專利名稱：：用于血樣中微生物快速檢測(cè)的儀器、試劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于化學(xué)試劑、檢測(cè)及計(jì)算機(jī)應(yīng)用領(lǐng)域，涉及一種用于血樣中微生物快速檢測(cè)的儀器、試劑及制備方法。
背景技術(shù)：
：我國(guó)臨床抗生素的濫用已相當(dāng)嚴(yán)重。中華醫(yī)院感染管理委員會(huì)的調(diào)查結(jié)果顯示，我國(guó)抗生素的使用率在三級(jí)醫(yī)院達(dá)到了70%，二級(jí)醫(yī)院達(dá)到了80%，一級(jí)醫(yī)院達(dá)到了90%。與此同時(shí)，世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)報(bào)告為30%，美國(guó)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果只有20%，臨床抗生素的不合理使用，不僅增加了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，造成醫(yī)療資源的巨大浪費(fèi)；更嚴(yán)重的是導(dǎo)致了臨床的許多不良反應(yīng)和耐藥性細(xì)菌的不斷增長(zhǎng)。加強(qiáng)病原學(xué)的檢測(cè)，提供及時(shí)、準(zhǔn)確的病原學(xué)檢驗(yàn)報(bào)告，根據(jù)病原學(xué)藥物敏感實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)選擇抗生素是臨床合理使用抗生素最重要的途徑。目前國(guó)外已有Bactec9000系列、BacT/Alert3D系統(tǒng)、ESP系列等全自動(dòng)培養(yǎng)系統(tǒng)。國(guó)內(nèi)外對(duì)于全自動(dòng)血培養(yǎng)系統(tǒng)的臨床應(yīng)用與評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，其血培養(yǎng)及無(wú)菌體液培養(yǎng)的陽(yáng)性率較傳統(tǒng)手工方法均有明顯提高，檢測(cè)時(shí)間明顯縮短。經(jīng)BacT/Alert培養(yǎng)的陽(yáng)性檢出時(shí)間為13.3±9.2小時(shí)，在12小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)陽(yáng)性的比率達(dá)56.5%，而采用傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法陽(yáng)性檢出的時(shí)間為43.4±34.2小時(shí)，在12小時(shí)內(nèi)陽(yáng)性比率僅為13.0%。ESP系統(tǒng)的陽(yáng)性率為17.3%，其中67.6%的細(xì)菌在24小時(shí)內(nèi)檢出，92.6%的細(xì)菌在48小時(shí)內(nèi)檢出?？焖傺囵B(yǎng)系統(tǒng)的應(yīng)用對(duì)于臨床病原菌感染的早期診斷、抗生素的合理運(yùn)用、延緩病原菌的耐藥性都起到了十分重要的作用。無(wú)論哪類培養(yǎng)系統(tǒng)，都還存在一些缺陷與不足。Bactec9000系列的檢測(cè)原理是檢測(cè)細(xì)菌在新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的C02，或利用C02激活培養(yǎng)瓶底的熒光物質(zhì)，通過(guò)檢測(cè)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)判斷有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。