專利名稱：熒光圖像檢測(cè)裝置以及熒光圖像檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種使用熒光檢測(cè)的生物光學(xué)成像(bioluminescence imaging)技術(shù)。
背景技術(shù)：
對(duì)生物體中、細(xì)胞中的分子種(molecular species)如何分布進(jìn)行成像的方法是醫(yī)學(xué)、生物學(xué)的重要研究方法。在細(xì)胞等級(jí)廣泛應(yīng)用著如下方法使用顯微鏡，利用附著有熒光色素的分子探針、使用基因發(fā)現(xiàn)分子探針來(lái)將分子種進(jìn)行圖像化。另外，要求如下一種裝置針對(duì)比細(xì)胞等級(jí)更大的臟器、甚至動(dòng)物個(gè)體，在仍存活的狀態(tài)下觀察所關(guān)注的分子種分布的樣子。例如如下技術(shù)通過(guò)使熒光探針與小鼠等個(gè)體中的癌細(xì)胞相結(jié)合來(lái)將所關(guān)注的癌細(xì)胞增殖的樣子進(jìn)行圖像化，觀察每天或者每周的隨時(shí)間變化。在以往的用于細(xì)胞等級(jí)的測(cè)量裝置中，為了觀察動(dòng)物個(gè)體內(nèi)部的癌細(xì)胞的增殖，通過(guò)殺死動(dòng)物對(duì)規(guī)定的部分染色或者附著熒光體來(lái)進(jìn)行觀察，但是這樣就無(wú)法對(duì)一個(gè)個(gè)體長(zhǎng)時(shí)間地觀察細(xì)胞的隨時(shí)間增殖。 由于該原因，期望開(kāi)發(fā)一種能夠在個(gè)體仍存活的狀態(tài)下觀察小動(dòng)物個(gè)體的內(nèi)部信息的分子種的裝置。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明要解決的問(wèn)題

圖10是表示典型的熒光圖像檢測(cè)裝置的一例的圖。該裝置是如下裝置將來(lái)自光源16的光中的由激勵(lì)側(cè)濾波器Il(Fex)選擇的波長(zhǎng)的光作為激勵(lì)光照射到生物體試樣，利用熒光側(cè)濾波器12 (Fm)取出來(lái)自該生物體試樣的散射光中的熒光成分，利用成像透鏡32在作為二維檢測(cè)器的CXD照相機(jī)38上成像，由此得到試樣的熒光圖像。在這樣的裝置中，在對(duì)試樣照射激勵(lì)光時(shí)，從所關(guān)注的熒光分子發(fā)射波長(zhǎng)與激勵(lì)光不同的、通常波長(zhǎng)比激勵(lì)光長(zhǎng)的光，因此，如果安裝完全遮斷激勵(lì)光的波長(zhǎng)成分的濾波器作為從試樣至二維檢測(cè)器38之間的熒光側(cè)濾波器12，則能夠以高靈敏度地檢測(cè)熒光波長(zhǎng)成分。但是，實(shí)際上，照射到試樣的激勵(lì)光的光譜中往往包含較少波長(zhǎng)與熒光成分相同的光(還稱為雜散光)，該雜散光在試樣上進(jìn)行反射而與從試樣發(fā)出的熒光重疊，從而使熒光的檢測(cè)邊界惡化。另外，相反如果照射到試樣的激勵(lì)光完全不包含雜散光，熒光側(cè)濾波器的能力不足而也沒(méi)有完全去除激勵(lì)光的波長(zhǎng)成分，則在試樣上反射的激勵(lì)光成分的一部分透過(guò)熒光側(cè)濾波器而與來(lái)自試樣的熒光成分重疊，從而使熒光的檢測(cè)邊界惡化。當(dāng)熒光的檢測(cè)邊界較差時(shí)微弱的熒光被噪聲掩蓋，從而無(wú)法清楚地捕捉圖像。在生物體試樣的關(guān)注部分附著熒光色素而觀察的情況下，當(dāng)關(guān)注部分處于生物體試樣的中心附近即從表面遠(yuǎn)離的位置時(shí)，相應(yīng)地從生物體試樣的表面捕捉到的熒光的強(qiáng)度變?nèi)?。?dāng)熒光的檢測(cè)邊界較差時(shí)，無(wú)法清楚地捕捉這樣微弱的熒光成分。