專利名稱：：用于細(xì)胞計(jì)數(shù)和分析的方法、系統(tǒng)和組合物的制作方法用于細(xì)胞計(jì)數(shù)和分析的方法、系統(tǒng)和組合物
背景技術(shù)：
：現(xiàn)場(chǎng)護(hù)理檢驗(yàn)(Point-of-caretesting)和搜索有效的生物標(biāo)記在生物醫(yī)學(xué)研究中是重要的主題，例如Hollandetal，Curr.Opin.Microbiol.,8:504-509(2005);Yageretal，Nature,442:412-418(2006》Franketal，NatureReviewsDrugDiscovery,2:566-580(2003);Sidransky，NatureReviewsDrugDiscovery,2:210-218(2002)。兩種努力都旨在提高保健的獲得和有效性，同時(shí)降低其成本?，F(xiàn)場(chǎng)護(hù)理檢驗(yàn)是在中心實(shí)驗(yàn)室外使用這樣的裝置進(jìn)行的分析測(cè)試，所述裝置易于運(yùn)送至患者附近并且可以在野外條件下運(yùn)行，而無需非常專業(yè)的人員。在許多急性護(hù)理醫(yī)學(xué)和生物防護(hù)監(jiān)視應(yīng)用中，還需要快速的才羊品處理和測(cè)試讀出，例如Rajaetal，ClinicalChe加istry，48:1329-1337(2002)。生物標(biāo)記是作為正常生物學(xué)過程、發(fā)病過程或針對(duì)治療干預(yù)的藥理學(xué)應(yīng)答的客觀測(cè)定和評(píng)價(jià)的特征，Atkinsonetal，Clin.Pharmacol.Ther.，69:89-95(2001)。生物標(biāo)記在性質(zhì)、測(cè)定容易性以及與目標(biāo)的生理狀態(tài)的相關(guān)性上變化^艮大，例如Franketal(以上引用)。大多數(shù)現(xiàn)場(chǎng)護(hù)理裝置被設(shè)計(jì)為測(cè)定已經(jīng)從樣品或試樣中提取出或在生物體液(例如血液)中直接發(fā)現(xiàn)的分子生物標(biāo)記，Hollandetal(以上引用)。在現(xiàn)場(chǎng)護(hù)理裝置中測(cè)定細(xì)胞標(biāo)記上有重大興趣，但是細(xì)胞標(biāo)記典型地需要成像或流體系統(tǒng)的某些形式以進(jìn)行細(xì)胞特異性測(cè)定，由此給分子標(biāo)記的測(cè)定增加了顯著的技術(shù)挑戰(zhàn)，例如Shapiro,CytometryA，60A:115-124(2004);Shapiroetal，CytometryA，69A:620-630(2006);Rodriquezetal，PLOSMedicine,2(7):el82(2005);Janossyetal，ClinicalCytometry,50:78-85(2002);Toneretal，Annu.Rev.Biomed.Eng.，7:77-103(2005);等?，F(xiàn)場(chǎng)護(hù)理檢驗(yàn)可以在各種樣品種類上進(jìn)行，不僅包括來自個(gè)體有機(jī)體的樣品，例如醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)或植物樣品，還包括來自各種環(huán)境的樣品，例如土壤、水系統(tǒng)、空調(diào)系統(tǒng)、公共場(chǎng)所表面，例如運(yùn)輸系統(tǒng)，等等。醫(yī)學(xué)樣品中，生物體液，例如血液、唾液、淚腺流體、尿等，特別適合現(xiàn)場(chǎng)護(hù)理檢驗(yàn)的使用，因?yàn)樗鼈兺ǔ１裙腆w組織容易得到的多。在此類可從其獲得細(xì)胞或分子標(biāo)記的生物體液中，只要生物學(xué)上相關(guān)，血液為優(yōu)選的樣品，因?yàn)檠菏侨淼?，容易得到，并且包含豐富和動(dòng)態(tài)的細(xì)胞和分子懸浮液，所述細(xì)胞和分子的組成反映健康和疾病的狀態(tài)。特別是，在能夠計(jì)數(shù)非紅細(xì)胞的特定亞類上有極大興趣，所述非紅細(xì)胞與疾病易感性、疾病進(jìn)程、藥物反應(yīng)性等有關(guān)，例如Guissetetal，IntensiveCareMed.，Epub(November8，2006);Shakedetal，Curr.CancerDrugTargets,5:551-559(2005);Madjidetal，J.Am.Coll.Cardiol"44:1945-1956(2004);Ja畫syetal(以上引用)；Rodriquezetal(以上引用)。不幸的是，對(duì)于此類標(biāo)記當(dāng)前可獲得的分析器遭受限制其廣泛使用的一種或幾種以下缺點(diǎn)，包括復(fù)雜的涉及分離和/或細(xì)胞裂解的制備步驟，專業(yè)人員的參與、缺乏輕便性、高成本、缺乏靈敏性等?？紤]到以上，幾種醫(yī)學(xué)和生物
技術(shù)領(lǐng)域：
將會(huì)由于能夠進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)護(hù)理操作的技術(shù)的獲得而得到顯著促進(jìn)，上述技術(shù)允許特別在例如血液的生物體液中對(duì)細(xì)胞生物標(biāo)記進(jìn)行容易和靈活地測(cè)定。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供低成本的基于成像的系統(tǒng)(imaged-basedsystem),用于檢測(cè)、測(cè)定和/或計(jì)數(shù)生物樣品、特別是血液試樣的被標(biāo)記特征。在一個(gè)方面，本發(fā)明包括一個(gè)用于成像試樣的多個(gè)特征的系統(tǒng)，包含以下元件(a)—個(gè)或多個(gè)光源，能夠連續(xù)地產(chǎn)生各自具有不同波長(zhǎng)帶的照射光束，(b)多個(gè)差異可激發(fā)標(biāo)記(differentiallyexcitablelabel),能夠標(biāo)記包含多個(gè)特征的試樣，以使各不同特征褲不同的差異可激發(fā)標(biāo)記標(biāo)記；(c)與所述一個(gè)或多個(gè)光源操作性地相關(guān)聯(lián)的控制器，用于將照射光束連續(xù)地引導(dǎo)到試樣上，從而連續(xù)地引起不同的差異可激發(fā)標(biāo)記中的每一個(gè)發(fā)射在相同波長(zhǎng)帶內(nèi)的光信號(hào)；以及(d)光學(xué)系統(tǒng)，能夠收集此類發(fā)射的光信號(hào)并在光響應(yīng)表面(light-responsivesurface)上形成與試樣的,皮標(biāo)記特征相對(duì)應(yīng)的連續(xù)圖像，從而形成其連續(xù)的圖像數(shù)據(jù)組。在另一個(gè)方面，本發(fā)明包括一種用于分析在血液試樣中用多個(gè)差異可激發(fā)標(biāo)記標(biāo)記的非紅細(xì)胞的設(shè)備，此類設(shè)備包括(a)樣品室，能夠容納血液試樣，并且沿光收集軸具有阻止形成紅細(xì)胞光遮蔽層(light-obstructinglayer)的尺寸;(b)多個(gè)光源，各自能夠用具有不同波長(zhǎng)帶的照射光束照射血液試樣，(c)耦合到多個(gè)光源的控制器，用于將各光源的照射光束連續(xù)地引導(dǎo)到試樣上，從而連續(xù)地引起多個(gè)差異可激發(fā)標(biāo)記中的每一個(gè)發(fā)射在相同波長(zhǎng)帶內(nèi)的光信號(hào)；(d)光學(xué)系統(tǒng)，能夠收集此類發(fā)射的光信號(hào)并在光響應(yīng)表面上形成與其對(duì)應(yīng)的連續(xù)圖像，從而形成連續(xù)的圖像數(shù)據(jù)組；其中在血液試樣中的非紅細(xì)胞通過分析連續(xù)的此類圖像數(shù)據(jù)組來計(jì)數(shù)。在另一個(gè)方面，本發(fā)明包括一種用于標(biāo)記樣品中多個(gè)不同細(xì)胞分析物中的一個(gè)或多個(gè)的探針組合物，包括分析物特異性的探針的混合物，每一探針能夠特異性地結(jié)合至不同的分析物，其中每一探針的特征在于(a)在結(jié)合條件下對(duì)細(xì)胞分析物特異的結(jié)合化合物，以及(b)與結(jié)合化合物連接的光學(xué)標(biāo)記，各不同探針的光學(xué)標(biāo)記具有不同的激發(fā)帶，并且所有探針的光學(xué)標(biāo)記發(fā)射在相同波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光信號(hào)。優(yōu)選地，此類相同波長(zhǎng)范圍與探針組合物的光學(xué)標(biāo)記的激發(fā)帶分開。