專利名稱：：用于生殖醫(yī)學(xué)和生物學(xué)的生物標(biāo)記的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生殖醫(yī)學(xué)和生物學(xué)。本發(fā)明涉及著床失敗和成功足月妊娠的預(yù)測(cè)性標(biāo)記，特別是在體外受精之后。
背景技術(shù)：
：在年輕成年人中，不育的診斷和處理是一種普遍的健康問(wèn)題。對(duì)于不育夫婦來(lái)說(shuō)，正在發(fā)展中的體外受精(IVF)技術(shù)是大有希望的生育替代方案。然而，體外受精伴有臨床并發(fā)癥增加的風(fēng)險(xiǎn)，所述風(fēng)險(xiǎn)對(duì)于它們?cè)谂灾械谋憩F(xiàn)，代表的是缺點(diǎn)，包括多胎生產(chǎn)，異位妊娠自發(fā)流產(chǎn)和早產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。考慮到這些臨床風(fēng)險(xiǎn)，以及這些高端技術(shù)的高經(jīng)濟(jì)成本，IVF治療仍然難以用于大多數(shù)不育夫婦。雖然對(duì)影響受精和著床機(jī)制的更好了解已經(jīng)提供了與體外受精成功有關(guān)參數(shù)的更為精準(zhǔn)的觀察，但是搜尋在IVF后，治療開(kāi)始之前可以預(yù)測(cè)妊娠結(jié)果(issue)的生物標(biāo)記，仍然是一個(gè)重大的挑戰(zhàn)。大多數(shù)預(yù)測(cè)胚胎著床或流產(chǎn)的標(biāo)記(Tong等，2004)是在開(kāi)始IVF治療后出現(xiàn)的，因而限制了預(yù)測(cè)與妊娠失敗有關(guān)的壓力和臨床問(wèn)題的心理咨詢(counselling)。因此，在優(yōu)化對(duì)不育夫婦增加的需求的醫(yī)療響應(yīng)中，預(yù)測(cè)不育女性在IVF治療后娩出活嬰的兒率是一個(gè)主要問(wèn)題。因此，強(qiáng)烈需要可以改善對(duì)不育夫婦的心理咨詢的標(biāo)記，其在決定開(kāi)始IVF治療并牽涉到相關(guān)的臨床并發(fā)癥之前的階段，作為與IVF有關(guān)的流產(chǎn)和著床失敗的預(yù)報(bào)物。成功胚胎的著床是通過(guò)將具有質(zhì)量合格的胚胎移植至著床來(lái)實(shí)施的。胚胎的能力主要是由胚胎形態(tài)學(xué)和分裂動(dòng)力學(xué)來(lái)得到認(rèn)識(shí)的。將胚胎培養(yǎng)到胚泡階段具有幾個(gè)潛在的優(yōu)點(diǎn)，其中包括選擇最有活力的胚胎并具有最好的著床機(jī)會(huì)，使胚胎-子宮同步化，在多次著床失敗的情況下評(píng)價(jià)能夠胚胎發(fā)育的可能性。人們可以希望在移植具有良好質(zhì)量的胚胎時(shí)(質(zhì)量限定為形態(tài)學(xué)方面和發(fā)育速度)，胚胎將會(huì)著床并使得妊娠。對(duì)于胚胎釋放出一組支持其在子宮內(nèi)膜內(nèi)著床的信號(hào)的這種內(nèi)在能力的評(píng)價(jià)，尚難以評(píng)價(jià)。因此，對(duì)于能夠幫助評(píng)估胚胎質(zhì)量，其存活性及其著床能力的標(biāo)記，有著強(qiáng)烈的需求。發(fā)明概述本發(fā)明首次提供了允許非侵入性評(píng)價(jià)和預(yù)測(cè)IVF結(jié)果的生物標(biāo)記。除了它的診斷價(jià)值之外，該生物標(biāo)記的重要價(jià)值是在女性開(kāi)始激素調(diào)節(jié)治療之前，對(duì)其定劑量的可能性。使用這種生物標(biāo)記將改善心理咨詢或管理IVF相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而為不育女性的健康護(hù)理提供結(jié)果的益處。另外，本發(fā)明將MICA(MHCI類鏈相關(guān)蛋白A)鑒定為不育和妊娠并發(fā)癥的標(biāo)記。因此，本發(fā)明涉及MICA在生殖醫(yī)學(xué)和生物學(xué)中作為生物標(biāo)記。在第一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及確定體外受精(IVF)結(jié)果的方法，包括體外分析樣品中的MICA，MICA水平是IVF結(jié)果的指示，特別是著床失敗率，IVF失敗和/或流產(chǎn)的指示。優(yōu)選，樣品選自-接受移植胚胎的女性的血液，血漿，血清，子宮內(nèi)膜活檢物，子宮液，陰道和宮頸分泌物，宮頸粘液，道格拉斯陷凹(Douglas'pouch)和腹腔鏡探査情況下(子宮內(nèi)膜異位，盆腔粘連，感染性后遺癥)的腹膜液樣品；-提供精子的男性的血液，血漿，血清和精液樣品；-提供卵母細(xì)胞的女性的血液，血漿，血清，子宮內(nèi)膜活檢物，子宮液，陰道和宮頸分泌物，宮頸粘液，道格拉斯陷凹，卵泡液和腹腔鏡探查情況下的腹膜液(子宮內(nèi)膜異位，盆腔粘連，感染性后遺癥)樣品；禾口8-胚胎上清液或胚胎培養(yǎng)基樣品。在第二實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及選擇IVF對(duì)象的方法，包括體外分析樣品中的MICA，并選擇MICA水平指示IVF成功概率的對(duì)象。優(yōu)選，樣品選自血液，血漿，血清，子宮內(nèi)膜活檢物，子宮液，陰道和宮頸分泌物，宮頸粘液，道格拉斯陷凹，和腹腔鏡探查情況下的腹膜液(子宮內(nèi)膜異位，盆腔粘連，感染性后遺癥)樣品。在第三實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及在對(duì)象中確定精液或游動(dòng)精子質(zhì)量或者確定男性不育概率的方法，包括體外分析來(lái)自對(duì)象的血液，血清，血漿或精液樣品中的MICA，MICA水平是精液或游動(dòng)精子質(zhì)量或者男性不育的指示。在第四實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及確定胚胎質(zhì)量或選擇適合胚胎移植，體外受精或著床的胚胎的方法，包括體外分析胚胎培養(yǎng)基或上清液中的MICA，MICA水平是胚胎質(zhì)量或胚胎適合胚胎移植，體外受精或著床的指示。在第五實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及不育癥預(yù)后以及在對(duì)象中確定妊娠并發(fā)癥概率的方法，所述妊娠并發(fā)癥包括流產(chǎn)，血管型妊娠病(VPD)，先兆子癇(PE)，合并或不合并先兆子癇的宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)，HELLP綜合征，妊娠期脂肪變性，妊娠期腎病或胎死宮內(nèi)，與自身免疫病相關(guān)的妊娠疾病或不育癥，包括體外分析樣品中的MICA，MICA水平指示妊娠并發(fā)癥的概率。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，分析樣品中MICA的步驟包括選自下面的步驟-分析樣品中可溶性MICA蛋白；-分析編碼MICA的無(wú)細(xì)胞核酸；和-分析樣品中存在的抗-MICA抗體。在最優(yōu)選的實(shí)施方案中，分析樣品中MICA的步驟包括將樣品與抗-MICA抗體相接觸，優(yōu)選單克隆抗體，更優(yōu)選選自SR99，SR104和SR116。任選，分析樣品中可溶性MICA的步驟能夠通過(guò)ELISA分析進(jìn)行，優(yōu)選通過(guò)夾心ELISA分析。在第六實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及在生殖醫(yī)學(xué)和生物學(xué)中體外使用的試劑盒，所述試劑盒包含選自下列的至少一種成分抗-MICA抗體，編碼MICA的核酸特異性的引物組，編碼MICA的核酸的特異性探針和MIC蛋白，優(yōu)選MICA蛋白。優(yōu)選，試劑盒用于選擇適合IVF的對(duì)象，確定體外受精(IVF)結(jié)果，確定精液或游動(dòng)精子質(zhì)量，選擇適合IVF的精液或游動(dòng)精子，確定對(duì)象中男性不育的概率，確定胚胎質(zhì)量，選擇適合胚胎移植，體外受精或著床的胚胎，或鑒別在妊娠期間有高并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象，特別是流產(chǎn)，血管型妊娠病，先兆子癇，合并或不合并先兆子癇的宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)，HELLP綜合征，妊娠期脂肪變性，妊娠期腎病或胎死宮內(nèi)的易感對(duì)象。優(yōu)選，抗-MICA是抗體單克隆抗體，優(yōu)選自SR99，SR104和SR116。任選，試劑盒還可包含可溶性MICA蛋白。圖1:平均sMIC血清水平在患者中根據(jù)著床成功性和IVF結(jié)果而不同。sMIC血清水平評(píng)價(jià)是在170名不育女性IVF候選者的血清中，于IVF開(kāi)始之前周期的卵泡期期間得到的。