因此，本發(fā)明的目的在于提供一種熒光圖像檢測(cè)裝置，提高熒光的檢測(cè)邊界而也能夠高靈敏度地檢測(cè)微弱的熒光。用于解決問(wèn)題的方案圖11是表示在圖10的熒光圖像檢測(cè)裝置中試樣所包含的熒光色素的激勵(lì)光譜 45和熒光光譜46以及與這些激勵(lì)光譜45和熒光光譜46相對(duì)應(yīng)地選擇的激勵(lì)側(cè)濾波器 11 (Fex)的透過(guò)特性41和熒光側(cè)濾波器12 (Feffl)的透過(guò)特性42的圖。將激勵(lì)側(cè)濾波器11的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶選擇為被包含于表示激勵(lì)光譜45較強(qiáng)的強(qiáng)度的波長(zhǎng)范圍內(nèi)。因?yàn)闊晒夤庾V 46移位到波長(zhǎng)比激勵(lì)光譜45長(zhǎng)的波長(zhǎng)側(cè)，所以與之相對(duì)應(yīng)地選擇熒光側(cè)濾波器12的透過(guò)特性42以使其移位到波長(zhǎng)比激勵(lì)側(cè)濾波器11長(zhǎng)的波長(zhǎng)側(cè)。圖12是表示激勵(lì)側(cè)濾波器Frai、熒光側(cè)濾波器Fm的具體透過(guò)特性的一例的圖表。 在該圖表中，橫軸表示波長(zhǎng)(nm)，縱軸表示透過(guò)率(對(duì)數(shù))?？v軸的透過(guò)率是指1(表示為 1.E+00)最大、即100%的透過(guò)。作為激勵(lì)側(cè)濾波器Fra、熒光側(cè)濾波器Fail而使用的濾波器一般為多層膜干涉濾波器。多層膜干涉濾波器為如下濾波器通過(guò)在透明的支承體上交替層疊幾十層折射率不同的兩種電介質(zhì)薄膜的多層膜結(jié)構(gòu)，從而僅使期望波長(zhǎng)的光通過(guò)而遮擋(反射)剩余波長(zhǎng)的光。在圖12中，激勵(lì)側(cè)濾波器Fex為在630nm 690nm中具有透過(guò)波長(zhǎng)頻帶的帶通濾波器(透過(guò)波長(zhǎng)頻帶的寬度Δ λ )。如果針對(duì)該激勵(lì)側(cè)濾波器Frai觀察透過(guò)波長(zhǎng)頻帶的透過(guò)率，則能夠達(dá)到90%左右而足夠高，不存在問(wèn)題；但是在要遮擋光的波長(zhǎng)域中也存在 2X10_6(將X10_6表示為E-06)左右的透過(guò)率，即在透過(guò)波長(zhǎng)頻帶以外的波長(zhǎng)域中存在漏光。將該激勵(lì)側(cè)濾波器Fra的漏透過(guò)率設(shè)為“tra”。另一方面，熒光側(cè)濾波器Fem為在730nm 780nm中具有透過(guò)波長(zhǎng)頻帶的帶通濾波器(透過(guò)波長(zhǎng)頻帶的寬度Δ λΜ)。如果針對(duì)該熒光側(cè)濾波觀察透過(guò)波長(zhǎng)頻帶的透過(guò)率，則能夠達(dá)到90%左右而足夠高，不存在問(wèn)題；但是在要遮擋光的波長(zhǎng)域中也存在 IX 10_5左右的透過(guò)率，即在透過(guò)波長(zhǎng)頻帶以外的波長(zhǎng)域中存在漏光。將該熒光側(cè)濾波器Fm 的漏透過(guò)率設(shè)為“tem”。參照?qǐng)D13研究在圖10的例子中使用圖12的濾波器Fex(透過(guò)特性41)、Fem(透過(guò)特性4 并使用碘鎢燈那樣的連續(xù)波長(zhǎng)光源作為光源16的情況。如圖13的(a)所示，將來(lái)自光源16的光強(qiáng)度假設(shè)為在整個(gè)波長(zhǎng)上均勻的I (mW/ nm)。如果為了簡(jiǎn)化而將Frai的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶的透過(guò)率視作1 (100% )，則從激勵(lì)側(cè)濾波器Fra 的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶透過(guò)的激勵(lì)光強(qiáng)度在圖中相當(dāng)于面積，因此該強(qiáng)度為I · Δ λ ex (mff)。