在另一個(gè)方面，本發(fā)明包括一種用于非紅細(xì)胞的光學(xué)分析的一次性血液收集容器(collectioncuvette)，所述容器包括(a)具有用于接納全血樣品的入口的混合室，所述混合室進(jìn)一步包括干燥的試劑(driedreagent),該干燥的試劑能夠與全血樣品接觸時(shí)溶解并且包含探針組合物，該探針組合物包括多個(gè)分析物特異性的探針，每一探針能夠特異性地與非紅細(xì)胞的不同細(xì)胞分析物結(jié)合，其中每一探針的特征在于(i)在結(jié)合條件下對(duì)細(xì)胞分析物特異的結(jié)合化合物，以及(ii)與結(jié)合化合物連接的光學(xué)標(biāo)記，其中各不同探針的光學(xué)標(biāo)記具有不同的激發(fā)帶，并且所有探針的光學(xué)標(biāo)記發(fā)射在相同波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光信號(hào)；以及(b)與混合室流體連接的樣品室，以使混合室中的樣品通過毛細(xì)作用傳送至樣品室，樣品室具有光學(xué)透射壁(transmissivewall)和與其垂直的與非紅細(xì)胞的直徑基本上相等的尺寸，以使由與細(xì)胞分析物連接的探針產(chǎn)生的光信號(hào)不被樣品的紅細(xì)胞遮蔽。優(yōu)選地，選擇所述尺寸以使其基本上阻止在目的細(xì)胞和所述光學(xué)透射壁之間形成無核紅細(xì)胞光遮蔽層。在另一個(gè)方面，本發(fā)明包括一種用于非紅細(xì)胞的光學(xué)分析的一次性的血液收集容器，其中所述容器包括(a)能夠接收全血樣品的樣品室，該樣品室放置在體部(body)內(nèi)，并且具有至少一個(gè)光學(xué)透射壁和與其垂直的與非紅細(xì)胞的直徑基本上相等的尺寸，以使由與細(xì)胞分析物連接的探針產(chǎn)生的光信號(hào)不被樣品的紅細(xì)胞遮蔽；以及(b)在樣品室中的干燥的試劑，其與樣品組合時(shí)溶解以形成探針組合物，該探針組合物包括多個(gè)分析物特異性的探針，每一探針能夠特異性地與非紅細(xì)胞的不同細(xì)胞分析物結(jié)合，其中每一探針的特征在于(i)在結(jié)合條件下對(duì)細(xì)胞分析物特異的結(jié)合化合物，以及(ii)與結(jié)合化合物連接的光學(xué)標(biāo)記，其中各不同探針的光學(xué)標(biāo)記具有不同的激發(fā)帶，并且所有探針的光學(xué)標(biāo)記發(fā)射在相同波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光信號(hào)?！?；在另一個(gè)方面，本發(fā)明包括一種用于使;故多個(gè)熒光標(biāo)記標(biāo)記的試樣成像的設(shè)備，該設(shè)備包括以下元件(a)能夠照射試樣的一個(gè)或多個(gè)發(fā)光二極管，每一發(fā)光二極管產(chǎn)生具有不同波長(zhǎng)帶的照射光束；(b)耦合到發(fā)光二極管的控制器，用于將發(fā)光二極管的照射光束引導(dǎo)到試樣上，從而引起多個(gè)熒光標(biāo)記的每一個(gè)順序發(fā)射光信號(hào)；和(c)光學(xué)系統(tǒng)，能夠收集發(fā)射的光信號(hào)并在光響應(yīng)表面上形成與其對(duì)應(yīng)的圖像以產(chǎn)生圖像數(shù)據(jù)，其中光學(xué)系統(tǒng)包括能夠捕獲多個(gè)具有不同波長(zhǎng)的光信號(hào)的彩色相機(jī)。優(yōu)選地，所述一個(gè)或多個(gè)發(fā)光二極管為多個(gè)發(fā)光二極管，所述光學(xué)系統(tǒng)產(chǎn)生多個(gè)圖像數(shù)據(jù)組，每一此類組與響應(yīng)于由不同的所述發(fā)光二極管之一的照射產(chǎn)生的光信號(hào)相對(duì)應(yīng)。本發(fā)明解決了現(xiàn)場(chǎng)護(hù)理系統(tǒng)用于快速分析醫(yī)學(xué)和環(huán)境樣品，包括血液、唾液、尿等時(shí)的現(xiàn)有技術(shù)方案的許多成本和效率缺點(diǎn)。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式良好地適合低成本和有效的檢測(cè)和計(jì)數(shù)可能在全血中存在的各種細(xì)胞組分和/或病原體，包括但不限于非紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞，例如CD3+細(xì)胞、CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞，血液寄生蟲，例如瘧叛斧。圖1圖解例示了供本發(fā)明使用的光學(xué)系統(tǒng)。圖2圖解例示了供LED使用以調(diào)節(jié)激發(fā)光束的光學(xué)組件系統(tǒng)。圖3例示了用于為本發(fā)明的探針組合物選擇光學(xué)標(biāo)記的原理。圖4A示出了在實(shí)施例中使用的兩種熒光標(biāo)記的吸收曲線，該兩種熒光標(biāo)記具有不同的激發(fā)帶但能夠發(fā)射基本上在相同波長(zhǎng)范圍內(nèi)的熒光。圖4B示出了三種熒光標(biāo)記的吸收和發(fā)射曲線，該三種熒光標(biāo)記可被三種不同的激發(fā)光束順序地激發(fā)，并且在高于650nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)發(fā)射熒光信號(hào)。圖5A-5C圖解例示了供本發(fā)明使用的樣品容器的實(shí)施方式，該樣品容器用于檢測(cè)和分析全血中妁非紅細(xì)胞和/或其它細(xì)胞或微生物。圖6A為商業(yè)上獲得的放置在載玻片上的藻紅蛋白標(biāo)記的珠的圖像。圖6B示出了證明標(biāo)記的珠濃度和珠計(jì)數(shù)之間的線性關(guān)系的數(shù)據(jù)。圖7A為來自全血的用APC-標(biāo)記的抗-CD3抗體和PECy5-標(biāo)記的抗-CD4抗體雙標(biāo)記的細(xì)月包的圖4象。圖7B示出了在APC信號(hào)強(qiáng)度相對(duì)于PE信號(hào)強(qiáng)度的二維圖中的來自圖5的數(shù)據(jù)，其顯示三種細(xì)胞類型，單核細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和CDfT細(xì)胞的不同蔟(cluster)。圖8A-8B顯示將來自實(shí)施例1的設(shè)備的全血細(xì)胞計(jì)數(shù)與使用流式細(xì)胞儀獲得的計(jì)數(shù)相比較的數(shù)據(jù)，其中上述二者針對(duì)不同的樣品容器深度(圖6A)和具有501im(深度)樣品容器(圖6B)的不同標(biāo)記。圖9示出了來自關(guān)于白介素-2濃度的基于珠的檢驗(yàn)的數(shù)據(jù)。圖10圖解例示了供本發(fā)明使用的光學(xué)系統(tǒng)。具體實(shí)施例方式除非另行指明，本發(fā)明的實(shí)踐可以利用來自分子生物學(xué)(包括重組技術(shù))、細(xì)胞生物學(xué)、免疫檢測(cè)技術(shù)、顯微術(shù)、圖像分析、分析化學(xué)的常規(guī)技術(shù)，這些技術(shù)在現(xiàn)有技術(shù)的范圍內(nèi)。這些常規(guī)技術(shù)包括但不限于熒光信號(hào)的檢測(cè)、圖像分析、照射源以及光信號(hào)檢測(cè)組件的選擇、生物細(xì)胞的標(biāo)記等等。這些常規(guī)技術(shù)和描述可以在諸如下述的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)中找到GenomeAnalysis:ALaboratoryManualSeries(Vols.I-IV)，UsingAntibodies:ALaboratoryManual,Cells:ALaboratoryManual,PCRPrimer:ALaboratoryManual,andMolecularCloning:ALaboratoryManual(都來自于ColdSpringHarborLaboratoryPress);Murphy,FundamentalsofLightMicroscopyandElectronicImaging(Wiley-Liss，2001);Shapiro,PracticalFlowCytometry,FourthEdition(Wiley-Liss，2003);Hermanetal，F(xiàn)luorescenceMicroscopy,2ndEdition(Springer,1998);上述內(nèi)容出于全部目的全文引入作為參考。本發(fā)明提供通過使用不同波長(zhǎng)范圍的照射光束順序地照射樣品來測(cè)量和計(jì)數(shù)樣品中的細(xì)胞、」微團(tuán)、顆粒和/或分析物的系統(tǒng)、方法和組合物，所述不同波長(zhǎng)范圍對(duì)應(yīng)于與樣品中的分析物、細(xì)胞或微粒直接或間接結(jié)合或連接的標(biāo)記的激發(fā)帶。在以此順序進(jìn)行每次照射之后，收集光信號(hào)以形成圖像，由此形成圖像組，其中每一幅圖像包含;敗分析用以提供對(duì)細(xì)胞、顆粒和/或分析物的群體的進(jìn)行計(jì)數(shù)和/或測(cè)量的圖像數(shù)據(jù)。在一個(gè)方面，利用波長(zhǎng)范圍基本上無重疊的多個(gè)照射光束。這些多個(gè)照射光束在2至6，2至4，或者2至3的范圍之間。多個(gè)照射光束可以通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠利用的各種方法和種實(shí)施方式中，照射光束使用發(fā)光二極管(LED)或者類似的固態(tài)設(shè)備產(chǎn)生。示例性的LED光源包括可從LumiledsLightingLLC(SanJose，CA)購(gòu)得的波長(zhǎng)峰值為綠色(530nin)、青色(505nm)、藍(lán)色(470nm)、品藍(lán)(455nm)的LuxeonTMLED。