sMIC是ng/ml的水平。散點(diǎn)圖呈現(xiàn)了sMIC陽(yáng)性血樣中的中值和中位的25-75四分位范圍的誤差棒。使用第4版GmphPadPrism軟件獲得圖。分組代表的是IVF后著床失敗的女性(IMP-)，IVF后出現(xiàn)著床成功的女性(IMP+)，IMP+組進(jìn)一步細(xì)分為2組IVF后生下新生兒的女性(BBaby)或成功著床后經(jīng)歷流產(chǎn)的女性(MIS)。產(chǎn)子失敗(或因著床失敗或因流產(chǎn))的女性的中位sMIC值還以IMP-或MIS表示。生育女性對(duì)照捐贈(zèng)組是收集的沒(méi)有妊娠的血樣，所述女性之前已經(jīng)歷過(guò)至少2次成功的妊娠，對(duì)所述樣品也進(jìn)行MIC評(píng)價(jià)(FertCtl)。圖2:參照經(jīng)歷正常妊娠并與孕期相匹配的女性(NP)，發(fā)現(xiàn)患有血管型妊娠病(VPD)女性的MIC+陽(yáng)性樣品中MIC水平高。血管型妊娠病進(jìn)一步細(xì)分為宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)，先兆子癇(PE)和胎死宮內(nèi)(IUFD)。圖3:(圖3A)先兆子癇組中每天蛋白尿的中位和四分位范圍取決于sMIC狀況。使用非參數(shù)曼-惠特尼檢驗(yàn)(non-parametricMann-withneytest)，對(duì)sMIC陽(yáng)性和sMIC陰性血漿之間進(jìn)行比較。(圖3B)在先兆子癇患者的先兆子癇sMIC陽(yáng)性組和sMIC陰性血漿中，子宮雙側(cè)舒張?jiān)缙谇雄E的頻率。發(fā)明詳述本發(fā)明是基于鑒別生殖醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域中的生物標(biāo)記。實(shí)際上，他們發(fā)現(xiàn)MICA水平能夠用于預(yù)測(cè)IVF結(jié)果，特別是用于確定IVF成功或失敗，胚胎著床的成功或失敗以及流產(chǎn)的概率。另外，該標(biāo)記可用于評(píng)價(jià)精液的生育能力，并可用于選擇最有活力并具有最佳著床概率的胚胎。該標(biāo)記也與妊娠并發(fā)癥有關(guān)。特別是它能夠用于定義宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)，胎死宮內(nèi)，與自身免疫病有關(guān)的妊娠病，不育，妊娠期血管病和先兆子癇的概率。MICA已在專利申請(qǐng)WO98/19167和WO03/089616中被深入描述，所述申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容合并在此作為參考。MICA的UnigeneCluster是Hs.549053，代表性序列在EmblQ9UDZ9中?？扇苄訫ICA是截短的蛋白?？扇苄訫ICA缺乏跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)尾，并包含三個(gè)細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域。因此，本發(fā)明涉及確定體外受精(IVF)結(jié)果的方法，包括體外分析樣品中的MICA，MICA的水平指示IVF結(jié)果。該方法可包括提供樣品的先期步驟。IVF結(jié)果可以是產(chǎn)子，著床失敗或流產(chǎn)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本方法包括分析樣品中的可溶性MICA蛋白。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析編碼MICA的無(wú)細(xì)胞的核酸。"無(wú)細(xì)胞"是指不是包含在細(xì)胞中的核酸。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括間接分析MICA，并包括分析樣品中存在的抗-MICA抗體。樣品可由對(duì)象提供。在第一實(shí)施方案中，對(duì)象是接受移植胚胎的女性。對(duì)象也可以是卵母細(xì)胞提供者。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，樣品選自血液，血漿，血清，子宮內(nèi)膜活檢物，子宮液，陰道和宮頸分泌物，宮頸粘液，道格拉斯陷凹，和腹腔鏡探查情況下的腹膜液(子宮內(nèi)膜異位，盆腔粘連，感染性后遺癥)樣品。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，樣品是血液，血漿或血清樣品，更優(yōu)選血清樣品。優(yōu)選，在激素調(diào)節(jié)治療開(kāi)始之前，測(cè)定可溶性MICA水平。在第一具體實(shí)施方案中，激素調(diào)節(jié)治療開(kāi)始之前，血清樣品中MICA水平大于2.45ng/ml指示著床失敗率較高。因此，本發(fā)明涉及一種方法，其中對(duì)象是準(zhǔn)備接受移植胚胎的女性，在激素調(diào)節(jié)治療開(kāi)始之前測(cè)定可溶性MICA水平，血清樣品中MICA水平大于2.45ng/ml指示著床失敗率較高。在第二具體實(shí)施方案中，激素調(diào)節(jié)治療開(kāi)始之前，血清樣品中MICA水平大于28ng/ml指示IVF失敗概率高。因此，本發(fā)明涉及一種方法，其中對(duì)象是準(zhǔn)備接受移植胚胎的女性，在激素調(diào)節(jié)治療開(kāi)始之前測(cè)定可溶性MICA水平，血清樣品中MICA水平大于28ng/ml指示IVF失敗概率高。在第三具體實(shí)施方案中，激素調(diào)節(jié)治療開(kāi)始之前，血清樣品中MICA水平大于6ng/ml指示流產(chǎn)概率高。因此，本發(fā)明涉及一種方法，其中對(duì)象是準(zhǔn)備接受移植胚胎的女性，在激素調(diào)節(jié)治療開(kāi)始之前測(cè)定可溶性MICA水平，血清樣品中MICA水平大于6ng/ml指示流產(chǎn)概率高?？扇苄訫ICA蛋白水平也可在著床后測(cè)定。因此，在第四具體實(shí)施方案中，著床后血清樣品中MICA水平大于3.2ng/ml指示流產(chǎn)概率高。因此，本發(fā)明涉及一種方法，其中對(duì)象是接受了胚胎移植的女性，可溶性MICA水平也可在著床后測(cè)定，血清樣品中MICA水平大于3.2ng/ml指示流產(chǎn)概率高。在第五具體實(shí)施方案中，低水平的MICA指示IVF成功概率高。尤其是，激素調(diào)節(jié)治療開(kāi)始之前，血清樣品中MICA水平低于28ng/ml，優(yōu)選低于6ng/ml并更優(yōu)選低于2.45ng/ml，是IVF成功，優(yōu)選IVF成功概率高的指示。因此，本發(fā)明涉及一種選擇適合IVF的對(duì)象的方法，包括體外分析對(duì)象樣品中的MICA和選擇MICA水平指示IVF成功概率的對(duì)象。所述方法可包含提供對(duì)象樣品的先期步驟。對(duì)象特別是作為IVF候選者的女性。樣品可選自血液，血槳，血清，子宮內(nèi)膜活檢物，子宮液，陰道和宮頸分泌物，宮頸粘液，道格拉斯陷凹，和腹腔鏡探查情況下的腹膜液(子宮內(nèi)膜異位，盆腔粘連，感染性后遺癥)樣品。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，樣品是血液，血漿或血清樣品，優(yōu)選血清樣品。樣品可直接使用或經(jīng)過(guò)預(yù)處理。選擇適合IVF對(duì)象的方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，方法包括分析樣品中的可溶性MICA蛋白?？扇苄訫ICA水平優(yōu)選在激素調(diào)節(jié)治療開(kāi)始之前測(cè)定。例如，血清樣品中可溶性MICA水平低于28ng/ml，優(yōu)選低于6ng/ml,并更優(yōu)選低于2.45ng/ml是IVF成功概率的指示。在另一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，該方法包括分析編碼MICA的無(wú)細(xì)胞核酸。"無(wú)細(xì)胞"是指不是包含在細(xì)胞中的核酸。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括間接MICA分析，并包括分析樣品中存在的抗-MICA抗體。13樣品中MICA水平優(yōu)選在激素調(diào)節(jié)治療開(kāi)始之前測(cè)定。在第二實(shí)施方案中，對(duì)象是提供精液的男性。在該實(shí)施方案中，樣品可選自血液，血漿，血清和精液樣品。精液可選自新鮮射出的精液，準(zhǔn)備好游動(dòng)精子獲能后的新鮮精液，冷凍之前或之后的附睪精液和冷凍之前或之后的睪丸精液。樣品中存在的MICA的確指示生育能力較低。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析樣品中的可溶性MICA蛋白。