專利名稱：雙腫瘤標(biāo)志物金標(biāo)檢測(cè)試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種雙腫瘤標(biāo)志物金標(biāo)檢測(cè)試紙，屬于臨床檢驗(yàn)科學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
癌癥是全世界各種疾病中最歷害與嚴(yán)峻的殺手之一，腫瘤也是我國(guó)發(fā)病率、死 亡率最高的疾病之一。2000年，中國(guó)四分之一的死亡人數(shù)來自癌癥。同時(shí)，肝炎病 毒感染是目前在全世界各地(主要為第三世界國(guó)家)幅蓋面積巨大和人口眾多的疾 病，有數(shù)以十億人被感染，因此這成為全球影響最大的疾病之一。中國(guó)有十三億人 口，也是肝炎病毒感染與肝癌的高發(fā)區(qū)，超過百分之十的中國(guó)人口是被肝炎病毒感 染過的，加上酗酒和其他環(huán)境與遺傳因素，肝炎又會(huì)發(fā)展成為肝硬化以至肝癌，因 此肝癌發(fā)病率在中國(guó)是非常高。但腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療是患者獲 得長(zhǎng)期生存的最主要途徑。以肝癌為例，腫瘤直徑〈2cm， 5年生存率幾乎100%; 直徑每增加lcm， 5年生存率下降20%。
腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療是患者獲得長(zhǎng)期生存的最主要途徑。腫 瘤標(biāo)志物在腫瘤診斷，檢測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移，判斷療效和預(yù)后以及人群普查等方面 都有很大的實(shí)用價(jià)值。腫瘤診斷三大支柱是圖像診斷(包括B超、CT、核磁共振)、 化學(xué)診斷(血清學(xué)和免疫學(xué))及細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)診斷，而后兩者均以腫瘤標(biāo)志為主 要或輔助觀察指標(biāo)。腫瘤標(biāo)志物是指腫瘤細(xì)胞在生長(zhǎng)、增殖、轉(zhuǎn)移或在腫瘤復(fù)發(fā)過 程中產(chǎn)生或分泌的物質(zhì)。人們可通過化學(xué)、免疫、分子生物學(xué)或蛋白組學(xué)方法，在 血液、尿液、腦脊髓液等體液中捕捉到這些物質(zhì)。
腫瘤標(biāo)志(Tumor Markers)是指由腫瘤細(xì)胞分泌或脫落到血液或其他體液或組 織中，或是宿主對(duì)體內(nèi)新生物反應(yīng)而產(chǎn)生并進(jìn)入到血液或體液或組織中而含量明顯 高于正常參考值的一類生物活性物質(zhì)。腫瘤標(biāo)志物在腫瘤診斷，檢測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn) 移，判斷療效和預(yù)后以及人群普查等方面都有較大的實(shí)用價(jià)值，而且在腫瘤發(fā)生和 發(fā)展機(jī)理研究中也具有重要作用。腫瘤標(biāo)志物除用于腫瘤診斷外，可為臨床腫瘤治 療提供依據(jù)及以其為耙，進(jìn)行腫瘤的靶向治療及免疫治療。腫瘤標(biāo)志學(xué)已成為腫瘤 學(xué)中一個(gè)重要的新學(xué)科和新領(lǐng)域。
中國(guó)專利ZL 01239923.X公開了 一種乙肝表面抗原和甲胎蛋白雙聯(lián)膠體金免疫 層析試紙條其結(jié)構(gòu)是在載體上部的纖維素膜兩端分別有膠體金結(jié)合物墊和吸收 墊，兩墊中間膜上依此有質(zhì)控線、AFP禾卩HBsAg檢測(cè)線，樣品墊裝在HBsAg+AFP 膠體金結(jié)合物墊上部。該試劑盒一次檢測(cè)可同時(shí)獲AFP和HBsAg兩項(xiàng)指標(biāo)。該專 利可用于診斷乙型肝炎和原發(fā)性肝癌，但是無法對(duì)肝癌的發(fā)展進(jìn)程進(jìn)行診斷和追蹤。
發(fā)明內(nèi)容
本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問題是提供一種敏感、特異、能夠分辯不同肝癌的雙 腫瘤標(biāo)志物金標(biāo)檢測(cè)試紙。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采用以下設(shè)計(jì)方案