選擇本發(fā)明使用的特定LED的指導(dǎo)可以從技術(shù)文獻(xiàn)中廣泛地獲得，所述技術(shù)資料諸如LuxeonStarTechnicalDataSheetDS23(PhilipsLumiledsLightingCompany,SanJose，2006);LuxeonStarVTechnicalDataSheetDS30(LumiledsLighting,U.S.,LLC,SanJose,CA，September20，2004);等等。通常，光源與常規(guī)濾光片和其他光學(xué)組件一起使用以產(chǎn)生期望波長(zhǎng)范圍和強(qiáng)度分布的照射光束。I.光學(xué)系統(tǒng)本發(fā)明可以利用各種各樣的光學(xué)系統(tǒng)。通常，此類系統(tǒng)提供用于以不同的波長(zhǎng)范圍順序地照射樣品的一個(gè)或多個(gè)照射光束，用于記錄來自被照射樣品的圖像數(shù)據(jù)的圖像收集裝置，以及控制照射光束和圖像收集裝置的操作以順序地收集圖像數(shù)據(jù)組的控制器。在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及包括圖像收集裝置的系統(tǒng)，該圖像收集裝置與連接至探針的差異可激發(fā)染料組協(xié)同使用，所述差異可激發(fā)染料對(duì)樣品中的目的細(xì)月包、顆?；蚍治鑫锞哂刑禺愋?。換句話說，這類系統(tǒng)包括對(duì)用多個(gè)差異可激發(fā)標(biāo)記標(biāo)記的樣品和試樣進(jìn)行成像的設(shè)備，該設(shè)備包括如下組件U)多個(gè)光源，每一光源都能夠用具有不同波長(zhǎng)帶的照射光束照射試樣；(b)控制器，耦合至所述多個(gè)光源，用于將各光源的照射光束連續(xù)地引導(dǎo)到試樣上，從而連續(xù)地引起多個(gè)差異可激發(fā)標(biāo)記的每一個(gè)發(fā)射在相同波長(zhǎng)帶內(nèi)的光信號(hào)；以及(c)光學(xué)系統(tǒng)，能夠收集此類發(fā)射的光信號(hào)并在光響應(yīng)表面上形成與其相對(duì)應(yīng)的連續(xù)圖像，由此形成連續(xù)的圖像數(shù)據(jù)組。上述設(shè)備的一種實(shí)施方式在圖1中例示。系統(tǒng)(100)包括若干組件，包括示出為L(zhǎng)ED1(102)和LED2(104)的多個(gè)光源，用于順序照射放置在樣品臺(tái)(116)上或之內(nèi)的品(114)的觀察區(qū)域(107);成像光學(xué)器件(imagingoptics)(106)，用于收集響應(yīng)于照射光束(103)和(105)從樣品內(nèi)和/或樣品上的探針產(chǎn)生的光信號(hào)(109)，并且用于將收集到的信號(hào)引導(dǎo)(111)至檢測(cè)器(108)，檢測(cè)器(108)包括諸如CCD或CMOS元件的光響應(yīng)表面，光信號(hào)(109)在所述光響應(yīng)表面上形成圖^^并且從所述光響應(yīng)表面記錄連續(xù)的圖像數(shù)據(jù)組。優(yōu)選地，系統(tǒng)(100)的操作處于計(jì)算機(jī)(110)的控制下，計(jì)算機(jī)(110)用于(a)控制照射光束(103)和(105)的定時(shí)和持續(xù)時(shí)間，(b)控制用于收集圖像數(shù)據(jù)并將圖像數(shù)據(jù)傳送至一個(gè)或多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的檢測(cè)器(108)，(c)分析圖像數(shù)據(jù)以產(chǎn)生用于讀出組件的讀出，以及類似操作。樣品臺(tái)(116)在設(shè)計(jì)和功能性能上可以廣泛變化，但通常需要將樣品置于基本平面的幾何構(gòu)造內(nèi)以符合對(duì)多個(gè)平行光信號(hào)的收集并在檢測(cè)器上形成圖像。優(yōu)選地，放置在樣品臺(tái)(116)上的樣品是靜態(tài)的，不流動(dòng)或移動(dòng)；或者即便存在運(yùn)動(dòng)，也是足夠緩慢以便能夠收集連續(xù)圖像，所述連續(xù)圖像在圖像分析期間能夠比對(duì)。樣品臺(tái)(116)可以包括在顯微術(shù)中使用的常規(guī)顯微鏡載玻片、樣品室或容器，培養(yǎng)板，微流體裝置等。在一個(gè)方面，如下將更為詳細(xì)地描述，樣品臺(tái)(116)包括被設(shè)計(jì)用于檢測(cè)全血中的非紅細(xì)胞組分的一次性容器。在另一方面，樣品臺(tái)(116)包括具有樣品室的容器，該樣品室具有只要系統(tǒng)(100)使用此類容器就允許測(cè),量已知體積的幾何結(jié)構(gòu)。在一種實(shí)施方式中，這類樣品室具有基本平面的幾何結(jié)構(gòu)，其中(a)底面(或底壁)和頂面(或頂壁)彼此平行并且(優(yōu)選地)垂直于成像光學(xué)器件(106)的最小光程，以及(b)頂壁和底壁之間的垂直距離與要檢測(cè)的細(xì)胞或顆粒的直徑基本上相等。只要將此類樣品室放置在(已知或者可確定的)觀察區(qū)域(107)，細(xì)胞或顆粒將會(huì)處于已知(或可確定)的體積內(nèi)，由此允許測(cè)量顆?；蚣?xì)胞的濃度。關(guān)于樣品室頂壁和底壁之間垂直距離或尺寸的"基本上相等"指的是在全血樣品中，來自觀察區(qū)域(107)內(nèi)的非紅細(xì)胞或顆粒的光信號(hào)是可檢測(cè)的。換句話說，可位于標(biāo)記的細(xì)胞或顆粒與樣品室頂壁之間的紅細(xì)胞(或其他碎片(debris))層并未完全遮蔽光信號(hào)的傳輸。在一個(gè)方面，當(dāng)白血細(xì)胞被標(biāo)記并檢測(cè)時(shí)(例如CD4+細(xì)胞)，頂壁和底壁之間垂直距離的范圍在40至120nm之間，或在50至lOOiam之間。讀出組件(112)的性質(zhì)可以從簡(jiǎn)單的數(shù)值顯示到信息豐富的圖形用戶界面，變化很大。在一種實(shí)施方式中，簡(jiǎn)單的數(shù)值讀出由給出一種或多種預(yù)定細(xì)胞或顆粒類型的計(jì)數(shù)的讀出組件(112)提供。在另一種實(shí)施方式中，讀出包括一種或多種預(yù)定細(xì)胞或顆粒類型的濃度。而在另一種實(shí)施方式中，讀出包括簡(jiǎn)單的"是或非"指示符，用來指示是否已經(jīng)或尚未超過細(xì)胞、顆?；蚱渌治鑫锏拈撝邓?例如，計(jì)數(shù)或濃度)。在利用LED產(chǎn)生照射光束的實(shí)施方式中，來自所選LED的發(fā)射可以使用光學(xué)組件進(jìn)行調(diào)節(jié)，如圖2中例示的雙LED系統(tǒng)。第一LED(202)和第二LED(206)分別具有調(diào)節(jié)光學(xué)器件(200)和(204)，調(diào)節(jié)光學(xué)器件(200)和(204)各自包括漫射器(208)、透鏡(210)、帶通濾光片(212)和透鏡(216)。調(diào)節(jié)光學(xué)器件(200)和(204)的目的是對(duì)樣品(220)提供空間均勻的照明。圖10圖解了本發(fā)明使用的落射(epi-illumination)光學(xué)系統(tǒng)。LED(1000)產(chǎn)生照射光束(1002)，照射光束(1002)由透鏡(1004)平行校準(zhǔn)并被引導(dǎo)至分色鏡(1006)，然后至物鏡(1008)。來自照射光束(1002)的光聚焦在樣品(1010)上，其中熒光標(biāo)記被激發(fā)以發(fā)射熒光信號(hào)。將由物鏡(1008)收集的熒光信號(hào)引導(dǎo)通過分色鏡(1006)，可選地通過發(fā)射濾光片(1012)，隨后到光響應(yīng)表面(1014)，在此圖解中，光響應(yīng)表面(1014)是可商業(yè)購(gòu)得的個(gè)人數(shù)字助理Zire72PalmPilot,并且其還包括用于觀測(cè)樣品的顯示器。另外的照射光束可以通過在物鏡(1008)和發(fā)射濾光片(1012)之間沿光程添加另外的分色鏡來添加。II.差異可激發(fā)探針(differentiallyexcitableprobes)在另一方面，本發(fā)明提供用于標(biāo)記樣品中多種不同分析物中的一種或多種的差異可激發(fā)探針的組合物。通常，本發(fā)明的探針組合物包括分析物特異性的探針的混合物，每種探針都能夠與不同的分析物特異性結(jié)合，其中每種探針的特征在于(a)在結(jié)合條件下對(duì)分析物(例如細(xì)胞分析物)特異性的結(jié)合化合物，以及(b)與結(jié)合化合物連接的光學(xué)標(biāo)記，其中每種不同探針的光學(xué)標(biāo)記具有不同的激發(fā)帶并且所有探針的光學(xué)標(biāo)記發(fā)射處于同一波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光信號(hào)。通常情況下，后述波長(zhǎng)范圍不與任何激發(fā)帶重疊。優(yōu)選地，光學(xué)標(biāo)記是能夠產(chǎn)生熒光信號(hào)的熒光標(biāo)記，例如熒光染料。然而，本發(fā)明也可以使用其它熒光標(biāo)記，例如在暗視野照射條件下使用的等離子共振顆粒。在一個(gè)方面，本發(fā)明的探針組合物包括對(duì)多種不同分析物的每一種具有特異性的至少一種探針。