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析編碼MICA的無(wú)細(xì)胞核酸.因此，本發(fā)明還涉及提供測(cè)量提供精液的男性的血液，血漿，血清或精液樣品中的MICA水平，確定精液或游動(dòng)精子質(zhì)量的方法。該方法可包含提供對(duì)象樣品的先期步驟。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析樣品中的可溶性MICA蛋白。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析編碼MICA的無(wú)細(xì)胞核酸。特別是，精液或游動(dòng)精子質(zhì)量用于確定生育能力。優(yōu)選，樣品中的MICA水平指示精液或游動(dòng)精子的質(zhì)量，因而指示IVF成功的概率。優(yōu)選MICA水平越高，精液或游動(dòng)精子的質(zhì)量越低，因而IVF成功的概率越低。本發(fā)明還涉及選擇適合卵母細(xì)胞的IVF的精液或游動(dòng)精子的方法，包括測(cè)量提供精液的男性的血液，血漿，血清或精液樣品中的MICA水平。該方法可包括提供對(duì)象樣品的先期步驟。MICA的存在確實(shí)與著床失敗有關(guān)。優(yōu)選，顯示MICA水平最低的樣品被選擇用于IVF。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析樣品中的可溶性MICA蛋白。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析編碼MICA的無(wú)細(xì)胞核酸。另外，本發(fā)明涉及確定對(duì)象中男性不育概率的方法，包括測(cè)量對(duì)象的血液，血漿，血清或精液樣品中的MICA水平。該方法包括提供對(duì)象血液，血槳，血清或精液樣品的先期步驟。MICA的存在的確與男性不育有關(guān)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析樣品中的可溶性MICA蛋白。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析編碼MICA的無(wú)細(xì)胞核酸。在第三實(shí)施方案中，對(duì)象是提供卵母細(xì)胞的女性。對(duì)象也可以是接受的女性。MICA的存在的確能夠用于評(píng)估卵母細(xì)胞的質(zhì)量，因而評(píng)估胚胎的質(zhì)量，MICA的存在是存活力和/或著床概率較低的指示。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，樣品選自血液，血漿，血清，子宮內(nèi)膜活檢物，子宮液，陰道和宮頸分泌物，宮頸粘液，道格拉斯陷凹，卵泡液，和腹腔鏡探査情況下的腹膜液(子宮內(nèi)膜異位，盆腔粘連，感染性后遺癥)樣品。具體是，樣品可以是卵泡液，例如在收獲卵母細(xì)胞后，通過(guò)卵泡穿剌得到的卵泡液。這種液體可以在HCG誘導(dǎo)排卵后，通過(guò)陰道穿刺而提供。樣品也可以由上清液或胚胎培養(yǎng)基提供。在具體實(shí)施方案中，上清液或培養(yǎng)基來(lái)自目標(biāo)在于移植或冷凍的胚胎。樣品能夠直接使用或進(jìn)行預(yù)處理，例如冷凍，提純，加熱，濃縮，稀釋等...因此，本發(fā)明還涉及一種通過(guò)測(cè)量胚胎培養(yǎng)基或上清液中的MICA水平而確定胚胎質(zhì)量的方法。MICA水平在受精后至少44-46小時(shí)測(cè)量，優(yōu)選受精后60，70，80或90小時(shí)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析樣品中的可溶性MICA蛋白。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析編碼MICA的無(wú)細(xì)胞核酸。具體是，胚胎質(zhì)量用于確定胚胎成功著床的潛力。優(yōu)選，胚胎培養(yǎng)基或上清液中的MICA水平指示胚胎質(zhì)量，并因此指示胚胎成功著床的概率。優(yōu)選MICA水平越高，胚胎質(zhì)量越低，因此胚胎成功著床的概率越低。本發(fā)明還涉及一種選擇適合胚胎移植，體外受精或著床的胚胎的方法，該方法包括測(cè)量胚胎培養(yǎng)基或上清液中的MICA水平。具體是，MICA水平指示胚胎對(duì)胚胎移植，體外受精或著床的合適性。優(yōu)選，選擇培養(yǎng)基中顯示的MICA水平最低的胚胎用于胚胎移植，體外受精或著床。MICA的存在的確與著床失敗相關(guān)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析樣品中的可溶性MICA蛋白。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析編碼MICA的無(wú)細(xì)胞核酸。本發(fā)明還涉及一種IVF方法，包括用本發(fā)明的方法選擇胚胎和將胚胎移植到相容的人類子宮中。另一方面，本發(fā)明涉及在對(duì)象中確定妊娠并發(fā)癥概率的方法，妊娠并發(fā)癥包括流產(chǎn)，血管型妊娠病，先兆子癇，合并或不合并先兆子癇的血管或非血管型宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)，HELLP綜合征，妊娠期脂肪變性，妊娠期腎病或胎死宮內(nèi)，方法包括體外分析樣品中的MICA，MICA水平是妊娠并發(fā)癥概率的指示，妊娠并發(fā)癥包括流產(chǎn)，血管型妊娠病，先兆子癇，合并或不合并先兆子癇的血管或非血管型宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)，HELLP綜合征，妊娠期脂肪變性，妊娠期腎病或胎死宮內(nèi)。具體是，本方法用于確定先兆子癇的嚴(yán)重性。因此，本發(fā)明涉及在對(duì)象中確定嚴(yán)重先兆子癇的概率的方法，包括，體外分析樣品中的MICA，MICA水平是嚴(yán)重先兆子癇概率的指示。該方法可包括提供樣品的先期步驟。用于本方法的樣品可選自血液，血漿，血清，胎盤(pán)，臍帶血，內(nèi)皮細(xì)胞和羊膜液樣品。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，樣品是血液，血漿或血清樣品，優(yōu)選血清樣品。樣品可直接使用或可經(jīng)過(guò)預(yù)處理。對(duì)象優(yōu)選妊娠女性或希望妊娠的女性。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析樣品中的可溶性MICA蛋白。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析編碼MICA的無(wú)細(xì)胞核酸。16在另一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括間接MICA分析并包括分析樣品中存在的抗-MICA抗體。優(yōu)選，在胚胎著床后測(cè)定可溶性MICA水平。優(yōu)選，測(cè)得血清樣品中可溶性MICA例如至少為0.3ng/ml，0.5ng/ml，0.75ng/ml或1ng/ml，是病理妊娠概率較高的指示，病理妊娠包括流產(chǎn)，血管型妊娠病，先兆子癇，合并或不合并先兆子癇的血管或非血管型宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)，HELLP綜合征，妊娠期脂肪變性，妊娠期腎病或胎死宮內(nèi)，更具體而言，病理選自VPD，先兆子癇，血管型IUGR，IUFD及其組合。優(yōu)選，測(cè)得血清樣品中可溶性MICA例如至少為0.3ng/ml，0.5ng/ml，0.75ng/ml或1ng/ml，也是嚴(yán)重先兆子癇概率較高的指示，特別是先兆子癇合并反映腎衰的蛋白尿和/或反映胎盤(pán)功能不全的子宮雙側(cè)舒張?jiān)缙谇雄E。在具體實(shí)施方案中，血清樣品中可溶性MICA蛋白水平大于2.5或10ng/ml是病理妊娠概率高的指示，病理妊娠包括流產(chǎn)，血管型妊娠病，先兆子癇，合并或不合并先兆子癇的宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)，HELLP綜合征，妊娠期脂肪變性，妊娠期腎病或胎死宮內(nèi)。本發(fā)明還涉及在對(duì)象中區(qū)分血管型與非血管型宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)的方法，包括體外分析樣品中的MICA，MICA水平是血管型IUGR概率的指示。優(yōu)選，樣品是血液，血漿或血清樣品，優(yōu)選血清樣品。更優(yōu)選，測(cè)得樣品中的可溶性MICA優(yōu)選至少0.3ng/ml，0.5ng/ml，0.75ng/ml或1ng/ml，是血管型IUGR的指示。優(yōu)選，在胚胎著床后測(cè)定可溶性MICA水平。如上所述，分析MICA的步驟包括分析樣品中的可溶性MICA蛋白。