當(dāng)假設(shè)試樣是完全不發(fā)出熒光而使激勵(lì)光原樣散射的白色散射體時(shí)，投向熒光側(cè)濾波器Fm的散射光的強(qiáng)度為I · Δ λ ex · kk為投向熒光側(cè)濾波器Fem的散射光的比例。如果將漏光相對(duì)于入射到熒光側(cè)濾波器Fem的散射光的比例設(shè)為總漏率LF (LF =Leak Factor)，則到達(dá)二維檢測(cè)器38的漏光的強(qiáng)度為I · Δ λ p . k · LF
由于假設(shè)試樣不發(fā)出熒光，因此如果LF = 0則CXD照相機(jī)38拍攝全黑的圖像。由于k是固定的，因此為了估計(jì)LF，等同于如下情況如圖13的(b)所示，在來(lái)自光源16的光的行進(jìn)方向上串行排列激勵(lì)側(cè)濾波器11和熒光側(cè)濾波器12，評(píng)價(jià)被包含于熒光側(cè)濾波器12的透過(guò)光中的漏光的比例。即，考慮設(shè)為k = 1即可。在圖13的(b)的配置中，當(dāng)測(cè)量來(lái)自熒光側(cè)濾波器12的漏光的光譜時(shí)，檢測(cè)出圖 13的(c)的兩個(gè)波長(zhǎng)成分的山形Sex、Sem。圖左側(cè)的成分Sex是相當(dāng)于激勵(lì)光的波長(zhǎng)的光由于熒光側(cè)濾波器12的能力不足沒(méi)有被完全遮擋而漏掉的成分，如果使用熒光側(cè)濾波器12 的漏率tM則形成如下公式Sex = I · Δ λ · tem圖右側(cè)的成分Sem可以說(shuō)是由于激勵(lì)側(cè)濾波器11(漏率=tex)的能力不足而有 I · tex的強(qiáng)度的光到達(dá)熒光側(cè)濾波器12，而其中處于熒光側(cè)濾波器12的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶 Δ Aem內(nèi)的波長(zhǎng)的光是原樣透過(guò)(由于設(shè)定為透過(guò)波長(zhǎng)頻帶的透過(guò)率=1)熒光側(cè)濾波器 12的成分。因而，形成以下公式Sem = I · Δ λ em · tex入射到二維檢測(cè)器38的最終漏光的強(qiáng)度為上述激勵(lì)波長(zhǎng)中的Sex與熒光檢測(cè)波長(zhǎng)中的Sem之和。因而，總漏率LF為漏光相對(duì)于入射到熒光側(cè)濾波器Fem的散射光的比例，因此能夠定義為如下公式LF= (Sem+Sex)/(I · Δ λεχ)= (tem· Δ Xex+tex· Δ λ )/Δ λεχ (1)如果激勵(lì)側(cè)濾波器11與熒光側(cè)濾波器12的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶的寬度Δ λ 與Δ λ Μ 大致相同，則形成如下公式。LF = teffl+texS卩，如果兩個(gè)濾波器11、12的漏率tex、tem都為1X10_5左右，則由于總漏率LF為兩個(gè)濾波器11、12的漏率之和，因此不會(huì)降低到該總和以下。此外，一般作為激勵(lì)側(cè)濾波器、 熒光側(cè)濾波器而使用的多層膜干涉濾波器的漏率通常為1X10_6左右，較佳的為1X10_7左