BacT/Alert3D系統(tǒng)，利用產(chǎn)生C02使培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)pH值降低，瓶底顏色發(fā)生改變，通過(guò)顏色感應(yīng)器檢測(cè)顏色變化來(lái)判斷有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。ESP系列[5]，利用產(chǎn)生C02使培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的壓力發(fā)生改變，通過(guò)檢測(cè)瓶?jī)?nèi)壓力的變化來(lái)判斷有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。各類血培養(yǎng)系統(tǒng)均利用細(xì)菌在新陳代謝過(guò)程中分解糖原產(chǎn)生C02這一原理。對(duì)力弱的細(xì)菌如苛養(yǎng)菌、真菌等容易引起假陰性[6];而對(duì)各種引起培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)C02濃度升高的一些非細(xì)菌性因素(如白血病患者血液中的白細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)、嚴(yán)重感染引起的全血白細(xì)胞升高，培養(yǎng)溫度不穩(wěn)定等)常引起假陽(yáng)性[7]。另外，全自動(dòng)微生物培養(yǎng)系統(tǒng)儀器與試劑都非常昂貴，這些都嚴(yán)重的制約了全自動(dòng)培養(yǎng)系統(tǒng)的推廣與應(yīng)用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，提供一種用于血樣中微生物快速檢測(cè)的儀器、試劑、及制備方法，用于對(duì)臨床血樣中微生物的準(zhǔn)確、快速檢測(cè)。本發(fā)明為解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是-一種用于血樣中微生物快速檢測(cè)的測(cè)試儀，其特征在于，包括檢測(cè)池、傳感器和檢測(cè)電路；所述的檢測(cè)池中放入用于血樣中微生物快速檢測(cè)的試劑，該試劑由牛肉浸膏、酵母浸膏、YC-1溶液和YC-2溶液配置而成，各組分的比例為牛肉浸膏0.210g/L，酵母浸膏0.2~10g/L，YC-1溶液20~60g/L，YC-2溶液10~40g/L;待檢測(cè)的血樣加入到所述的檢測(cè)池中的試劑中；所述傳感器置入該試劑中，傳感器的輸出信號(hào)端接檢測(cè)電路的輸入端，檢測(cè)電路輸出可以表征血樣中微生物濃度的頻率信號(hào)，所述頻率信號(hào)為數(shù)字信號(hào)。所述的檢測(cè)電路包括振蕩電路、頻率計(jì)、單片機(jī)和上位機(jī)，所述的振蕩電路的輸入端接傳感器的信號(hào)輸出端，所述的振蕩電路的輸出端接頻率計(jì)的輸入端，頻率計(jì)的輸出端接單片機(jī)的IO端口，所述單片機(jī)和上位機(jī)通信連接。一種用于與上述微生物快速檢測(cè)儀配套的試劑，其特征在于，由牛肉浸膏、酵母浸膏、YC-1溶液和YC-2溶液配置而成，各組分的比例為牛肉浸膏0.210g/L，酵母浸膏0.2~10g/L,YC-1溶液2060g/L，YC-2溶液10~40g/L。所述各組分優(yōu)選比例為牛肉浸膏2g/L;酵母浸膏l(xiāng)g/L;YC-1溶液40g/L;YC-2溶液16g/L。一種用于與上述微生物快速檢測(cè)儀配套的試劑的制備方法，其特征在于，將牛肉浸膏、酵母浸膏和YC-1溶液按"牛肉浸膏0.2~10g/L，酵母浸膏0.2~10g/L，YC-1溶液20~60g/L，YC-2溶液1040g/L"的比例稱量，溶解，定容后形成培養(yǎng)基，通過(guò)過(guò)濾去除培養(yǎng)基中雜質(zhì)，將過(guò)濾后的培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2~7.4，再放入滅菌器下滅菌；再按10~40g/L的比例加入YC-2溶液，再密封、保存?zhèn)溆?