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，分析液體樣品中可溶性MICA蛋白的步驟包括將樣品與抗-MICA抗體接觸。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，分析樣品中可溶性MICA的步驟通過(guò)ELISA分析，優(yōu)選夾心ELISA分析進(jìn)行。分析和定量蛋白，特別是可溶性蛋白的ELISA技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。在備選的實(shí)施方案中，分析樣品中可溶性MICA的步驟通過(guò)將抗體與微珠偶聯(lián)(Luminex技術(shù))，Western印跡，點(diǎn)印跡，放射免疫分析(RIA)，F(xiàn)ACS分析和本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它免疫分析技術(shù)來(lái)進(jìn)行。例如，可以如下進(jìn)行ELISA分析將待測(cè)樣品固定在聚苯乙烯微量滴定板的孔上；孔中加入抗-MICA抗體；結(jié)合和清洗除去非特異性結(jié)合之后，檢測(cè)結(jié)合的抗-MICA抗體。檢測(cè)經(jīng)常通過(guò)加入抗-MICA抗體的可檢測(cè)特異性抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)。例如，可以通過(guò)針對(duì)二抗(例如，山羊的抗小鼠IgG抗體)的Fc部分的三抗來(lái)檢測(cè)?；蛘撸梢詷?biāo)記抗-MICA抗體。優(yōu)選，如下進(jìn)行夾心ELISA分析將抗-MICA抗體固定在聚苯乙烯微量滴定板的孔上；孔中加入待測(cè)樣品；結(jié)合和清洗除去非特異性結(jié)合之后，通過(guò)抗-MICA二抗檢測(cè)結(jié)合的MICA。檢測(cè)經(jīng)常通過(guò)加入抗-MICA抗體的可檢測(cè)特異性抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)。例如，可以通過(guò)針對(duì)二抗(例如，山羊的抗小鼠IgG抗體)的Fc部分的三抗來(lái)檢測(cè)?；蛘撸梢詷?biāo)記抗-MICA二抗。本發(fā)明中有用的抗-MICA抗體可以是多克隆或單克隆的?？贵w可以是任何類別，優(yōu)選IgGl或IgG2a。它們可以是MICA，特別是可溶性MICA特異性的。這些抗體能夠結(jié)合MICA的細(xì)胞外部分?；蛘?，它們能夠結(jié)合MICA和MICB。制備和表征抗體的方法是本領(lǐng)域公知的(Harlow和Lane,Antibodies:ALaboratoryManual(抗體實(shí)驗(yàn)室指南)，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY(1988))。更具體的抗體例子如下WO03/089616中的2C10，6D4，6G6和3H5，和Hue等(2003)中的SR99，SR104和SR116。優(yōu)選，抗-MICA抗體是單克隆抗體，優(yōu)選自S謂，SR104和SR116。抗-MICA抗體可是被標(biāo)記的。標(biāo)記可以是放射性標(biāo)記，熒光標(biāo)記，化學(xué)發(fā)光標(biāo)記，酶或配體?？?MICA抗體也可不標(biāo)記并可以與標(biāo)記了的檢測(cè)劑一起使用。例如，它們可以由針對(duì)抗-MICA抗體的Fc部分的二抗(例如，山羊的抗小鼠IgG抗體)來(lái)檢測(cè)。如上所述，分析MICA的步驟可以包括分析編碼MICA的無(wú)細(xì)胞核酸。編碼MICA的核酸可以是RNA或DNA。編碼智人(Homosapiens)MICA的mRNA的Genbank登錄號(hào)是NM—000247。智人MICA的GeneID是4276。所述編碼MICA的無(wú)細(xì)胞核酸在液體樣品中可以沒(méi)有和/或包含在循環(huán)微粒中，特別是血液或血清樣品中存在的微粒中。編碼MICA的核酸可由本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的任何手段進(jìn)行分析。例如，可經(jīng)使用合適的引物和探針，通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR——RT-PCR，通過(guò)Southern或Northern印跡或其組合進(jìn)行分析。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)定量PCR或RT-PCR分析。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠容易地設(shè)計(jì)合適的引物對(duì)。例如，適合用sybergreen通過(guò)定量RT-PCR分析MICARNA的引物對(duì)可以為下列引物對(duì)MICA970F和MICA1127R。,誇督)纏,距ATCJ的位置Sens位置序列'Tui引物農(nóng)達(dá)'Tni引物^8產(chǎn)物IC產(chǎn)物匸an》1PCR條付MICA970F931F外顯子5SEQIDNo160,662,84215887,43iMICA1127R1088R外顯子7SEQIDNo261,363,741在應(yīng)用這些技術(shù)之前，可以純化或富集樣品的核酸。編碼MICA的核酸的檢測(cè)已經(jīng)全面描述于專利申請(qǐng)WO98/19167中，其公開(kāi)內(nèi)容合并在此作為參考。如上所述，分析MICA的步驟可以包括樣品中存在的抗-MICA抗19體。例如，抗-MICA抗體可使用MICA蛋白，優(yōu)選重組MICA蛋白，通過(guò)ELISA分析檢測(cè)。制備所述MICA蛋白的方法已經(jīng)全面描述于專利申請(qǐng)WO98/19167和WO03/089616中，其公開(kāi)內(nèi)容合并在此作為參考?；蛘撸治鰳悠分锌?MICA抗體的步驟可通過(guò)將MIC，優(yōu)選MICA與微珠偶聯(lián)(Luminex技術(shù))來(lái)進(jìn)行?？缮藤?gòu)的試劑盒Labscreen(OneLambda,參考號(hào)LSMICA001)可用于通過(guò)Luminex分析血清樣品中的抗MIC抗體。這類針對(duì)抗MIC抗體的分析對(duì)于與不育有關(guān)的自身免疫病(乳糜瀉，APS，...)中自身抗體的分析是有效的。在女性患有免疫病因的妊娠期病(先兆子癇，習(xí)慣性流產(chǎn))的情況下，這種分析也是有價(jià)值的。另外，本發(fā)明涉及在罹患自身免疫疾病或紊亂的對(duì)象中確定不育概率的方法，包括測(cè)量對(duì)象的樣品中的MICA水平，MICA水平是對(duì)象不育概率的指示。任選，該方法包括提供對(duì)象樣品的先期步驟。樣品可選自血液，血漿，血清，子宮內(nèi)膜活檢物，子宮液，陰道和宮頸分泌物，宮頸粘液，道格拉斯陷凹，卵泡液，腹腔鏡探査情況下的腹膜液和精液。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析樣品中的可溶性MICA蛋白。在另一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析編碼MICA的無(wú)細(xì)胞核酸。在另一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，方法包括分析樣品中存在的抗-MICA抗體。本發(fā)明還涉及試劑盒在生殖醫(yī)學(xué)和生物學(xué)中的應(yīng)用，所述試劑盒包含選自下列的至少一種成分抗-MICA抗體，編碼MICA的核酸特異性的引物組，編碼MICA的核酸的特異性探針和MICA蛋白。還涉及生殖醫(yī)學(xué)和生物學(xué)用試劑盒，所述試劑盒包含選自下列的至少一種成分抗-MICA抗體，編碼MICA的核酸特異性的引物組，編碼MICA的核酸的特異性探針和MICA蛋白。MICA蛋白可以是可溶性MICA。試劑盒還可包含說(shuō)明單，任何適當(dāng)?shù)年幮院完?yáng)性對(duì)照，標(biāo)準(zhǔn)蛋白和/或檢測(cè)試劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，試劑盒包括抗-MICA抗體。試劑盒還可包20含可溶性MIC蛋白，優(yōu)選MICA蛋白。可溶性MICA能夠通過(guò)重組表達(dá)截短的MICA而生產(chǎn)。可溶性MICA能夠由合適的宿主細(xì)胞表達(dá)，例如細(xì)菌，酵母，哺乳動(dòng)物和昆蟲(chóng)細(xì)胞。為了便于純化，編碼序列中可以包括標(biāo)簽，例如Myc或His標(biāo)簽。這樣的可溶性MICA能夠用于陽(yáng)性對(duì)照。重組的可溶性MICA分子可按照Hue等，2003(p.1910)中所述進(jìn)行制備，其公開(kāi)內(nèi)容合并在此作為參考。試劑盒還可包含微量滴定板，任選具有固定在微量滴定板孔上的抗-MICA抗體。最后，試劑盒可包含任何適當(dāng)?shù)拿庖邫z測(cè)試劑或溶劑。