右O如上所述，在熒光圖像檢測(cè)裝置中需要區(qū)分濾波器本身的漏率與包含光源的總漏率來(lái)進(jìn)行討論，但是目前沒(méi)有根據(jù)這樣的觀點(diǎn)來(lái)區(qū)分兩者的記載。本發(fā)明提出一種進(jìn)行該區(qū)分而降低總漏率的方法。即本發(fā)明的主要目的在于提供一種熒光圖像獲取裝置，其使用具有與當(dāng)前得到的性能相同程度的性能的濾波器作為濾波器但與以往相比降低總漏率LF。本發(fā)明的熒光圖像獲取裝置具備激勵(lì)光源，其激勵(lì)試樣的熒光；二維檢測(cè)器，其用于檢測(cè)從試樣發(fā)出的熒光；激勵(lì)側(cè)濾波器，其被配置于光源至試樣之間；以及熒光側(cè)濾波器部，其被配置于試樣至二維檢測(cè)器之間，取出從試樣發(fā)出的熒光來(lái)引導(dǎo)到上述二維檢測(cè)器。并且，激勵(lì)側(cè)濾波器具有透過(guò)波長(zhǎng)頻帶，該透過(guò)波長(zhǎng)頻帶阻止上述熒光側(cè)濾波器部的透過(guò)波長(zhǎng)域的光。熒光側(cè)濾波器部包括多層膜干涉濾波器和吸收濾波器，將這些多層膜干涉濾波器和吸收濾波器串行排列在熒光的行進(jìn)方向上。這些多層膜干涉濾波器和吸收濾波器組合成在熒光側(cè)濾波器部的透過(guò)波長(zhǎng)域中包含熒光波長(zhǎng)的至少一部分波長(zhǎng)并且不包含激勵(lì)側(cè)濾波器的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶。即，作為確保激勵(lì)側(cè)濾波器與熒光側(cè)濾波器相互不共用透過(guò)波長(zhǎng)域的方法，使多層膜干涉濾波器和吸收濾波器作為熒光側(cè)濾波器而雙重地發(fā)揮功能。在該熒光圖像檢測(cè)裝置中，使用降低由熒光側(cè)濾波器引起的漏光強(qiáng)度Sra的方法。 即，除了目前使用的多層膜干涉濾波器以外還使用串行配置吸收形濾波器(還簡(jiǎn)稱為吸收濾波器)來(lái)作為熒光側(cè)濾波器部而得到“吸收濾波器備用法”。當(dāng)設(shè)為多層膜干涉濾波器的漏率例如為1XIO-5時(shí)，如果配置吸收濾波器而漏率降低三位，則能夠?qū)崿F(xiàn)1XIO-8總漏率 LF。吸收濾波器例如為市場(chǎng)上銷售的廉價(jià)“著色玻璃濾波器(colored glass filter)”。該濾波器在透明的玻璃中溶解吸收光的物質(zhì)而在該吸收部分遮擋光的透過(guò)。也可以不使用玻璃而使用透明的樹(shù)脂或者根據(jù)波長(zhǎng)在石英中溶解期望的吸收物質(zhì)并使之凝固來(lái)得到該濾波器。以后說(shuō)明理由，將相同種類的多層膜干涉濾波器作為備用濾波器而使用，也無(wú)法使漏率降低，與此相對(duì)，通過(guò)將多層膜干涉濾波器與性質(zhì)不同的吸收濾波器組合，有效利用兩者的特征則能夠大幅降低由兩者漏率的乘法運(yùn)算而得到的漏率。本發(fā)明的特征在于，找出上述特性，實(shí)現(xiàn)總漏率LF的大幅降低，提高熒光圖像檢測(cè)裝置的熒光檢測(cè)精度。在此，優(yōu)選激勵(lì)側(cè)濾波器的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶中的吸收濾波器的透過(guò)率為10%以下。 這是指吸收濾波器的漏率為0. 1 (IX 10—1)以下，如果吸收濾波器的漏率為0. 1以下，則通過(guò)與多層膜干涉濾波器進(jìn)行組合能夠降低總漏率一位以上。根據(jù)以后的說(shuō)明可知，即使將漏率為1 X 10_5左右的多層膜干涉濾波器作為備用濾波器而使用，總漏率僅被降低一位左右。 與此相對(duì)，與使用多層膜干涉濾波器作為備用濾波器的情況相比，通過(guò)使用漏率0. 1以下的吸收濾波器能夠大幅降低總漏率。在本發(fā)明中，優(yōu)選還使用與激勵(lì)側(cè)濾波器的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶相比發(fā)射波長(zhǎng)頻帶更窄的光的單波長(zhǎng)光源作為光源。由此，根據(jù)以下理由能夠?qū)崿F(xiàn)降低由激勵(lì)側(cè)濾波器引起的漏光強(qiáng)度s 。