，即得到所述的用于血樣中微生物快速檢測(cè)的試劑。所述的牛肉浸膏、酵母浸膏、YC-1溶液和YC-2溶液的比例優(yōu)選為牛肉浸膏2g/L;酵母浸膏l(xiāng)g/L;YC-1溶液40g/L;YC-2溶液16g/L。本發(fā)明一種用于血樣中微生物快速檢測(cè)的測(cè)試儀、試劑及其制備方法。其檢測(cè)原理是壓電全自動(dòng)血培養(yǎng)儀(即測(cè)試儀)對(duì)培養(yǎng)液中的電特性變化有靈敏頻移響應(yīng)，能在線檢測(cè)血液中微生物的生長(zhǎng)情況。具體關(guān)系如下所示A77"化(4;r2尸o2c，+4《C"o-rGo2)[4丌2化(C。+Cs)-2《C0ro0+G02]2式中Go為溶液背景電導(dǎo)，Cq、Co和Cs分別為PQC的動(dòng)態(tài)電容、靜態(tài)電容和溶液電容。△G為培養(yǎng)液的電導(dǎo)變化。Fc為石英晶體的振蕩基頻，為常數(shù)。y是振蕩器的相移參數(shù)，取決于振蕩器的類型及工作條件，各條件固定時(shí)，為常數(shù)。細(xì)菌在培養(yǎng)過(guò)程中，能將一些大分子物質(zhì)轉(zhuǎn)化成無(wú)機(jī)小分子物質(zhì)如C02、NH3、H20等等，使培養(yǎng)液電特性發(fā)生變化，引起全自動(dòng)血培養(yǎng)儀響應(yīng)頻率的改變，從而實(shí)現(xiàn)血液中細(xì)菌的檢測(cè)。其檢測(cè)方法是向帶有傳感電極和無(wú)菌試劑檢測(cè)池中依次加入l5mL臨床血液，(此時(shí)試劑的量大約80mL)再將檢測(cè)池插入溫度設(shè)定為37°C的壓電生物傳感儀中培養(yǎng)，啟動(dòng)檢測(cè)。儀器每隔13分鐘記錄一個(gè)頻率值，所有的頻率曲線自動(dòng)保存于計(jì)算機(jī)中，檢測(cè)完畢，儀器將自動(dòng)給出檢驗(yàn)結(jié)果。所發(fā)明的全自動(dòng)血培養(yǎng)儀檢測(cè)速度快、性能可靠、操作方便，其配套檢測(cè)池及試劑，檢測(cè)菌譜廣，安全性能高，使用方便。本發(fā)明的有益效果有本發(fā)明的特點(diǎn)是具有靈敏度高、易于實(shí)現(xiàn)數(shù)字化、響應(yīng)譜廣、快速檢測(cè)、操作簡(jiǎn)單、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，其充分利用串聯(lián)式壓電傳感器對(duì)溶液電導(dǎo)的響應(yīng)，并和微生物的新陳代謝特征相結(jié)合，拓寬了壓電傳感器在臨床血液檢測(cè)方面的應(yīng)用，使信息的提取更加準(zhǔn)確容易，檢測(cè)更加快速方便，從而為疾病診斷應(yīng)用提供了可靠依據(jù)。圖1是本發(fā)明實(shí)施例1的測(cè)試儀的總體框圖；圖2是本發(fā)明實(shí)施例1的測(cè)試儀的振蕩電路原理圖；圖3是本發(fā)明實(shí)施例1的測(cè)試儀的振蕩電路的基本振蕩電路原理圖；圖4是頻率和品質(zhì)因子關(guān)系圖；((a)未引入RLC回路，(b)引入RLC回路)圖5是本發(fā)明實(shí)施例1的測(cè)試儀的振蕩電路的一級(jí)放大電路原理圖；圖6是本發(fā)明實(shí)施例1的測(cè)試儀的振蕩電路的二級(jí)放大電路原理圖；圖7是本發(fā)明實(shí)施例1的測(cè)試儀的振蕩電路的三級(jí)放大電路原理圖；圖8是本發(fā)明實(shí)施例1的測(cè)試儀的實(shí)測(cè)曲線(？)檢測(cè)呈陽(yáng)性曲線(b)檢測(cè)呈陰性曲線。具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例1:a)測(cè)試儀的硬件圖i給出了多個(gè)樣品同時(shí)檢測(cè)的壓電全自動(dòng)血培養(yǎng)儀(即測(cè)試儀)的檢測(cè)方框圖。