專利名稱：癌癥唾液快速檢測試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明專利是涉及醫(yī)學(xué)免疫診斷技術(shù)領(lǐng)域，特別是癌癥的唾液檢測試劑。
2.
背景技術(shù)：
(1)免疫膠體金技術(shù)是上世紀(jì)90年代發(fā)展起來的一種簡便、快速、準(zhǔn)確的檢測技術(shù)，其原理與雙夾心ELISA相似，不同的是使用膠體金結(jié)合蛋白質(zhì)形成的復(fù)合物作為探針，且所使用的試劑事先都被固定在具有微孔的硝酸纖維素膜上。使用時將一端置于檢測液中，硝酸纖維素膜可被液體穿過，若檢測液中含有相關(guān)的抗原或抗體。在檢測區(qū)就會出現(xiàn)淡紅色線條。否則為陰性。該技術(shù)問世以來已在臨床上不斷被采用，該方法不依賴于精密的儀器、不依賴于熟練的技術(shù)人員、操作步驟簡捷，比起目前常用的酶聯(lián)免疫法具有更大的優(yōu)點。整個反應(yīng)過程約在5分鐘內(nèi)就可以完成。因而需要的樣品量少，檢測更為敏感和準(zhǔn)確。建立上述快速、簡便、特異的免疫分析方法。 在病毒和細(xì)菌等病原生物引起的傳染病中，實驗室診斷有著極重要的價值。實驗室診斷又分為病原學(xué)診斷和血清學(xué)(即免疫學(xué))診斷兩大部分。前者雖具有確診感染和疾病的優(yōu)點，但檢出效果很不理想。因此，免疫學(xué)診斷已成為許多傳染病的主要檢測手段。
當(dāng)前國內(nèi)外使用最廣泛的血清學(xué)診斷方法為酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，檢測的目標(biāo)物可為抗體、亦可為可溶性循環(huán)抗原。與既往使用的血清學(xué)診斷方法(如間接血凝試驗、乳膠凝集試驗、免疫熒光法和放射免疫試驗等)相比較、該類方法具有敏感性強(qiáng)、特異性高、操作相對簡便等優(yōu)點。但該法操作步驟多、技術(shù)要求高、檢測時間長達(dá)2 3小時，結(jié)果需借助儀器判讀且結(jié)果無法保存。這些缺點限制了其在基層和現(xiàn)場的應(yīng)用和推廣，更無法直接進(jìn)入家庭。 3.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明專利的目的在于公開一種結(jié)構(gòu)簡單，檢測過程快速準(zhǔn)確，應(yīng)用層析法(Lateral Flow Immuno-Assay)膠體金免疫診斷技術(shù)的癌癥唾液快速檢測試劑。膠體金檢測系統(tǒng)使用一種特殊的多孔膜(NC膜)作為固相抗原或抗體載體。該膜具有很強(qiáng)的蛋白吸附功能，抗原或抗體吸附于NC膜并經(jīng)干燥處理后即作為固相，可與液相中的相應(yīng)抗體或抗原快速結(jié)合。而在濕潤狀態(tài)下，液相(唾液)中含有的抗體或抗原可因"燈芯引流現(xiàn)象"作快速定向泳動并與固相抗原或抗體結(jié)合成為復(fù)合物；結(jié)合物載體上預(yù)先噴點的結(jié)合有膠體金(作為顯色和指示劑)的相應(yīng)第二抗體或抗原亦可與該復(fù)合物快速結(jié)合。由于毛細(xì)作用復(fù)合物沿紙條向前移動.移動至檢測線處，復(fù)合物被抗人-IgG單克隆抗體捕獲形成CEA抗體-抗人-IgG單克隆抗體夾心物，呈現(xiàn)出一條紫紅色條帶.陰性標(biāo)本則不會形成夾心物.游離的膠體金標(biāo)重組HIV抗原移動至對照線處被HIV單克隆抗體捕獲呈現(xiàn)出一條紫紅色條帶.對照線的出現(xiàn)表明測試是有效的. 由于這種結(jié)合過程為物理過程，反應(yīng)可在數(shù)分鐘內(nèi)完成且結(jié)合非常穩(wěn)定。這一技術(shù)的創(chuàng)新點為加有輔助劑使抗原或抗體與固相膜載體牢固結(jié)合；應(yīng)用特殊干燥技術(shù)使與固相膜載體結(jié)合的蛋白保持穩(wěn)定，從而達(dá)到試劑盒可在常溫下保存18個月到1年；膠體金制備和結(jié)合技術(shù)；膠體金結(jié)合物的干燥和在常溫下長期保存技術(shù)；測試條中各種參試組分
3的最佳配比；為達(dá)到整個測試反應(yīng)在數(shù)分鐘內(nèi)一步完成對測試條中各種原材料的測試選定和參試組分的最佳配比。
4.
