專利名稱：：一種裸花紫珠中鞣質(zhì)的含量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥
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。更具體地說涉及裸花紫珠中或裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)的含量測定方法。裸花紫珠為馬鞭草科植物裸花紫珠(CallicarpanudiflomHook.etAm.)的干燥葉，主要具有收斂止血、清熱解毒的功效，可用于各種內(nèi)外出血癥，對肺胃之出血尤為多用，也可治療燒燙傷及熱毒瘡癌。目前己有裸花紫珠片、裸花紫珠膠囊、裸花紫珠栓等制劑，但質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量僅以總黃酮為控制標(biāo)準(zhǔn)。鞣質(zhì)(tannins)又稱單寧，是存在于植物體內(nèi)的一類結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的多元酚類化合物?，F(xiàn)代研究表明，鞣質(zhì)具有收斂性，內(nèi)服可用于治療胃腸道出血，潰瘍和水瀉等癥；外用于創(chuàng)傷、灼傷，可使創(chuàng)傷后滲出物中蛋白質(zhì)凝固，形成痂膜，可減少分泌和防止感染，鞣質(zhì)能使創(chuàng)面的微血管收縮，有局部止血作用。鞣質(zhì)可用作生物堿及某些重金屬中毒時的解毒劑。鞣質(zhì)具有較強的還原性，可清除生物體內(nèi)的超氧自由基，延緩衰老。此外，鞣質(zhì)還具有抗變態(tài)反應(yīng)、抗炎、驅(qū)蟲、降血壓等作用。因此，通過建立裸花紫珠中鞣質(zhì)的含量測定標(biāo)準(zhǔn)以及用多量化指標(biāo)嚴(yán)格控制裸花紫珠提取物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，將有利于提高裸花紫珠藥材及制劑的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，保證工藝穩(wěn)定、藥效可靠。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是建立一種準(zhǔn)確、可靠的裸花紫珠中鞣質(zhì)的含量測定方法。本發(fā)明的再一個目的是建立一種準(zhǔn)確、可靠的裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)的含量測定方法。本發(fā)明所述的裸花紫珠中鞣質(zhì)的含量測定方法包括下列步驟(1).由裸花紫珠藥材提取得到裸花紫珠提取物；(2).裸花紫珠提取物的預(yù)處理將裸花紫珠提取物溶解，制成樣品溶液；(3).標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作用沒食子酸作為對照品，配制成梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入顯色液顯色，在760nm波長下，分別測定該標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值，根據(jù)吸光度值與濃度之間的對應(yīng)關(guān)系建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；(4).樣品溶液總酚的含量測定取一份上述樣品溶液，加入顯色液顯色，在760nm波長下測定吸光度值，根據(jù)該吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得對應(yīng)的濃度，該濃度值即為樣品溶液總酚的含量；(5).樣品溶液不被吸附的多酚的含量測定再取一份上述樣品溶液，加入干酪素進(jìn)行處理后，加入顯色液顯色，在760nm波長下測定吸光度值，根據(jù)該吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得對應(yīng)的濃度，該濃度值即為樣品溶液不被吸附的多酚的含量；(6).計算裸花紫珠中鞣質(zhì)的含量先由樣品溶液總酚的含量減去樣品溶液不被吸附的多酚的含量計算出樣品溶液鞣質(zhì)的含量，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)的含量，最后根據(jù)提取收率換算出裸花紫珠中鞣質(zhì)的含量。其中，步驟(l)中由裸花紫珠藥材提取得到裸花紫珠提取物包括下列步驟將裸花紫珠藥材在水、稀醇或稀酮溶劑中加熱煎煮，倒出煎液，過濾得濾液，將所得濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用10%90%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，將乙醇洗脫液濃縮，得裸花紫珠提取物；上述提取方法中，加熱的時間可以為30150分鐘；所述的大孔吸附樹脂可以為聚苯乙烯類大孔吸附樹脂，所述聚苯乙烯類大孔吸附樹脂可以優(yōu)選JD-1、DlOl、AB-8、X-5或D402;大孔吸附樹脂柱的徑高比可以為1:51:10。本發(fā)明所述的裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)的含量測定方法包括下列步驟(1).裸花紫珠提取物的預(yù)處理將裸花紫珠提取物溶解，制成樣品溶液；(2).標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作用沒食子酸作為對照品，配制成梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入顯色液顯色，在760nm波長下，分別測定該標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值，根據(jù)吸光度值與濃度之間的對應(yīng)關(guān)系建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；O、娃品、狡、戚tt船的今是、),*.