檢測(cè)池的振蕩頻率信號(hào)由振蕩電路取出，再輸入頻率計(jì)，由頻率計(jì)將信號(hào)分為段信號(hào)和位信號(hào)，分別送到八位數(shù)碼顯示器和單片機(jī)，單片機(jī)再將信號(hào)經(jīng)232數(shù)據(jù)接口送到pc機(jī)顯示出來(lái)。為了實(shí)現(xiàn)多個(gè)樣品的適時(shí)采集，由pc機(jī)發(fā)指令，通過(guò)232數(shù)據(jù)接口送到單片機(jī)，單片機(jī)發(fā)指令給多通道選擇開(kāi)關(guān)，采集指定檢測(cè)池的信號(hào)，即可同時(shí)實(shí)現(xiàn)多通道樣品的同時(shí)檢測(cè)。八位數(shù)碼顯示器直接顯示出頻率信號(hào)，而PC機(jī)能給出頻移-時(shí)間曲線及測(cè)試結(jié)果。在電路部分，具有創(chuàng)新性的是振蕩電路設(shè)計(jì)與制造?，F(xiàn)詳細(xì)說(shuō)明如下。①振蕩電路的基本原理振蕩電路的基本原理如圖2所示；包括基本振蕩電路和三級(jí)放大電路。圖中AGC是自動(dòng)增益控制?；菊袷庪娐?如圖3所示)基本振蕩電路中，在外接電源處增加了一個(gè)RLC回路，這樣即可降低Q值，在外環(huán)境稍有變化時(shí)，電路仍然起振，又可以減少外電路其他信號(hào)的影響。即在響應(yīng)外環(huán)境變化的同時(shí)，能穩(wěn)定振蕩。未引入和引入RLC回路時(shí)，所測(cè)得的頻率與品質(zhì)因子的關(guān)系如圖4(a)、(b)所示在圖4(a)中，品質(zhì)因子Q在9MHz處最大，頻率稍偏離9MHz，則品質(zhì)因子Q急劇下降，如A點(diǎn)，這樣電路回不起振。在圖4(b)中，頻率稍低于9MHz，品質(zhì)因子Q變化不是很大，電路仍能穩(wěn)定振蕩。一級(jí)放大電路(圖如5):在一到三級(jí)放大電路中均增加了LC抗干擾回路，保證整個(gè)電路能長(zhǎng)期穩(wěn)定工作。二級(jí)放大電路(如圖6):二級(jí)放大電路中，增加了自動(dòng)增益控制，防止信號(hào)波形改變。級(jí)放大電路(圖7):三級(jí)放大電路是為了增加電路帶負(fù)載能力而設(shè)置的。采頻部分就是頻率計(jì)數(shù)器。(2)儀器的軟件在MicrosoftWindows2000操作系統(tǒng)中開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品配套軟件，軟件由Delphi程序編譯而成，設(shè)計(jì)靈活，使用簡(jiǎn)便，可視化程度高，功能齊全，可在Windows2000及以上系統(tǒng)中運(yùn)行。湖南高新生物儀器有限公司開(kāi)發(fā)的艾麗特全自動(dòng)血培養(yǎng)系統(tǒng)Versionl.O軟件已通過(guò)湖南省醫(yī)療器械與藥用包裝材料(容器)檢測(cè)所驗(yàn)證通過(guò)，性能穩(wěn)定，符合使用要求。據(jù)儀器的需要，軟件的開(kāi)發(fā)包括了以下部分操作界面的設(shè)計(jì)、測(cè)定曲線的顯示、臨床陰陽(yáng)結(jié)果的自動(dòng)判定、軟件工作原理。①操作界面的設(shè)計(jì)操作軟件包括采樣周期、串口選擇、文件存放路徑等選擇，同時(shí)包括了檢測(cè)位的運(yùn)行，判別陰陽(yáng)的指示燈提示。工具欄有運(yùn)行、查看響應(yīng)曲線、系統(tǒng)設(shè)置、病人資料、化驗(yàn)單和幫助等幾個(gè)選項(xiàng)，可以對(duì)整個(gè)檢測(cè)過(guò)程進(jìn)行控制。完善的設(shè)計(jì)，使檢測(cè)過(guò)程系統(tǒng)化，操作更簡(jiǎn)便。②測(cè)定曲線的顯示響應(yīng)曲線中，橫坐標(biāo)為檢測(cè)時(shí)間t(秒/時(shí)/日)，縱坐標(biāo)為AF(Hz):AF=Fi-F0(Fi是任一時(shí)刻的頻率值)③臨床陰陽(yáng)結(jié)果的自動(dòng)判定根據(jù)臨床響應(yīng)曲線的變化，軟件自動(dòng)進(jìn)行后臺(tái)分析判斷檢測(cè)樣品的陰陽(yáng)性。