測物質(zhì)的官能團和光學性質(zhì)無關(guān)。采用蒸發(fā)光散射檢測器進行鹽酸金剛垸胺的含量測定，有效地避免了復方制劑中其余成分的干擾。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)31、色譜柱選用規(guī)格為250mmX4.6mm的的KromasilC18柱作為色譜固定相。2、蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度40'C，載氣(空氣)流速2.0bar3、流動相體系由醋酸銨溶液與甲醇組成。4、上述醋酸銨溶液濃度范圍為0.0010.01rao1/1，優(yōu)選為0.005mo1/1。5、醋酸銨溶液與甲醇溶液比例優(yōu)選為(70-80):(2030)，更優(yōu)選為(80:20)。6、流動相流速為O.4~1.Oml/min。高效液相色譜法與非水滴定法相比有以下優(yōu)勢(1)非水滴定法用于復方制劑中的鹽酸金剛垸胺含量測定專屬性不強，組方中其余成分的干擾太大。而高效液相蒸發(fā)光散射檢測法的應用克服了這一缺陷，這由專屬性試驗色譜圖可知，鹽酸金剛烷胺對照品、原料及其復方制劑的色譜圖比較，三者鹽酸金剛垸胺色譜峰保留時間保持一致，并且陰性樣品未在此位置出峰，不干擾檢測。具體圖譜見附圖。(2)用高效液相色譜蒸發(fā)光測定樣品含量，并進行方法學驗證，有良好的線性關(guān)系，回收率高，精密度和溶液的日間穩(wěn)定性良好，并且比滴定法靈敏度更高。(3)高效液相色譜測定含量較之滴定法所需樣品量從幾克減少到了幾十毫克，減少了樣品的浪費。因此本發(fā)明技術(shù)進步在于方法簡便、靈敏度高，專屬性強，可用于單方或多種復方藥物制劑中鹽酸金剛烷胺含量的測定。圖l鹽酸金剛烷胺對照品溶液HPLC圖圖2鹽酸金剛烷胺原料樣品溶液HPLC圖圖3鹽酸金剛垸胺復方制劑樣品溶液HPLC圖圖4鹽酸金剛烷胺制劑陰性樣品溶液HPLC圖本發(fā)明的具體試驗過程如下1.儀器與試劑島津LC-10ATvp泵；迪馬SEDEX型低溫蒸發(fā)光散射檢測器，漂移管溫度40'C，載氣(空氣)流速2.0bar。色譜柱KromasilC18，250mmX4.6,,5um試劑醋酸銨分析純，甲醇色譜純，水為二次重蒸水流動相0.005mol/l醋酸銨溶液-甲醇(75:25)流速0.4ml/rain進樣2(M2.測定方法的建立及方法驗證(1)流動相的選擇根據(jù)蒸發(fā)光散射檢測器的相關(guān)文獻，一般來說，流動相的揮發(fā)性越好，方法的靈敏度越高。中性物質(zhì)的分析，其流動相一般能滿足要求。但絕大多數(shù)酸堿化合物的檢測都需要緩沖鹽，而緩沖鹽的揮發(fā)性、純度及濃度將直接影響到ELSD檢測的基線水平、基線漂移程度及噪音大小。緩沖鹽揮發(fā)性差，純度低，或濃度高，均會提高基線水平，增大基線漂移程度，從而降低信噪比；揮發(fā)性好，載氣流速和漂移管溫度較低。因而，用作緩沖鹽的鹽既要容易揮發(fā)(一般是熱分解揮發(fā))，又要具有較高的純度。通常使用的緩沖鹽由醋酸、甲酸、二氟醋酸、硝酸銨、磷酸氫二銨等組成。根據(jù)鹽酸金剛垸胺的特性選擇緩沖鹽與有機溶劑相結(jié)合的流動相，緩沖鹽選擇醋酸銨，有機相選擇甲醇。以醋酸銨緩沖鹽和甲醇為基本配比，進行流動相比例的調(diào)節(jié)，使其達到最佳狀態(tài)。分別以醋酸銨的比例、甲醇的比例、醋酸銨溶液的濃度為考察因素，設(shè)計正交試驗表，結(jié)果見表l。表l流動相選擇結(jié)果試驗^^\醋酸銨濃度(mol/L)醋酸銨比例A先甲醇比例100%-A%結(jié)果評價10.0018020峰型較好，可分離20.0017525峰型較好，可分離30.0017030峰型較好，可分離40,0016040峰型較差，不能分離50.0058020峰型好，可分離60.0057525峰型好，可分離70.0057030峰型好，可分離80.0056040峰型較好，不能分離90.018020峰型較好，可分離100.017525峰型較好，可分離110.017030峰型較好，可分離120.016040峰型較好，不能分離130.058020前沿峰，可分離140.057525前沿峰，可分離150.057030前沿峰，可分離160.056040前沿峰，可分離170.18020前沿峰，可分離180.17525前沿峰，可分離190.17030前沿峰，可分離200.16040前沿峰，不能分離由上表結(jié)果可知，醋酸銨溶液與甲醇比例(70-80):(20~30)，濃度在O.001-0.Olmol/1范圍內(nèi)，峰型較好，且分離度R〉1.5，其中更優(yōu)選為0.005mol/l醋酸銨溶液-甲醇(75:25)。(2)流速的選擇一般來說，采用ELSD檢測時，在一定范圍內(nèi)，流動相的流速越低，流動相完全揮發(fā)所需的載氣流速越低，形成的溶質(zhì)顆粒越大，對激光散射能力越強，相應的信號越強。但流速過低，會造成分析樣品出峰太早，影響分離度，流速過高，分析樣品出峰太晚，會導致峰型變差，并加長了分析時間。因此選擇流動相流速為O.11.0ml/min，優(yōu)選為O.4ml/min，峰型好，分離度滿足分析要求，且保留時間適宜。(3)方法的驗證照1.項下的色譜條件進行相關(guān)方法學的驗證。A專屬性陰性試驗取按處方配制的除鹽酸金剛垸胺外的陰性溶液，吸取注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果輔料無干擾。