玩V—々A卜古至總、狡、諒"hn入后在、戚后.色，在760nm波長下測定吸光度值，根據(jù)該吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得對應(yīng)的濃度，該濃度值即為樣品溶液總酚的含量；(4).樣品溶液不被吸附的多酚的含量測定再取一份上述樣品溶液，加入干酪素進(jìn)行處理后，加入顯色液顯色，在760nm波長下測定吸光度值，根據(jù)該吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得對應(yīng)的濃度，該濃度值即為樣品溶液不被吸附的多酚的含量；(5).計算裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)的含量先由樣品溶液總酚的含量減去樣品溶液不被吸附的多酚的含量計算出樣品溶液鞣質(zhì)的含量，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)的含量。在上述測定裸花紫珠中和裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)的含量的步驟中，溶解所述的裸花紫珠提取物以及所述的沒食子酸的溶劑為水；所述的顯色液為水、磷鉬鎢酸試液和碳酸鈉溶液；其中，所述的碳酸鈉溶液的濃度為20%29%。為了達(dá)到本發(fā)明的目的，發(fā)明人對裸花紫珠藥材及其提取物中鞣質(zhì)含量的測定方法進(jìn)行了穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率的試驗考察，結(jié)果表明該試驗方法具有良好的穩(wěn)定性和可靠性。本發(fā)明首次建立了裸花紫珠藥材及其提取物中鞣質(zhì)的含量測定方法，進(jìn)一步提高了裸花紫珠藥材以及裸花紫珠制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。此外，本發(fā)明的方法對于其它藥材及制劑中鞣質(zhì)的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)也有一定的借鑒作用。下面將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的具體實施方式以及本發(fā)明方法的穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、回收率等試驗進(jìn)行詳細(xì)地說明。圖1表示沒食子酸對照品經(jīng)顯色后在400nm800nm波長下的吸收曲線；圖2表示樣品溶液經(jīng)顯色后在400nm800nm波長下的吸收曲線；圖3表示樣品溶液先經(jīng)干酪素處理、再經(jīng)顯色后，在400nm800nm波長下的吸收曲線。具體實施方式實施例一(一)、裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)的含量測定方法儀器、試劑與對照品儀器TU-1901雙光束紫外-可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；D2F-6030A型真空干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)。試劑磷鉬鎢酸試液(自制)，甲醇，碳酸鈉(分析純)，干酪素(化學(xué)純)。對照品沒食子酸(純度為99.9%)。裸花紫珠提取物的制備取100kg裸花紫珠藥材，加水1500kg，浸泡30分鐘，加熱煮沸30分鐘，倒出煎液，藥渣再煎2次，每次加水1500kg，煮沸60分鐘，合并三次煎液，過濾，濾液通過比表面積為350450m2/g、骨架密度為l1.2g/ml，平均孔徑為3565nm，空隙率為6068%的JD-1(WLD)型聚苯乙烯類大孔吸附樹脂柱，樹脂柱的徑高比為l:5，棄去流出液，用5倍柱體積的水洗滌柱體，棄去洗滌液，用10%的乙醇洗脫至洗脫液中無黃酮檢出。收集洗脫液，回收乙醇后減壓濃縮至相對密度為1.2，冷凍干燥，檢驗分裝即得裸花紫珠提取物。提取物的收率為2.53%。溶液的配制①對照品溶液的制備取沒食子酸對照品適量，精密稱定，加水制成每lml含沒食子酸0.0541mg的溶液，作為對照品溶液。②樣品溶液的制備取裸花紫珠提取物約0.7g，置250ml容量瓶中，加水150ml浸提過夜，超聲處理10分鐘后加水定容至刻度，搖勻，靜置后再稀釋5倍，即得樣品溶液。p克^舁的確定取上述lml對照品溶液，置25ml棕色量瓶中，加水llml，再加入磷鉬鎢酸試液lml，用27%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，在400nm800nm的波長下測定吸光度值。掃描曲線見圖1。取上述樣品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，加磷鉬鎢酸試液lml，再加入水10ml，用27%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，在400nm800nm的波長下測定吸光度值。掃描曲線見圖2。取上述樣品溶液25ml，加至已盛有干酪素0.6g的100ml具塞錐形瓶中，密塞，3(TC水浴中振搖1小時，濾過，取續(xù)濾液2ml，置25ml棕色量瓶中，加磷鉬鎢酸試液lml，再加入水10ml，用27%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，在400nm800nm的波長下測定吸光度值。掃描曲線見圖3。