在另一方面，所述多種的范圍在2至8之間；或者在另一方面在2至4之間；或者在另一方面在2至3之間；以及在另一方面，所述多種是至少3種；或者范圍在3至4之間。本發(fā)明探針組合物的一個(gè)重要特征在于樣品中用組合物的不同探針標(biāo)記的分析物，可以通過使用對(duì)探針的光學(xué)標(biāo)記具有特異性的照射光束連續(xù)激發(fā)每種探針的光學(xué)標(biāo)記而被順序檢測(cè)。通常，當(dāng)以分離的時(shí)間間隔將各個(gè)照射光束引導(dǎo)至樣品時(shí)，此類連續(xù)激發(fā)在時(shí)間上不重疊。換句話說，照射光束被一次一個(gè)地連續(xù)地引導(dǎo)至樣品。優(yōu)選地，在操作中，來自各激發(fā)的光信號(hào)在檢測(cè)器的光響應(yīng)表面上成像，圖像數(shù)據(jù)從所述光響應(yīng)表面產(chǎn)生并被存儲(chǔ)以用于分析。當(dāng)探針的光信號(hào)被限制在一個(gè)較窄的波長(zhǎng)范圍時(shí)，由于光程中透鏡的色差引起的圖像劣化就得以減輕或消除。本發(fā)明的探針組合物的一種實(shí)施方式的操作原理在圖3中例示，圖3示出了由兩種探針組成的本發(fā)明的組合物的光學(xué)標(biāo)記的激發(fā)和發(fā)射光譜。第一探針具有使用熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的光學(xué)標(biāo)記，其中供體分子具有吸收或激發(fā)光譜(300)(虛線曲線)和發(fā)射光譜(302)(實(shí)線曲線)，受體分子具有與(302)重疊的吸收光譜(304)(虛線曲線)以及發(fā)射光譜(306)(實(shí)線曲線)。第二探針具有作為光學(xué)標(biāo)記的具有吸收光語(yǔ)(310)(虛線曲線)和發(fā)射光譜(312)(實(shí)線曲線)的熒光分子。虛線(320)指示收集光信號(hào)范圍的最大波長(zhǎng)邊界。這樣，只要用第一和第二探針標(biāo)記的樣品被如所指示的波長(zhǎng)范圍的第一照射光束(330)照射，收集由受體分子發(fā)射光譜(306)組成的第一光信號(hào)；只要此類樣品被所指出的波長(zhǎng)范圍的第二照射光束(340)照射，就收集在相同波長(zhǎng)范圍內(nèi)但由發(fā)射光鐠(312)組成的第二光信號(hào)。用于第一探針的示例性的供體-受體對(duì)為花菁3畫別藻藍(lán)蛋白(cyanine3-allophycocyanin，Cy3-APC)，第二探針的示例性光學(xué)標(biāo)記為花菁5(cyanine5，Cy5)。用于三探針組合物的示例性光學(xué)標(biāo)記包括花菁7(cyanine7，Cy7)(作為用于第一探針的供體和受體)、APC-Cy7(APC作為供體，Cy7作為受體，用于第二探針)以及PE-Cy7(PE作為供體，Cy了作為受體，用于第三探針)。用于雙標(biāo)記和三標(biāo)記探針的進(jìn)一步示例性的探針組合物在圖4A(以下描述)和4B中分別舉例說明。圖4B例示了三種熒光染料的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)曲線和本發(fā)明探針組合物的相關(guān)照射光束的波長(zhǎng)帶。染料為具有激發(fā)曲線(422)和發(fā)射曲線(428)的多甲藻葉綠素蛋白(peridininchlorophyllprotein,PerCP)、具有激發(fā)曲線(424)和發(fā)射曲線(430)的藻紅蛋白-Cy5(PECy5)綴合物以及具有激發(fā)曲線(426)和發(fā)射曲線(432)的別藻藍(lán)蛋白(APC)。此類染料可以通過施加照射光束順序激發(fā)，所述照射光束對(duì)于PerCP(434)波長(zhǎng)范圍為約420-470nm，對(duì)于PECy5(436)波長(zhǎng)范圍為約515-550nm，對(duì)于APC(438)波長(zhǎng)范圍為約590-640nm。此類照射光束可由LED,例如分別由LuxeonStarRoyal的藍(lán)、綠和紅橙(Red-Orange)LED產(chǎn)生。由探針產(chǎn)生的熒光信號(hào)使用帶通濾光片(440)方便地與散射光分離，帶通濾光片(440)僅透過約650nm以上的光。寸吏用傳纟充才支術(shù)，例i口Hemanson，BioconjugateTechniques(AcademicPress,NewYork,1996)，上述染料易于綴合至例如抗體的結(jié)合化合物。在另一方面，探針組合物包括被等離子共振顆粒(PRP)標(biāo)記的結(jié)合化合物。當(dāng)用于暗視野照射系統(tǒng)時(shí)，此類探針組合物尤其有用，從而僅收集來自PRP的散射光。適合與本發(fā)明探針組合物一起使用的PRP在以下文獻(xiàn)中7>開Schultzetal，Proc.Natl.Acad.Sci.，97:996-1001(2000);Schultz等，美國(guó)專利6,180,415;Prober等，美國(guó)專利7,122,384;等等，在此引入以作參考。在該實(shí)施方式中，收集PRP照射光束的光。III用于全血測(cè)定的容器在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供供本發(fā)明的系統(tǒng)使用的一次性容器，以用于進(jìn)行全血測(cè)定。在一種實(shí)施方式中，此類容器用于計(jì)數(shù)在預(yù)定體積中的預(yù)定的血細(xì)胞種類，例如非紅細(xì)胞；從而，此類預(yù)定細(xì)胞種類的細(xì)胞計(jì)數(shù)或濃度可以作為讀出給出。通常，本發(fā)明的一次性容器包括(a)能夠接收全血樣品的樣品室，該樣品室設(shè)置在體部?jī)?nèi)，并且具有至少一個(gè)光學(xué)透射壁和與其垂直的與要分析的非紅細(xì)胞的直徑基本上相等的尺寸，從而使由與細(xì)胞分析物連接的探針產(chǎn)生的光信號(hào)不被樣品的紅細(xì)胞遮蔽；以及(b)在樣品室中的干燥的試劑，其與樣品組合時(shí)溶解以形成探針組合物，該探針組合物包括多個(gè)分析物特異性的探針，每一探針能夠特異性地結(jié)合至非紅細(xì)胞的不同細(xì)胞分析物上，其中每一探針的特征在于(i)在結(jié)合條件下對(duì)細(xì)胞分析物特異的結(jié)合化合物，以及(ii)與結(jié)合化合物連接的光學(xué)標(biāo)記，其中各不同探針的光學(xué)標(biāo)記具有不同的激發(fā)帶，并且所有探針的光學(xué)標(biāo)記發(fā)射在相同波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光信號(hào)。優(yōu)選地，此類一次性容器與如上所述的光學(xué)系統(tǒng)一起使用，該光學(xué)系統(tǒng)包括用于容納容器的平臺(tái)以使得容器具有關(guān)于照射光束和成像光學(xué)器件的固定位置。此類固定位置對(duì)準(zhǔn)成像光學(xué)器件從而能夠收集來自容器樣品室的光信號(hào)。用于觀察或測(cè)量生物體.液的性質(zhì)，例如血液參數(shù)的一次性樣品架的設(shè)計(jì)和制作在以下文獻(xiàn)中公開:美國(guó)專利6,723,290;6，869，570;5,674,457;5,200,152;6,638,769;4,088,448;等等，將其引入以作參考。本發(fā)明容器的一種實(shí)施方式圖解示例于圖5A-5C。在一種形式中，容器(500)包括體部(501)，其可以是玻璃、塑料或類似材料，或其組合；以及至少一個(gè)樣品室(502)，其通過通道(506)與入口(504)連接。一方面，為了在全血測(cè)定中使用，樣品室(502)可以容納范圍從5至100|LiL，或5至50pL體積的樣品液。容器(500)還可以包括與樣品室(502)連接的排氣口(未示出)，以允許樣品進(jìn)入樣品室而不會(huì)形成背壓(backpressure),還可以使用用于將樣品裝入樣品室(502)的替代方法，例如毛細(xì)作用、抽吸、離心力等。容器(500)的一個(gè)重要特征為從規(guī)定的或可測(cè)定的體積(512)收集光信號(hào)，以使?jié)舛葴y(cè)定可以從例如所選細(xì)胞類型的圖像數(shù)據(jù)中獲得。體積(512)由容器(500)的頂壁(514)和底壁(516)之間的距離(例如，圖5C中的528)以及成像光學(xué)器件的面積或觀察視野(507)來限定，用錐體(508)和收集光信號(hào)的方向(510)表示。在該實(shí)施方式中本發(fā)明光學(xué)系統(tǒng)的重要特性為物鏡的視野深度大于或等于頂壁(514)和底壁(516)之間的距離(528或518)，從而收集來自體積(512)中所有對(duì)象的光信號(hào)。優(yōu)選地，頂壁(514)適合要收集的光信號(hào)通過，并且與底壁(516)基本上平行。在另一實(shí)施方式，本發(fā)明的容器可以包括另外的室，例如用于容納試劑和/或用于將樣品與此類試劑在觀察之前混合。在一個(gè)方面，本發(fā)明的容器進(jìn)一步包含干燥的試劑，例如包括探針組合物、鹽，緩沖劑、如果需要時(shí)的裂解試劑等，其或者直接放置于樣品室(502)，或在另一實(shí)施方式，包含在分開的混合室中以在傳送至樣品室(502)之前活化和與樣品混合。