具體實施例方式
本發(fā)明是指一種測試唾液中癌胚抗原的專用檢測試劑.癌坯抗原是癌和胚胎組織產(chǎn)生的一種糖蛋白，是世界上公認(rèn)的腫瘤標(biāo)志物之一，CEA的檢測廣泛用于消化道腫瘤的診斷及術(shù)后觀察，在胃癌.口腔癌及癌前病變中唾液較血清升高明顯.因此唾液CEA的檢測對某些惡性腫瘤的早期診斷及普查有著臨床價值.
1)操作步驟 a.用采樣器取40 ii 1待測微量唾液，加到測試紙條的加樣處。隨即滴加2滴樣本
稀釋液，若一分鐘后未見樣本遷移至檢測窗口，則需再加1滴樣本稀釋液。 b.加樣后，陽性標(biāo)本因其強(qiáng)弱不同可在1 20分鐘內(nèi)檢出，20分鐘后判讀結(jié)果無
效 2)結(jié)果判斷 陽性測試紙條在檢測區(qū)和對照區(qū)位置出現(xiàn)紫紅色條帶，任何可見的紫紅色條帶只要在檢測區(qū)出現(xiàn)，不論深淺均解釋為陽性。
陰性測試紙條只在對照線位置出現(xiàn)一條紫紅色條帶。
失效對照區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶或僅在檢測區(qū)出現(xiàn)紫紅色條帶
表明不正確的操作過程或試劑盒已變質(zhì)損壞。
3)試劑保存于4-3(TC，避免凍結(jié)。有效期18個月。
權(quán)利要求
一種癌癥唾液快速檢測試劑其特征是用于檢測唾液中癌胚抗原，可用于臨床診斷。本發(fā)明是指一種測試唾液中癌胚抗原的專用檢測試劑.癌坯抗原是癌和胚胎組織產(chǎn)生的一種糖蛋白，是世界上公認(rèn)的腫瘤標(biāo)志物之一，CEA的檢測廣泛用于消化道腫瘤的診斷及術(shù)后觀察，在胃癌.口腔癌及癌前病變中唾液較血清升高明顯.因此唾液CEA的檢測對某些惡性腫瘤的早期診斷及普查有著臨床價值.
2. 原材料選擇與制造(1) NC膜選用美國Milipore或國產(chǎn)膜公司膜，膜孔徑(5-8)um。(2) 濾紙墊片普通實驗用濾紙；(3) 樣品稀釋液PBS緩沖液；(4) 抗原膠體金標(biāo)記物，單克隆抗體膠體金。
3. 工藝過程和技術(shù)參數(shù)的確定(1) 30 40nm膠體金溶液的制備；(2) 膠體金溶液結(jié)合重組抗原最佳濃度和量的選擇；(3) 試劑盒半成品和成品制備過程中需確定的主要技術(shù)參數(shù)(4) 抗體噴點濃度、體積和量；(5) 完成檢測步驟所需時間的確定。
4. 權(quán)利要求1試劑盒它用于檢測癌癥和其它疾病，以及相應(yīng)療效監(jiān)測；
5. 權(quán)利要求2試劑盒其中癌癥是結(jié)腸癌、直腸癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、乳腺癌等的輔助診斷、病情檢測及療效評價.
6. 權(quán)利要求3試劑盒使用生物學(xué)樣本為人的全血.血清.尿液.唾液.痰液及其組織液.
全文摘要
一種癌癥唾液快速檢測試劑是采用雙抗體夾心法原理，用純化抗癌胚抗原(Carcinoembryonic Atigen，CEA)單克隆抗體和抗鼠IgG分別固相硝酸纖維素膜，以膠體金標(biāo)記抗CEA單克隆抗體，應(yīng)用層析雙抗體夾心法的原理檢測血清/血漿中CEA。檢測時標(biāo)本中的CEA先與金標(biāo)抗體形成“抗原-金標(biāo)抗體復(fù)合物”，并在層析作用下向前移動，與包被抗體形成“抗體-抗原-金標(biāo)抗體復(fù)合物”，出現(xiàn)一條肉眼可見的紅線(檢測線T)，為陽性結(jié)果，表明標(biāo)本中CEA含量高于5ng/ml；未反應(yīng)的標(biāo)記物繼續(xù)向前移動，與抗鼠IgG抗體結(jié)合，形成一條紅色對照線(C)。若檢測線不出現(xiàn)，結(jié)果為陰性；若對照線不出現(xiàn)，則本次測定無效。靈敏度高，更好的特異性和穩(wěn)定性，具有操作簡便、無需儀器、可單人份及時檢測癌癥。檢測過程縮減成一步并在5分鐘內(nèi)完成，應(yīng)用包括醫(yī)院、防疫站、出入境檢疫局，現(xiàn)場的疾病診斷。家庭自檢。檢測無創(chuàng)傷，速度快，方便安全。填補(bǔ)了國內(nèi)空白。
文檔編號G01N33/577GK101750491SQ200810147888
公開日2010年6月23日 申請日期2008年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月16日
發(fā)明者陳潔 申請人:陳潔;陳斌