雙腫瘤標(biāo)志物金標(biāo)檢測(cè)試紙，在由PVC制成的載體(PVC底板)上部的硝酸 纖維素膜(即NC膜)上分別設(shè)有質(zhì)控線、甲胎蛋白(AFP)檢測(cè)線和癌胚抗原(CEA) 檢測(cè)線，膜的一端設(shè)有膠體金結(jié)合物墊和樣品墊(玻璃纖維)，另一端設(shè)有吸收墊 (棉漿板)。
所述膠體金結(jié)合物墊為由干燥的紅色膠體金標(biāo)記單克隆抗體的膠體金結(jié)合物墊。
本實(shí)用新型選用甲胎蛋白和癌胚抗原作為檢測(cè)的標(biāo)志物，甲胎蛋白是原發(fā)性肝 癌、肝炎、肝硬化的標(biāo)志物，癌胚抗原是結(jié)、直腸癌及其他癌和其肝轉(zhuǎn)移的腫瘤標(biāo) 志物。
甲胎蛋白(AFP):我國(guó)是肝癌死亡率最高的國(guó)家，肝癌死亡人數(shù)約占全世界 的45% 50%。醫(yī)療工作人員已經(jīng)達(dá)成共識(shí)提高生存率的最佳途徑就是早診斷、 早發(fā)現(xiàn)、早治療。其中最關(guān)鍵的是早期診斷，目前肝癌早期診斷生物學(xué)指標(biāo)主要依 靠甲胎蛋白AFP，在相當(dāng)部分良性肝病患者中甲胎蛋白也容易升高，不僅具有早期 診斷原發(fā)性肝癌的價(jià)值，而且有助于肝炎、肝硬化癌變的預(yù)警。對(duì)甲胎蛋白含量異 常的肝病患者密切隨訪，可早期診治，以提高患者的生存率。
癌胚抗原(CEA):癌胚抗原是一種酸性糖蛋白，胚胎期合成于小腸、肝臟和胰 腺。成人血清含量極低。主要用于對(duì)結(jié)腸直腸癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、乳 腺癌及甲狀腺髓質(zhì)癌等患者的臨床輔助診斷。其中結(jié)腸直腸癌CEA的敏感性高于 其他腫瘤標(biāo)志物。CEA對(duì)肺腺癌較為敏感并且其陽性率隨病程發(fā)展而增高，CEA
對(duì)鼻咽腺癌也較為敏感。CEA可顯著提高診斷結(jié)直腸癌的敏感性和準(zhǔn)確性，也可用 于結(jié)、直腸癌術(shù)后療效評(píng)價(jià)、病情分期和復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)。血清CEA水平變化與結(jié)腸癌 Duke分期密切相關(guān)。結(jié)直腸癌病人常常發(fā)生肝轉(zhuǎn)移，而其間CEA升高更為明顯。 在結(jié)直腸癌術(shù)前CEA檢測(cè)有助于分期和制定治療計(jì)劃，但推薦術(shù)后2年或2年以 上每2 3個(gè)月檢査1次血清CEA，若CEA升高，有必要進(jìn)一步檢查轉(zhuǎn)移灶(主要 為轉(zhuǎn)移性肝癌)。
甲胎蛋白(AFP)及癌胚抗原(CEA)為長(zhǎng)期大量使用的腫瘤標(biāo)志物，其臨床反應(yīng)結(jié) 果準(zhǔn)確可靠。此多重次癌蛋白試劑盒產(chǎn)品的特點(diǎn)是以二種免疫法以達(dá)到檢驗(yàn)多種 腫瘤標(biāo)志物的目的。經(jīng)檢測(cè)，本實(shí)用新型比市場(chǎng)上的單次癌蛋白標(biāo)志物的試劑為優(yōu)， 蛋白芯片檢測(cè)與其他抗體無交叉反應(yīng)，可降低假陰，假陽性發(fā)生，試劑穩(wěn)定性可達(dá) 1年，在檢測(cè)、疾病診斷及藥物研發(fā)中，均顯示出快速、高效、高通量信息處理等 優(yōu)勢(shì)和良好的應(yīng)用前景。
本實(shí)用新型采用金標(biāo)免疫滲濾原理(GIFA);液體的移動(dòng)是通過滲濾作用的橫 流，應(yīng)用的標(biāo)記物為一般均采用簡(jiǎn)便的紅色膠體金-來標(biāo)記甲胎蛋白(AFP)及癌胚抗 原(CEA)抗體。標(biāo)本中的抗原與試劑中的金標(biāo)抗體反應(yīng)后，形成結(jié)合的抗原-金標(biāo)抗 體復(fù)合物和剩余的游離抗體；以固相膜免疫法的硝酸纖維素膜為載體，膜上有固定 于不同位置上的抗體甲胎蛋白(AFP)抗體、癌胚抗原(CEA)抗體，用于將抗原-金 抗體復(fù)合物結(jié)合定位及分離；同時(shí)，膜上另有一固定指控抗體(control),為羊或 兔抗人IgG抗體。