從圖l、圖2及圖3的掃描曲線中可以看出，對照品和樣品溶液均在波長為760nm處的吸收度值最大，因此，本實驗中選取760nm作為裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)含量的測定波長。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密量取對照品溶液0.5ml、l.Oml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置25ml棕色量瓶中，分別加水11.5ml、llml、10ml、9ml、8ml、7ml，再各加入磷鉬鎢酸試液lml，用27%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，在760nm處測定吸光度值。以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)線回歸方程為Y=-0.130X+0.146R2=0.9978。結(jié)果表明，在上述范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。樣品溶液總酚的含量測定精密量取樣品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，加磷鉬鎢酸試液lml，再加入水10ml，用27%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，在760nm處測定吸光度值。樣品溶液不被吸附的多酚的含量測定精密量取樣品溶液25ml及空白對照一份(蒸餾水)，加至已盛有干酪素0.6g的100ml具塞錐形瓶中，密塞，3(TC水浴中振搖1小時，濾過，取續(xù)濾液2ml，照總酚測定方法測定吸光度值。該樣品溶液的鞣質(zhì)含量=總酚的含量-不被吸附的多酚的含量，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)即可換算出裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)的含量。(二)、精密度試驗精確量取沒食子酸對照品溶液2ml，按上述方法進(jìn)行測定。連續(xù)測定6次，吸光度值分別為0.818、0.822、0.819、0.821、0.815、0.826，精密度值以其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD來估計，RSD為0.459%。(三)、重復(fù)性試驗稱取裸花紫珠提取物6份，按樣品溶液的制備方法進(jìn)行制備，按上述方法進(jìn)行測定。重復(fù)測定6份樣品中鞣質(zhì)含量。樣品溶液的鞣質(zhì)含量=總酚含量-不被吸附的多酚含量，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)含量分別為12.64%、11.97%，12.38%、12.06%、11.85%、12.35%，重復(fù)性以其RSD來估計，RSD=2.042%。(四)、穩(wěn)定性試驗稱取裸花紫珠提取物，按樣品溶液的制備方法進(jìn)行制備，按上述的方法在30分鐘、45分鐘、60分鐘、90分鐘、120分鐘、180分鐘進(jìn)行檢測，其吸光度值分別為0.826、0.828、0.824、0.820、0.817、0.814。i式驗結(jié)果表明，樣品在3小時內(nèi)穩(wěn)定，在3045分鐘內(nèi)測定為佳，吸光度值隨時間變化逐漸變小。(五)、回收率試驗稱取裸花紫珠提取物6份，分別置于250ml棕色量瓶中，加水150ml，再分別加入lmg/ml的沒食子酸對照品溶液35ml，然后按樣品溶液制備方法進(jìn)行制備，并測定，計算回收率。結(jié)果平均回收率為99.36%。RSD=1.44%。實驗數(shù)據(jù)見表一。表一、回收率試驗<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實施例二裸花紫珠提取物的制備取100kg裸花紫珠藥材，加水1000kg，浸泡50分鐘，加熱煮沸90分鐘，倒出煎液，藥渣再煎2次，每次加水1500kg，煮沸90分鐘，合并三次煎液，過濾，將濾液減壓濃縮至相對密度為1.1，冷凍干燥，檢驗分裝即得裸花紫珠提取物。裸花紫珠提取物的收率為9.7%。對照品溶液的配制取沒食子酸對照品適量，精密稱定，加水制成每lml含沒食子酸0.0541mg的溶液，作為對照品溶液。樣品溶液的配制取裸花紫珠提取物約0.7g，置250ml容量瓶中，加水150ml浸提過夜，超聲處理10分鐘后加水定容至刻度，搖勻，靜置后再稀釋5倍，即得樣品溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密量取對照品溶液0.5ml、l.Oml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置25ml棕色量瓶中，分別加水11.5ml、llml、10ml、9ml、8ml、7ml，再各加入磷鉬鎢酸試液lml，用20%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，在760nm處測定吸光度值。樣品溶液總酚的測定精密量取樣品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，加磷鉬鎢酸試液lml，再加入水10ml，用20%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，在760nm處測定吸光度值。樣品溶液不被吸附的多酚的測定精密量取待測液25ml及空白對照一份(蒸餾水)，加至己盛有干酪素0.6g的100ml具塞錐形瓶中，密塞，3(TC水浴中振搖1小時，濾過，取續(xù)濾液2ml，照總酚測定方法測定吸光值。樣品溶液的鞣質(zhì)含量=總酚含量-不被吸附的多酚含量，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)含量為9.03%。