B線性與范圍精密稱取鹽酸金剛烷胺對照品適量，用水稀釋成不同濃度的溶液，按上述色譜條件，分別吸取20W注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，計算線性回歸方程為A-608952C-446673,r=0.9999(n=5)，表明鹽酸金剛烷胺濃度在0.2012.01mg/ml范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。C精密度試驗照前述色譜條件，取濃度為1.0mg/ml的鹽酸金剛烷胺對照品溶液，重復進樣6次，計算峰面積的相對標準偏差RSD為0.20%,表明精密度試驗結(jié)果良好。D回收率試驗取鹽酸金剛烷胺約25mg，加入對照品適量，使供試品濃度為含量測定供試品濃度的80%,100%，120%，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。分別測定，外標法計算回收率。結(jié)果見表2。由結(jié)果可知，本測定法準確度良好。表2回收率試驗結(jié)果濃度加入量(mg)測得量(mg)回收率(％)平均值《)RSD(%)16.116.74104.0101.80.57低-^-濃16.316.69102.4度_^_^_^_16.216.68103.025.125.33100.9中-濃25.225.29跳3度_25.325,31100.0變濃晨35.536.40102.535.736.33101.835.636.15101.6E最小檢出限和最低定量限取0.2mg/ml濃度的溶液，按逐步稀釋法測其檢測限，按信噪比3倍計算，檢出限20ng。F穩(wěn)定性試驗取含量測定項下供試品溶液，室溫條件下放置O、1、2、4、6、8小時后，進樣，計算峰面積的相對標準偏差RSD為0.12%,說明此條件下，溶液穩(wěn)定性良好。下面結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進一步說明，但是本發(fā)明的保護范圍并不限于這些實施例。按下述檢測方法對鹽酸金剛烷胺原料及其制劑的含量進行測定，制劑中鹽酸金剛烷胺標示量為150mg/片或粒，結(jié)果應為標示量的90.0%~110.0%。實施例1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.005mol/l醋酸銨溶液-甲醇(75:25)為流動相，流速為0.4ml/min，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度40'C，載氣(空氣)流速2.0bar。對照品溶液的制備取鹽酸金剛烷胺對照品適量，加水制成濃度為每lral含鹽酸金剛烷胺lmg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，約相當于鹽酸金剛烷胺50mg,置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定結(jié)果見表3。表3鹽酸金剛烷胺含量檢査結(jié)果批號原料復方制劑2005010820060612070301070302070304070303結(jié)果(％)99.2599.21102.4102.6103.4102.6實施例2色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.005mo1/1醋酸銨溶液-甲醇(80:20)為流動相，流速為0.4ml/min，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度40'C，載氣(空氣)流速2.0bar。對照品溶液的制備取鹽酸金剛烷胺對照品適量，加水制成濃度為每lral含鹽酸金剛烷胺l呢的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，約相當于鹽酸金剛烷胺50mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定結(jié)果見表4。表4鹽酸金剛烷胺含量檢査結(jié)果批號原料復方制劑72005010820060612070301070302070304070303結(jié)果(％)99.4298.92103.6102.4103.2102.7實施例3色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.005rno1/1醋酸鉸溶液-甲醇(70:30)為流動相，流速為0.4ral/min，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度40°C，載氣(空氣)流速2.0bar。對照品溶液的制備取鹽酸金剛垸胺對照品適量，加水制成濃度為每lml含鹽酸金剛烷胺lmg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品適呈，約相當于鹽酸金剛垸胺50mg,置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定結(jié)果見表5。表5鹽酸金剛烷胺含量檢査結(jié)果批號原料復方制劑2005010820060612070301070302070304070303結(jié)果(％)99,3399.51101.9102.4103.7103.6實施例4色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑，以0.OOlmol/1醋酸銨溶液-甲醇(70:30)為流動相，流速為0.4ml/min，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度40°C，載氣(空氣)流速2.0bar。