在這種情況下，當(dāng)處于與激勵(lì)光的主波長(zhǎng)(是指單波長(zhǎng)光源的放射能量所集中的波長(zhǎng)域)不同的波長(zhǎng)域的熒光側(cè)濾波器的透過(guò)波長(zhǎng)域的光源放射光強(qiáng)度，在將連續(xù)光源的放射強(qiáng)度設(shè)定為1時(shí)例如為IX 10_4左右時(shí)，即使激勵(lì)側(cè)濾波器的漏率為IX 10_5左右，來(lái)自激勵(lì)側(cè)濾波器的漏率的強(qiáng)度也為1X10_9左右。即，如果代替連續(xù)光源而使用單波長(zhǎng)激勵(lì)光源，則在從光源發(fā)射的光中幾乎不包含熒光側(cè)濾波器的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶的光，因此從激勵(lì)側(cè)濾波器漏光的熒光側(cè)濾波器的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶的光大幅降低，從而實(shí)質(zhì)上漏率降低。根據(jù)圖13 圖16進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明能夠?qū)崿F(xiàn)上述情況的理由。在圖13的(c)中，tem相當(dāng)大，因此Sex顯出明顯大。追加吸收濾波器13的方法 (參照?qǐng)D14的(b))對(duì)降低這些具有效果。在吸收濾波器13的透過(guò)特性43(參照?qǐng)D14的 (a))中在激勵(lì)側(cè)濾波器11的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶Δ λ M中透過(guò)率較小。將該透過(guò)率設(shè)為ta，例如設(shè)為ta = 0.001 (IX 10_3)。于是，通過(guò)圖14的(c)示出的吸收濾波器13之后的由熒光側(cè)濾波器12、13引起的漏光強(qiáng)度Sra形成如下公式，Sex = I · tem · ta · Δ λ ex = L · tem · ta (2)與圖13的(c)的漏光強(qiáng)度Sex相比僅減小系數(shù)、的量。在此，設(shè)為I · Δ λ ex (光源強(qiáng)度)=L0根據(jù)圖14的(c)可知，通過(guò)追加吸收濾波器13，Sex已降低但是Sem幾乎沒(méi)有降低。 這是因激勵(lì)側(cè)濾波器11中存在熒光側(cè)濾波器的透過(guò)波長(zhǎng)域Δ 內(nèi)的漏光引起的。在降低Sem時(shí)，利用鎢絲燈那樣的連續(xù)光源16代替圖15示出的主波長(zhǎng)頻帶較窄的光源(單波長(zhǎng)光源)15效果較好。典型的單波長(zhǎng)光源可舉出發(fā)光二極管(LED)、半導(dǎo)體激光器(LD)。以單波長(zhǎng)光源15的放射光譜51中的主波長(zhǎng)帶51a(將波長(zhǎng)寬度記述為Δ Als)進(jìn)入到激勵(lì)側(cè)濾波器11的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶△ λ 中的方式選擇單波長(zhǎng)光源15與激勵(lì)側(cè)濾波器11的組合。但是，雖說(shuō)是單波長(zhǎng)光源，但是正確地說(shuō)不僅在中心部的較強(qiáng)放射部分(主波長(zhǎng)帶)51a中而且在其拖尾部分中也伴隨著微弱發(fā)光。該拖尾部分與來(lái)自激勵(lì)側(cè)濾波器11的漏光Srai有關(guān)。當(dāng)將單波長(zhǎng)光源的主波長(zhǎng)帶的放射強(qiáng)度即激勵(lì)光強(qiáng)度設(shè)為L(zhǎng)(= IX Δ λ LS), 將系數(shù)f乘以I而以[I · f]表示拖尾部分的放射強(qiáng)度時(shí)，由激勵(lì)側(cè)濾波器11引起的漏光強(qiáng)度Sm形成如下公式。
權(quán)利要求