本發(fā)明還特別涉及試劑盒在體外受精(IVF)失敗，胚胎著床失敗，流產(chǎn)，宮內(nèi)發(fā)育遲緩和先兆子癇的概率中的應(yīng)用。優(yōu)選，抗-MICA抗體是單克隆抗體，優(yōu)選自SR99，SR104和SR116。在具體實(shí)施方案中，試劑盒還包含可溶性MICA蛋白。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的試劑盒在下述中的用途選擇適合IVF的對(duì)象，確定體外受精(IVF)結(jié)果，確定精液或游動(dòng)精子質(zhì)量，選擇適合IVF的精液或游動(dòng)精子，確定對(duì)象中男性不育的概率，確定胚胎質(zhì)量，選擇適合胚胎移植，體外受精或著床的胚胎，鑒別在妊娠期間有高并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象，特別是流產(chǎn)，血管型妊娠病，先兆子癇，合并或不合并先兆子癇的宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)，HELLP綜合征，妊娠期脂肪變性，妊娠期腎病或胎死宮內(nèi)的易感對(duì)象，確定先兆子癇的嚴(yán)重性，區(qū)分血管型與非血管型宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)，以及確定患有自身免疫病，特別是乳糜瀉或抗磷脂抗體綜合征(APS)的對(duì)象的不育概率。本發(fā)明還涉及分析可溶性MICA的試劑盒，其包含至少一種選自SR99，SR104和SR116的抗-MICA抗體。優(yōu)選，試劑盒包含兩種抗-MICA抗體，特別是SR99和SR104。任選，兩種抗體之一被標(biāo)記(例如，生物素化的抗體)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，試劑盒適合夾心ELISA分析。本發(fā)明還涉及該試劑盒在本發(fā)明的方法中的用途。此外，本發(fā)明方法和用途中的任何一種中的MICA分析都可以與本領(lǐng)域已知的其它標(biāo)記的分析相組合。數(shù)種標(biāo)記的組合還可增加可預(yù)測(cè)性。例如，這些其它標(biāo)記可選自HLA-G和生血管標(biāo)記，例如內(nèi)皮糖蛋白(endoglin)，PIGF禾QsFLTl。為了分析這些其它標(biāo)記，試劑盒可包含一種或數(shù)種選自下列的其它成分對(duì)一種或多種其它標(biāo)記例如HLA-G，內(nèi)皮糖蛋白，PIGF和/或sFLTl抗體具有特異性的抗體，引物和探針，對(duì)編碼HLA-G，內(nèi)皮糖蛋白，PIGF或sFLTl的核酸具有特異性的引物組，禾口/或?qū)幋aHLA-G，內(nèi)皮糖蛋白，PIGF或sFLTl的核酸具有特異性的探針。本發(fā)明的其它方面和優(yōu)勢(shì)將公開(kāi)在下面的實(shí)驗(yàn)部分，其應(yīng)被視為說(shuō)明而不是限制本發(fā)明的范圍。本說(shuō)明書(shū)和實(shí)施例中引用的所有參考文獻(xiàn)包括論文，專利和專利申請(qǐng)的內(nèi)容，都合并在此作為參考。實(shí)施例實(shí)施例1:可溶性MIC的血清水平是體外受精之后著床失敗和成功的足月妊娠的預(yù)測(cè)性標(biāo)記。子宮NK(uNK)是在胚胎著床位置處發(fā)現(xiàn)的主要淋巴細(xì)胞群并在懷孕中期之后日漸消失。因而，在母親體內(nèi)發(fā)揮作用的內(nèi)在免疫機(jī)制被認(rèn)為在接納半異體胎兒中具有強(qiáng)大的影響。特別是，uNK受體識(shí)別親體/滋養(yǎng)層配體，其阻止胎兒受到母體免疫系統(tǒng)的攻擊。在胚胎上清液中存在可溶性HLA-G，一種已知的NK抑制配體，通常在胎母界面處表達(dá)，其與體外受精(IVF)后胚胎著床率較高相關(guān)(Fuzzi等，2002;Warner等，2004)。母體uNK上的殺傷細(xì)胞免疫球蛋白受體(KIR)和胎兒HLA-C之間的相互作用也影響生育成功性(Hiby等,2004;Parham,2004;Wu等，2004)。另外，uNK細(xì)胞分泌有利于著床和胎盤(pán)形成的生血管因子和細(xì)胞因子(Ashkar等，2003;Coulam等，2003;Ha腿等，2006;Ledee-Bataille等，2004;Moffett-King,2002)。因此，發(fā)明人推斷UNK細(xì)胞的任何功能障礙將進(jìn)而表現(xiàn)為成功著床和妊娠的障礙。在腫瘤學(xué)(Carbone等，2005;Groh等，2005;Groh等，1998)和自身免疫學(xué)(Hue等，2004;Meresse等，2004)中己經(jīng)廣泛探査了sMIC脅迫誘導(dǎo)的MHCI類相關(guān)分子的表達(dá)的所牽涉的功能。異體或自體細(xì)胞上脅迫誘導(dǎo)的NKG2D配體表達(dá)已經(jīng)顯示出耙向NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性和細(xì)胞因子/趨化因子的產(chǎn)生(Andre等，2004;Lanier,2005;Meresse等，2004;Raulet等，2003;Sutherland等，2002)。雙重的活化和刺激機(jī)制與可溶性MIC被NKG2D受體接合有關(guān)。在一些癌癥患者的血清中可溶形式的MIC(sMIC)釋放，的確已經(jīng)顯示出誘導(dǎo)效應(yīng)子NK和T淋巴細(xì)胞中刺激性NKG2D受體的內(nèi)化，進(jìn)而削弱內(nèi)在的和適應(yīng)性的抗腫瘤免疫應(yīng)答以及利于腫瘤生長(zhǎng)的逃逸機(jī)制(Groh等，2002;Wu等，2004)。NKG2D被胎盤(pán)來(lái)源的SMIC的這種下調(diào)近來(lái)也已經(jīng)被提出作為免疫逃逸機(jī)制，可以下調(diào)妊娠期間的母體免疫應(yīng)答(Mincheva-Nilsson等，2006)。但是，sMIC脅迫誘導(dǎo)的MHCI類相關(guān)分子在生育失敗方面從未得到研究。本發(fā)明人首次研究了血清sMICA是否能夠成為體外受精(IVF)后女性不能懷孕或娩出活嬰的證明依據(jù)。材料和方法受試者和方法本前瞻性研究由當(dāng)?shù)貍惱砦瘑T會(huì)批準(zhǔn)，于馬賽(Marseilles)的CenterofAssistedReproductiveMedicine,LaConceptionHospital,在進(jìn)行過(guò)IVF或ICSI的連貫的系列不育患者中進(jìn)行(2004年1月-2005年10月)。在給出知情同意書(shū)之后，本研究征集了一群170名不育女性，都是IVF的候選者。臨床指征是原因不明的不育，男性不育和輸卵管原因。所包括的女性無(wú)一曾有懷孕史。在IVF之前的周期的卵泡期收集血漿樣品。所有患者接受相似的刺激方案。在用Gnrh激動(dòng)劑類似物進(jìn)行垂體下調(diào)之后，開(kāi)始使用重組FSH(GonalF,SeronoPharma,法國(guó)23巴黎；Puregon,OrganonFrance,法國(guó)巴黎)進(jìn)行卵巢刺激。通過(guò)低于50pg/ml的低血漿雌二醇和超聲檢査排除卵巢囊腫并證實(shí)子宮內(nèi)膜厚度低于5mm來(lái)證實(shí)垂體脫敏完成。當(dāng)至少三個(gè)卵泡直徑超過(guò)16mm時(shí)，施用人絨毛膜促性腺激素10000UI(HCG)。HCG施用后32-34小時(shí)，通過(guò)經(jīng)陰道超聲引導(dǎo)和全身麻醉來(lái)收獲卵母細(xì)胞。從胚胎移植當(dāng)天起，用天然孕酮支持黃體期。胚胎移植在收集卵母細(xì)胞后第二天或第三天進(jìn)行。在胚胎移植后15天進(jìn)行一次血清HCG測(cè)量。當(dāng)通過(guò)經(jīng)陰道超聲圖探測(cè)到具有胎兒心跳的子宮內(nèi)孕囊時(shí)，確定為臨床妊娠。收集的卵母細(xì)胞在帶有添加了血清替代品補(bǔ)充的600pL培養(yǎng)基的四孔多-皿中培養(yǎng)。每孔含1-4個(gè)卵母細(xì)胞。采用IVF或ICSI技術(shù)進(jìn)行授精。授精后16-18h在倒置顯微鏡下觀察卵母細(xì)胞的受精，并計(jì)算受精率。培養(yǎng)48h或72h后檢查胚胎，評(píng)估分裂率，直至選出四個(gè)胚胎用于移植。胚胎根據(jù)卵裂球的數(shù)目和碎片量分級(jí)。所用的級(jí)別是l級(jí)(沒(méi)有碎片)，2級(jí)(<20%)，3級(jí)(20-50%碎片)，4級(jí)(>50%碎片)。ELISA分析血漿中的可溶性MIC水平可溶性MICA分子的構(gòu)建，表達(dá)和純化。按照Hue等，2003(p.1910)的記載，制備重組可溶性MICA分子，其公開(kāi)內(nèi)容合并在此作為參考?？?MICAmAbs的生產(chǎn)。抗-MICA單克隆抗體按照Hue等，2003(p.1910)的記載生產(chǎn)，其公開(kāi)內(nèi)容合并在此作為參考.ELISA檢測(cè)可溶性MICA.