技術(shù)背景中的HBsAg+AFP專利與本發(fā)明的區(qū)別乃在于本發(fā)明用雙重腫瘤標(biāo)志， 不但可分辨原發(fā)性肝癌和轉(zhuǎn)移性肝癌，也能應(yīng)用在肝癌和其他非肝臟性的腫瘤包括 結(jié)腸直腸癌、胃癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌，甲狀腺髓質(zhì)癌與鼻咽腺癌的鑒別診斷， 并且本發(fā)明還可以用于對(duì)原發(fā)性肝癌的療效判斷；而背景技術(shù)中的專利只用了一種 腫瘤標(biāo)志只能檢測(cè)原發(fā)性肝癌這類腫瘤，不能診斷轉(zhuǎn)移性肝癌和其他非肝臟性的腫 瘤，其加上乙型肝炎抗原的診斷，只能說明這腫瘤的形成過程是否與感染乙型肝炎 病毒有關(guān)，目前無法用于對(duì)腫瘤的療效判斷上。
本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是本實(shí)用新型可同時(shí)檢測(cè)甲胎蛋白(AFP)及癌胚抗原 (CEA);結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用方便、敏感性好、特異性強(qiáng)、能夠分辨原發(fā)性肝癌、肝炎、 肝硬化、和結(jié)、直腸癌及其肝轉(zhuǎn)移和其他非肝臟性的腫瘤；檢測(cè)瘤譜廣，適用于常 見瘤種，尤其適于大規(guī)模健康體檢(腫瘤篩查)，市場(chǎng)空間廣闊，便于推廣應(yīng)用。
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，并非對(duì)發(fā)明的限定，依照本領(lǐng) 域公知的現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的實(shí)施方式并不限于此，因此凡依照本文公開內(nèi)容所作 出的本領(lǐng)域的等同替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。


圖1為本實(shí)用新型的雙重次肝癌蛋白診斷試紙的立體結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施方式實(shí)施例1:
參閱圖1所示，雙腫瘤標(biāo)志物金標(biāo)檢測(cè)試紙，在由PVC制成的載體(PVC底
板)l上部的硝酸纖維素膜(即NC膜)2上分別固定有質(zhì)控線23 (羊或兔抗人IgG 抗體)、甲胎蛋白(AFP)檢測(cè)線21和癌胚抗原(CEA)檢測(cè)線22，膜的一端設(shè) 有由干燥的紅色膠體金標(biāo)記單克隆抗體的膠體金結(jié)合物墊3和樣品吸收墊4 (玻璃 纖維)，另一端設(shè)有吸收墊5 (棉漿板)。
本實(shí)用新型的使用方法為
雙腫瘤標(biāo)志物金標(biāo)檢測(cè)試劑盒使用前，試劑盒與樣品恢復(fù)至室溫，平放桌面
(1) 加一滴樣本血液、血清、或血漿 (25-50ul)到加樣孔；
(2) 加入一滴稀釋液(40-50ul)，開始計(jì)時(shí)；
(3) 待紫紅色帶出現(xiàn)，測(cè)試結(jié)果應(yīng)在IO分鐘時(shí)讀出，20分鐘后判定無效。
本發(fā)明檢測(cè)結(jié)果參考
(1) 陽性(+ )兩條紫紅色帶出現(xiàn)， 一條位于測(cè)試區(qū)(Tl)，另一條位于質(zhì)控區(qū) (C)，檢測(cè)結(jié)果表明樣本中含有AFP，水平高于正常值，如果C帶強(qiáng)于T帶，
樣本中AFP含量低于400mg/ml,如果C，T帶一致，樣本中含有AFP水平在 400mg/ml左右，如果T帶強(qiáng)于C帶，樣本中AFP含量高于400mg/ml 。
(2) 陽性(+ )兩條紫紅色帶出現(xiàn)， 一條位于測(cè)試區(qū)(T2)，另一條位于質(zhì)控區(qū) (C)，檢測(cè)結(jié)果表明樣本中含有CEA，水平高于正常值，如果C帶強(qiáng)于T帶，
樣本中CEA含量低于400mg/ml,如果C與T帶一致，樣本中含有CEA水平在 400mg/ml左右，如果T帶強(qiáng)于C帶，樣本中CEA含量高于400mg/ml 。