實施例三裸花紫珠提取物的制備取100kg裸花紫珠藥材，加稀醇1000kg，浸泡50分鐘，加熱煮沸90分鐘，倒出煎液，藥渣再煎2次，每次加水1500kg，煮沸90分鐘，合并三次煎液，過濾，濾液通過比表面積為350~450m2/g、骨架密度為l1.2g/ml，平均孔徑為3565nm，空隙率為6068X的D101型聚苯乙烯類大孔吸附樹脂柱，樹脂柱的徑高比為1:7，棄去流出液，用4倍柱體積的水洗滌柱體，棄去洗滌液，用50%乙醇洗脫至洗脫液中無黃酮檢出。收集洗脫液，回收乙醇后減壓濃縮至相對密度為1.1，冷凍干燥，檢驗分裝即得裸花紫珠提取物。提取物的收率為3.23%。對照品溶液的配制取沒食子酸^t照品適量，精密稱定，加水制成每lml含沒食子酸0.0541mg的溶液，作為對照品溶液。樣品溶液的配制取裸花紫珠提取物約0.7g，置250ml容量瓶中，加水150ml浸提過夜，超聲處理10分鐘后加水定容至刻度，搖勻，靜置后再稀釋5倍，即得樣品溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0.5ml、l.Oml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置25ml棕色量瓶中，分別加水11.5ml、llml、10ml、9ml、8ml、7ml，再各加入磷鉬鎢酸試液lml，用27%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，在760nm處測定吸光度值。樣品溶液總酚的測定精密量取樣品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，加磷鉬鎢酸試液lml，再加入水10ml，用27%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，在760nm處測定吸光度值。樣品溶液不被吸附的多酚的測定精密量取樣品溶液25ml及空白對照一份(蒸餾水)，加至已盛有干酪素0.6g的100ml具塞錐形瓶中，密塞，30'C水浴中振搖1小時，濾過，取續(xù)濾液2ml，照總酚測定方法測定吸光度值。樣品溶液的鞣質(zhì)含量=總酚含量-不被吸附的多酚含量，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)含量為12.54%。實施例四裸花紫珠提取物的制備取100kg裸花紫珠藥材，加稀酮2000kg，浸泡40分鐘，加熱煮沸150分鐘，取出煎液，藥渣再煎2次，每次加水1000kg，煮沸60分鐘，合并三次煎液，過濾，濾液通過比表面積為350450m2/g、骨架密度為l1.2g/ml，平均孔徑為3565nm，空隙率為6068%的AB-8型聚苯乙烯類大孔吸附樹脂柱，樹脂柱的徑高比為1:10，棄去流出液，用6倍柱體積的水洗滌柱體，棄去洗滌液，用90%乙醇洗脫至洗脫液中無黃酮檢出。收集洗脫液，回收乙醇后減壓濃縮至相對密度為1.08，冷凍干燥，檢驗分裝即得裸花紫珠提取物。提取物的收率為3.03%。對照品溶液的配制取沒食子酸對照品適量，精密稱定，加水制成每lml含沒食子酸0.0541mg的溶液，作為對照品溶液。樣品溶液的配制取裸花紫珠提取物約0.7g，置250ml容量瓶中，加水150ml浸提過夜，超聲處理10分鐘后加水定容至刻度，搖勻，靜置后再稀釋5倍，即得待測液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作精密量取對照品溶液0.5ml、l.Oml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置25ml棕色量瓶中，分別加水11.5ml、llml、10ml、9ml、8ml、7ml，再各加入磷鉬鎢酸試液lml，用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，在760nm處測定吸光度值。樣品溶液總酚的測定精密量取樣品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，加磷鉬鎢酸試液lml，再加入水10ml，用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，在760nm處測定吸光度值。樣品溶液不被吸附的多酚的測定精密量取樣品溶液25ml及空白對照一份(蒸餾水)，加至已盛有干酪素0.6g的100ml具塞錐形瓶中，密塞，30'C水浴中振搖1小時，濾過，取續(xù)濾液2ml，照總酚測定方法測定吸光度值。樣品溶液的鞣質(zhì)含量=總酚含量-不被吸附的多酚含量，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)含量為10.17%。應(yīng)該理解，本發(fā)明裸花紫珠提取物的制備方法不僅限于實施例中所描述的幾種方法，本發(fā)明領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)公知技術(shù)可以得到很多種提取物的制備方法。顯然，這些方法變化的實施例都應(yīng)該落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.一種裸花紫珠中鞣質(zhì)的含量測定方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1).由裸花紫珠藥材提取得到裸花紫珠提取物；(2).裸花紫珠提取物的預(yù)處理將裸花紫珠提取物溶解，制成樣品溶液；(3).標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作用沒食子酸作為對照品，配制成梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入顯色液顯色，在760nm波長下，分別測定該標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值，根據(jù)吸光度值與濃度之間的對應(yīng)關(guān)系建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；(4).