-為了檢測(cè)血清中的可溶性MICA,夾心ELISA中使用了兩種不同的抗-MICmAbs。高結(jié)合性聚苯乙烯板(Greiner;Sigma-Aldrich)4°C下用捕獲SR99Ab(PBS中5pg/ml,100孔)包被12h，用PBS加0.05%Tween20清洗5次，22°C加入100pi的5%BSAlh進(jìn)行阻斷，并在PBS-0.05%Tween20中清洗。然后在室溫下加入標(biāo)準(zhǔn)(可溶性rMICA在PBS-0.05%Tween20中從100pg/ml至O.lng/ml的連續(xù)稀釋液)和血清樣品(100pl/孔)2h。清洗5次后，24在室溫下加入生物素化的SR104檢測(cè)Ab(PBS中150ng/ml,100pl/孔)1h。將板清洗，并在室溫下與鏈親和素結(jié)合的HRP(1/30,000;AmershamPharmaciaBiotech)—起溫育20min，清洗，并與四甲基聯(lián)苯胺底物(Sigma-Aldrich)在37°C反應(yīng)15min。用0.5MH2S04(50|11/孔)終止反應(yīng)。測(cè)量450nm處的吸光度。重組可溶性MICA蛋白的檢測(cè)閾值為0,1ng/ml。統(tǒng)計(jì)分析使用4.0b版GraphPadPrism軟件，根據(jù)數(shù)據(jù)是否正態(tài)分布，通過(guò)單因素方差分析，student'st檢驗(yàn)或曼-惠特尼(Mann-Whitney)秩和檢驗(yàn)評(píng)價(jià)組間差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性?？ǚ椒治鲇糜诒容^各個(gè)獨(dú)立組之間的sMIC頻率。受試者工作特征曲線分析(ROC)用于分析SMICA濃度截止點(diǎn)和它們的靈敏性/特異性。確定的截止點(diǎn)還用于評(píng)價(jià)相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)和比數(shù)比。顯著性p值設(shè)定為〈0.05。結(jié)果在IVF后經(jīng)歷著床失敗的不孕女性中發(fā)現(xiàn)較高的sMIC血清水平在所包括的170名患者中，38名在IVF后經(jīng)歷了成功的胚胎著床，其中30名繼續(xù)妊娠，足月生育活嬰，8名在成功著床后流產(chǎn)。3名患者在8SA，2名患者在9SA，兩名患者在6SA和1名患者在7SA發(fā)生流產(chǎn)。病理報(bào)告(針對(duì)>8SA流產(chǎn)者做出)并不支持遺傳性流產(chǎn)?；颊叩奶卣骺偨Y(jié)在表1中。按照記載(Hue等，2004)，用夾心ELISA測(cè)量血清sMIC。64名(38%)進(jìn)行了IVF的患者具有可檢測(cè)的sMIC血清水平(均值=15.28ng/ml，低-高95%范圍=10.7-19.9ng/ml)。雖然事實(shí)上在這些組標(biāo)準(zhǔn)化的情況下，參數(shù)與IVF結(jié)果相關(guān)聯(lián)(表1)，但是陽(yáng)性患者中，胚胎成功著床的女性(中值=2.5,25-75%四分位范圍1.5-9.7)與著床失敗組相比，平均sMIC水平有顯著的差異(12.0,3-24.2,p<0.021)。因此，發(fā)明人進(jìn)一步研究了sMIC水平值是否可以幫助預(yù)測(cè)sMIC陽(yáng)性婦女的著床失敗。他們進(jìn)而限定了2.45ng/ml的截止值，可以通過(guò)ROC分析進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估(靈敏度82,特異性50%)。SMIC高達(dá)2.45與著床失敗相關(guān)(比數(shù)比4.6，95%CI1.08-19.79，p=0.031)。sMIC血清水平>27.7ng/ml通常與IVF后胚胎沒(méi)有著床相關(guān)(圖1)。表1:本研究中征集的170名不育女性的特征<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>sMIC血清水平預(yù)測(cè)IVF后足月娩出活嬰的幾率除了預(yù)測(cè)著床失敗之外，發(fā)明人還前瞻性地分析了sMIC水平增加是否能夠以生育活嬰來(lái)預(yù)測(cè)IVF結(jié)果。的確，成功著床后(38名女性)，8名女性經(jīng)歷了IVF后流產(chǎn)，而30人生育了活嬰。在陽(yáng)性的情況下，發(fā)現(xiàn)IVF之前觀察到的可溶性血清MIC值在IVF后生育的女性組中(中值二2ng/ml，最小-最大范圍l-6ng/ml)較之經(jīng)歷了IVF后流產(chǎn)或著床失敗的女性(中值=11ng/ml，最小-最大0.1-96ng/ml，圖l)要明顯地低。進(jìn)而發(fā)明人還評(píng)價(jià)了可以預(yù)測(cè)實(shí)現(xiàn)成功妊娠而不是流產(chǎn)或著床失敗的幾率的sMIC值。使用相同的2.45ng/ml截止值(靈敏度82。/。和特異性=75%)，當(dāng)通過(guò)IVF之前的sMIC血清水平預(yù)測(cè)時(shí)，生育活嬰的幾率比低于2.45ng/ml閾值的要高(比數(shù)比=13.8,CI95%=2.03-118，p=0.002)。在實(shí)現(xiàn)了妊娠發(fā)展的女性中觀察到的sMIC最高值為6ng/ml(圖1)。高sMIC值與成功著床后流產(chǎn)有關(guān)雖然相對(duì)于著床成功度而言，sMIC陽(yáng)性女性的頻率沒(méi)有顯著差異(著床成功組中36%相對(duì)于著床失敗組中的38%)，但是當(dāng)著床成功時(shí)(38例)，在經(jīng)歷流產(chǎn)的女性組中，sMIC陽(yáng)性的頻率(75%)比成功足月妊娠的女性組高(26%,p=0.03)。此外，在陽(yáng)性時(shí)，在IVF后經(jīng)歷流產(chǎn)的組中表現(xiàn)出IVF前的中值sMIC血清水平(中值二9.7,觀察到的最小-最大值=2.5-24ng/ml)，要高于成功完成妊娠的組(中值=2.1,最小-最大范圍l-6ng/ml)。進(jìn)而發(fā)明人還評(píng)價(jià)了是否能夠從sMIC血清水平預(yù)測(cè)流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。雖然在未進(jìn)行IVF的妊娠女性總?cè)巳褐?，較高的sMIC血清水平并不與發(fā)生流產(chǎn)相關(guān)，但是本發(fā)明人能夠表明，在IVF之后成功著床時(shí)，較高的sMIC與IVF之后得到的妊娠期間的流產(chǎn)發(fā)生有關(guān)。的確，使用sMIC血清水平>3.2ng/ml的截止值(靈敏度83%和特異性75%)，sMIC能夠在與足月妊娠相比較時(shí)，預(yù)測(cè)成功著床后的流產(chǎn)(比數(shù)比=35，p=0.026,95%CI1.74-703)。當(dāng)女性的sMIC血清水平>6ng/ml時(shí)，沒(méi)有觀察到足月生育。討論SMIC影響胚胎著床的機(jī)制尚不清楚。自然殺傷細(xì)胞在著床的早期發(fā)揮著關(guān)鍵作用，因?yàn)樗鼈兇砹似鹬饕饔玫拿庖呋锇椋刂萍?xì)胞因子/趨化因子/生血管因子產(chǎn)生和滋養(yǎng)層構(gòu)建(Sargent等，2006)。sMIC是廣泛表達(dá)在NK和CD8和yST淋巴細(xì)胞上的激活性NKG2D受體的眾多配體之一。激活性NKG2D受體被NKG2D配體接合，其中可溶性MIC是NK-介導(dǎo)的細(xì)胞毒活性，增殖和細(xì)胞因子產(chǎn)生的協(xié)同刺激信號(hào)(Andre等，2004;Bryceson等，2006;Raulet等，2003;Sutherland等，2002;Upshaw等，2006)。另外，sMIC-誘導(dǎo)其NKG2D受體的內(nèi)化已被描述成下調(diào)抗腫瘤NK細(xì)胞活性的機(jī)制(Wu等，2004)。NKG2D被胎盤(pán)來(lái)源的可溶性MIC下調(diào)，近來(lái)已經(jīng)被提示為是有利于胎兒存活的免疫逃逸機(jī)制(Mincheva-Nilsson等，2006)。因此，NKG2D受體及其配體之間相互作用，導(dǎo)致調(diào)節(jié)uNK-細(xì)胞的全部細(xì)胞因子或溶胞活性，可能影響著床環(huán)境并有損于IVF后的成功妊娠。因此，發(fā)明人的主要發(fā)現(xiàn)在于，將會(huì)經(jīng)歷著床和妊娠失敗的女性在IVF之前，普遍有脅迫誘導(dǎo)的免疫刺激性MHCI類鏈相關(guān)分子。sMIC的血清水平大于2.45ng/ml預(yù)測(cè)了著床失敗率較高的子宮，而sMIC血清水平>6ng/ml從不產(chǎn)生足月發(fā)展的妊娠，而水平>28ng/ml通常與IVF失敗相關(guān)。此外，著床成功后，MIC水平〉3.2ng/ml的女性處于IVF后發(fā)生流產(chǎn)的高風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)IVF后沒(méi)有實(shí)現(xiàn)成功妊娠的女性血清中sMIC蛋白水平提高可能有貢獻(xiàn)的根源和不育狀況相關(guān)的機(jī)制，尚未揭開(kāi)。