如上所述，樣品室(502)的頂壁(514)和底壁(516)之間的距離對(duì)《于分析全血樣品是重要的。如果距離過大，例如圖5B的(518),那么無核紅細(xì)胞(520)可能遮蔽(526)從目的細(xì)胞類型(522)產(chǎn)生的通過光信號(hào)，在該情況下此類細(xì)胞可能不被計(jì)數(shù)，導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)目或濃度的低估。根據(jù)本發(fā)明，如圖..5C中所示，樣品室(502)的頂壁(514)和底壁(516)之間的距離(518)與目的細(xì)胞類型(522)的直徑或有效直徑基本上相等，從而無法在目的細(xì)胞(522)和頂壁(514)之間形成無核紅細(xì)胞的遮蔽層，并且來自其的光信號(hào)(524)都從樣品室(502)到成#>光學(xué)器件。在一個(gè)方面，樣品室(502)具有與成像光學(xué)器件的視野深度基本上相等的距離(518)。在另一個(gè)方面，樣品室(502)具有范圍在10至100jdm，或10至50iam，或20至50pm內(nèi)的距離(518)。實(shí)施例在該實(shí)施例中，本發(fā)明使用的成像系統(tǒng)通過計(jì)數(shù)各個(gè)樣品中的細(xì)胞或顆粒進(jìn)行構(gòu)造和測(cè)試。該系統(tǒng)具有按照?qǐng)D1中所示的設(shè)計(jì)。將兩臺(tái)不同的灰度相機(jī)(greyscalecameras)用作檢測(cè)器。第一臺(tái)為17SensovationSambaEZ140TC-冷卻相才幾(cooledcamera)(低于周圍環(huán)境20。C)，具有1392x1024像素，像素大小6.4um見方。第二臺(tái)相機(jī)為PointGreyResearchDragonfly2工業(yè)視覺相機(jī)，具有1024x768(4.65um)像素。使用兩種成像透鏡設(shè)計(jì)中任一種。一種設(shè)計(jì)為一對(duì)雙合球狀透鏡(doubletsphericallenses),其中有激發(fā)濾光片置于其間。該系統(tǒng)擁有相對(duì)高的N.A.(0.33)并且在高達(dá)約2mm的觀察視野下工作良好。超出該距離，散光畸變顯著，并且隨像場(chǎng)增加快速地增加。為了解決該狀況，使用第二透鏡裝置。其為商用相機(jī)透鏡(Nikon18-55mmf/3.5-5.6GEDAF-SDXZoom),具有一個(gè)復(fù)合非球面元件(hybridasphericalelement)和一個(gè)極低色散的元件。該透鏡具有優(yōu)良的低畸變，較好的視野深度，并且能夠在超過4mm的觀察視野下無可檢測(cè)畸變地成像，雖然其具有較低的-0.1的N.A.。光收集效率的這一下降不足以引起對(duì)于細(xì)胞計(jì)數(shù)的任何精度上可檢測(cè)的降低。使用DragonFly2相機(jī)和DX變焦透鏡的該設(shè)計(jì)就成本和成像質(zhì)量而言是優(yōu)選的配置。LED光源，或照明器，在燈罩內(nèi)各自配備有其自身的激發(fā)濾光片。在碘化丙啶(propidiumiodide,PI)或藻紅蛋白/藻紅蛋白(PE/PE)一前一后照射的情況下，燈為具有朗伯輻射模式(Lambertianradiationpattern)的LuxeonVStarCyan(青色)LED，標(biāo)稱峰值波長(zhǎng)50Snm(±30nm光鐠半寬度)，標(biāo)稱通量700mA電流下570mW。激發(fā)濾光片為購(gòu)自Chroma的HQ510/50濾光片。對(duì)于SYTO17或APC激發(fā)，燈為L(zhǎng)uxeonIIIStarRed誦OrangeLED(紅橙LED,朗伯輻射模式)，標(biāo)稱峰值波長(zhǎng)617nm(士18nm光譜半寬度)，標(biāo)稱通量1400mA電流600mW。ChromaHQ610/30發(fā)射濾光片用于紅橙光。LED在低于最大額定電流下使用。具體地，除非另外指出，青色在500mA下(使用~75%最大通量)，紅橙色在700mA下(使用~55%最大通量)。如圖2中所示，為了平滑來自激發(fā)光的LED元件圖案，將全息漫射器(15。角，購(gòu)自EdmundsScientific)置于LED之前。通過一對(duì)25mm聚焦長(zhǎng)透鏡將光聚集在樣品成像區(qū)域。貫穿該研究始終，需要使用軟件算法來處理和分析圖像以鑒定珠、細(xì)胞或其它顆粒，并且按照熒光強(qiáng)度和粒徑將它們參數(shù)化。圖象處理保持在相對(duì)最小值以維持原始數(shù)據(jù)的完整性，并且僅包括縮放圖像以補(bǔ)償圖像上的光照強(qiáng)度的變化。具體地，其包括使用與平均全圖背景相對(duì)的局部背景縮放每一像素的算法。將局部背景的大小修正為合適以考慮目的顆粒的預(yù)期粒度范圍和每像素表示的距離(將圖像放大后)。例如，在該研究中的最普通的情況下，珠直徑3至8um,細(xì)胞直徑7至15um，各像素表示4um的樣品，發(fā)現(xiàn)60um的窗口(跨15像素)在該示例性系統(tǒng)中工作非常良好，同時(shí)不消耗過多的CPU時(shí)間用于處理。圖像補(bǔ)償光照變化后，另一算法通過鑒定滿足統(tǒng)計(jì)規(guī)律的局部強(qiáng)度最大值搜索目的顆粒，該統(tǒng)計(jì)規(guī)律被設(shè)計(jì)為避免來自隨機(jī)噪聲、外源顆粒(灰塵等)和樣品室的結(jié)構(gòu)模式(例如，血細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)劃線)的假陽(yáng)性。首先，算法尋找局部最大值(明亮像素)，該最大值為背景噪聲之上至少3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差，被都在背景噪聲之上至少1.5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差的像素的環(huán)包圍，并且具有隨后的強(qiáng)度降低的環(huán)(允許統(tǒng)計(jì)的噪聲變化)。包括用于剔除雙顆粒(duplicateparticle)鑒定和檢查合理的標(biāo)準(zhǔn)差值的其它檢查。當(dāng)鑒定顆粒時(shí)，另一算法使用最速下降擬合算法，以為此擬合算法優(yōu)化的高斯方程的形式，計(jì)算顆粒的強(qiáng)度分布的最佳擬合簡(jiǎn)單(圓形，非橢圓形)高斯曲線(Gaussiancurve)。隨著針對(duì)每一經(jīng)鑒定的顆粒記錄擬合統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)(fittingstatistics)(平方殘差和以及卡方)，報(bào)告高度、半徑、偏移和X-Y位置的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)。然后基于顆粒的半徑、高度和積分強(qiáng)度(高斯曲線下的體積)將顆粒分類(或"選通(gated)")，以將它們分成不同的血細(xì)胞群。使用各種特別制備的珠來證明敏感性，每珠具有少量的邊界藻紅蛋白(PE)分子。這些顆粒通過孵育與混合物一起醉育的BDa畫Mouse-IgKCompensationBeads(代償珠，BectonDickinsonp/n552843)來制備，其中所述混合物具有對(duì)用PE標(biāo)記的CD3抗原(CD3-PE)特異的抗體以及對(duì)用生物素標(biāo)記的CD3抗原(CD3-生物素)特異的抗體，兩抗體具有產(chǎn)生穩(wěn)定的每珠具有非常低濃度的PE分子19界限的珠的比例。用DragonFly2CCD相機(jī)(PointGreyResearch,Vancouver,BC)在各種曝光時(shí)間和內(nèi)部增益設(shè)置下使珠成像。對(duì)于所得的珠每顆粒PE分子的數(shù)目通過相對(duì)于PEQuantibrite珠(BectonDickinsonp/n30495)縮i文來確定。在該研究中，最暗的珠制品(如圖6A中所示)每顆粒產(chǎn)生825個(gè)PE分子，并且可從在高增益(24dB)和中等曝光時(shí)間(ls)下的背景噪聲中檢測(cè)。825個(gè)PE分子的珠為最暗測(cè)試珠，表示高于靈敏度的充足水平以滿足任何基于DNA的細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)(每細(xì)胞成百上千個(gè)熒光團(tuán))、最相關(guān)的細(xì)胞表面標(biāo)記例如T細(xì)胞上的CD3和CD4抗原(每細(xì)胞各自染色150，000和50，000個(gè)PE分子)、以及許多其它應(yīng)用，包括寄生蟲檢測(cè)和臨床基于珠的檢測(cè)，例如在Morganetal，ClinicalImmunol.,110:252-266(2004)中公開的血細(xì)胞計(jì)數(shù)珠陣列(beadarray),將其引入以作參考。電子檢測(cè)器(包括這一個(gè))的動(dòng)態(tài)范圍主要通過A-D轉(zhuǎn)換器的動(dòng)態(tài)范圍來設(shè)定，然后被信號(hào)噪聲減小。Dragonfly2相機(jī)的12-位A-D轉(zhuǎn)換器在單幅圖像內(nèi)的理論最大動(dòng)態(tài)范圍設(shè)定為1-4096。調(diào)查有關(guān)Dragonfly2相機(jī)的噪聲特性，其中讀噪聲和暗電流是兩個(gè)主要的原因。