④軟件工作原理i.系統(tǒng)軟件組成本血培養(yǎng)儀是一種醫(yī)療監(jiān)控管理軟件。按照該軟件的功能，可以劃分為以下幾個(gè)部分?jǐn)?shù)據(jù)采集模塊，通過(guò)串口控制醫(yī)療設(shè)備并采取實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)；數(shù)據(jù)分析模塊，對(duì)采集的數(shù)據(jù)根據(jù)某種變化規(guī)律判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果，包括陽(yáng)性與陰性；圖形分析模塊，將采集的數(shù)據(jù)生成曲線圖，便于實(shí)驗(yàn)人員分析結(jié)果；其它控制模塊，包括實(shí)驗(yàn)結(jié)果入庫(kù)，病人檔案管理等。ii.系統(tǒng)軟件的通訊協(xié)議PC機(jī)與儀器之間通過(guò)串口進(jìn)行通訊，其通訊協(xié)議采用主從模式，即PC機(jī)為主機(jī)，儀器為從機(jī)，只有PC機(jī)向串口發(fā)送命令后，儀器才將實(shí)驗(yàn)頻率傳送給PC機(jī)，從協(xié)議看，分為PC機(jī)發(fā)往儀器儀器共有實(shí)驗(yàn)標(biāo)本32支，當(dāng)PC機(jī)需要采取某一支的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)時(shí)，只需要發(fā)送這支標(biāo)本的序號(hào)給串口，如PC機(jī)需要采取第6支標(biāo)本的數(shù)據(jù)，只需要向串口發(fā)送6即可；儀器發(fā)往PC機(jī)當(dāng)儀器接收到采取指令時(shí)，將會(huì)傳送對(duì)應(yīng)標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)給PC機(jī)，如第6支實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)為9012340，儀器將會(huì)向串口輸出9012340數(shù)據(jù)。所用檢測(cè)池及試劑檢測(cè)池材料為聚碳酸酯，檢測(cè)池下端有一對(duì)電極，檢測(cè)池內(nèi)裝有試劑。該檢測(cè)池和試劑與儀器配套使用。試劑的組成牛肉浸膏0.2~10g/L酵母浸膏0.2~10g/LYC-120~60g/L(范圍)YC-210~40g/L(范圍)配制方法首先，將牛肉浸膏、酵母浸膏、YC-l，按比例稱量，溶解，定容后形成培養(yǎng)基，通過(guò)過(guò)濾去除培養(yǎng)基中雜質(zhì)。(注配制培養(yǎng)基的水必須為去除雜質(zhì)后的去離子水，因?yàn)槠胀ㄋ械碾x子會(huì)使培養(yǎng)基的電導(dǎo)產(chǎn)生變化。)。將過(guò)濾后培養(yǎng)基pH值調(diào)到7.2~7.4(調(diào)ph值就是直接加如堿或酸，為常用的技術(shù)手段)，放入滅菌器12rC下高壓滅菌20min;以無(wú)菌操作按比例加入YC-2，再分裝、密封、保存?zhèn)溆?。YC-l和YC-2具體是(長(zhǎng)沙英才公司生產(chǎn)的溶液，在市場(chǎng)上有商品出售，產(chǎn)品名稱即為YC-1和YC-2)。在自身進(jìn)行模擬實(shí)驗(yàn)的同時(shí)，還在2個(gè)醫(yī)院做了大量的臨床實(shí)驗(yàn)，具體實(shí)驗(yàn)情況見(jiàn)下表:<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>權(quán)利要求1.