據(jù)報(bào)告，sMIC從MIC-表達(dá)細(xì)胞的細(xì)胞膜上釋放涉及被金屬蛋白酶切割(Waldhauer等，2006)。在反復(fù)著床失敗的患者中，已經(jīng)報(bào)道了金屬蛋白酶活性改變(Shibahara等，2005)。對(duì)于產(chǎn)生可溶性MIC的機(jī)制和sMIC對(duì)與IVF后著床失敗或妊娠失敗有關(guān)的免疫功能的影響的進(jìn)一步研究，現(xiàn)在是要探索的挑戰(zhàn)性課題。本研究的共同作者對(duì)于乳糜瀉的研究(Hue等，2004)認(rèn)為事實(shí)上sMIC也是自身或同種免疫過(guò)程的標(biāo)記，乳糜瀉被報(bào)告不育的發(fā)生率較高(Meloni等，1999)，提示sMIC可能是28母親排斥胚胎的較高自身或同種反應(yīng)性潛力的信號(hào)?？傊?，鑒于IVF的經(jīng)濟(jì)和心理牽涉高，本研究首先提供了論據(jù)，即血清(seric)sMIC定量可以被視為應(yīng)用于非侵入性評(píng)價(jià)和預(yù)測(cè)IVF結(jié)果的新參數(shù)。除了它的預(yù)后價(jià)值之外，該生物標(biāo)記的主要價(jià)值是其在女性開(kāi)始激素調(diào)節(jié)治療之前，確定其用量的可能性。因此，這些特征應(yīng)當(dāng)改善心理咨詢或管理IVF相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)，結(jié)果進(jìn)而為不育女性健康的護(hù)理提供益處。實(shí)施例2:女性血管型妊娠病的血漿中發(fā)現(xiàn)高頻率的可溶性MIC妊娠產(chǎn)生了獨(dú)特的狀態(tài)，其中廣泛的血管生成和建立母體免疫耐受性使得胎兒和胎盤(pán)可以成功發(fā)育。滋養(yǎng)層胎兒細(xì)胞和母體免疫細(xì)胞之間的交談，調(diào)節(jié)了早期妊娠的胎盤(pán)發(fā)育，血管生成和胎兒的免疫耐受性。胎盤(pán)形成不充分導(dǎo)致血管型妊娠病(VPD)，包括先兆子癇(PE)，宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)和反復(fù)的妊娠失敗，這些代表了胎-母發(fā)病率和死亡率的主因。先兆子癇的特征是懷孕20周之后的高血壓和蛋白尿。盡管近來(lái)在了解胎盤(pán)血管化不充分(螺旋動(dòng)脈不完全重構(gòu))為何可以導(dǎo)致血管型妊娠病上有進(jìn)步，但它們的預(yù)后仍然嚴(yán)重，并且取出胎盤(pán)仍然是管理嚴(yán)重先兆子癇和大部分宮內(nèi)生長(zhǎng)阻滯的唯一治療方法。實(shí)施例2a材料和方法受試者在49名經(jīng)歷過(guò)血管型妊娠病(VPD)的女性中評(píng)價(jià)可溶性MIC血漿水平，血管型妊娠病包括血管型宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)，先兆子癇(PE)或胎死宮內(nèi)(IUFD)，并與來(lái)自匹配妊娠期限(平均29周)的正常進(jìn)行妊娠的53名女性的血漿對(duì)照組相比較。方法PE被定義為動(dòng)脈舒張血壓大于90mmHg，收縮壓大于140mmHg，合并蛋白尿(超過(guò)300mg/24h)。另外，報(bào)告有針對(duì)母體和胎兒的不利后果的風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)的嚴(yán)重母體并發(fā)癥，特別是與HELLP綜合征相關(guān)(H=溶血；EL=肝臟酶增加；和LP=低血小板)(Weinstein等,2005)和導(dǎo)致腎衰的少尿。血管型IUGR被定義為以超聲圖測(cè)量，孕齡<2.5百分位點(diǎn)，合并有至少一種"胎盤(pán)功能不全"的生物或超聲標(biāo)記，如子宮異常，或臍動(dòng)脈多普勒(Chien等，2000)或血漿纖連蛋白水平升高(Ostlund等，2001)。血管型IUGR組的排除標(biāo)準(zhǔn)是胎兒存在先天畸形或染色體異常，近期巨細(xì)胞病毒或弓形體感染，創(chuàng)傷，妊娠期間藥物或酒精濫用，以及胎兒對(duì)于孕齡而言生來(lái)就小。IUFD通過(guò)超聲檢查的定義是，在12孕周后，根據(jù)按孕期的胎兒生長(zhǎng)參數(shù)，胎兒明顯沒(méi)有心臟活動(dòng)，發(fā)生在嚴(yán)重發(fā)育遲緩之后。結(jié)果表2:VPD組中觀察到的頻率高于孕期相匹配的對(duì)照組。正常妊娠血管型妊娠病NPVPDIUGRPEIUFDn=5349131917MIC+n=11968%MIC+1.938,838.531.647.1均值1.010.276.3915.258.95標(biāo)準(zhǔn)差0.03.174.435.215.99最大值10.350.41.370.35最小值150.0023.7032.6950.00如圖2所示，在患有血管型妊娠病的女性的MIC+陽(yáng)性樣品中，發(fā)現(xiàn)了較高的MIC水平。30實(shí)施例2b材料和方法受試者在知情同意之后，169名女性相繼入選到這項(xiàng)經(jīng)2年(2004-2006)時(shí)間施行的研究中。81名存在血管型妊娠病(VPD)的患者進(jìn)一步細(xì)分為3組40名PE患者，23名血管型IUGR患者，18名胎死宮內(nèi)(IUFD)患者。PE，IUGR，IUFD的定義如上面在實(shí)施例2a中所述。25名患者存在孤立的非血管型IUGR，涉及4例胎兒染色體非整倍體，8例胎兒多發(fā)畸形綜合征，3例是毒性或感染病源，剩下10例是胎兒對(duì)于孕齡而言小。非-血管型IUGR的診斷是以超聲圖測(cè)量，相對(duì)于孕齡<2.5個(gè)百分位點(diǎn)，但纖連蛋白水平，子宮和臍動(dòng)脈多普勒速度正常。對(duì)照組由63名進(jìn)行常規(guī)婦產(chǎn)科檢査的健康妊娠女性組成，并隨訪至分娩，以證實(shí)正常妊娠(NP)結(jié)果。正常妊娠在17-41孕周之間征集，以將正常妊娠與VPD患者的孕期相匹配。收集血漿血樣在診斷出血管性妊娠病或孤立IUGR時(shí)，以及在孕期匹配的正常妊娠對(duì)照組進(jìn)行產(chǎn)科檢查時(shí)收集。按照標(biāo)準(zhǔn)程序，樣品收集到0.129mol/L檸檬酸鈉(3.8。/。)中，離心并在-80°保存。捕獲ELISA測(cè)定sMICA/B使用以前記載的夾心酶聯(lián)免疫吸附分析(Hue等，2004)，測(cè)量血槳中的可溶性MIC濃度。在各實(shí)驗(yàn)中用作標(biāo)準(zhǔn)的重組可溶性MICA蛋白的檢測(cè)閾值為0.1ng/ml，血漿水平高于0.3ng/ml被認(rèn)為是陽(yáng)性。31統(tǒng)計(jì)所進(jìn)行的分析是用Prism軟件(GraphPad4.0b,GraphPad,SanDiego，CA)執(zhí)行非參數(shù)Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，然后是Dunn事后檢驗(yàn)，以比較3個(gè)或多個(gè)連續(xù)變量，曼-惠特尼檢驗(yàn)比較2個(gè)未配對(duì)的組，Wilcoxon配對(duì)檢驗(yàn)用于NKG2D表達(dá)和CD107a脫粒分析結(jié)果。數(shù)據(jù)根據(jù)分布表達(dá)為中值[范圍]和平均值(sd)。范疇變量之間的關(guān)聯(lián)在交叉列表之后通過(guò)Pearson卡方檢驗(yàn)(和如果iK5的話，通過(guò)fisher確切檢驗(yàn))進(jìn)行檢驗(yàn)。通過(guò)spearman檢驗(yàn)提供相關(guān)性。95%置信區(qū)間(p0.05)被認(rèn)為有顯著性。對(duì)取樣時(shí)的產(chǎn)次，孕次，收縮和舒張血壓，孕齡；分娩時(shí)期和出生時(shí)的嬰兒體重參數(shù)進(jìn)行多元分析，以鑒定與檢測(cè)血漿中可溶性MIC有關(guān)的獨(dú)立標(biāo)記。結(jié)果患有血管型妊娠病女性中血漿sMIC的頻率增加在3組孕期匹配的NP，VPD或非-血管型IUGR女性中評(píng)價(jià)sMIC的血漿水平。取樣時(shí)正常妊娠，VPD禾口非-血管型IUGR之間的年齡，孕次，體重指數(shù)和孕齡沒(méi)有發(fā)現(xiàn)顯著性差異。VPD女性的收縮和舒張血壓明顯較高。正如預(yù)期，VPD和非-血管型IUGR組與正常妊娠相比較，分娩時(shí)的嬰兒出生體重和孕齡的中值均明顯較低(pO.OOl)。這些患者的主要臨床和生物學(xué)特征總結(jié)在表3中。表3:研究人群的特征<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>用非參數(shù)Kmskal-Wallis檢驗(yàn)，然后是Dunn事后檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。