對照品溶液的制備取鹽酸金剛垸胺對照品適量，加水制成濃度為每lml含鹽酸金剛烷胺lmg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，約相當于鹽酸金剛垸胺50mg，置50nil容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定結(jié)果見表6。表6鹽酸金剛烷胺含量檢查結(jié)果批號原料復方制劑2005010820060612070301070302070304070303結(jié)果(％)99.1199.08102.8101.4102.8103.0實施例5色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.OOlmol/1醋酸銨溶液-甲醇(75:25)為流動相，流速為0.4ml/min,蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度4CTC，載氣(空氣)流速2.0bar。對照品溶液的制備取鹽酸金剛烷胺對照品適量，加水制成濃度為每lral含鹽酸金剛烷胺lmg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，約相當于鹽酸金剛烷胺50mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定結(jié)果見表7。表7鹽酸金剛烷胺含量檢查結(jié)果批號2005010820060612070301070302070303070304結(jié)果(％)99.3398.96101.6102.3103.4102.7實施例6色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.OOlmol/1醋酸銨溶液-甲醇(80:20)為流動相，流速為0.4ml/min,蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度40°C，載氣(空氣)流速2.0bar。對照品溶液的制備取鹽酸金剛烷胺對照品適量，加水制成濃度為每lml含鹽酸金剛垸胺lmg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，約相當于鹽酸金剛烷胺50mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定結(jié)果見表8。表8鹽酸金剛烷胺含量檢查結(jié)果批號原料復方制劑2005010820060612070301070302070304070303結(jié)果(％)99.2199.81100.9101.8102.6103.4實施例7色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.Olmol/1醋酸銨溶液-甲醇(70:30)為流動相，流速為0.4ml/min，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度40°C,載氣(空氣)流速2.0bar。對照品溶液的制備取鹽酸金剛烷胺對照品適量，加水制成濃度為每lml含鹽酸金剛烷胺lmg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，約相當于鹽酸金剛烷胺50mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定結(jié)果見表9。表9鹽酸金剛垸胺含量檢査結(jié)果批號原料復方制劑2005010820060612070301070302070304070303結(jié)果(％)99.2598.74風6一101,4實施例8色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.Olmol/1醋酸銨溶液-甲醇(75:25)為流動相，流速為0.4ml/min，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度40°C，載9氣(空氣)流速2.0bar。對照品溶液的制備取鹽酸金剛垸胺對照品適量，加水制成濃度為每lml含鹽酸金剛烷胺lmg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，約相當于鹽酸金剛垸胺50rag，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定結(jié)果見表IO。表10鹽酸金剛烷胺含量檢査結(jié)果批號原料復方制劑2005010820060612070301070302070304070303結(jié)果(°/。)99.6199.24102,6102.5103.8102.4實施例9色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.Olmol/1醋酸銨溶液-甲醇(80:20)為流動相，流速為0.4ml/min，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度40°C，載氣(空氣)流速2.0bar。