樣品溶液總酚的含量測定取一份上述樣品溶液，加入顯色液顯色，在760nm波長下測定吸光度值，根據(jù)該吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得對應(yīng)的濃度，該濃度值即為樣品溶液總酚的含量；(5).樣品溶液不被吸附的多酚的含量測定再取一份上述樣品溶液，加入干酪素進(jìn)行處理后，加入顯色液顯色，在760nm波長下測定吸光度值，根據(jù)該吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得對應(yīng)的濃度，該濃度值即為樣品溶液不被吸附的多酚的含量；(6).計算裸花紫珠中鞣質(zhì)的含量先由樣品溶液總酚的含量減去樣品溶液不被吸附的多酚的含量計算出樣品溶液鞣質(zhì)的含量，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)的含量，最后根據(jù)提取收率換算出裸花紫珠中鞣質(zhì)的含量。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于步驟(l)中由裸花紫珠藥材提取得到裸花紫珠提取物包括下列步驟將裸花紫珠藥材在水、稀醇或稀酮溶劑中加熱煎煮，倒出煎液，過濾得濾液，將所得濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用10%90%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，將乙醇洗脫液濃縮，得裸花紫珠提取物。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的含量測定方法，其特征在于所述的加熱煎煮的時間為30150分鐘。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的含量測定方法，其特征在于所述的大孔吸附樹脂為聚苯乙烯類大孔吸附樹脂。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的含量測定方法，其特征在于所述的聚苯乙烯類大孔吸附樹脂為JD-1、DlOl、AB-8、X-5或D402。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的含量測定方法，其特征在于所述的大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:51:10。7.—種裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)的含量測定方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1).裸花紫珠提取物的預(yù)處理將裸花紫珠提取物溶解，制成樣品溶液；(2).標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作用沒食子酸作為對照品，配制成梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入顯色液顯色，在760nm波長下，分別測定該標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值，根據(jù)吸光度值與濃度之間的對應(yīng)關(guān)系建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；(3).樣品溶液總酚的含量測定取一份上述樣品溶液，加入顯色液顯色，在760nm波長下測定吸光度值，根據(jù)該吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得對應(yīng)的濃度，該濃度值即為樣品溶液總酚的含量；(4).樣品溶液不被吸附的多酚的含量測定再取一份上述樣品溶液，加入干酪素進(jìn)行處理后，加入顯色液顯色，在760nm波長下測定吸光度值，根據(jù)該吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線得對應(yīng)的濃度，該濃度值即為樣品溶液不被吸附的多酚的含量；(5).計算裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)的含量先由樣品溶液總酚的含量減去樣品溶液不被吸附的多酚的含量計算出樣品溶液鞣質(zhì)的含量，然后根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出裸花紫珠提取物中鞣質(zhì)的含量。8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項所述的含量測定方法，其特征在于溶解所述的裸花紫珠提取物和所述的沒食子酸的溶劑為水。9.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項所述的含量測定方法，其特征在于所述的顯色液為水、磷鉬鎢酸試液和碳酸鈉溶液。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的含量測定方法，其特征在于所述的碳酸鈉溶液的濃度為20%~29%。全文摘要本發(fā)明涉及一種裸花紫珠中鞣質(zhì)的含量測定方法。本發(fā)明采用分光光度法對裸花紫珠中鞣質(zhì)的含量進(jìn)行測定，進(jìn)一步提高了裸花紫珠藥材及制劑的可控性，確保了裸花紫珠提取物的質(zhì)量。文檔編號G01N21/31GK101625313SQ20091000608公開日2010年1月13日申請日期2009年1月22日優(yōu)先權(quán)日2009年1月22日發(fā)明者嚴(yán)冬蘭,關(guān)繼峰,寧云山申請人:九芝堂股份有限公司