這些通過分析圖像來測(cè)量，圖像在0至24dB的增益和范圍0至10秒的曝光時(shí)間下拍攝。將計(jì)算的噪聲強(qiáng)度代入在就每一增益設(shè)置的讀噪聲和暗電流值下產(chǎn)生的圖像。.噪聲隨增益線性增加，并且對(duì)于測(cè):定條件的實(shí)際范圍，從在OdB增益0.1s曝光下消耗1.62比特，到在24dB增益10s曝光下消耗6.24比特。對(duì)于最好情況，這將單幅圖像的動(dòng)態(tài)范圍降低至1-1334，對(duì)于最差情況，降低至1-54。注意對(duì)于該系統(tǒng)，其中樣品在相機(jī)前保持靜止，儀器的有效動(dòng)態(tài)范圍可以通過拍攝多張圖像同時(shí)改變實(shí)時(shí)(onthefly)的CCD增益設(shè)置和曝光時(shí)間來顯著地增強(qiáng)。由于強(qiáng)度與爆光時(shí)間和CCD放大率成正比，在實(shí)際條件下這增加了可獲得的動(dòng)態(tài)范圍2至3個(gè)數(shù)量級(jí)?？?00-倍強(qiáng)度變化的PEQuantibrite珠，用于測(cè)試此。PEQuantibrite珠由四種珠的群體的混合物組成，每種的每一珠都具有特定的PE分子平均數(shù)。以這種方式，可以將檢測(cè)器按照PE分子校正為絕對(duì)強(qiáng)度值。這樣，最亮的群體每珠包含(平均)66408個(gè)PE分子，次之的群體每珠包含31779個(gè)PE分子，然后是每珠8612和863個(gè)PE分子。PEQuantibrite珠以一系列0.1至20秒增加的曝光時(shí)間和增益設(shè)置跨度(1-15X放大)成像。隨著曝光時(shí)間和增益增加，動(dòng)態(tài)范圍窗口以增加的強(qiáng)度水平依次移動(dòng)以檢測(cè)每一珠，直到所有的珠被測(cè)定(圖9)。以此方法，最佳擬合線的斜率與每珠PE分子的數(shù)目成比例，比僅使用單幅圖像給出更精確的值。在該設(shè)備上研究的第一應(yīng)用為在體積室中的培養(yǎng)細(xì)胞的絕對(duì)計(jì)數(shù)。按照該設(shè)備的雙色激發(fā)和普通發(fā)射范圍方面，設(shè)計(jì)活/死檢測(cè)(live/deadassay),其中用不浸透性的碘化丙咬(PI)染料染色死細(xì)胞，浸透性的SYTO-17染料染色所有細(xì)胞。PI用在510/50帶通濾光片之后的505nm(青色)LED激發(fā)，SYTO-17用在610/30帶通濾光片之后的617nm(紅橙)LED激發(fā)。所用的發(fā)射濾光片為720/150帶通濾光片，其概略地包括PI發(fā)射光譜的三分之一和SYTO-17發(fā)射光鐠的二分之一(參見圖4A，其中例示如下PI吸收光鐠(400)，Pl發(fā)射光i普(402，SYTO-17吸收光鐠(404)，SYTO-17發(fā)射光鐠(406)，第一激發(fā)波長(zhǎng)范圍(408)，第二激發(fā)波長(zhǎng)范圍(410)，以及收集光信號(hào)的波長(zhǎng)范圍(412))。將三個(gè)細(xì)胞系(A549，HeLa和U20S)以及DNAQC顆粒(BectonDickinsonp/n349523，包括小雞紅細(xì)胞鈿胞核和小牛胸腺細(xì)胞核)用于該研究。由于DNA染色相對(duì)于細(xì)胞表面標(biāo)記或PEQuantibrite珠極其明亮，儀器敏感性由于降低曝光時(shí)間、增益或激發(fā)LED電流(都產(chǎn)生令人滿意的結(jié)果)而降低。圖像質(zhì)量和保真度對(duì)于PI和SYTO-17(圖像6A)染色都很優(yōu)秀。SYTO-17可以通過活細(xì)胞膜，而PI僅能通過已經(jīng)喪失部分結(jié)構(gòu)完整性的細(xì)胞膜。隨著染色細(xì)胞的膜滲透性增加，細(xì)胞核的PI染色增加。因此，在這些細(xì)胞中PI染色相對(duì)于SYTO-17染色的平衡的范圍可從粗略地1:1,至為當(dāng)DNA中PI代替SYTO-17時(shí)高出幾倍的PI強(qiáng)度。將活細(xì)胞和死細(xì)胞在所得的圖像中區(qū)分出，以分別確定活細(xì)胞和死細(xì)胞計(jì)數(shù)，以及總細(xì)胞計(jì)數(shù)。在一個(gè)研究中，將新近被胰蛋白酶化并從培養(yǎng)瓶中解吸附的A549細(xì)胞，以范圍從50至500細(xì)胞/uL的濃度加入DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基。每一樣品與10uMSYTO-17+10uMPI一起孵育10分鐘，然后將來自每一樣品的等分試樣轉(zhuǎn)移入血細(xì)胞計(jì)數(shù)室。如上所述使樣品在血細(xì)胞計(jì)數(shù)室中成像，就活細(xì)胞、死細(xì)胞和總細(xì)胞計(jì)數(shù)分析圖像。線性結(jié)果優(yōu)秀(參見圖6B)，三種計(jì)數(shù)的R2值為0.99或更好。未進(jìn)行圖像分析算法或選通處理的優(yōu)化，并且來自假陽(yáng)性的25細(xì)胞/uL的背景計(jì)數(shù)是明顯的，雖然其可以通過在分析和選通算法上改進(jìn)來解決。上述系統(tǒng)用于檢測(cè)和計(jì)數(shù)血液樣品中的CD4+細(xì)胞。使用裂解的血液樣品，對(duì)于無核CD3-，CD4-和CD45-陽(yáng)性細(xì)胞，結(jié)果相較于使用流式細(xì)胞儀要有利的多。CD3和CD4細(xì)胞表面標(biāo)記都已經(jīng)用于通過分別加入熒光標(biāo)記的抗-CD3和抗-CD4抗體，來鑒定全血中的細(xì)胞，如圖7A-7B和8A-8B示出的數(shù)據(jù)所示，圖像質(zhì)量?jī)?yōu)秀。上述系統(tǒng)的性能通過計(jì)數(shù)和量化來自傳統(tǒng)基于珠的免疫檢測(cè)的光信號(hào)來進(jìn)一步檢測(cè)。來自BDBioscience(SanJose，CA)血細(xì)胞計(jì)數(shù)珠檢測(cè)(cytometricbeadassay,CBA)的用于測(cè)定白介素-2(IL-2)的珠與幾種濃度的IL-2結(jié)合，并且使用制造商的方案，例如Morganetal，ClinicalImmunology,110:252-266(2004)，用標(biāo)記的抗-IL誦2抗體染色。代替用流式細(xì)胞儀分析來自珠的信號(hào)的是，使標(biāo)記的珠在上述系統(tǒng)中成像，然后根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度將它們計(jì)數(shù)和分類。結(jié)果示于圖9。定義通常，除非另外指出，本文中所用的術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明相關(guān)的領(lǐng)域中的常規(guī)用法相對(duì)應(yīng)的含義，所述領(lǐng)域包括分析化學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、顯微術(shù)、圖像分析等等，例如在下文中表示的那些Albertsetal，MolecularBiologyoftheCell,第四版(Garland,2002);NelsonandCox,LehningerPrinciplesofBiochemistry,FourthEdition(W.H.Freeman,2004);Murphy，F(xiàn)undamentalsofLightMicroscopyandElectronicImaging(Wiley-Liss,2001);Shapiro,PracticalFlowCytometry,Fourth22Edition(Wiley-Liss，2003);等等。"分析物"是指在樣品中的物質(zhì)、混合物或組分，檢測(cè)其存在與否或測(cè)定其定量。分析物包括但不限于肽、蛋白質(zhì)、多核苷酸、多肽、寡核苷酸、有機(jī)分子、半抗原、表位、生物細(xì)胞的部分、蛋白質(zhì)的遺傳翻譯后修飾、受體、復(fù)合糖、維生素、激素等等。與單一分子實(shí)體相關(guān)的分析物可以不止一種，例如在相同蛋白質(zhì)上的不同砩酸化位點(diǎn)。"抗體"或"免疫球蛋白，，是指天然的或通過重組或化學(xué)方法合成產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，其能夠特異性的結(jié)合至特定的抗原或抗原決定簇?？贵w通常為約150,000道爾頓的異四聚糖蛋白，由兩條相同的輕鏈(L)和兩條相同的重鏈(H)組成。每條輕鏈通過一個(gè)共價(jià)二硫鍵與重鏈相連，而二硫鍵的數(shù)目在不同的免疫球蛋白同型的重鏈之間是變化的。每一重鏈和輕鏈還具有規(guī)律間隔的鏈內(nèi)二硫橋鍵。每一重鏈在一端具有可變區(qū)(VH)，然后是許多恒定區(qū)。每一輕鏈在一端具有可變區(qū)(V。，在另一端具有恒定區(qū)；輕鏈的恒定區(qū)與重鏈的第一恒定區(qū)成直線排列，輕鏈的可變區(qū)與重鏈的可變區(qū)成直線排列。恒定區(qū)不直接參與使抗體結(jié)合至抗原。依賴于其重鏈的恒定區(qū)的氨基酸順序，免疫球蛋白被分為不同的類別。有五種主要類別的免疫球蛋白IgA，IgD，IgE，IgG，和IgM,這些中的幾種可以進(jìn)一步分為亞類(同型)，例如，IgGbIgG2，IgG3，IgG4，IgAh和IgA2。