一種用于血樣中微生物快速檢測(cè)的測(cè)試儀，其特征在于，包括檢測(cè)池、傳感器和檢測(cè)電路；所述的檢測(cè)池中包括了一對(duì)傳感電極及用于血樣中微生物快速檢測(cè)的試劑，該試劑由牛肉浸膏、酵母浸膏、YC-1溶液和YC-2溶液配置而成，各組分的比例為牛肉浸膏0.2～10g/L，酵母浸膏0.2～10g/L，YC-1溶液20～60g/L，YC-2溶液10～40g/L；待檢測(cè)的血樣加入到所述的檢測(cè)池中的試劑中；傳感器的輸出信號(hào)端接檢測(cè)電路的輸入端，檢測(cè)電路輸出可以表征血樣中微生物濃度的頻率信號(hào)，所述頻率信號(hào)為數(shù)字信號(hào)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于血樣中微生物快速檢測(cè)的測(cè)試儀，其特征在于，所述的檢測(cè)電路包括振蕩電路、頻率計(jì)、單片機(jī)和上位機(jī)，所述的振蕩電路的輸入端接傳感器的信號(hào)輸出端，所述的振蕩電路的輸出端接頻率計(jì)的輸入端，頻率計(jì)的輸出端接單片機(jī)的10端口，所述單片機(jī)和上位機(jī)通信連接。3.—種用于血樣中微生物快速檢測(cè)的試劑，其特征在于，由牛肉浸膏、酵母浸膏、YC-1溶液和YC-2溶液配置而成，各組分的比例為牛肉浸膏0.210g/L，酵母浸膏0.2~10g/L，YC-1溶液20~60g/L，YC-2溶液1040g/L。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于血樣中微生物快速檢測(cè)的試劑，其特征在于，所述各組分優(yōu)選比例為牛肉浸膏2g/L;酵母浸膏l(xiāng)g/L;YC-1溶液40g/L;YC-2溶液16g/L。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于血樣中微生物快速檢測(cè)的試劑的制備方法，其特征在于，將牛肉浸膏、酵母浸膏和YC-l溶液按"牛肉浸膏0.210g/L，酵母浸膏0.2~10g/L，YC-1溶液20~60g/L，YC-2溶液1040g/L"的比例稱量，溶解，定容后形成培養(yǎng)基，通過(guò)過(guò)濾去除培養(yǎng)基中雜質(zhì)，將過(guò)濾后的培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2~7.4，再放入滅菌器中滅菌；再按1040g/L的比例加入YC-2溶液，再密封、保存?zhèn)溆?，即得到所述的用于血樣中微生物快速檢測(cè)的試劑。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于血樣中微生物快速檢測(cè)的試劑的制備方法，其特征在于，所述的牛肉浸膏、酵母浸膏、YC-1溶液和YC-2溶液的比例優(yōu)選為牛肉浸膏2g/L;酵母浸膏l(xiāng)g/L;YC-1溶液40g/L;YC-2溶液16g/L。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種基于壓電傳感器原理對(duì)血樣中微生物進(jìn)行快速檢測(cè)的儀器與試劑。本測(cè)試儀的特點(diǎn)是具有靈敏度高、易于實(shí)現(xiàn)數(shù)字化、響應(yīng)譜廣、檢測(cè)快速、操作簡(jiǎn)單、成本低廉等，其充分利用串聯(lián)式壓電傳感器對(duì)溶液電導(dǎo)的響應(yīng)，并和微生物的新陳代謝特征相結(jié)合，拓寬了壓電傳感器在臨床血液檢測(cè)方面的應(yīng)用，為疾病診斷應(yīng)用提供了可靠依據(jù)。與之配套的試劑的特征在于，由牛肉浸膏、酵母浸膏、YC-1溶液和YC-2溶液配置而成，各組分的比例為牛肉浸膏0.2～10g/L，酵母浸膏0.2～10g/L，YC-1溶液20～60g/L，YC-2溶液10～40g/L。本發(fā)明還公開(kāi)了該試劑的制備方法。文檔編號(hào)G01N27/416GK101403724SQ20081014306公開(kāi)日2009年4月8日申請(qǐng)日期2008年10月8日優(yōu)先權(quán)日2008年10月8日發(fā)明者何鳳姣申請(qǐng)人:湖南大學(xué)