對照品溶液的制備取鹽酸金剛烷胺對照品適量，加水制成濃度為每lml含鹽酸金剛垸胺lmg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，約相當于鹽酸金剛烷胺50mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定結(jié)果見表ll。表11鹽酸金剛烷胺含量檢查結(jié)果批號原料復方制劑2005010820060612070301070302070304070303結(jié)果(％)99.2598.34100.5101.6103.1102.4實施例io色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.005mol/l醋酸銨溶液-甲醇(70:30)為流動相，流速為1.0ml/min，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度40°C，載氣(空氣)流速2.0bar。對照品溶液的制備取鹽酸金剛垸胺對照品適量，加水制成濃度為每lml含鹽酸金剛烷胺lrag的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，約相當于鹽酸金剛烷胺50mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定結(jié)果見表12。表12鹽酸金剛垸胺含量檢査結(jié)果批號原料復方制劑10<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實施例ll色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.005mol/l醋酸銨溶液-甲醇(75:25)為流動相，流速為1.0ml/min，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度40°C，載氣(空氣)流速2.0bar。對照品溶液的制備取鹽酸金剛烷胺對照品適量，加水制成濃度為每1ml含鹽酸金剛烷胺lnig的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，約相當于鹽酸金剛烷胺50mg,置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定結(jié)果見表13。表13鹽酸金剛烷胺含量檢査結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實施例12色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.005,1/1醋酸銨溶液-甲醇(80:20)為流動相，流速為1.0ml/min，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度40°C，載氣(空氣)流速2.0bar。對照品溶液的制備取鹽酸金剛烷胺對照品適量，加水制成濃度為每lml含鹽酸金剛烷胺lmg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，約相當于鹽酸金剛垸胺50mg,置50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定結(jié)果見表14。表14鹽酸金剛垸胺含量檢査結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>權(quán)利要求1、一種鹽酸金剛烷胺含量的測定方法，其特征在于用高效液相色譜法測定，檢測器為蒸發(fā)光散射檢測器。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的測定方法，其特征在于色譜柱選用規(guī)格為250mmX4.6mm的KromasilC18柱作為色譜固定相。3、根據(jù)權(quán)利要求l所述的測定方法，其特征在于其蒸發(fā)光檢測器漂移管溫度為4(TC，載氣(空氣)流速2.Obar。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于其流動相體系由醋酸銨溶液與甲醇組成。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的流動相體系，其特征在于其醋酸銨溶液濃度范圍為0.001~0.Olmol/l,優(yōu)選為O.005mol/l。6、根據(jù)權(quán)利要求4所述的流動相體系，其特征在于醋酸銨溶液與甲醇溶液比例優(yōu)選為(70~80):(2030)'更優(yōu)選為(80:20)。7、根據(jù)權(quán)利要求4所述的流動相體系，其特征在于其流動相流速為O.4~1.0ml/niin。優(yōu)選為O.4ml/min。全文摘要本發(fā)明提供了高效液相色譜蒸發(fā)光散射測定鹽酸金剛烷胺含量的方法，檢測器為蒸發(fā)光散射檢測器，流動相為醋酸銨溶液與甲醇的組合體系。本發(fā)明技術(shù)方法簡便、靈敏度高，專屬性強，可用于單方或多種復方藥物制劑中鹽酸金剛烷胺含量的測定。文檔編號G01N30/00GK101576546SQ20081010579公開日2009年11月11日申請日期2008年5月5日優(yōu)先權(quán)日2008年5月5日發(fā)明者張玲玲申請人:北京瑞伊人科技發(fā)展有限公司;安英