值表示為中值[25-75四分位范圍]*p<0.001血管型妊娠病和其它組之間§p<0.001正常妊娠和其它組之間NP組中，63名女性中只有1人的血漿sMIC水平低(0.5ng/ml)。但是，必須注意到，該患者隨訪的是全身性紅斑狼瘡，妊娠發(fā)展正常。在25名非-血管型IUGR女性中，1人有檢測(cè)得到的sMIC血漿水平(1.63ng/ml)。反之，在VPD組的81名患者中，26名(32%)測(cè)得sMIC分子(與NP相對(duì)照，p<0.0001)。此外，先兆子癇患者中sMIC水平(中值，25-75四分位范圍7.5ng/ml，1.37-32.69)明顯比在IUFD(2.18ng/ml,0.86-7.58,p〈0.01)和血管型IUGR(1.63ng/ml,0.86-5.2,p〈0.05)中高(表4)。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>血漿sMIC的存在鑒別嚴(yán)重先兆子癇亞組然后，根據(jù)診斷時(shí)的孕期，收縮或舒張血壓，蛋白尿定量，尿酸和纖連蛋白血漿水平，臍帶和子宮動(dòng)脈多普勒流速波形分析，分娩時(shí)期和嬰兒出生體重(表3)，確定母體血漿中存在sMIC是否與表征嚴(yán)重先兆子癇的臨床，生物學(xué)或聲譜標(biāo)記相關(guān)。sMIC-陽(yáng)性和-陰性患者的收縮或舒張血壓，纖連蛋白和尿酸水平之間沒(méi)有差異。但是，反映腎衰的每日中值蛋白尿，在sMIC-陽(yáng)性血漿的PE女性中顯著高于沒(méi)有可檢測(cè)sMIC的PE女性^=0.04,圖3A)。對(duì)取樣時(shí)的產(chǎn)次，孕次，收縮和舒張血壓，孕齡；分娩期限和出生時(shí)的嬰兒體重進(jìn)行多元分析，進(jìn)一步證實(shí)了蛋白尿與sMIC存在獨(dú)立相關(guān)。另外，PE時(shí)進(jìn)行聲譜分析母體子宮動(dòng)脈多普勒流速波形顯示，反映胎盤(pán)功能不全的子宮雙側(cè)舒張?jiān)缙谇雄E在PE的sMIC-陽(yáng)性組中更為頻繁(p^0.037,圖3B)。然后對(duì)與sMIC血槳檢測(cè)有關(guān)的PE患者中的嚴(yán)重母體并發(fā)癥頻率進(jìn)行了研究。在9名有sMIC-陽(yáng)性血漿的PE女性中，3人(33%)存在伴有急性腎功能不全的少尿，比較之下，31名檢測(cè)不到血槳sMIC的PE女性只有l(wèi)人(3.2%)(p=0.03)。此外，HELLP綜合征的頻率，在與sMIC陰性PE組相比較時(shí)(31名患者中l(wèi)人，3.2%，p=0.1)，在sMIC陽(yáng)性PE組中傾向于升高(9名患者中2人，22.2%)。血漿中存在sMIC與血管型IUGR有關(guān)為了研究血漿sMIC的存在是否與IUGR的血管來(lái)源相關(guān)，發(fā)明人比較了血管型和非血管型IUGR女性的sMIC的水平。在血管型IUGR的23名患者中，9名(39%)與25名非血管型IUGR患者只有l(wèi)名(4%)相比具有可檢測(cè)的血漿sMIC(OR=15.43[1.763-135]，p=0.0038)。因此，雖然年齡，取樣時(shí)的孕期，嬰兒出生體重和分娩期限在2組之間沒(méi)有差異，但母體血漿中sMIC的存在與血管型IUGR明顯相關(guān)。此外，陽(yáng)性sMIC血漿預(yù)測(cè)IUGR的血管病因具有90%陽(yáng)性預(yù)測(cè)值(96%特異性和39%靈敏度)禾卩63%陰性預(yù)測(cè)值。討論本發(fā)明人的結(jié)果表明，可溶性MIC分子在血管型妊娠病女性的血漿中的檢出頻率比孕齡相匹配的正常妊娠者更高。此外，sMIC血漿水平與先兆子癇的嚴(yán)重性相關(guān)，并看來(lái)是血管型IUGR的特異性標(biāo)記。先兆子癇是原因不明的多系統(tǒng)疾病，是人類妊娠獨(dú)有的。其中，先天易栓性缺陷與VPD的發(fā)生有關(guān)。已經(jīng)鑒別了新的炎癥和血栓癥標(biāo)記，但沒(méi)有臨床應(yīng)用(Levine等，2006,Bretelle等，2003和2005)。此外，高蛋白尿與母體和胎兒不良結(jié)果的風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)(Chan等，2005)。但是，蛋白尿不能獨(dú)立預(yù)測(cè)不良結(jié)果，并且沒(méi)有蛋白分泌的閾值可以預(yù)測(cè)炎癥先兆子癇并發(fā)癥。在現(xiàn)有技術(shù)中，尚未鑒別出PE嚴(yán)重性的臨床數(shù)據(jù)相關(guān)標(biāo)記。鑒于本發(fā)明人的結(jié)果，母體血漿中sMIC的存在，提供了PE嚴(yán)重性的新臨床相關(guān)標(biāo)記。任選需要的話，該參數(shù)也能與其它參數(shù)組合，以增加預(yù)測(cè)先兆子癇的靈敏度水平。母體血漿中sMIC的存在與多重起源的血管病的另一種亞型一一IUGR有關(guān)，IUGR的預(yù)后取決于起因，嚴(yán)重性和診斷時(shí)期。胎盤(pán)異常導(dǎo)致的胎盤(pán)功能不全構(gòu)成了稱為血管型IUGR的IUGR的主因。大多數(shù)35血管型IUGR與PE有關(guān)，并共有相同的病理生理。反之，孤立的IUGR可能代表了嚴(yán)重胎兒缺陷，非整倍體或與異常神經(jīng)結(jié)果相關(guān)的遺傳綜合征的唯一聲譜標(biāo)記，從而在這樣的情況下患者可以請(qǐng)求終止妊娠。在存在有PE，母體血管標(biāo)記(纖連蛋白，高尿酸水平)或子宮多普勒血流測(cè)量波形(waveflow)的情況下，有時(shí)易于診斷血管型IUGR。但是，在現(xiàn)有技術(shù)中，缺乏可以區(qū)分血管型與非血管型IUGR的非侵入性和特異性標(biāo)記。例如，用于預(yù)測(cè)IUGR中胎盤(pán)缺氧-缺血病變的子宮多普勒流速測(cè)量指標(biāo)顯示出對(duì)于97%的靈敏度來(lái)說(shuō)，特異性只有63%。在缺乏明顯的IUGR病因的情況下，需要侵入性胎兒探査以確定胎兒預(yù)后，這具有不可忽視的早產(chǎn)和晚期流產(chǎn)率。發(fā)明人的結(jié)果顯示在女性血漿中檢測(cè)sMIC使得可以預(yù)測(cè)血管病源的IUGR，特異性為96%。因此，IUGR診斷時(shí)的sMIC定量構(gòu)成了有用的非侵入性工具，以改善自發(fā)性IUGR的管理。這些結(jié)果顯示，對(duì)女性血漿中的sMIC分子進(jìn)行定量是有用的非侵入性工具，用于預(yù)測(cè)妊娠期間血管型并發(fā)癥的緊急發(fā)作。實(shí)施例3:在著床失敗的情況下，在卵泡液，胚胎上清液，精液和用于胚胎移植的導(dǎo)管中發(fā)現(xiàn)較高頻率的可溶性MIC。在卵泡液(FF)，移植胚胎的上清液(T胚胎)或未移植胚胎(UT)的上清液，用于IVF(T)或未用于IVF(UT)的精液，和用于胚胎移植(KT)的導(dǎo)管中，評(píng)價(jià)了可溶性MIC水平。在著床失敗的情況下，觀察到可溶性MIC的存在頻率更高，如表5所示。表5著床妊娠進(jìn)展sMICFFMICT胚胎MICUT胚M(jìn)IC精液MIC精液MICKT是/否胎TUT是產(chǎn)子00.84iitntnt是產(chǎn)子000ntntnt36<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>參考文獻(xiàn)AndreP，etal.(2004)EurJImmunol34,961-971.AshkarAA,etal(2003)JImmunol171，2937-2944.Bretelle,F.,etal.(2003)ThrombHaemost89:486-492.Bretelle,F.,etal.(2005)Am.J.ofobstetricsandgynecology193:1698-1702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白，PIGF或sFLTl抗體，編碼HLA-G，內(nèi)皮糖蛋白，PIGF或sFLTl的核酸的特異性引物組，和編碼HLA-G，內(nèi)皮糖蛋白，PIGF或sFLTl的核酸的特異性探針。全文摘要本發(fā)明涉及生殖醫(yī)學(xué)和生物學(xué)，特別是體外受精(IVF)結(jié)果的新生物標(biāo)記。本發(fā)明涉及預(yù)測(cè)IVF結(jié)果和選擇IVF對(duì)象的方法。文檔編號(hào)G01N33/68GK101641600SQ200880002177公開(kāi)日2010年2月3日申請(qǐng)日期2008年1月11日優(yōu)先權(quán)日2007年1月11日發(fā)明者帕斯卡爾·保羅,杰拉爾丁·波爾庫(kù),索菲·卡亞·楚克曼申請(qǐng)人:地中海大學(xué);法國(guó)國(guó)家衛(wèi)生及研究醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì);巴黎笛卡爾大學(xué);公共事業(yè)救濟(jì)局-馬賽醫(yī)院