1.一種熒光圖像檢測(cè)裝置，具備 激勵(lì)光源，其激勵(lì)試樣的熒光；二維檢測(cè)器，其用于檢測(cè)從上述試樣發(fā)出的熒光； 激勵(lì)側(cè)濾波器，其被配置在上述光源與試樣之間；以及熒光側(cè)濾波器部，其被配置在上述試樣與二維檢測(cè)器之間，用于取出從試樣發(fā)出的熒光而引導(dǎo)到上述二維檢測(cè)器，上述激勵(lì)側(cè)濾波器具有阻止上述熒光側(cè)濾波器部的透過(guò)波長(zhǎng)域的光的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶， 上述熒光側(cè)濾波器部包括干涉濾波器和吸收濾波器，上述干涉濾波器和吸收濾波器被串行配置在上述熒光的行進(jìn)方向上，上述干涉濾波器和吸收濾波器被組合成在它們組合得到的透過(guò)波長(zhǎng)域中包含熒光波長(zhǎng)的至少一部分波長(zhǎng)并且不包含上述激勵(lì)側(cè)濾波器的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熒光圖像檢測(cè)裝置，其特征在于，上述吸收濾波器在上述激勵(lì)側(cè)濾波器的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶中的透過(guò)率為10%以下。
3.一種熒光圖像檢測(cè)裝置， 上述激勵(lì)光源為單色激勵(lì)光源，上述激勵(lì)側(cè)濾波器的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶使上述單色激勵(lì)光源的主波長(zhǎng)的光透過(guò)， 構(gòu)成上述熒光側(cè)濾波器部的吸收濾波器在上述單色激勵(lì)光源的主波長(zhǎng)的波長(zhǎng)域中具有10%以下的低透過(guò)率。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的熒光圖像檢測(cè)裝置，其特征在于，上述光源為發(fā)射以785nm士 IOnm為峰值波長(zhǎng)的光的半導(dǎo)體激光器，上述吸收濾波器的 50%透過(guò)波長(zhǎng)在800nm 860nm的范圍內(nèi)。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的熒光圖像檢測(cè)裝置，其特征在于，上述光源為發(fā)射以690nm士 IOnm為峰值波長(zhǎng)的光的半導(dǎo)體激光器，上述吸收濾波器的 50%透過(guò)波長(zhǎng)在720nm 780nm的范圍內(nèi)。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的熒光圖像檢測(cè)裝置，其特征在于，上述光源為發(fā)射以658nm士 IOnm為峰值波長(zhǎng)的光的半導(dǎo)體激光器，上述吸收濾波器的 50%透過(guò)波長(zhǎng)在690nm 740nm的范圍內(nèi)。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的熒光圖像檢測(cè)裝置，其特征在于，上述光源為發(fā)射以808nm士 IOnm為峰值波長(zhǎng)的光的半導(dǎo)體激光器，上述吸收濾波器的 50%透過(guò)波長(zhǎng)在820nm 870nm的范圍內(nèi)。