本文所用的"抗體片段"，及其語(yǔ)法上的變體，定義為包括抗原結(jié)合位點(diǎn)的完整抗體的部分，或完整抗體的可變區(qū)，其中該部分沒有完整抗體的Fc區(qū)域的重鏈恒定區(qū)(即CH2，CH3和CH4，依賴于抗體同型)?？贵w片段的實(shí)例包括Fab,Fab',Fab'-SH，F(xiàn)(ab')2和Fv片段；二聚體；初級(jí)結(jié)構(gòu)由一種不間斷順序的連續(xù)的氨基酸殘基構(gòu)成的多肽的任何抗體片段(本文中稱為"單鏈抗體片段，，或"單鏈多肽，，)，包括但不限于(l)單鏈Fv(scFv)分子，(2)單鏈多肽，其僅包含一個(gè)輕鏈可變區(qū)，或其包含輕鏈可變區(qū)的三個(gè)CDR的片段，而沒有相關(guān)的重鏈部分，以及(3)僅包含一個(gè)重鏈可變區(qū)的單鏈多肽，或其包含重鏈可變區(qū)的三個(gè)CDR的片段，而沒有相關(guān)的輕鏈部分；以及由抗體片段形成的多特異性或多價(jià)結(jié)構(gòu)。本文所用的術(shù)語(yǔ)"單克隆抗體，，(mAb)是指從基本上同種抗體的群體獲得的抗體，即構(gòu)成群體的單獨(dú)抗體是相同的，除了有可能天然發(fā)生的少量存在的突變。單克隆抗體針對(duì)單一抗原位點(diǎn)是高度特異的。此外，與典型地包括針對(duì)不同抗原決定簇(表位)的不同抗體的傳統(tǒng)(多克隆)抗體制備相反，各mAb針對(duì)抗原上的單一抗原決定簇。除它們的抗原特異性之外，單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)在于它們可以通過雜交瘤培養(yǎng)來合成，不被其它免疫球蛋白污染。免疫檢測(cè)中所用的抗體的生產(chǎn)和選擇的指導(dǎo)可容易地在i果本和手冊(cè)中發(fā)現(xiàn)，例如HarlowandLane,Antibodies:ALaboratoryManual(ColdSpringHarborLaboratoryPress,NewYork,1988);HowardandBethell,BasicMethodsinAntibodyProductionandCharacterization(CRCPress,2001);Wild,editor,TheImmunoassayHandbook(StocktonPress,NewYork,1994)，等等。"抗原決定簇"或"表位"是指在分子，通常是蛋白質(zhì)表面的位點(diǎn)，單獨(dú)的抗體分子可以結(jié)合在其上；通常蛋白質(zhì)具有幾個(gè)或許多不同的抗原決定簇，并且可以與許多不同特異性的抗體反應(yīng)。優(yōu)選的抗原決定簇為蛋白質(zhì)的鱗酸化位點(diǎn)。-"結(jié)合化合物"是指能夠特異性結(jié)合到特定靶分子的化合物。結(jié)合化合物的實(shí)例包括抗體、凝集素、核酸、適配子等，例如SharonandLis,Lectins,2ndEdition(Springer,2006);Klussmann，TheAptamerHandbook:FunctionalOligonucleotidesandTheirApplications(JohnWiley&Sons,NewYork,2006)。本文所用的"絡(luò)合物"為直接或間接相互接觸的分子的集合體(assemblage)或團(tuán)聚體。在一個(gè)方面，"接觸"，或更具體地說，關(guān)于分子的絡(luò)合物，或關(guān)于特異性或特異性結(jié)合的"直接接觸"，是指配分^的相互作用，該非共價(jià)的相互^用例如范德i力氬鍵、離子和疏水相互作用，等等。在此方面，分子的絡(luò)合物的穩(wěn)定之處在于在檢測(cè)條件下，絡(luò)合物在熱力學(xué)上比其組成分子的非團(tuán)聚，或非絡(luò)合狀態(tài)更有利。如本文所用，"絡(luò)合物"通常是指兩種或以上蛋白質(zhì)的穩(wěn)定的團(tuán)聚體。在一個(gè)方面，"絡(luò)合物"是指兩種蛋白質(zhì)的穩(wěn)定的團(tuán)聚體，例如與靶蛋白的抗原決定簇特異性結(jié)合的抗原。"干燥的試劑"是指檢測(cè)試劑，例如緩沖劑、鹽、活性化合物，例如酶、輔因子等等，或結(jié)合化合物，例如抗體、適配子等等，其以脫水制劑的形式提供以旨在提高貯存壽命、運(yùn)輸和處理容易性、改善貯存等等。干燥的試劑的性質(zhì)、組分以及生產(chǎn)方法變化很大，并且此類材料的配制和生產(chǎn)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的，這可被以下文獻(xiàn)證明Franks等，美國(guó)專利patent5,098,893;Cole，美國(guó)專利5,102,788;Shen等，美國(guó)專利5,556,771;Treml等，美國(guó)專利5,763,157;DeRosier等，美國(guó)專利6,294,365;Buhl等，美國(guó)專利5,413,732;McMillan,美國(guó)專利申請(qǐng)2006/0068398;McMillan等，美國(guó)專利申請(qǐng)2006/0068399;Schwegmanetla(2005)，Pharm.Dev.Technol"10:151-173;Nailetal(2002)，Pharm.Biotechnol"14:281-360;等等，將這些文獻(xiàn)引入本文以作參考。干燥的試劑包括但不限于，固體和/或半固體顆粒、粉末、片劑、晶體、膠嚢等，其可以各種方式制備。在一個(gè)方面，千燥的試劑為凍干顆粒。凍干顆?？梢跃哂芯鶆虻慕M成，其中各顆粒具有相同的組成，或者它們可以具有不同的組成，，以使兩種或以上不同種類的具有不同組成的凍干顆粒混合在一起。凍干顆?？梢园糜诟鞣N檢測(cè)和生化反應(yīng)，包括免疫檢測(cè)、基于酶的檢測(cè)、酶底物檢測(cè)、DNA測(cè)序反應(yīng)等的所有或部分的試劑。在一個(gè)方面，本發(fā)明的凍干顆粒包括賦形劑和至少一種檢測(cè)試劑。凍干顆粒可以以預(yù)定的尺寸和形狀制備，所述預(yù)定的尺寸和形狀可由要進(jìn)行的檢測(cè)的種類、所需的反應(yīng)體積、所需的溶解速度等確定。干燥的試劑可以包括賦形劑，其通常是添加到材料的惰性物質(zhì)，以賦予材料稠度或形狀。對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言許多賦形劑是已知的，可以包括許多不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)。可用于本發(fā)明的賦形劑的實(shí)例包括糖類，例如蔗糖、葡萄糖、海藻糖、松三糖、右旋糖和甘露醇；蛋白質(zhì)例如BSA、凝膠和膠原；以及聚合物例如PEG和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。在凍干顆粒中賦形劑的總量可以包括單一或多種化合物。在某些實(shí)施方式中，賦形劑的種類為控制干燥的試劑的吸濕性的量的因子。較低的吸濕性可以增強(qiáng)干燥的試劑的完整性和抗凍能力。然而，從此類組合物除去所有的水將對(duì)那些反應(yīng)組分有不利效果，所述反應(yīng)組分例如蛋白質(zhì)，其需要一定量的結(jié)合水以維持正確的構(gòu)象。"讀出"是指測(cè)量和/檢測(cè)的可轉(zhuǎn)換為數(shù)字或值的參數(shù)。在某些語(yǔ)境下，讀出是指此類收集或記錄數(shù)據(jù)的實(shí)際數(shù)值表示。例如來自微陣列的熒光強(qiáng)度信號(hào)的讀出為在微陣列的每一雜交位點(diǎn)處產(chǎn)生的信號(hào)的位置和熒光強(qiáng)度，因此此類讀出可以以各種方式寄存或存儲(chǔ)，例如以微陣列的圖像，以數(shù)字表格，等等。"樣品"是指一些來自生物、環(huán)境、醫(yī)學(xué)或患者來源的材料，其中試圖檢測(cè)或測(cè)定靶細(xì)胞、顆粒、珠和/或分析物。術(shù)語(yǔ)"樣品"包括生物樣品，例如一些血液、微生物培養(yǎng)物等等；環(huán)境樣品，例如土壤或水樣品；醫(yī)學(xué)樣品或試樣，例如一些血液或組織；等等。樣品可以包括合成來源的試樣。生物樣品可以是動(dòng)物(包括人類)、流體、固體(例如糞便)或組織，以及液體和固體食物和飼料產(chǎn)品以及成分例如乳制品、蔬菜、肉類和肉類副產(chǎn)物以及廢物。生物樣品可以包括取自患者的材料，包括但不限于培養(yǎng)物、血液、唾液、腦脊髓液、胸水、乳、淋巴、痰、精液、穿刺抽吸物(needleaspirates)等等。生物樣品可以從各種科的家畜，以及野性或野生動(dòng)物中獲得，包括但不限于有蹄類、熊、魚、嚙齒類等動(dòng)物。環(huán)境樣品包括環(huán)境材料(例如表面物質(zhì)、土壤、水和工業(yè)樣品)，以及獲自食物和乳制品加工儀器、設(shè)備、裝置、器皿、一次性或非一次性物品的樣品。這些樣品不解釋為限制適合本發(fā)明的樣品種類。術(shù)語(yǔ)"樣品"和"試樣"可替換地使用。關(guān)于一種分子與另一種分子結(jié)合的"特異的"或"特異性"是指識(shí)別、接觸和在兩種分子間形成穩(wěn)定的絡(luò)合物，同時(shí)該分子基本上不識(shí)別、接觸或與其它分子不形成絡(luò)合物。一方面，關(guān)于第一分子與第二分子結(jié)合的"特異的"是指第一分子在反應(yīng)或樣品中識(shí)別另一分子26并與另一分子形成絡(luò)合物的程度，其與第二分子形成最大數(shù)量的絡(luò)合物。優(yōu)選地，該最大量為至少百分之三十。