(3) 陽性(+ )三條紫紅色帶出現(xiàn)，第一條位于測(cè)試區(qū)(Tl)，第二條位于測(cè)試 區(qū)(T2)第三條位于質(zhì)控區(qū)(C)，檢測(cè)結(jié)果表明樣本中含有AFP與CEA，水平 高于正常值，如果C帶強(qiáng)于T1,T2帶，樣本中AFP和CEA含量低于400mg/ml，如 果C, Tl， T2帶一致，樣本中含有AFP和CEA水平在400mg/ml左右，如果T1， T2帶強(qiáng)于C帶，樣本中AFP和CEA含量高于400mg/ml 。
(4) 陰性(-)僅質(zhì)控區(qū)(C)出現(xiàn)一條紫紅色帶，在測(cè)試區(qū)1 (Tl)無紫紅 色帶出現(xiàn)。陰性結(jié)果表明樣本中含有AFP水平量低于20ng/ml。
(5) 陰性(-)僅質(zhì)控區(qū)(C)出現(xiàn)一條紫紅色帶，在測(cè)試區(qū)2 (T2)無紫紅 色帶出現(xiàn)。陰性結(jié)果表明樣本中含有CEA水平量低于20ng/ml。
(6) 無效質(zhì)控區(qū)(C)，沒出現(xiàn)紫紅色帶，表明不正確的操作過程，樣本不 適當(dāng)保存或制備，或試劑盒無效，應(yīng)用新的試劑盒和樣本再測(cè)試。
權(quán)利要求1.雙腫瘤標(biāo)志物金標(biāo)檢測(cè)試紙，其特征在于在由PVC制成的載體上部的硝酸纖維素膜上分別設(shè)有質(zhì)控線、甲胎蛋白檢測(cè)線和癌胚抗原檢測(cè)線，膜的一端設(shè)有膠體金結(jié)合物墊和樣品墊，另一端設(shè)有吸收墊。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙腫瘤標(biāo)志物金標(biāo)檢測(cè)試紙，其特征在于所述膠 體金結(jié)合物墊為由干燥的紅色膠體金標(biāo)記單克隆抗體的膠體金結(jié)合物墊。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙腫瘤標(biāo)志物金標(biāo)檢測(cè)試紙，其特征在于所述樣 品墊為玻璃纖維材質(zhì)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙腫瘤標(biāo)志物金標(biāo)檢測(cè)試紙，其特征在于所述吸 收墊為棉漿板。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙腫瘤標(biāo)志物金標(biāo)檢測(cè)試紙，其特征在于所述質(zhì) 控線為羊或兔抗人IgG抗體。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種雙腫瘤標(biāo)志物金標(biāo)檢測(cè)試紙，屬于臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域。雙腫瘤標(biāo)志物金標(biāo)檢測(cè)試紙，在由PVC制成的載體上部的硝酸纖維素膜上分別設(shè)有質(zhì)控線、甲胎蛋白檢測(cè)線和癌胚抗原檢測(cè)線，膜的一端設(shè)有膠體金結(jié)合物墊和樣品墊，另一端設(shè)有吸收墊。本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是本實(shí)用新型可同時(shí)檢測(cè)甲胎蛋白(AFP)及癌胚抗原(CEA)；結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用方便、敏感性好、特異性強(qiáng)、能夠分辨原發(fā)性肝癌、肝炎、肝硬化、和結(jié)、直腸癌及其肝轉(zhuǎn)移；檢測(cè)瘤譜廣，適用于常見瘤種，尤其適于大規(guī)模健康體檢(腫瘤篩查)，市場(chǎng)空間廣闊，便于推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)G01N33/574GK201196651SQ20082010801
公開日2009年2月18日 申請(qǐng)日期2008年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月22日
發(fā)明者吳小意, 李仲興, 智 王, 陳若瀚, 齊山峰 申請(qǐng)人:北京德易和康技術(shù)有限公司