8.一種熒光圖像檢測(cè)方法，利用熒光圖像檢測(cè)裝置來(lái)檢測(cè)熒光圖像，該熒光圖像檢測(cè)裝置具備如下部分激勵(lì)光源，其激勵(lì)試樣的熒光；二維檢測(cè)器，其用于檢測(cè)從上述試樣發(fā)出的熒光；激勵(lì)側(cè)濾波器，其被配置在上述光源與試樣之間；以及熒光側(cè)濾波器部，其被配置在上述試樣與二維檢測(cè)器之間，用于取出從試樣發(fā)出的熒光而引導(dǎo)到上述二維檢測(cè)器，該方法使用具有如下透過(guò)波長(zhǎng)頻帶的濾波器作為上述激勵(lì)側(cè)濾波器，該透過(guò)波長(zhǎng)頻帶阻止上述熒光側(cè)濾波器部的透過(guò)波長(zhǎng)域的光，將干涉濾波器和吸收濾波器串行配置在上述熒光的行進(jìn)方向上作為上述熒光側(cè)濾波器部，使用如下組合得到的上述干涉濾波器和上述吸收濾波器在它們組合得到的透過(guò)波長(zhǎng)域中包含熒光波長(zhǎng)的至少一部分波長(zhǎng)并且不包含上述激勵(lì)側(cè)濾波器的透過(guò)波長(zhǎng)頻帶。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的熒光圖像檢測(cè)方法，其特征在于，使用單色激勵(lì)光源作為上述激勵(lì)光源，使用具有如下透過(guò)波長(zhǎng)頻帶的濾波器作為上述激勵(lì)側(cè)濾波器，該透過(guò)波長(zhǎng)頻帶使上述單色激勵(lì)光源的主波長(zhǎng)的光透過(guò)，使用在上述單色激勵(lì)光源的主波長(zhǎng)的波長(zhǎng)域中的透過(guò)率為10%以下的濾波器作為上述熒光側(cè)濾波器部的上述吸收濾波器。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的熒光圖像檢測(cè)方法，其特征在于，上述激勵(lì)光源為發(fā)射以785nm士 IOnm為峰值波長(zhǎng)的光的半導(dǎo)體激光器，上述吸收濾波器的50%透過(guò)波長(zhǎng)在800nm 860nm的范圍內(nèi)。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的熒光圖像檢測(cè)方法，其特征在于，上述激勵(lì)光源為發(fā)射以690nm士 IOnm為峰值波長(zhǎng)的光的半導(dǎo)體激光器，上述吸收濾波器的50%透過(guò)波長(zhǎng)在720nm 780nm的范圍內(nèi)。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的熒光圖像檢測(cè)方法，其特征在于，上述激勵(lì)光源為發(fā)射以658nm士 IOnm為峰值波長(zhǎng)的光的半導(dǎo)體激光器，上述吸收濾波器的50%透過(guò)波長(zhǎng)在690nm 740nm的范圍內(nèi)。
13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的熒光圖像檢測(cè)方法，其特征在于，上述激勵(lì)光源為發(fā)射以808nm士 IOnm為峰值波長(zhǎng)的光的半導(dǎo)體激光器，上述吸收濾波器的50%透過(guò)波長(zhǎng)在820nm 870nm的范圍內(nèi)。
14.根據(jù)權(quán)利要求9、10或者13所述的熒光圖像檢測(cè)方法，其特征在于，上述試樣包含吲哚花青綠作為熒光色素。
全文摘要
本發(fā)明提供一種熒光圖像檢測(cè)裝置以及熒光圖像檢測(cè)方法，為了降低與熒光圖像檢測(cè)裝置的檢測(cè)能力有關(guān)的漏光，將熒光側(cè)濾波器部的干涉濾波器和吸收濾波器串行配置在熒光的行進(jìn)方向上。在此所使用的干涉濾波器和吸收濾波器使相當(dāng)于熒光的波長(zhǎng)頻帶的光充分透過(guò)并且遮蔽相當(dāng)于照射到試樣的激勵(lì)光的波長(zhǎng)頻帶的光。
文檔編號(hào)G01N21/64GK102159936SQ20088013118
公開(kāi)日2011年8月17日 申請(qǐng)日期2008年9月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月18日
發(fā)明者小田一郎, 樋爪健太郎, 矢島敦, 綱澤義夫 申請(qǐng)人:株式會(huì)社島津制作所