通常，涉及特異性結(jié)合事件的分子在其表面具有區(qū)域，和/或在蛋白質(zhì)的情況下具有空腔，在相互結(jié)合的分子之間引起特異性識(shí)別。特異性結(jié)合的實(shí)例包括抗體-抗原相互作用、酶-底物相互作用、在多核苷酸和/或寡核苷酸之間形成雙鏈體或三鏈體、受體-配體相互作用，等等。如本文所用，關(guān)于特異性或特異性結(jié)合的"接觸"是指兩種分子足夠接近以致于弱的非共價(jià)化學(xué)相互作用(例如范德華力、氫鍵、堿基堆積相互作用、離子和疏水相互作用等)支配分子的相互作用。上述教導(dǎo)旨在舉例說明本發(fā)明，而不是由其細(xì)節(jié)限制本發(fā)明權(quán)利要求的范圍。雖然本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式已經(jīng)描述，但是對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，可以進(jìn)行各種變化或改進(jìn)而不背離本發(fā)明，并且旨在使所附的權(quán)利要求覆蓋所有落入本發(fā)明真正精神和范圍的此類變化和改進(jìn)。權(quán)利要求1.一種用于成像試樣的多個(gè)特征的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括一個(gè)或多個(gè)光源，能夠連續(xù)地產(chǎn)生各自具有不同波長(zhǎng)帶的照射光束，多個(gè)差異可激發(fā)標(biāo)記，能夠標(biāo)記包含多個(gè)特征的試樣，以使各不同特征被不同的差異可激發(fā)標(biāo)記標(biāo)記；與所述一個(gè)或多個(gè)光源操作性地相關(guān)聯(lián)的控制器，用于將照射光束連續(xù)地引導(dǎo)到試樣上，以連續(xù)地引起不同的差異可激發(fā)標(biāo)記中的每一個(gè)發(fā)射在相同波長(zhǎng)帶內(nèi)的光信號(hào)；以及光學(xué)系統(tǒng)，能夠收集此類發(fā)射的光信號(hào)并在光響應(yīng)表面上形成與試樣的被標(biāo)記特征相對(duì)應(yīng)的連續(xù)圖像，由此形成其連續(xù)的圖像數(shù)據(jù)組。2.—種用于分析在血液試樣中用多個(gè)差異可激發(fā)標(biāo)記標(biāo)記的非紅細(xì)力包的i殳備，所述i殳備包括樣品室，能夠容納血液試樣，并且沿光收集軸具有阻止形成紅細(xì)胞光遮蔽層的尺寸；多個(gè)光源，各自能夠用具有不同波長(zhǎng)帶的照射光束照射血液試樣；耦合到多個(gè)光源的控制器，用于將各光源的照射光束連續(xù)地引導(dǎo)到試樣上，從而連續(xù)地引起多個(gè)差異可激發(fā)標(biāo)記中的每一個(gè)發(fā)射在相同波長(zhǎng)帶內(nèi)的光信號(hào)；光學(xué)系統(tǒng)，能夠收集此類發(fā)射的光信號(hào)并在光響應(yīng)表面上形成與其對(duì)應(yīng)的連續(xù)圖像，從而形成連續(xù)的圖像數(shù)據(jù)組；以及通過分析連續(xù)的圖像數(shù)據(jù)組來計(jì)數(shù)血液試樣中的非紅細(xì)胞。3.—種用于標(biāo)記樣品中多個(gè)不同細(xì)胞分析物中的一個(gè)或多個(gè)的探針組合物，包括分析物特異性的探針的混合物，每一探針能夠特異性地結(jié)合至不同的分析物，其中每一探針的特征在于(a)在結(jié)合條件下對(duì)細(xì)胞分析物特異的結(jié)合化合物，以及(b)與結(jié)合化合物連接的光學(xué)標(biāo)記，各不同探針的光學(xué)標(biāo)記具有不同的激發(fā)帶，并且所有探針的光學(xué)標(biāo)記發(fā)射在相同波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光信號(hào)，所述波長(zhǎng)范圍與探針組合物的光學(xué)標(biāo)記的激發(fā)帶分開。4.一種用于非紅細(xì)胞的光學(xué)分析的一次性血液收集容器，所述容器包括具有用于接納全血樣品的入口的混合室，所述混合室進(jìn)一步包括千燥的試劑，該干燥的試劑能夠與全血樣品接觸時(shí)溶解并且包含探針組合物，該探針組合物包括多個(gè)分析物特異性的探針，每一探針能夠特異性地與非紅細(xì)胞的不同細(xì)胞分析物結(jié)合，其中每一探針的特征在于U)在結(jié)合條件下對(duì)細(xì)胞分析物特異的結(jié)合化合物，以及(b)與結(jié)合化合物連接的光學(xué)標(biāo)記，其中各不同探針的光學(xué)標(biāo)記具有不同的激發(fā)帶，并且所有探針的光學(xué)標(biāo)記發(fā)射在相同波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光信號(hào)；以及樣品室，與混合室流體連接，以使混合室中的樣品通過毛細(xì)作用傳送至樣品室，樣品室具有光學(xué)透射壁和與其垂直的基本上與非紅細(xì)胞的直徑相等的尺寸，以使由與細(xì)胞分析物連接的探針產(chǎn)生的光信號(hào)不被^羊品的紅細(xì)力包遮蔽。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的容器，其中所述尺寸基本上阻止在目的細(xì)胞和所述光學(xué)透射壁之間形成無核紅細(xì)l包光遮蔽層。6.—種用于非紅細(xì)胞的光學(xué)分析的一次性血液收集容器，所述容器包括能夠接收全血樣品的樣品室，該樣品室設(shè)置在體部?jī)?nèi)，并且具有至少一個(gè)光學(xué)透射壁和與其垂直的基本上與非紅細(xì)胞的直徑相等的尺寸，以使由與細(xì)胞分析物連接的探針產(chǎn)生的光信號(hào)不被樣品的紅細(xì)胞遮蔽；以及在樣品室中的干燥的試劑，其與樣品組合時(shí)溶解以形成探針組合物，該探針組合物包括多個(gè)分析物特異性的探針，每一探針能夠特異性地與非紅細(xì)胞的不同細(xì)胞分析物結(jié)合，其中每一探針的特征在于(a)在結(jié)合條件下對(duì)細(xì)胞分析物特異的結(jié)合化合物，以及(b)與結(jié)合化合物連接的光學(xué)標(biāo)記，其中各不同探針的光學(xué)標(biāo)記具有不同的激發(fā)帶，并且所有探針的光學(xué)標(biāo)記發(fā)射在相同波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光信號(hào)。7.—種用于使被多個(gè)熒光標(biāo)記標(biāo)記的試樣成像的設(shè)備，該設(shè)備包括能夠照射試樣的一個(gè)或多個(gè)發(fā)光二極管，每一發(fā)光二極管產(chǎn)生具有不同波長(zhǎng)帶的照射光束；耦合到發(fā)光二極管的控制器，用于將發(fā)光二極管的照射光束引導(dǎo)到試樣上，從而引起多個(gè)熒光標(biāo)記的每一個(gè)順序發(fā)射光信號(hào)；和光學(xué)系統(tǒng)，能夠收集發(fā)射的光信號(hào)并在光響應(yīng)表面上形成與其對(duì)應(yīng)的圖像以產(chǎn)生圖像數(shù)據(jù)，其中該光學(xué)系統(tǒng)包括能夠捕獲多個(gè)具有不同波長(zhǎng)的光信號(hào)的彩色相機(jī)。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的設(shè)備，其中所述一個(gè)或多個(gè)發(fā)光二極管為多個(gè)發(fā)光二極管，并且所述光學(xué)系統(tǒng)產(chǎn)生多個(gè)圖像數(shù)據(jù)組，每一此類組與響應(yīng)于由不同的所述發(fā)光二極管之一的照射產(chǎn)生的光信號(hào)相對(duì)應(yīng)。全文摘要本發(fā)明提供低成本的基于成像的系統(tǒng)，用于檢測(cè)、測(cè)定和/或計(jì)數(shù)生物樣品，特別是血液試樣的標(biāo)記特征。一方面，本發(fā)明包括一種用于成像試樣的多個(gè)特征的系統(tǒng)，包括一個(gè)或多個(gè)光源，能夠連續(xù)地產(chǎn)生各自具有不同波長(zhǎng)帶的照射光束；和多個(gè)差異可激發(fā)標(biāo)記，能夠標(biāo)記包含多個(gè)特征的試樣，以使各不同特征被不同的差異可激發(fā)標(biāo)記標(biāo)記。本發(fā)明的系統(tǒng)可進(jìn)一步包括與所述一個(gè)或多個(gè)光源操作性地相關(guān)聯(lián)的控制器，用于將照射光束連續(xù)地引導(dǎo)到試樣上，從而連續(xù)地引起不同的差異可激發(fā)標(biāo)記的每一個(gè)發(fā)射在相同波長(zhǎng)帶內(nèi)的光信號(hào)；光學(xué)系統(tǒng)，能夠收集此類發(fā)射的光信號(hào)并在光響應(yīng)表面上形成與試樣的被標(biāo)記特征對(duì)應(yīng)的連續(xù)圖像，從而形成連續(xù)的其圖像數(shù)據(jù)組；以及用于非紅細(xì)胞的收集和光學(xué)分析的一次性容器。文檔編號(hào)G01N21/03GK101622522SQ200880006361公開日2010年1月6日申請(qǐng)日期2008年1月25日優(yōu)先權(quán)日2007年1月26日發(fā)明者E·構(gòu)德博格,J·布魯克申請(qǐng)人:貝克頓·迪金森公司